45Ca2+ uptake study in PC12 cells简要介绍

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基于PC12细胞的西维因神经损伤作用机理研究

大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤（PC12 细胞）由中国
按照 1.3.2 中细胞培养方法，在细胞培养完成后，
科学院细胞库提供；西维因（Carbaryl，99%）、2',7'- 分别利用酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒，计算 LDH
二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA，97.00%）和二甲的漏出率。计算公式：
基亚砜（DMSO，99%）购自 Sigma-Aldrich 公司； DMEM-低糖培养基、胎牛血清（FBS）、磷酸盐缓冲
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现代食品科技
Modern Food Science and Technology
2016, Vol.32, No.12
的重要风险因素[5]。人体是农药的非靶标生物，为达
超氧化物歧化酶（SOD）WST-1 法试剂盒购自南京建
到尽可能减轻农药残留对人体损伤的目的，有必要研成生物工程研究所；透明孔板购自上海宏生生科科技
加。同时，利用激光共聚焦扫描显微镜观察到了线粒体膜电位的显著下降。西维因对 PC12 细胞表现出很强的神经毒性。
关键词：PC12 细胞；西维因；损伤；细胞毒性；神经毒1-5
DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.12.001
增加到了（73.00±1.71）%；同时谷胱甘肽（GSH）含量从 96.15±6.10 μmol/g prot 逐渐减少到 22.91±3.98 μmol/g prot；细胞相对荧光
强度（RFI）从 37.38±11.48 先增强到 45.56±11.96，后因细胞严重损伤又减弱到 17.11±1.50。细胞液内乙酰胆碱（ACh）含量也逐渐增
Key words: PC12 cells; Carbaryl; injury; cytotoxicity; neurotoxicity

钙调蛋白在PC12细胞分化和迁移中的作用

钙调蛋白在PC12细胞分化和迁移中的作用
袁俊;李朝军
【期刊名称】《华北农学报》
【年(卷),期】2011(026)001
【摘要】PC12 细胞经神经生长因子 (NGF)作用后,利用免疫荧光染色、单个细胞迁移率检测等方法,研究了钙调蛋白在PC12 细胞中的分布以及钙调蛋白对PC12 细胞分化和迁移的影响.免疫荧光染色结果表明,钙调蛋白在PC12细胞突起的顶端处呈密集分布.加入钙调蛋白抑制剂W7的细胞仅有少量长出突起.单个细胞迁移率检测表明钙调蛋白可能促进PC12 细胞迁移.提示钙调蛋白可能在PC12细胞的分化和迁移过程中发挥作用.
【总页数】4页(P22-25)
【作者】袁俊;李朝军
【作者单位】南京晓庄学院,生物化工与环境科学学院,江苏,南京,211171;南京大学,医学院,江苏,南京,210093
【正文语种】中文
【中图分类】Q26
【相关文献】
1.P53和P21在PC12细胞分化中的作用 [J], 沈晗;吴少波;张百芳;彭芳芳;武栋成
2.ERK在NGF诱导PC12 细胞分化中的作用 [J], 张雯;彭芳芳;张百芳;沈晗;吴少波;武栋成
3.蛋白酶抑制剂MG132在联合NGF诱导PC12细胞分化过程中的作用及机制[J], 王晓明;卢伟;丁军
4.MAPK、PI3K途径在蛇毒神经生长因子诱导PC12细胞分化的作用 [J], 何艳;汪效英;陈崇宏
5.人牙周膜细胞条件培养基促PC12细胞分化的作用研究 [J], 徐娟;刘洪臣;徐璐璐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Seipin敲低大鼠PC12细胞株的构建和对细胞凋亡的影响

·专题研究１·Ｓｅｉｐｉｎ敲低大鼠ＰＣ１２细胞株的构建和对细胞凋亡的影响吕菊１，２，胡玉梅１，２，任真奎１，２，３，谢鹏１，２，张春林４，焦玲５，禹文峰１，２（１．贵州医科大学分子生物学重点实验室，贵州贵阳　５５０００４；２．贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室，贵州贵阳　５５０００４；３．黔西南州人民医院检验科，贵州兴义　５６２４００；４．贵州医科大学基础医学院，贵州贵阳　５５００２５；５．贵州医科大学附院神经内科，贵州贵阳　５５０００４）［摘　要］目的：构建大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（ＰＣ１２）细胞的先天性脂肪代谢障碍２型（ＢＳＣＬ２／Ｓｅｉｐｉｎ）敲低细胞株，探讨Ｓｅｉｐｉｎ敲低后对细胞凋亡的影响。

方法：将ＰＣ１２细胞分为空白感染组和助感染组（加助感染试剂ＨｉｔａｎｓＧ），采用不同慢病毒感染复数（ＭＯＩ）感染细胞进行病毒预感染试验筛选助感染试剂和合适的ＭＯＩ；依据上述感染条件，用阴性对照病毒和ＳｅｉｐｉｎｓｈＲＮＡ目的病毒感染ＰＣ１２细胞作为阴性对照组和Ｓｅｉｐｉｎ敲低组，同时设置正常组（正常ＰＣ１２细胞），采用蛋白质免疫印迹法检测Ｓｅｉｐｉｎ蛋白的表达；将阴性对照组与Ｓｅｉｐｉｎ敲低组细胞用脱氧核苷酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）细胞凋亡染色法和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色法检测细胞凋亡情况。

结果：慢病毒ＭＯＩ＝１００时感染效果最强，助感染试剂能增加感染效率；与正常组相比，Ｓｅｉｐｉｎ敲低组Ｓｅｉｐｉｎ蛋白表达水平降低（Ｐ＜０．０５）；与阴性对照组相比，ＴＵＮＥＬ染色结果显示Ｓｅｉｐｉｎ敲低组发红色荧光的凋亡细胞明显增加，Ｈｏｅｃｈｓｔ染色结果显示Ｓｅｉｐｉｎ敲低组细胞的细胞核致密浓染或碎块状致密浓染程度明显增多。

结论：成功构建大鼠ＰＣ１２Ｓｅｉｐｉｎ敲低细胞，下调Ｓｅｉｐｉｎ蛋白表达会增加细胞凋亡。

［关键词］细胞凋亡；帕金森病；ＰＣ１２细胞；神经变性疾病；Ｓｅｉｐｉｎ蛋白；基因干扰［中图分类号］Ｒ７４２．５；Ｒ－３３２［文献标识码］Ａ［文章编号］１０００２７０７（２０２０）０３０２４９０６ＤＯＩ：１０．１９３６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１０００２７０７．２０２０．０３．００１ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＲａｔＰＣ１２ＳｅｉｐｉｎＫｎｏｃｋｄｏｗｎＣｅｌｌＬｉｎｅａｎｄｉｔｓＥｆｆｅｃｔｏｎＡｐｏｐｔｏｓｉｓＬＶＪｖ１，２，ＨＵＹｕｍｅｉ１，２，ＲＥＮＺｈｅｎｋｕｉ１，２，３，ＸＩＥＰｅｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧＣｈｕｎｌｉｎ４，ＪＩＡＯＬｉｎｇ５，ＹＵＷｅｎｆｅｎｇ１，２（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｄｅｍｉｃａｎｄＭｉｎｏｒｉｔｙＤｉｓｅａｓｅｓ，ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｕｔｈｗｅｓｔＧｕｉｚｈｏｕＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓＰｒｅｆｅｃｔｕｒｅ，Ｘｉｎｇｙｉ５６２４００，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；４．ＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５００２５，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；５．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｒａｔＢｅｒａｒｄｉｎｅｌｌｉＳｅｉｐｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｌｉｐｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ２（ＰＣ１２ＢＳＣＬ２／Ｓｅｉｐｉｎ）ｋｎｏｃｋｄｏｗｎｃｅｌｌｌｉｎｅａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａｃｅｌｌｓ１２（ＰＣ１２ｃｅｌｌｓ）ｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅｂｌａｎｋｉｎｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄＨｉｔａｎｓＧｇｒｏｕｐ（ａｄｄＨｉｔａｎｓＧａｇｅｎｔ），ａｎｄｒｅｃｅｉｖｅｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓＭＯＩｆｏｒｖｉｒｕｓｐｒｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｔｅｓｔｔｏｓｃｒｅｅｎＨｉｔａｎｓＧｒａｇｅｎｔａｎｄａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅＭＯＩ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ＰＣ１２ｃｅｌｌｓｒｅｃｅｉｖｅｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｖｉｒｕｓａｎｄＳｅｉｐｉｎｓｈＲＮＡｖｉｒｕｓ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｎｏｒｍａｌＰＣ１２ｃｅｌｌｓ）ｗａｓｓｅｔａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｃｅｌｌｓ９４２第４５卷　第３期２０２０年３月贵州医科大学学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＩＺＨＯＵＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＶｏｌ．４５　Ｎｏ．３２０２０．３［基金项目］国家自然科学基金（８１３６０１９９）；教育部科学技术研究项目（２０１３０３２Ａ）；贵州省国际科技合作计划项目［黔科合外Ｇ字（２０１３）７０２６］；贵州省创新计划项目［黔教合协同创新中心（２０１４）０６］；贵州省教育厅项目（２０１５年贵州省普通高等学校地方病和少数民族疾病防控创新团队）；贵州省科技厅计划课题［黔科合重大专项字（２０１４）６００８］；贵州省教育厅项目［黔教合外Ｇ字（２０１３）６３］通信作者Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｏｌｉｎｇ５１５１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ；ｗｅｎｆｅｎｇｙｕ２０１３＠１２６．ｃｏｍｏｆｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐｗａｓｓｔａｉｎｅｄｂｙＴｄＴｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰＮｉｃｋＥｎｄＬａｂｅｌｉｎｇ（ＴＵＮＥＬ）ａｎｄＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８ｔｏｄｅｔｅｃｔａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｗａｓｔｈｅｂｅｓｔｉｎＭＯＩ＝１００，ａｎｄｔｈｅＨｉｔａｎｓＧｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｓ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓ，ｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｏｆＴＵＮＥＬｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｒｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８ｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄｃｏｎｄｅｎｓｅｄｂｒｉｇｈｔｎｕｃｌｅｉａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＰＣ１２Ｓｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｃｅｌｌｓａｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎｃａｎｉｎｃｒｅａｓｅａｐｏｐｔｏｓｉｓ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ（ＰＤ）；ＰＣ１２ｃｅｌｌｓ；ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅ；ｓｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎ；ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ帕金森病（ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）的病理特征是中枢和外周特定神经元群的神经退行性病变和残存的多巴胺（ｄｏｐａｍｉｎｅ，ＤＡ）能神经元内出现的嗜酸性小体－路易小体（ｌｅｗｙｂｏｄｙ，ＬＢ），主要发生在黑质致密部［１］。

