花卉植物组织培养训练

花卉植物组织培养训练

一、实训目的与要求

1.实训目的实训课程是学生专业技能训练的重要环节。通过参加一定的实训教学活动，进一步提高学生对课程所学理论的理解和巩固，培养和锻炼学生的动手能力及实践技能。本次实训课主要让学生熟悉和掌握植物组织培养的基本实践技能（一般操作技术）及综合实践能力，重点培养学生对植物组织培养技术的实际操作能力以及学生发现问题、分析问题和解决问题的实践能力。

2.实训要求①实训以真实的生产任务为载体，采用指导教师讲解，示范与学生亲自动手操作相结合的教学方式，同时聘请生产一线的专业技术人员进行现场操作与指导。②要求每个学生不得缺席，自觉遵守实训纪律，认真完成实训的每个环节，不迟到、不早退。服从实训指导老师统一安排，谦虚请教、认真参与、仔细操作，做好实训记录。③实训结束后，每位同学认真总结，完成一份实训报告。实训报告要求每个学生能结合自己的实训记录和实训体验，对整个实训过程做出书面总结，对实训所获得的体验、发现的问题以及解决的方法逐一做出说明。最后根据学生的实训表现（出勤）、实训态度（认真程度）、实训操作（效果与结果）以及实训报告，对每位同学做出实训综合评价（实训课程总成绩）。

二、实训内容

1.资讯、决策、计划（设计培养方案）。

2.①可行性讨论、分组汇报；②培养基母液的配制与消毒。

3.培养基的制备、消毒与预培养。

4.外植体的处理、无菌接种与培养（茎段培养、茎尖培养、鳞茎培养）。

5.①培养基的制作与消毒；②试管苗的驯化与移栽。

6.组培苗工厂化生产的观摩与实践。

7.实训考核与总结评价。

三、实训器具

冰箱、恒温箱、干燥箱、托盘天平、电子天平（感量系数是0.1克、0.01克、0.001克）、恒温水浴、恒温磁力搅拌器、烧杯（50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml）、移液管（1ml、2ml、5ml、10ml）、移液枪（10ul、100ul、500ul、1000ul）、容量瓶（50ml、100ml、500ml、1000ml）、量筒（25ml、50ml、100ml、500ml、1000ml）、磨砂广口试剂瓶（白色、棕色）（50ml、500ml、1000ml）、酸度计、

剪刀、镊子、解剖针、酒精灯、培养皿、小型离心机、立式高压灭菌锅、电磁炉、微波炉、双人双面超净工作台、双筒解剖镜、铝合金培养架、光照培养箱、空调、摇床、喷雾器、不同规格穴盘、育苗钵、花盆、基质等。

