药典方法确认规程

目的

建立药典方法确认规范，确保药典方法适用于本实验室的实验条件。

定义

药典方法的确认：收载于CP、USP、BP、EP等药典的产品分析方法，使用前证明该验证过的产品测试方法、条件确实适用于本实验室的实际使用环境。

职责

质量控制室所有人员负责按照本规程执行药典分析方法的确认。

程序

药典方法确认需要做的项目

原料药：

制剂：

被检测项目类型的说明：

系统适用性实验

按药典正文要求的内容进行；正文没有要求的内容，如RSD%，按药典附录的要求进行。

专属性

系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正确鉴定、检出被分析物质的特性。通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专属性。如采用的方法不够专属，应采用多个方法予以补充。

鉴别反应专属性

鉴别试验应确证被分析物符合其特征。专属性试验要求证明能与可能共存的物质或

结构相似化合物区分，需确证含被分析物的供试品呈正反应，而不含被测成分的阴

性对照呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。

杂质检测专属性

在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能

得到分离和检出，并具适当的准确度与精密度。在杂质或降解产物不能获得的情况

下，专属性可通过与另一种已证明合理但分离或检测原理不同、或具较强分辨能力

的方法进行结果比较来确定。或将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及

氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。

必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。

含量检测专属性

对于API主成分含量测定可在供试品中加入杂质，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质的供试品比较测定结果；在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另

一个经验证了的或药典方法进行比较，对比两种方法测定的结果。也可采用破坏性

试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试

样，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。必要时进行色谱峰纯度检查，证明

含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。

对于制剂主成分含量测定可在被测活性组分溶液中加入辅料组，考察测定结果是否受辅料干扰，并与未加辅料的被测活性组分比较测定结果。必要时进行色谱峰纯度

检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。

专属性的接受标准

应当证明潜在的干扰成分不会对方法的性能产生负作用。对于层析分离方法，要求

证实杂质之间﹑杂质与主峰之间的选择性；分辨率≥1.5，如果证明确实可行，某些

情况下分辨率低于1.2也可以接受。

辅料组空白对照应无干扰。

精密度

精密度系指在规定的条件下，从同一个均匀样品中，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差（d=测量值与平均值之差）、标准偏差（SD）、相对标准偏差（RSD）（变异系数CV）表示。

杂质定量检查、含量和溶出方法均应验证其精密度，精密度可以用重复性、中间精密度和重现性表示。

重复性：

重复性系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的接近程度。

重复性的评价：在方法规定的线性范围内至少测定9 次(如3 个浓度级别80％，100％和120％，每个浓度级别测定3 次)，或在100％的试验浓度，至少测定6 次。

注意：每种测定应从样品称量或者高浓度溶液的稀释开始。

中间精密度：

系指同一实验室不同日期、不同仪器、不同分析人员对同一样品、采用同一方法处理样品所得结果之间的接近程度。验证方法：同一批样品每位分析员准备六份进行测量，计算两人之间平均值的差异。

重现性：

一般实验室不进行此项考察，只有当分析方法将被法定标准采用时，才进行重现性试验。

建立药典分析方法时常需通过协同检查得出重现性的结果。

精密度接受标准：

重复性：API的RSD≤1.0%；制剂活性成份的RSD≤2.0%；每个杂质的RSD≤20%。中间精密度：API的平行六份样品的RSD≤1.0 %，两人之间的平均值之差≤1.0 %。制剂平行六份样品的RSD≤2.0%，两人之间的平均值之差≤3.0 %。杂质时，平行六份样品的RSD≤20.0 %，两人之间的平均值之差如下：

准确度：

准确度的测定至少要取方法范围内的3个浓度级别，每个浓度级别至少要3个结果。9个结果的精密度应符合要求，回收率均应在限度内。（也可以制备6份100％浓度的样品进行测定。）对于常量分析，回收率至少应在95%～105%之间；对于微量或半微量分析，回收率可根据仪器本身条件适当放宽。

原料药的含量分析：通过分析已知含量的参比标准来确定此方法的准确度。或者把此方法的分析结果与另一有确定准确度的方法的分析结果进行比较来确定准确度。

成品药中各组分的含量分析：按成品药处方取适量各组分进行有机混合得一混合物，在方法的范围内，往此混合物中加入已知量的被分析物进行分析，从而确定方法的准确度。

若不可能得到成品药中所有组分的样品，可用以下方法确定准确度：（1）往成品药中加入已知量的被分析物；（2）将此方法的分析结果与与另一有确定准确度的方法的分析结果进行比较。

杂质的定量分析：通过往样品中加入已知量的杂质来确定。若不可能得到某种杂质或降解产物的参比标准品，可把此方法的分析结果与另一已验证的方法的结果进行比较来确定。若杂质为未知物，可通过计算杂质与主药响应值的比值来确定；若响应因子（等量的杂质和主药的响应比值）是已知的，应使用响应因子进行计算。

线性：

线性系指在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度（量）直接呈线性关系的程度。用实验证实样品中含有此范围内浓度的样品时，能符合规定的准确度、精密度和线性的要求。线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量检查、含量和溶出方法均需要验证其线性。可用一贮备液经精密稀释或分别精密称样，制备一系列的供试品进行测定，至少制备5个浓度（通常选取50%, 80%,100%,120%和150%）。并且80%, 100%和120%的数据也可以用来确定方法重现性。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再

进行线性回归计算，并说明依据。

对于化学分析，相关系数应不小于0.999；对于仪器分析，相关系数应不小于0.99。线性范围是用实验证实样品中含有此范围内浓度的样品时，能符合规定的准确度、精密度和线性的要求。具体建议如下：

检测限和定量限

检测限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被检测出的最小量；定量限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被准确测定的最小量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。杂质限度检查时应验证其方法的检测限，杂质定量检查时应验证其方法的定量限。

确定某一分析方法检测限和定量限的方法：

目视法（直观评价，非仪器分析）：可用于非仪器的分析方法，也可用于仪器的分析方法，用已知浓度的被测物，试验出能被可靠的检测出的最低浓度或量；对于定量限需要一定的准确度和精密度。

信噪比法：该方法适用于出现基线噪音的分析方法。信噪比的测定是通过比较含已知低浓度被分析物的样品与空白样品的测试信号，确定被分析物可被确切地检测的最小浓度，典型的信噪比为3:1；对于定量限典型的信噪比为10:1。

根据响应值的标准差和斜率

检测限：LOD=3.3δ/S；定量限：LOQ=10δ/S。δ：响应值的标准差；S：校正曲线的斜率。

斜率S 可从被分析物的校正曲线来估算，δ的值可由多种途径估算。如根据空白的标准差：通过几份空白样品的分析，计算其响应值的标准差，测出背景响应值的大小。

根据校正曲线：通过被分析物样品的分析来研究其标准曲线，回归线的剩余标准差或回归线的y轴截距标准差都可作为标准差。

若上文中样品溶液需要经过提取、萃取或多步反应等以后才检测的，由于所引入的系统误差被扩大，可接受限度可适当放宽并必要时在个论项下或相关文件中单独规定。

在制剂主成分含量测定完成分析方法确认后，该制剂主成分含量测定的分析方法同样适用于该制剂内容物主成分含量测定的分析方法。