PC12细胞培养方法步骤

PC12细胞培养方法步骤PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。

1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。

其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。

分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。

这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。

2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。

这些改变尤见于未分化型PC12细胞。

主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。

因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。

3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。

细胞一天一看即可，经常动会有影响。

注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。

复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。

（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。

5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。

6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。

我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。

肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

收稿日期:2000-12-11 修回日期:2001-05-30基金项目:黑龙江省自然科学基金(9717)*通讯作者:E mail:Wangam@文章编号:1001 6325(2001)06 0551 03肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用刘长振1,王爱民1*,谢振华1,聂丹瑶1,马春2,杨歌德1,贺雨虹3(哈尔滨医科大学1 生物化学教研室;2 神经生物教研室,哈尔滨150086;3 清华大学生命科学院,北京100084)摘要:本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。

将培养的细胞进行分组:正常对照组;损伤组;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠;肌肽保护组,同损伤组的制备,但予先加入肌肽。

用MTT 法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH 活性,观察了细胞形态和蛋白电泳等。

结果表明:在保护组,MTT 的测定结果高于损伤组,LDH 低于损伤组,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用。

关键词:PC12细胞;肌肽;氧化应激损伤中图分类号:Q255 文献标识码:A随着自由基生命科学研究的不断进展,氧化应激损伤和抗氧化保护作用的理论已越来越受到人们的普遍关注,诸如象动脉硬化,糖尿病,Alzheimer s 病,白内障已及衰老等均被公认是与氧化应激损伤及自由基代谢失调相关[1]。

而寻找,研制和开发更有效的制剂,药物用以延缓,阻止,抵制这些疾病的发生发展,或预防衰老,探索抗氧化剂保护细胞的途径和作用机制已成为医学领域的重要研究课题。

本文的目的是以PC12细胞作为氧化应激损伤的靶细胞,通过比较各组MTT 的检测结果,比较LDH 活力水平及交联蛋白质电泳等实验,借以观察肌肽[2,4](carnosine)是否有抗氧化的神经保护作用,从而为深入研究肌肽的抗氧化机制及它的开发应用提供有意义的药物学依据。

1 材料和方法1 1 实验细胞PC12细胞,购自上海细胞生物所细胞库1 2 试剂Canosine ,NADH,MTT,购自Sigma 公司;DME M 培养基,胎牛血清,Hyelone 公司;胰酶,牛血清蛋白等,Sigma 公司;其它试剂,均为国产分析纯。

胰岛素样生长因子1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用

细胞与分子生物学胰岛素样生长因子-1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用马珂1，2，徐会友1，2，赵飞2，张健1，2，江继鹏1，2，代晨1，2，王仁杰2，陈旭义2△摘要：目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对氯化钴（CoCl2）诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的作用及机制。

方法取对数生长期的PC12细胞，分别以10、20、40、80µmol/L的CoCl2溶液和100、200、400µg/L的IGF-1溶液处理细胞，CCK-8法检测细胞活力，得出CoCl2和IGF-1最佳干预浓度。

根据选定的实验条件，应用CoCl2处理PC12细胞建立HIE细胞模型，实验分为对照组、CoCl2处理组、IGF-1+CoCl2处理组。

分组处理24h后采用CCK-8法检测细胞存活率；TUNEL染色检测细胞凋亡情况；Western blot检测各组细胞Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白的表达水平。

最后在上述实验的基础上，设CoCl2处理组、CoCl2+IGF-1处理组、HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇（2-MeOE2）+ CoCl2组和CoCl2+2-MeOE2+IGF-1组，Western blot观察IGF-1、2-MeOE2及两者共用对PC12细胞HIF-1α及Bax的表达水平的影响。

结果CCK-8检测结果显示，40µmol/L CoCl2和200µg/L IGF-1为最佳干预浓度。

利用以上浓度分组干预细胞24h后，与CoCl2组相比，IGF-1+CoCl2处理组细胞存活率明显提升，TUNEL阳性细胞数和细胞比例降低，同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调，促凋亡蛋白Bax、Caspase-3，HIF-1α表达下调，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

应用2-MeOE2对细胞进行预处理后，CoCl2+2-MeOE2组与2-MeOE2+IFG-1组HIF-1α和Bax蛋白表达差异无统计学意义，但均较CoCl2+IGF-1组明显下调（P＜0.01）。

葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤的保护作用

葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤的保护作用海峡药学2011年第23卷第3期1H),10.33(s,1H);¨CNMR(400MHz,DMSO—d6)8(ppm)25.27(2C).28.65(2C),32.48,36.61,119.26(2c),123.14,128.87(2C),139.58.169.34,171.45;IR:3312,3270,1663,1618.1599,1530,1444cm.3讨论在伏立诺他的合成中,本方法做了如下的改进:①缩短了反应步骤.也避免了工业上大量用乙酸酐蒸馏的困难,而此法操作简便,收率高,适合工业化生产;②粗品用乙腈进行重结晶.效果很好.通过一次精制产品的纯度就能达到99.6%以上.唯一不足就是氯甲酸乙酯和氯甲酸异丁酯有刺激性气味.工业化生产上需要做好安全通风措施,保证人员安全.目标化合物的结构经MS,'H-NMR.13C-NMR.IR予以确认.参考文献[1]RichonVM.EmilianiS,V erdinE,eta1.Aclassofhybridpolar Inducersoftransformedcelldifferentiationinhibitshistonedeacety,实验研究?lases[J).ProcNatlAcadSciUSA.1998.95(6):3003—3007.[2】MarkPA.Discoveryanddeve1opmentofjL}【Aasananticancera-gent(J).Oncogene,2007,26(9):1351.1356.(3)BreslowR,MarksPA,RifkindBA.eta1.NoveIpotentinducersof terminaldifferentiationandmethodsofusethereof(P】.WO:9307148.199304-15.[4]StowellJC.HuotRI,vanV oastL.eta1.ThesynthesisofN.hydroxy—N.phenyloctanediamideanditsinhibitoryeffectonproliferationof AXCratprostatecancerce!Ls【J].JMedChem,1995.38(9):1411-1413.[5]SbardellaEG,MassaS.AnewfacileandexpeditioussynthesisofN-hydroxy-N'-phenyloctanediamide,apotentinducerofterminalcytod-ifferentiation[J].OrgPrepProeedlnt,2001.33(4):391.394.[6]GediyaLK,ChopraP.PurushottamacharP.eta1.Anewsimpleandhigh?yieldsynthesisofsuberoylanilidehydroxamicacidanditsin- hibitoryeffectaloneorincombinationwithretinoidsonproliferation ofhumanprostatecancercells[J].JMedChem.2005,48(15):50475051.葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤的保护作用牛慧娟,戴平,杨中林(1.中国药科大学教育部现代中药重点实验室南京210009;2.广西桂林医学院桂林541004)摘要:目的研究葛根素对PC12细胞缺氧损伤的影响.方法使用氯化钻对PC12细胞制备缺氧损伤模型.通过测定受损细胞给药后的活力,受损细胞LDH泄漏量和受损细胞SOD活力,研究葛根素对受损细胞的保护作用.结果在5x10_..～2x10一'Img?mL一'范围内,葛根素显着地增加模型受损细胞的活力;降低细胞LDH自々泄露量;并增强受损细胞的SOD活性.结论葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤具有修复作用.?关键词:葛根素;PC12细胞;氯化钻;缺氧损伤.中圉分类号:R969.4;R282.71文献标识码:A文章编号:1006.3765f2011I.03.0190.03 ProtectiveeffectsofpuerarinonanoxiainjuryinculturedPC12cellsNIUHui.iuan',DAIPing,Y ANGZhong.1in(boratoryofModernChineseMedicine,Ch inaPharmaceuticalUniversity,Nanjing,210009,China;2.GuangxiGuilinMedicalUniversity,Guilin541004, China)ABSTRAOT:OB3ECTIVEToinvestigatetheeffectsofpuerarinonanoxiainjuryincultured PC12cells.METHODSCulturedPC12cellsweretreatedwith150~tmo卜I一cobaltdichlorideincombinationwithglu.cosedeprivation.Theprotectiveeffectsofpuerarinonthemodelwereevaluatedbycellularvit ality.1actatedehy—drogenate(LDH)effluxassayandcontentofS0D.RESULTspuerarin.withintherangeof5×10一～2×10—mg'mI～significantlyincreasecellularvitality.antagonizeI』)Heffluxandimprovetheactivityof SoD.CONCLUS10NItwasshownthatpuerarinmarkedlyprotectedPC12cellsfromanoxiai njury.KEYWORDS:Puerarin;PC12cdl;Cobaltdichloride;Anoxiainjury作者简介:牛慧娟,女.硕士,中国药科大学,E.mail:*********************通讯作者:杨中林.女.博士生导师.E.mail:*****************.en19O?StraitPharmaceutical[ournalV ol23No.32011脑组织极为敏感,当其缺血缺氧时,极易引起神经细胞的损伤.在目前研究脑缺血损伤的模型中PC12是常用的细胞.PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤克隆的细胞株.具有神经元细胞的基本生物学特性.细胞膜上有NMDA受体,胆碱能M,N受体等,可对神经生长因子产生反应.获得许多交感神经元特有的生物性质【1已被广泛用作研究神经细胞功能的实验材料.细胞缺氧模型中常用的造模方法包括物理缺氧法和化学缺氧法等.化学缺氧法是指使用化学试剂使细胞缺氧的方法.二氯化钴就是一种可以体外诱导细胞损伤的化学试剂,能够很好的模拟神经细胞缺氧损伤￡引.葛根素是一种异黄酮类化合物,广泛应用于治疗心脏血管疾病.既往文献表明:葛根素对A8诱导的PC12细胞凋亡有保护作用L3】,葛根素也可以降低过氧化氢诱导的PC12损伤中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性【4].也有文献报道葛根素对神经瘤细胞株N2a细胞的物理缺氧损伤保护作用,可以降低ca~pase一3活性和表达【5】.推测葛根素对细胞缺氧损伤可能具有保护作用.但目前尚无关于葛根素对氯化钴致PC12细胞缺氧损伤模型作用的相关报道,因此本文研究了葛根素对该模型的作用的影响,以便从另一个侧面研究证明葛根素对细胞缺氧损伤的具有保护作用.l材料与方法1.1试验药物葛根素(购自中国药品生物制品检定所,纯度为≥96.0%,批号110752—200912),尼莫地平(Nim,山西亚宝药业集团股份有限公司,批号081007).1.2细胞PC12细胞株(为大鼠肾上腺嗜铬肿瘤细胞株.购自于中国医学科学院基础医学研究所)1.3试剂小牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所);RPIM1640培养基(Gibco产品);胰蛋白酶(Trypsin(1:250) AMRESCO,USA);溴化一(4,5一二甲一2一噻唑基)-2,5一二苯基四氮唑(MTT)(南京生兴生物技术有限公司产品);乳酸脱氢酶(LDH)超氧化物歧化酶(SOD)(南京建成生物技术有限公司).1.4仪器DG5033A型酶联免疫检测仪(华东电子管厂); COICXDS-1B型倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂);cch培养箱(thermo产品);JJ—CJ一1FD超净工作台(吴江市净化设备有限公司).1.5方法1.5.1细胞培养:细胞置培养瓶中于95%(),,5%CCh,37℃条件下传代培养,培养基为RPMI1640培养基(含10%小牛血清,100U?mLI1青霉素和:t00/~g?mL链霉素).1.5.2实验分组及给药:实验用细胞在96子L培养板中培养.取生长良好的PC12细胞接种于96孑L培养板,1×10个细胞ITL,培养24h后,弃原液.)对照组:加入RPMI1640培养基(含10%小牛血清)培养.②模型组:加入低糖培养基以及终浓度为150/~mol?LI1氯化钴共作用4h.③阳性对照组:加入低糖培养基,终浓度为150/~mol?L-1氯化钴以及0.05mg?mL的Nim共作用4h④葛根素给药组:加入低糖培养基,终浓度为l5Omol?L氯化钴以及终浓度为5×10～～2×10mg?mL的葛根素共作用4h.1.5.3细胞活力测定:作用4h后加入终浓度为0.5mg?mL的M1vr反应4h,吸去上清液(注意避免吸走甲瓒结晶),每孔加200#LDMSO,待孑L内颗粒完全溶解后,以DMSO调零,测定570nm处的光密度值(0D).计算给药组对氯化钴诱导的PC12细胞的活力.1.5.4LDH泄漏量测定:用LDH试剂盒测定LDH含量,计算给药组对氯化钴诱导的PC12细胞的培养介质中LDH含量.1.5.5SOD活力测定:用SOD试剂盒测定SOD活力,计算给药组对氯化钴诱导的PC12细胞的S()D活力.1.6数据处理实验数据输入Excel表格,使用Excel统计软件处理,结果以平均数±标准差(x±s)表示.组间差异比较采用t检验.表1葛根素对氯化钴致PC12细胞损伤的修复作用实验结果lX土s,n= 6J注:与对照组比较:P<0.05.P<0.01;与模型组比较:P<0.05.★P<0.01.计算公式:细胞活力增值率=(给药组OD值.模型组OD值)/模型组OD值.2结果模型组与正常组相比,细胞活力明显降低,LDH泄漏量显着增加.SOD活性显着性降低,即显示造模成功.葛根索在5×10I4～2×10-1mg?mL的浓度范围内能极显着提高细胞活力,显着抑制LDH的泄露,提高SOD活性的能力,这说明葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤具有修复作用(见表1).3讨论MTT法是检测细胞活力的经典方法,处于增值期的活细胞线粒体在能量代谢时产生大量的的琥珀酸脱氢酶,可将外源性M1vr还原成紫色结晶甲攒(forlTlazam).甲瓒被DMSO溶解后,在570nm处有最大吸收峰,在一定范围内吸收值与活细胞浓度呈线性关系.LDH是无氧酵解过程中的一个关键酶.广泛存在于各组织的细胞浆内,通常情况下,神经细胞漏出很少.而受损神经元因细胞膜损伤,LDH漏出明显增加,神经细胞损伤程度与LDH释放量成比,故测定培养液中LDH活性是反映细胞损伤的一种敏感且较为简便的指标【6】. 自由基是机体代谢过程中不断产生的损害自身的毒性产物,它广泛参与机体的生理与病理过程.同时机体内也存在许多】9】?海峡药学2011年第23卷第3期自由基清除剂,保护机体免受损伤.超氧化物歧化酶(SOD)是机体内清除氧自由基的重要物质,在清除自由基的动态平衡状态中发挥着极大作用173.本实验结果表明,葛根素在5X10～2×10mg?rnL1范围内可以不同程度地提高细胞活力,抑制LDH泄露,提高SOD酶活力.葛根素对氯化钴所致PC12细胞缺血缺氧损伤具有一定程度的保护作用.既往关于葛根素对细胞缺氧损伤模型的研究虽多,但尚无关于葛根索对氯化钴致PC12细胞缺氧损伤模型作用的相关报道,本实验从另一个侧面研究证明了葛根素对细胞缺氧损伤的保护作用.参考文献(1]ShaferTJ,AtchisonWD.Transmitterionchannelandreceptorproper. tiesofpheochromoeytoma(PC12)cells:amodelforneurotoxicolog.ical教学探讨?studies[J].Neurotoxico|ogy,1991.12:473.[2]权晶晶.二氯化钴在体外细胞缺氧研究中的应用【J】.国际口腔医学杂志,2009.6(4):455.[3]张海英.胡海涛,刘亦恒,等.葛根索对aft25.35诱导PCI2细胞凋亡的影响[J].中药材,2008,31(4):543.(4]王立祥,曾季平,魏欣冰.等.葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用[J].山东大学,2006,44(1):20.[5]陈娟,陈庆,肖卫东,等.葛根素在体外模拟脑缺血再灌注诱导的神经元损伤中的保护作用(J].中华实验外科杂.2005,10(22):1254.(6]黄丽萍,黄敬耀.麝香酮对D_半乳糖所致拟痴呆小鼠抗痴呆作用研究[J].江西中医学院,2002.14(1):35.[7]李素婷,王海林,杨鹤梅.王宝元.黄芩茎叶总黄酮对脑组织缺氧的保护作用(J].中国中医基础医学杂志.2001,7(1):35.《中药药剂学》教学中探讨教改关键之教师因素王晓颖(福建中医药大学福州350108)摘要:教师是教学改革的关键因素之一,教师的教学能力关系到教学质量的高低.本文从更新教学内容,增加交流,深入实践,积极科研,解读实例,适时进修等方面,就教师如何在(中药药剂学)教学过程中提高自身教学水平.以促进教学质量不断提高作一探讨.关键词:中药药荆学;教学改革;教师因素;教学质量中图分类号:R95文献标识码:B文章编号:1006,3765(2011).03—0192.02 着名教育家陶行知说过:"做先生的,应该一面教一面学,并不是贩买些知识来,就可以终身卖不尽的."在教学改革过程中,我们大多在研究和探讨如何教学生以提高教学质量.少有探讨作为教学主导者的教师应该如何不断地提高自身的教学水平,而教学质量高低的关键恰恰在于教师的教学能力[1].(中药药剂学)是以中医药理论为指导,运用现代科学技术,研究中药药剂的配制理论,生产技术,质量控制与合理应用等内容的--F/综合性应用技术科学,是中药类各专业教学的主干课程【2】.这要求承担(中药药剂学>教学的教师应能尽职尽责地将本学科的知识很好地传授给学生,以实现培养目标.在这个过程中,作为教学改革的关键因素之一的教师应充分发挥主导作用,不断提高教学质量.以下从几个方面探讨教师如何在教学过程中提高自身水平,以推进(中药药剂学>教学改革的不断深入.l与时俱进,及时更新教学内容教材的编写,出版需要较长的一段时间,而中药药剂学技术发展得很快,很多知识在教材出版后已经不新了,因此.需作者简Or.王晓颖,女(1978一).2003年硕士毕业于长春中医药大学中药学专业,讲师,从事中药药剂学教学与科研工作.联系电话:139****4809,E—mail:******************192?要教师在教学的过程中,在深入研究基本理论的同时,及时地了解本学科的前沿知识.融入到相关知识的教学中.如在新剂型的讲授过程中,教师应大量查阅相关文献,学习和了解制剂新技术,把握新剂型发展动向,在基本剂型知识和基本技能的基础上适量地介绍给学生中药新剂型发展的前沿及新进展,做学生今后新剂型研究的引路人.另外,与<中药药剂学)教学内容密切相关的<中国药典>目前每五年就有新版问世. 而教材中涉及的(中国药典)中规定的内容也在不断变化,所以教师应对新版药典及时参阅和了解,在教学中,及时更新教材中相关内容,让学生及时掌握有关中药药剂的新要求和新规定.2增加交流.改进教学方法经常参加教学会议是增加备高校同学科教师之间交流,促进共同进步的好机会.交流过程中,同行教师对教学改革提出问题,各高校的教师可以共同探讨.一起解决,很多好的教学模式和教学方法都是在共同讨论和相互学习中产生,成熟并推广的.在<中药药剂学)的教学中,现在已有多种新的教学方法被广泛采用,如案例教学法,类比教学法,流程教学法等【3j.授课教师应在交流中学习并拓展这些方法,了解各种教学方法的利弊,在教学中,针对自身教学情况选择适合的方法应用于课堂教学,以达到最佳教学效果,提高教学质量,。