四、方法与步骤

资讯（市场调研、查阅文献）→设计培养方案→组织实施→讨论交流→撰写总结报告→结果评价。

五、记录与分析

对培养方案实施的过程应加以记录，如实训过程的相关数据和信息，对实训结果及过程中遇到的问题做出深刻分析和总结。

项目一资讯、决策、计划（设计培养方案）

时间：2013.4.22上午1-4节

地点：校内植物组培实训室

指导老师：赵华、胡蕾

一、实训材料

1.香石竹茎段：取当年生的嫩茎为佳，应尽量选择晴天中午进行。外植体大小为0.5-1.0为宜。

2.雀舌黄杨茎段：同上。

二、实训方法与步骤

1.材料：香石竹茎段培养

①培养基：MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L (制备1000ml）

②培养条件：a.温度：25度恒温。b.光照度：1000-2000lx。c.日照时间：10-12h。d.PH:5.8-6.2。e.湿度:70%-80%。

③培养基制备：水、药、糖、琼脂→混合→PH调整→加热溶解→玻璃器皿水洗→干燥→分装→加棉塞→高压蒸汽灭菌→冷却后拿出→等待凝固→进行接种。

④外植体消毒：取香石竹茎段→自来水冲洗30min→75%酒精杀菌12s →无菌水漂洗→10%次氯酸钠消毒剂消毒→无菌水冲洗三遍以上→备用。

⑤外植体接种：a.接种室消毒：用75%酒精喷雾消毒空气，接种前，超净工作台面用75%酒精擦洗后，再用紫外线灯照射20min。接种使用的解剖刀、镊子、培养皿、三角瓶等要事先经高压灭菌处理。操作中，使用过的镊子、解剖刀要不时的在酒精灯上灼烧灭菌。b.无菌操作要求：操作人员使用的工作服、帽子、口罩等要保持干净，并定期消毒。在接种时要戴上口罩，双手双臂也要用75%酒精表面杀菌。接种时，动作要轻。c.材料的分离、切取、接种：在无菌条件下切取消过毒的香石竹茎段。通常在无菌培养皿或载玻片上进行。将试管或三角瓶瓶口靠近酒精灯火焰，瓶口倾斜，将瓶口外部在火焰上烧数秒，然后轻轻取出封口物，将瓶口在火焰上旋转灼烧后，用消过毒的镊子将外植体均匀插在培养基上，将封口物在火焰上旋转灼烧数秒后迅速封住瓶口。接种完毕，封口膜上注明接种的植物名称，接种日期，接种人姓名，处理方法等。

2.材料：雀舌黄杨茎段培养

①培养基：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L (制备1000ml）大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐5ml、有机物5ml、琼脂7.15g、蔗糖30g、6-BA2ml、NAA0.05ml。

②培养条件：a.光照度：2000-3000lxb.温度：25度恒温c.日照时间：10-12h

③培养基制备：同上

④外植体消毒：同上

⑤外植体接种：同上

三、实训小结

遇到的问题以及解决的方法

1.问题：在设计培养方案时，由于缺乏基本的理论知识，不能正确的选择合适的外植体，导致设计不出正确的培养基方案。方法：课前查阅相关理论书籍，认真翻阅指导书，虚心向老师请教。

2.问题：配制母液时，由于我的疏忽，先加了二水氯化钙，导致与五水硫酸铜生成沉淀物。方法：将母液全部倒掉，按照正确的方法加入药剂，重新进行配制。

项目二 可行性讨论 培养基母液的制备与消毒

时间：2013.4.22下午7-10节 地点：校内植物组培实训室 指导老师：赵华、胡蕾 一、培养方案的可行性讨论

1.小组讨论：①以香石竹茎段为外植体，是因为香石竹主要靠掰取侧芽扦插来扩大繁殖，长期的营养繁殖使病毒病危害严重，切花质量变差，产花量降低。危害香石竹的病毒已经发现数种。大力推广由茎段繁殖的去毒苗，是综合防治当中的重要环节。同时，由于新发展，种苗来源较少，鉴于这两方面的原因，采用组织培养香石竹是很有必要的。②以雀舌黄杨为外植体，是因为雀舌黄杨虽在中原地区主要靠扦插和压条繁殖，但这种繁殖技术远远不能适应市场对优良无性系苗木的要求，因此，对雀舌黄杨茎段进行组织培养也是非常有必要的。

2.代表汇报：通过小组的激烈讨论，我集合大家的方案之所长，综合在一起后完成了一份相对比较完善的报告，然后我代表小组向老师和同学进行汇报，并吸取大家的批评与建议。

二、母液的配制与消毒 注：①制备1L 培养基，取50ml 贮备液1、5ml 贮备液2、5ml 贮备液3、5ml 贮备液4、②把FeSo4.7H2o 和Na2EDTA.2H2O 分别置于450ml 蒸馏水中，加蒸馏水，定容至100ml 。 三、激素制备

物质 成分 数量(g) 物质 成分 数量(g)