PC12细胞在缺氧条件下的自噬现象

PC12细胞在缺氧条件下的自噬现象胡中慧;马慧萍;樊鹏程;李加恒;王俊丽;蒙萍;贾正平【摘要】目的:考察PC12细胞内自噬发生与缺氧时间的关系,探讨自噬对缺氧细胞的影响作用.方法:以PC12细胞为模型,将对数生长期的细胞加入96孔培养板,37℃、5％ CO2培养24h后,放入0.5％O2、94.5％ N2和5％ CO2的培养箱缺氧1h、3h、6h、9h、12h、24h、36 h和48h,用MTT法检测细胞存活率,透射电镜观察细胞内自噬体,Westen blot法检测自噬相关蛋白(LC3B、Atg5和Beclint)的表达,用试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧自由基(ROS)和线粒体膜电位(MNP)水平,探究缺氧不同时间自噬对PC12细胞的作用.结果:在缺氧3～12h,PC12细胞自噬明显增加,自噬相关蛋白(LC3B、Atg5和Beclin1)表达增加,尤其是缺氧9h,PC12细胞存活明显增加,表明短时间缺氧自噬对细胞起保护作用,而随着缺氧时间的延长细胞存活明显降低,自噬相关蛋白表达水平减少,细胞LHD和ROS水平明显增加.MMP水平显著下降,细胞凋亡明显增加.结论:在缺氧早期自噬对PC12细胞起保护作用,但缺氧时间较长,超过了细胞自身调节能力导致细胞死亡.【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2017(033)001【总页数】4页(P65-68)【关键词】自噬;PC12细胞;缺氧;自噬相关基因【作者】胡中慧;马慧萍;樊鹏程;李加恒;王俊丽;蒙萍;贾正平【作者单位】兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州730050;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050【正文语种】中文【中图分类】Q255【DOI】 10.12047/j.cjap.5319.2017.016氧气对所有真核细胞的正常发育、新陈代谢和内环境稳定至关重要。

PC12细胞的培养整理总结

一、PC12细胞的折光性本来就比较好，刚传代以及新分裂的细胞都是亮的，至于你说的贴壁的细胞，不知道是否是圆的，在牛血清的刺激下，特别是国产的，会使pc12细胞发生定向的分化，长突起，贴壁就比较牢。

PC12分为未分化的和分化的.前者是球状,成团生长;后者形成很多丝状体;而丁香园里有人说楼主的这种细胞严格来讲已经不能算是PC12了.前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰,查了一些资料,现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助!培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中,置于ＣＯ2培养箱(37℃,95%空气5%ＣＯ2),培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ,高糖),加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。

分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形,直径15～20μｍ,也有椭圆或多角形的,扁平的细胞少见,倾向于聚集成小团簇状(A图)。

分化后:加入ＮＧＦ后的24ｈ内细胞停止分裂,长出似交感神经元样的突起;第4～14ｄ,细胞体积增大,突起增多并增长,形成网络,数周后,突起可长达500～1000μｍ(B图)。

NGF可促进PC12细胞向类似交感神经元样的形态分化,最终导致PC12细胞在生理、生化方面都具有神经元样的功能[12]。

分化后的PC12细胞对ACh的敏感性增大5~7倍有的战友提到分化的PC12药敏性更好是不是因为分化后的PC12细胞对ACh的敏感性增大5~7倍二、我养这个细胞一年多了，有点经验和大家交流一下。

1.我用的是15％的马血清和%的胎牛，胎牛要用进口的，国产的容易分化。

2.关于表面处理的问题，值得注意的是胶原和多聚赖氨酸使细胞贴壁的原理不太一样。

多聚就是纯粹的物理黏附作用，而胶原则是刺激的细胞，使细胞的表达一些能有助于贴壁的蛋白，这种刺激作用还涉及到MAPK途径，所以如果做细胞信号转导的战友要注意到这点。

相关的文献可以自己到pubmed上查找。

3.完全分化的细胞不能传代，因为贴壁已经很牢固，强迫其脱离可能造成，尤其是细胞的突起断裂，细胞存活率很低。

川芎嗪拼合物对PC12细胞损伤保护作用的研究

川芎嗪拼合物对PC12细胞损伤保护作用的研究毛佩;毕思玲;王鹏龙;向虹俊;徐冰;任丽薇;雷海民;张宇忠【摘要】目的:探讨川芎嗪拼合物T-CA对CoCl2拟缺血模型PC12细胞损伤的神经保护作用及其机制.方法:体外培养NGF诱导分化的拟缺血损伤PC12细胞,将其随机分为Normal组、Model组、T-CA组及Positive组.采用MTT比色法检测各组细胞OD值的变化,应用AO/EB荧光染色及DAPI染色法观察各组细胞的凋亡情况,应用HE染色法观察各组细胞形态学的变化情况,并采用免疫细胞化学方法检测各组细胞中Bad和Bcl-xl阳性颗粒的表达,最后应用Western Blot法检测各组细胞中NF-κB/P65和Caspase-8蛋白的表达情况.结果:与Normal组及Positive 组相比,经T-CA处理后的CoCl2拟缺血模型PC12细胞的活性明显增强(P＜0.05或P＜0.01);给药组中细胞数量增多,细胞形态较好,细胞突起生长正常、密集,坏死及凋亡的细胞减少;Bad阳性颗粒的表达明显减弱,而Bcl-xl阳性颗粒的表达明显增多;NF-κB/P65的表达量变化不明显,T-CA组Caspase-8的表达水平稍有升高,但差异没有统计学意义(P＞0.05);Positive组Caspase-8的表达略有降低,但差异不具有统计学意义(P＞0.05).结论:化合物T-CA可能通过作用于细胞凋亡的非死亡受体途径,上调Bcl-xl蛋白表达和下调Bad蛋白表达来抑制PC12细胞凋亡,发挥神经保护作用.【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2018(035)003【总页数】7页(P71-77)【关键词】川芎嗪;PC12细胞;缺血性脑卒中;神经保护;细胞凋亡【作者】毛佩;毕思玲;王鹏龙;向虹俊;徐冰;任丽薇;雷海民;张宇忠【作者单位】北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029【正文语种】中文【中图分类】R285.5缺血性脑卒中是临床常见疾病，具有高发病率、高致残率及高致死率的特点[1]。