贮备液1 （100ml ） 大量元素 NH4NO3 6.6

贮备液2（100ml ）微量元素

KI 0.166 KNO3 7.6 H3BO3 1.24 CaCl2.2H2O 1.76 MnSO4.4H2O 4.46 MgSO4.7H2O 1.48

ZnSO4.7H2O 1.72 KH2PO4 0.68 Na2.MoO4.2H2O 0.05

贮备液2 （100ml ） 有机物

肌醇 2 CuSO4.5H2O 0.005 烟酸 0.01 CoCl2.6H2O

0.005

盐酸吔多醇 0.01 贮备液2（100ml ） 铁盐 FeSO4.7H2O

0.556 盐酸硫胺素 0.01 Na2.EDTA.2H2O

0.746 甘氨酸

0.04

1.分别取0.1克克的NAA和6BA放入烧杯，用蒸馏水溶解。

2.取两个100ml的容量瓶，将溶解好的物质分别倒入容量瓶，并分别定容至100ml。

四、消毒

将已配制好的溶液放入冰箱中保存

五、实训总结

遇到的问题与解决方法

1.在使用天平时，没有调零称量，导致结果不准确。方法：使用天平时，要仔细。

2.在取用药物时，药匙没有按规定使用，导致药物混用。方法：一个药匙只取用一种药物。

3.溶解某些药剂时，未完全溶解就混合，导致药物浓度不够。方法：搅拌药物时，要仔细耐心。

项目三培养基的制备消毒与预培养

时间:2013.4.23上午1-4节

地点:校内植物组培实训室

指导老师:赵华，胡蕾

一、实验用具和药品

天平、烧杯、量筒、移液管、玻璃棒、PH试纸、蔗糖、NaoH溶液、Hcl溶液、母液

二、实验方法

1.配制两组1L的培养基

每组取一百毫升烧杯一只，用五十毫升量筒取大量元素五十毫升。分别用移液管吸取微量元素。铁盐，有机盐各5毫升，并分别做好标记a b。然后移液管吸取0.5毫升6BA。0.5mlNAA注入a中。取2ml6BA，0.05毫升NAA注入b中，放在烧杯中备用。取600毫升的去离子水→烧开到80℃左右加入琼脂→烧开至溶解加入白糖→调节PH→分装→封口标记。（制作两份）。

2.培养基的灭菌

培养基中含有大量的有机物。特别含糖量较高是各种微生物滋生繁殖的理想场所。而接种材料需在无菌条件下，培养很长时间。如果培养基微生物所污染点达不到培养的预期结果。因此培养基的灭菌是植物组织培养中十分重要的环节。培养基灭菌的方法有多种，这里主要用的是高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌法。将分装好的培养基以及需要灭菌的各种用具，蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内加水。水位不超过支柱高度，盖好锅盖，上好螺

丝，加热后，压力表指针移至0.5千克每平方厘米时，打开放气阀门，排除冷气使压力表指针回复零位，关好放气阀门继续加热。当指针移至1.1-1.2kg/㎝2时，将火调小，保持压力15-20min，即达到消毒目的。

高压蒸汽灭菌注意事项

①，锅内冷气必需排尽，否则压力表指针虽达到一定的压力，但由于锅内冷空气的存在并达不到应有的温度因而影响灭菌效果。

②，当达到一定压力以后，注意在保持压力过程中严格控制时间，时间过长后使一些化学物质遭到破坏影响培养基成分，时间短则达不到灭菌效果。

③，三角瓶中的液体不超过总体积的70%，否则当温度超过一百度时，培养机会喷溢，造成培养基壁和包头纸的污染。

三，实训总结

遇到的问题与解决的方法。

1，分装培养基时发现量不够。方法，先装一瓶五十毫升的水，放在边

上作为参照物，倒的时候以参照物为标准，以免有的多有的少，造成不平均的状态。

项目四，外植体的处理，无菌接种与培养

时间：2013年4月23日7-10节课。

地点：校内植物组培实训室

指导老师：赵华，胡蕾

一，实验用具和药品。

烧杯，纱布，酒精，八四消毒液，漂白粉，蒸馏水，镊子，刀片，酒精灯，培养基。

二，实验材料

香石竹茎段，雀舌黄杨茎段。

三，培养材料的接种。

四，培养材料的接种。

a.接种前用肥皂洗手，然后用沾有75%的酒精棉球把手擦干净。

b.将接种所用的器具均用75%的酒精擦拭。

c.轻轻打开培养基盖子，将瓶口放在酒精灯上灼烧一遍，然后将灭菌好的外植体接种到培养基上。

d.再将接种好的培养基瓶口放酒精灯上灼烧一周，盖好盖子标记。

五，实训结果

接种日期，2013.4.23。接种数，32瓶。污染数，20瓶。污染率，62.5%。主要污染菌种，霉菌，真菌，细菌，支原体。

六，实训小结

由上述表格可看出，本组污染率太高，分析原因如下。

一，外植体委撤底消毒。二，小组成员荣威车顶面均。三，操作不规范。四，培养条件不够。

项目五，培养基质的制作与消毒，试管苗的驯化与移栽

时间：2013年4月24日7-10节

地点：金华市农业高新园区

指导老师：赵华，汪玲娟

一，培养机制的制作与消毒

森山铁皮枫斗机制相关介绍。树皮原料→粉碎成直径在3cm以内→拌入羊粪石灰调整c/n40以下及PH在5-5.5之间（树皮：羊粪：石灰=500:25:1）→按使用说明拌入发酵剂→堆置3天内加膜捂闷充分浇水（水分含量达到80%左右→开始第一阶段发酵，强化保温保湿措施→7天后物料堆内温度应达到45-50度→10天后物料表面出现白色菌丝可进行第一次翻倒→继续发酵中→20天后第二次翻倒→进入第二阶段发酵期→注意加水控制物料水分含量60%左右并保持30天→发酵的累计温度达到800-1000度时，发酵结

束。

二，试管苗的驯化与移栽

植物从试管中的无菌条件，到适应外部环境的过程称为驯化。在生产培养

苗时，由于不能顺利进行驯化，有时苗会腐败枯死，这种不良的苗一般肥厚多肉，茎不生长，表现出水浸渍状态称玻璃化苗。通常在培养器内可清楚的识别出，但有的植物外观上无明显异常但成活也较困难。

为了试管驯化顺利进行，必须完成两种变化。1.从无菌条件低照度多温环境向通常的环境转变。2.从异养型向自养型转变。基本步骤，把培养物放在移栽环境中3到10天，使其适应新的光，温，湿等条件。在移栽

前一天，打开瓶子，第二天再移苗，移苗过成包括苗的取出和移植两步。

第一步，瓶中注入清水，再用镊子轻轻搅碎培养基。然后将苗取出用清水清洗根部。如果苗过大，可将瓶砸碎。

第二步，先将生根苗移栽到洗净灭菌的河沙中进行沙培。应注意，保持一在环境中有较高的温度和较稳定的气温，沙培二到三周后，可移栽到有土壤的花盆和大田中。

附图。

小苗在培养基中生长工人努力洗苗中

种植基地长在树上的铁皮石斛

铁皮枫斗制作过程铁皮石斛开花拉

项目六组培苗工厂化生产的现象与实践

时间：2013年4月25日上午1-5节

地点：金华市农业高新园区

指导老师：赵华，汪玲娟

附图。

他们在看什么呢，看葡萄森宇植物园参观中

项目七实训总结与考核评价

时间：2013年4月26日1-5节

地点：校内植物组培实训室

指导老师：赵华，胡蕾

本周我们进行了植物组织培养训练，通过这一周的实训，我学到了很多。下面我将对本周的实训情况进行总结。

这一周，我们小组从一开始方案的策划，到培养基的制备，接种，再到参观森宇，一直都配合默契，将每一天老师布置的任务都完成的良好。虽然其中有遇到些许困难，但通过我们团结协作共同努力，这些困难都迎刃而解啦！

下面我想提几点建议，第一，实验室的仪器有些许老旧了，需要更新，这样可以让实验结果更精确。第二，同学们在操作过程中应该更加严谨，要将其当成实际的操练，这样的实训才会更有意义。

最后我想说，在这周的实训中，我认为自己还是非常投入的，每个环节都有认真积极的参与，虽然其中有过疏忽和错误，但是我已经吸取教训，虚心改正了。在之后的生活和学习中，要更加严于律己，不能有一丝放松，要将实验精神在生活中发扬光大。