低浓度亚硝酸钠预处理对乙醇损伤PC12细胞的保护作用

低浓度亚硝酸钠预处理对乙醇损伤PC12细胞的保护作用李延红;周占业;史齐;皇甫超申【摘要】目的探讨低剂量NaNO2预处理对乙醇损伤PC12细胞的保护作用.方法采用400 mmol·L-1乙醇处理2 h制作PC12细胞乙醇损伤模型.细胞增殖指标采用MTT、活细胞计数法;细胞凋亡检测采用流式细胞术和Hoechst 33258/PI活细胞染色法;比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT) 活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量.Western blot检测相关蛋白表达.结果用0.14 mmol·L-1 NaNO2预处理细胞24 h,再用400 mmol·L-1乙醇作用2 h,与单纯乙醇处理组相比,细胞凋亡率明显下降;SOD、CAT酶活性和GSH-Px含量升高,MDA含量下降;Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量降低,Bcl-2和HIF-1α蛋白表达量升高;一氧化氮清除剂c-PTIO可以部分逆转NaNO2的这些作用.结论低剂量NaNO2预处理能够提高PC12细胞抗氧化水平,拮抗乙醇诱导的细胞凋亡,机制与亚硝酸盐还原为NO和HIF-1α的表达增加有关.%Aim To study the cytoprotective effect on ethanol - induced damage in PC 1 2 cells pre - treated with low-dose sodium nitrite. Methods To establish cell damage model. PC12 cells were pre-treated with 400 mmol · L-1 ethanol for 2h. Following ethanol insult,PC12 proliferation was measured by MTT and cell counting, apoptosis by FITC-annexinV/PI flow cytometry and Hoechst 33258/PI staining. Cellular contents of SOD. catalase ( CAT ), glutathione peroxidase GSH-Px ) and malonyldialdehyde ( MDA ) were measured by colorimetric technique, and apoptosis-related protein by Western blot. Results Compared with only ethanol exposure at 400 mmol · L-1 ethanol for 2h,pre-treatment with NaNO2 at 0. 14 mmol · L-1 for 24 h made PC12cells more viable. reduced apoptosis, increased cellular content of CSH-Px. enhanced activity of SOD and CAT. Western blot showed that Bax.Caspase-9, Caspase-3 protein level decreased, while Bcl-2 and HIF-1α protein level increased. Furthermore, c-PTIO salvaged partly the effects ofNaNO2.Conclusions Pre-treatment of PC12 with low dose of NaNO2 can increase the anti-oxidant activities and resist the apoptosis induced by ethanol. Reduction of NaNO2 to NO and increased HIF-Ia protein in PC12 cells may play important roles in this scenario.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2011(027)007【总页数】6页(P952-957)【关键词】亚硝酸钠;一氧化氮;PC12细胞;预处理;乙醇;凋亡【作者】李延红;周占业;史齐;皇甫超申【作者单位】河南大学医学院环境医学研究所,河南,开封,475004;河南大学医学院环境医学研究所,河南,开封,475004;河南大学医学院环境医学研究所,河南,开封,475004;河南大学医学院环境医学研究所,河南,开封,475004【正文语种】中文【中图分类】R329.24;R329.25;R916.4;R977.3人体亚硝酸盐不仅是一氧化氮(nitric oxide，NO)代谢过程中的一种惰性产物［1］，而且在细胞信号传导以及维持内环境NO稳态中起重要的作用［2］。

PC12细胞转化为神经元样细胞的培养、鉴定及氧糖剥夺模型的制备

PC12细胞转化为神经元样细胞的培养、鉴定及氧糖剥夺模型的制备郭洪亮;徐忠信【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(016)012【总页数】3页(P2182-2184)【作者】郭洪亮;徐忠信【作者单位】首都医科大学附属北京朝阳医院,神经内科,北京100020;北华大学附属第一临床医院;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033【正文语种】中文在缺血性神经疾病的研究中，由于体内环境较为复杂，从体外实验模拟体内试验的研究愈来愈受到重视，因神经元是不可再生细胞，神经元的原代培养难度较大，最终可用于实验的数量、纯度均受到一定限制。

本实验采用PC12细胞是由大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤分离并建立起的细胞系，其在体外经NGF刺激诱导后可向交感神经元分化，最终导致PC12细胞在生理、生化方面都具有神经元样的功能，同时应用体外氧糖剥夺（oxygen－glucose deprivation，OGD）来模拟体内脑缺血过程，为今后进一步探讨缺血缺氧状态下对神经元的活力、凋亡、信号通路机制的研究奠定物质基础。

1 材料和方法1.1 实验细胞大鼠PC12细胞株购自北京金紫晶生物医药技术有限公司（中国医学科学院肿瘤细胞库）。

鼠神经生长因子（NGF）（Sigma公司，美国）。

1.2 实验方法1.2.1 PC12细胞的培养、传代将细胞悬液加入含有DMEM完全培养基，培养液2－3天更换一次。

当细胞汇集至80%时进行传代接种。

1.2.2 鼠神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞转化为神经元样细胞 PC12细胞培养1－2天，观察细胞贴壁后，用含NGF终浓度为50ng／ml的培养液进行培养。

1.2.3 PC12细胞转化为神经元的鉴定（1）形态学观察细胞培养板每日置于倒置显微镜下观察细胞胞体与突起形态、贴壁与生长情况。

（2）免疫细胞化学染色鉴定 PC－12细胞分别在NGF培养液中培养24小时后，用NSE免疫细胞化学染色进行鉴定，显微镜下观察，以在细胞膜和胞浆内出现棕黄色颗粒者判定为阳性，每张爬片随机选取3个100×视野，计数，取均值，计算阳性细胞百分比，其中突起的长度超过胞体直径2倍者计为阳性，每次至少计数3个孔取平均值。

梓醇对缺糖缺氧诱导 PC12细胞损伤的保护作用研究

梓醇对缺糖缺氧诱导 PC12细胞损伤的保护作用研究王莹;刘玉刚;陈占法【摘要】目的：探讨梓醇对抗缺糖缺氧诱导的PC12细胞损伤作用。

方法梓醇预处理PC12细胞，加入含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液制备损伤模型，检测细胞存活率，乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛水平，检测细胞内游离Ca2＋浓度。

结果与模型组比较，梓醇可剂量依赖性的提高细胞存活率（ P ＜0．01），减少乳酸脱氢酶漏出率（ P ＜0．05或＜0．01），提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性，拮抗丙二醛水平升高，降低细胞内游离Ca2＋浓度（ P ＜0．05或＜0．01）。

结论梓醇对缺糖缺氧诱导的PC12细胞损伤具有保护作用，作用机制可能与其清除自由基和抑制钙超载有关。

%Objective To investigate the protective effects of catalpol on PC 12 cells damage induced by oxygen-glucose deprivation .Methods PC12 cells were pretreated with catalpol , then exposed to sodium hyposulfite to establish cell injury model .The cell survival rates were detected by MTT assay .The activities of LDH ,SOD,GSH-Px and MDA levels were detected by colorimetry ,and free Ca2+concentration within cell was detected by fluorescence probe .Results As compared with model group ,catalpol could enhance significantly survival rate of PC12 cell in a dose-dependent manner ( P <0.01),and could reduce the efflux of LDH from damaged cell and increase the activities of SOD ,GSH-Px,however,which could decrease MDA levels and intracellular Ca2+concentration ( P <0.05 or P<0.01).Conclusion Catalpol can protect PC12 cells from oxygen glucosedeprivation injury , and its action mechanism may be related with removing free radical and inhibiting calcium overload .【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】3页(P14-16)【关键词】梓醇;PC12细胞;缺糖缺氧;Ca2+【作者】王莹;刘玉刚;陈占法【作者单位】056002 河北省邯郸市，河北工程大学医学院药理教研室;河北工程大学附属医院骨科;河北工程大学附属医院骨科【正文语种】中文【中图分类】R965.1脑组织代谢旺盛，血流量丰富，因此脑缺血极易引起神经细胞损害，致功能缺失。

Zn_2_对A_1_40_诱导PC12细胞损伤的保护作用_宋明洁

阿尔茨海默病(Alzheimer ’s disease,AD)是一种进行性中枢神经系统退行性疾病,也是最常见的老年痴呆症类型.AD 的主要临床表现为行为异常,记忆力减退和认知能力下降[1],AD 的三大典型病理特征为胞外出现老年斑(senile plaques,SPs)、胞内出现神经纤维缠结(neurofibirillary tan －收稿日期:2013-05-03;修回日期:2013-07-04基金项目:国家自然科学基金资助项目(31071512);北京市“启明星”大学生科技创新项目(1201311417027)作者简介:宋明洁(1987-),女,山东聊城人,硕士研究生,主要从事老年性痴呆发病机理研究,E -mail:mingjie.song@;*通讯作者:姜招峰(1956-),男,黑龙江哈尔滨人,北京联合大学教授,博士生导师,主要从事衰老发生机理及老年性痴呆发病机理的研究,Tel:010-********,E -mail:zhaofeng@.Zn 2+对A β1-40诱导PC12细胞损伤的保护作用宋明洁1,戴雪伶2,常平2,姜招峰2*(1.首都师范大学生命科学学院,北京100048;2.北京联合大学生物活性物质与功能食品北京市重点实验室,北京100191)摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer ’s disease,AD)是一种进行性中枢神经系统退行性疾病,也是最常见的老年痴呆症.锌是人体必不可少的微量元素,在大脑海马中含量丰富,若海马中锌含量不足,会出现记忆力减退等症状并最终导致AD.通过MTT 法探索不同浓度锌离子作用于A β1-40损伤PC12细胞模型的最适浓度,并将实验分为对照组、A β损伤组、A β损伤前补锌组、A β损伤后补锌组、A β损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组,通过Hoechst33342荧光染色和Caspase -3活性检测实验分析细胞凋亡情况;通过检测LDH 含量分析细胞损伤程度并运用Western blotting 方法检测相关蛋白表达量,结果表明锌离子具有保护PC12细胞免受A β1-40损伤的作用,并且这种保护作用发生在A β损伤作用之前,在A β损伤后补充锌作用不明显.这一结论为进一步研究锌离子在AD 发生发展中的作用提供了实验依据.关键词:阿尔茨海默病;锌离子;β-淀粉样蛋白;tau 蛋白中图分类号:R749.1文献标识码:A文章编号:1007-7847(2013)04-0331-06Zn 2+Protects PC12Cells Against the Injury of A β1-40SONG Ming -jie 1,DAI Xue -ling 2,CHANG Ping 2,JIANG Zhao -feng 2*(1.College of Life Science,Capital Normal University,Beijing 100037,China ;2.Beijing Key Laboratory of BioactiveSubstances and Functional Foods,Beijing Union University,Beijing 100191,China )Abstract ：Alzheimer ′s disease (AD),a progressive neurodegenerative disease,is the most common form of dementia.Zinc,an essential element to the human body,is abundant in the hippocampus of the brain.The symptom of memory loss develops in case of zinc insufficient,eventually leading to AD.In this study,we in -vestigated the optimal protective concentration of zinc on A β1-40treated PC12cells using MTT assay.Cells were subgrouped into Control,A β1-40injury group,zinc supplement before A β1-40injury group,zinc supple -ment after A β1-40injury group,zinc and zinc ion chelator TPEN supplement before A β1-40injury group.Cell apoptosis was assessed by Hoechst33342staining and Caspase -3activity assay.LDH assay was conducted to detect cell damage,and the related proteins were assessed by Western blotting.The results showed that zinc could protect PC12cells from A β1-40injury only when zinc was added prior to A βexposure,whereas zinc ad -dition after A βinjury suggested non -significant protective effect.These findings provide evidence for further study on zinc in the process of AD.Key words:Alzheimer ′s disease;zinc;β-amyloid;tau（Life Science Research ，2013，17（4）：331～336）第17卷第4期生命科学研究Vol．17No．42013年8月Life Science ResearchAug.2013生命科学研究2013年gles,NFTs)以及神经元的缺失,其中老年斑的主要成分为Aβ[2].β-淀粉样蛋白级联假说认为[3]在AD 患者中,Aβ产生与清除机制的失衡导致Aβ积累,而Aβ积累引起细胞一系列病变并最终导致神经元死亡,本研究以该假说为依据,采用Aβ诱导PC12细胞损伤构建AD细胞模型.微管系统是神经细胞骨架成分,由微管蛋白及微管相关蛋白组成,tau蛋白是含量最高的微管相关蛋白之一,在细胞骨架构成、突起生长、神经元塑形等过程中起了重要作用,其丢失涉及到神经元结构破坏和神经功能障碍是导致AD的重要原因[4,5].有研究认为[6]低浓度的锌有保护分化的PC12细胞免受Aβ1-40损伤的作用,但锌是在Aβ1-40损伤前还是在Aβ1-40损伤后起作用鲜有人研究,本实验通过倒置显微镜观察PC12细胞形态变化,Hoechst33342荧光染色观察细胞核凋亡, Caspase-3活性检测细胞凋亡情况,MTT实验、LDH含量检测细胞损伤程度,Western blotting技术检测tau-5蛋白含量探究锌离子对Aβ1-40诱导PC12细胞损伤的保护作用及最佳作用时间,为进一步研究AD的发病机制和探索新的治疗途径奠定基础.1材料与方法1.1实验细胞高度分化的褐家鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞购买于中科院上海生命科学研究院细胞资源中心.1.2实验试剂DMEM高糖培养基购自美国Gibco公司; Aβ1-40购自美国Sigma公司;Tau-5鼠抗单克隆抗体(可检测tau蛋白总量)购自美国Santa Cruz生物技术公司;羊抗鼠标记的异硫氰酸荧光素(huoresecein isothiacyanate,FITC)购自北京中山生物技术公司;MTT购自美国Sigma公司;Hoechst 33342购自美国Sigma公司;乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所;Cas-pase-3活性检测试剂盒购自上海碧云天生物技术研究所.1.3实验仪器美国Forma3111系列CO2培养箱;日本Nikon TE2000-U系列Nikon倒置显微镜(配有CCD软件);北京市百剑空净化设备厂的双面超净工作台;哈尔滨市东明医疗仪器厂HZS-H型恒温水浴振荡器;上海一恒科技有限公司DHG-9140A 型电热恒温鼓风干燥箱;美国Varioskan多功能酶标仪;美国BD Bioscience电泳成像分析系统Image Quant RTECL.1.4实验方法1.4.1Aβ1-40的配制Aβ1-40肽为冻干粉末状,其疏水性较强,极难溶于水,易溶于有机溶剂.将突变体或野生型Aβ1-40冻干粉充分溶于六氟异丙醇(HFIP),使其终浓度为1g/L,4℃下震荡2h,用超生降解法处理3min,离心去除未溶部分,将溶解的样品经0.22μmol/L 滤器过滤除菌后分装于-20℃储存.1.4.2细胞培养将PC12细胞接种于培养瓶中,完全培养液为含有10%胎牛血清和1%双抗(青霉素和链霉素)的DMEM高糖培养基,每3～4d传代一次. 1.4.3MTT法探究最佳Aβ1-40损伤浓度取对数生长期的PC12细胞,以1×105/mL的密度接种于96孔板,培养箱培养24h后加入终浓度为0(对照组)、1、2、5、8、10、15、20、25、30μmol/L的Aβ1-40,每组6个复孔.继续培养24h后倒置显微镜观察细胞形态变化,每孔弃旧培养液,并加入20μL、5g/L的MTT原液和180μL无血清培养基,放入培养箱继续培养,4h后弃去培养液并加入150μL DMSO,待沉淀溶解酶标仪测定570nm波长的吸光度值,计算存活率.1.4.4MTT法探究最佳锌离子保护浓度取对数生长期的PC12细胞,以1×105/mL的密度接种于96孔板,培养箱培养24h后加入终浓度为0(对照组)、1、2、5、10、20、30、50、70、90μmol/L的ZnCl2,每组6个复孔,4h后加入最佳终浓度的Aβ1-40,继续培养24h时间后,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测细胞存活率(方法同上).1.4.5Hoechst33342荧光染色法测细胞凋亡取对数生长期的PC12细胞,以1×105/mL的密度接种于6孔板,培养箱培养24h后将实验分5组,对照组:仅用无血清培养液培养细胞;Aβ1-40损伤组:加入最佳损伤浓度的Aβ1-40;Aβ1-40损伤前补锌组:ZnCl2预处理4h后加入Aβ1-40;Aβ1-40损伤后补锌组:Aβ1-40损伤4h后加入ZnCl2;Aβ1-40损伤前同时补锌和TPEN组:ZnCl2和2μmol/L 的TPEN预处理4h后加入Aβ1-40,24h后每组弃旧培养基,加入浓度为10mg/L Hoechst33342荧332第4期宋明洁等：Zn 2+对A β1-40诱导PC12细胞损伤的保护作用图1不同浓度A β1-40对分化PC12细胞的抑制作用Fig.1The inhibitory effect of A β1-40on differentiatedPC12cells光染液1mL,室温条件下避光作用15～20min,弃去染液,用荧光倒置显微镜观察分析.1.4.6乳酸脱氢酶(LDH)含量的测定取对数生长期的PC12细胞,以1×105/mL 的密度接种于6孔板,培养箱培养24h 后将实验分5组(方法同上)24h 后,取各组上清液用乳酸脱氢酶测定试剂盒检测LDH 活性.活细胞的胞浆内含有LDH,正常情况下LDH 不能透过细胞膜,当细胞受损细胞膜通透性改变时,该酶释放到细胞外并在辅酶Ⅰ递氢作用下使乳酸脱氢生成丙酮酸,2,4二硝基苯腙在碱性环境下呈红棕色,其颜色深浅与丙酮酸浓度呈正比,酶标仪测吸光度值,波长450nm,求得LDH 含量,含量越高细胞受损越严重.1.4.7Caspase -3活性测定取对数生长期的PC12细胞,以1×105/mL 的密度接种于细胞培养瓶,培养箱培养24h 后将实验分5组(方法同上),24h 后收集不同处理组细胞,裂解提取细胞蛋白,测定蛋白含量,按照每10μL上样蛋白体积中含10～30μg 上样蛋白的浓度上样,用Caspase -3活性检测试剂盒测Caspase -3酶活性.Caspase 是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族,Caspase -3是细胞凋亡过程中的一个关键酶,通常状态下Caspase -3处于抑制状态,当细胞受到损伤时,Caspase -3被激活,表现出高于正常水平的活性.Caspase -3可以催化底物Ac -DEVD -pNA,产生黄色的p 硝基苯胺(pNA),pNA 在405nm 附近有强吸收,从而可以通过利用酶标仪测产物吸光度来检测Caspase -3活性,活性越大细胞凋亡程度越高.1.4.8Western blotting 印迹法检测tau 蛋白含量细胞长满培养瓶后用0.25%的胰酶将其消化于离心管中,于4℃下1200r/min 离心5min,PBS 重悬清洗细胞(重复3遍),去上清加裂解液于冰上裂解30min,于4℃下13000r/min 离心10min,取上清,用BCA 试剂盒测定蛋白浓度,并按40μg 蛋白上样量计算每管的上样体积,剩余蛋白加5×上样缓冲液煮沸5min,经10%SDS -PAGE 电泳分离2h,100V 电压下转膜2h,5%脱脂奶粉封闭1h,在室温下加入鼠抗tau -5(1∶200),旋转摇床4℃孵育过夜,TBST 洗涤15min (两遍),TBS 洗涤10min,室温下加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠二抗(1∶1000),弃去二抗用TBST 洗涤15min (两遍),TBS 洗涤10min,加显色剂,放入电泳条带成像系统,曝光,成像.1.4.9数据处理结果采用SPSS 13.0软件进行统计分析,数据表示方法为x ±s .单因素比较采用独立样本T 检验;多重比较采用One -Way ANOVA 中S -N -K 检验;显著性差异水平设为P <0.05,用*表示;极显著水平设为P <0.01,用**表示.2实验结果2.1A β1-40对PC12细胞的损伤作用与对照组相比,终浓度分别为1、2、5、8、10、15、20、25、30μmol/L 的A β1-40作用于PC12细胞24h 后细胞存活率均有降低,且A β1-40浓度越高细胞存活率降低越明显,表明A β1-40有剂量依赖性抑制细胞活性的作用.由图1可知10μmol/L A β1-40作用于PC12细胞24h 效果最佳,本课题后续实验均采用此作用条件构建AD 细胞模型.2.2MTT 法测锌离子对不同处理组细胞存活率的影响设对照组细胞存活率为100%,由图2可知,低浓度的锌离子有保护PC12细胞免受A β1-40损伤的作用,且在浓度为5μmol/L 时对细胞的保护作用最强,与对照组相比有显著性差异,因此选5μmol/L 为锌离子的保护浓度用作后续实验.2.3倒置显微镜下观察锌离子对细胞形态影响的观察倒置显微镜观察见图3,对照组细胞间连接紧密,细胞呈不规则多角形,细胞突起较长,立体感强.与对照组相比,单独加入A β1-40对PC12细A β1-40concentration/(μmol ·L -1)C e l l v i a b i l i t y /(%c o n t r o l )333生命科学研究2013年图3倒置相差显微镜下分化PC12细胞形态观察(400×)(A)对照组;(B)A β1-40损伤组;(C)A β1-40损伤前补锌组;(D)A β1-40损伤后补锌组;(E)A β1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组.Fig.3Morphological observation of PC12cells under inverted phase contrast microscope (400×)(A)Control;(B)A β1-40injury group;(C)zinc supplement before A β1-40injury group;(D)zinc supplement after A β1-40injury group;(E)zinc and zinc ion chelator TPEN supplement before A β1-40injury group.图2锌离子和A β1-40共同作用于PC12细胞Fig.2Effects of zinc and A β1-40on PC12cells胞会产生一定的损伤作用,细胞由不规则多边形变为球形,突起变短,细胞变圆,贴壁性变差;A β1-40损伤前补锌组,A β1-40对PC12细胞的损伤作用有所缓解,细胞状态与对照组相似;A β1-40损伤后补锌组和A β1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组锌离子对PC12细胞无明显保护作用,细胞状态与A β1-40损伤组相似.2.4荧光显微镜下观察锌离子对A β1-40诱导PC12细胞凋亡荧光染色的影响荧光显微镜下观察见图4,正常组和A β1-40损伤前补锌组细胞经Hoechst33342染色后,细胞核较大,呈圆形或椭圆形,染色均匀并呈较暗的浅蓝色;A β1-40损伤组、A β1-40损伤后补锌组和A β1-40损伤前同时补锌和TPEN 组细胞经Hoechst33342染色后细胞核缩小,呈月牙形或小圆点,染色不均匀,固缩的细胞核呈亮蓝色.采用Image -pro plus 软件分析PC12细胞核凋亡结果,选取各组图片相同数目的细胞范围,计算范围内核固缩的细胞数目从而计算细胞凋亡率,见图4F.C e l l v i a b i l i t y (%c o n t r o l )A β1-40Zn 2+(μmol ·L -1)(A)(B)(C)(D)(E)2.5LDH 释放量检测设对照组LDH 释放量为100%,各组分细胞上清液LDH 释放量比较见图5,由图可知A β1-40损伤组LDH 释放量明显增高,细胞膜受损严重,与对照组相比有极显著差异,A β1-40损伤前补锌组,LDH 释放量增高不明显,表明在损伤前补锌可缓解A β1-40对PC12细胞的损伤作用,A β1-40损伤后补锌组和A β1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组LDH 释放量与A β1-40损伤组相当,较对照组有极显著差异,表明损伤造成后补锌已图4Hoechst33342核染色观察细胞凋亡(200×)(A)对照组;(B)A β1-40损伤组;(C)A β1-40损伤前补锌组;(D)A β1-40损伤后补锌组;(E)AA β1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组;(F)各组细胞凋亡率的比较.Fig.4Cell apoptosis accessed by Hoechst33342staining (200×)(A)Control;(B)A β1-40injury group;(C)zinc supplement before A β1-40injury group;(D)zinc supplement after A β1-40injury group;(E)zinc and zinc ion chelator TPEN supplement before A β1-40injury group;(F)comparison of apoptosis rate in each group.(A)(B)(C)(D)(E)(F)(A)(B)(C)(D)(E)10203040506070A p o p t o s i s r a t e (%c o n t r o l )******334第4期图7Western blotting 测tau -5蛋白含量(A)对照组;(B)A β1-40损伤组;(C)A β1-40损伤前补锌组;(D)A β1-40损伤后补锌组;(E)A β1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组;(F)不同处理组tau -5蛋白相对表达量的比较.Fig.7Tau -5protein content measured by Western blotting(A)Control;(B)A β1-40injury group;(C)zinc supplement be -fore A β1-40injury group;(D)zinc supplement after A β1-40in -jury group;(E)zinc and zinc ion chelator TPEN supplement before A β1-40injury group;(F)comparison of tau -5proteinexpression levels in each group.图5各组LDH 释放量的比较(A)对照组;(B)A β1-40损伤组;(C)A β1-40损伤前补锌组;(D)A β1-40损伤后补锌组;(E)A β1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组.Fig.5Comparison of LDH releasing amount in each group(A)Control;(B)A β1-40injury group;(C)zinc supplement before A β1-40injury group;(D)zinc supplement after A β1-40injury group;(E)zinc and zinc ion chelator TPEN sup -plement before A β1-40injury group.起不到缓解A β1-40对PC12细胞的损伤作用.2.6Caspase -3活性测定正常细胞中的Caspase -3处于抑制状态,细胞受到损伤处于凋亡过程时,Caspase -3活性增强,由图6可知对照组细胞Caspase -3活性较低,A β1-40损伤组Caspase -3活性明显增高,且与正常组相比有极显著差异;A β1-40损伤前补锌组Cas -pase -3活性与正常组相比无明显差异;A β1-40损伤后补锌组和A β1-40损伤前同时补锌和TPEN 组Caspase -3活性与A β1-40损伤组水平相当,与对照组相比有极显著性差异.实验结果表明在损伤前补锌可抑制Caspase -3的激活从而抑制细胞凋亡,在损伤造成后补锌已起不到这种作用,这一实验结论与Hoechst33342荧光染色结果和LDH 含量检测结果相互印证.2.7Western blotting 法检测tau -5蛋白含量由图7可知,在蛋白上样量相同的情况下,与正常组相比A β1-40损伤前补锌组tau -5蛋白表达量无明显变化,而A β1-40损伤组、A β1-40损伤后补锌组和A β1-40损伤前同时补锌和TPEN 组tau -5蛋白表达量明显降低.用Quantity One 生物电泳图像分析软件测PVDF 膜上的蛋白条带灰度值,从而间接反映不同组tau -5蛋白表达量,见图7F.图6各组Caspase -3活性的比较(A)对照组;(B)A β1-40损伤组;(C)A β1-40损伤前补锌组;(D)A β1-40损伤后补锌组;(E)A β1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN 组.Fig.6Comparison of Caspase -3activity in each group (A)Control;(B)A β1-40injury group;(C)zinc supplement be -fore A β1-40injury group;(D)zinc supplement after A β1-40in -jury group;(E)zinc and zinc ion chelator TPEN supplement before A β1-40injury group.tau -5β-actin(A)(B)(C)(D)(E)宋明洁等：Zn 2+对A β1-40诱导PC12细胞损伤的保护作用L D H r e l e a s e /(%c o n t r o l )(A)(B)(C)(D)(E)******50100150200A r b i t r a r y u n i t(A)(B)(C)(D)(E)******153045(A)(B)(C)(D)(E)2030405060708090100110R e l a t i v e d c n x i t y /(%c o n t r o l )(F)******335生命科学研究2013年3讨论随着世界老龄化的进程,阿尔茨海默病成为困扰着越来越多老年人的重要疾病之一,为社会和家庭带来了严重问题,然而医学界还没有研究出行之有效的应对措施.因此积极研究AD的发病机制并探寻有效的防治措施成为当今医学和临床面临的重要课题.研究表明[7]锌是机体中枢神经系统含量最丰富的过渡金属元素之一,具有重要的生理功能,其稳态的维持对脑发挥正常的生理功能起着非常重要的作用.锌离子是一种内源性的神经递质,参与调节神经系统抑制性和兴奋性神经递质突触传递,过量的锌具有明显的神经毒性作用,并可引起神经细胞凋亡[8].然而,锌缺乏同样会加重AD的记忆和学习功能[9],锌离子对于维持细胞形态,稳定细胞膜结构以及保护细胞免受有毒物质的损害起到一定作用[10,11].本研究采用体外细胞培养法,应用Aβ1-40损伤PC12细胞构建AD细胞模型,倒置显微镜观察各处理组细胞形态,Hoechst33342荧光染色和测Caspase-3活性检测细胞凋亡,测LDH含量检测细胞损伤程度结果表明Aβ1-40损伤组细胞凋亡和损伤程度明显增加,Aβ1-40损伤前补锌,能减弱这种作用,而Aβ1-40损伤后补锌和Aβ1-40损伤前同时补锌和锌离子螯合剂TPEN无此作用.在倒置显微镜观察各处理组细胞形态实验时发现Aβ1-40损伤组PC12细胞突起变短、细胞变圆因此推测Aβ1-40可能会降低细胞中微管相关蛋白tau蛋白含量,Aβ1-40损伤前补锌能降低这种作用,Western blotting结果证实了这一猜测.本文结果提示锌离子是在PC12细胞被Aβ1-40损伤前起预保护作用,在细胞被Aβ1-40损伤后补锌已无此作用,这一结论为研究AD提供了新思路.锌离子对Aβ1-40诱导PC12细胞损伤的保护作用是一个复杂的过程,其具体作用机制仍有待进一步研究.参考文献(References):[1]CHLOPICKI K,RZEWUSKA-SZATOWSKA M.Differential di-agnosis in Alzheimer-Pick disease[J].Psychiatria Polska,1971, 5(3):363-366.[2]WALSH D M,SELKOE D J.Deciphering the molecular basisof memory 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醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase-3活性的影响

醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase-3活性的影响赵南;唐旭东;周克元【期刊名称】《中国工业医学杂志》【年(卷),期】2004(17)5【摘要】目的探讨醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase 3活性的影响。

方法采用四唑盐 (MTT)法检测IC50 值 ,用流式细胞仪、Hoechst3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡 ,比色法测定caspase 3活性。

结果用不同浓度的醋酸铅处理细胞48h ,其IC50 值为(0 44 5± 0 0 80 )mmol/L ;用 0 2 5、 0 5mmol/L醋酸铅处理细胞 48h ,可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改变 ,两铅处理组经流式细胞仪和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,cas pase 3活性也明显高于对照组 (P <0 0 1)。

结论醋酸铅可诱导PC12细胞凋亡 ,其机制可能与caspase 3的活化有关。

【总页数】3页(P286-288)【关键词】铅;PC12细胞;凋亡;caspase-3活性【作者】赵南;唐旭东;周克元【作者单位】湛江市卫生监督所;广东医学院生物化学与分子生物学研究所【正文语种】中文【中图分类】R135.11【相关文献】1.醋酸铅对人肾小球系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响 [J], 贾庆华;杨霄鹏;惠玲;哈小琴;王晓辉2.丙酮酸对体外循环术后狗心肌细胞凋亡的影响及其对fas、fasL和bcl-2家族蛋白及caspase-3活性的影响 [J], 张顺业;张小龙;张小平3.醋酸铅对PC12细胞核转录因子-κB转录活性的影响 [J], 荣静;常薇;包巍;吕玲;陈学敏;陈军4.醋酸铅诱导人肝细胞系L-02细胞凋亡与caspase-3表达关系的影响 [J], 邢伟;李胜联;陈兆夷5.醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶-6、-9活性的影响 [J], 赵南;唐旭东;周克元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化);PC-12(高分化)

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)简单描述：细胞名称：大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)形态特性：多角形生长特性：贴壁生长特征特性：该细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。

这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。

NGF 可诱导产生神经表型。

这些细胞不合成肾上腺素。

培养条件：1640+10%马血清+5%胎牛血清传代方法：消化3-5分钟。

1:2。

3天内可长满。

冻存条件：完全培养基+40%FBS+10%DMSO支原体检测：阴性使用权限：A类细胞的保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。

如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。

本库的细胞系（株）仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的。

T25瓶细胞处理方法收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。

如有破损漏液等问题，请即时联系我们。

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（40×,100×,200×各一张）。

3. 将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理，以稳定细胞状态。

4. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

5.若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。

每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。

放到37度培养箱培养。

待细胞密度达到80%以上，进行传代。

6. 若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传到10cm培养皿培养。

7. 传代时，T25瓶里保留部分细胞，同步培养，直到能确保10cm培养皿中的细胞状态良好。

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)其它相关优质产品：HL3268 小鼠X小鼠 PK136 DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3269 杂交瘤细胞CD25 PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3] DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3270 中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交瘤 MR1 [derivative of HB-11048] RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS HL3271 杂交瘤细胞抗AChE AE-1 DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3273 杂交瘤细胞抗CD2 OKT 11 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBSHL3274 杂交瘤(抗CD3) OKT 3 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBSHL3280 大鼠成纤维细胞 208F MEM+10% FBSHL3283 小鼠黑色素瘤细胞 B16-F0 DMEM+10% FBSHL3287 小鼠肝癌细胞 Hepa1-6 DMEM+10% FBSHL3289 猪肾近曲小管上皮细胞 LLC-PK1 M199+3% FBS/DMEM+F12+12%FBSHL3292 小鼠成纤维细胞 NIH-3T3 DMEM+10% FBSHL3300 小鼠单核细胞白血病细胞 Raw-Blue DMEM+10% FBS,不能加双抗+200μg/ml ZeocinHL3313 大鼠乳腺癌细胞 MADB-106 1640+10% FBSHL3314 猪肾上皮细胞 PK（15） MEM+10% FBSHL3315 狗肾上皮细胞 MDCK[NBL-2] MEM+10% FBSHL3316 猪肺泡巨噬细胞 3D4/21 1640+10% FBS+0.1mM NEAA+1mM 丙酮酸钠HL3317 猴胚胎肾上皮细胞 marc-145 DMEM+10% FBSHL3329 大鼠脑胶质瘤细胞 F98 DMEM+10%FBSHL3330 小鼠骨髓基质细胞 P9 1640+10%FBSHL3333 小鼠B淋巴细胞 WEHI-231 DMEM+10% FBS+0.05mM β-MercaptoethanolHL3071 小鼠前列腺癌细胞 RM-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3072 小鼠睾丸间质细胞瘤细胞 MLTC-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3073 小鼠睾丸间质细胞 TM3 D-MEM/F-12培养基(GIBCO)+5%马血清+2.5%FBSHL3074 小鼠畸胎瘤细胞 F9 DMEM培养基+10%FBSHL3076 小鼠乳腺癌细胞 4T1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3077 小鼠乳腺肿瘤细胞 C127 DMEM培养基+10%FBSHL3079 小鼠腹水瘤细胞 S-180 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3080 小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] MEM培养基(GIBCO)+10%FBS HL3081 小鼠垂体瘤细胞 AtT-20 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3082 小鼠骨髓瘤细胞 FO DMEM培养基+10%FBSHL3087 小鼠淋巴样瘤细胞 P388D1 RPMI-1640(GIBCO）+90%马血清+10%FBSHL3088 小鼠淋巴瘤细胞 EL4 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3091 小鼠巨噬细胞 Ana-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3092 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 RAW 264.7 DMEM+10% FBSHL3093 小鼠白血病细胞 L1210 DMEM培养基+10%FBSHL3094 小鼠白血病克隆细胞系 L6565 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3095 小鼠胚胎成纤维细胞 3T3-L1 DMEM+10%FBS。

PC12细胞在抗神经系统退行性疾病药物开发中的应用

PC12细胞在抗神经系统退行性疾病药物开发中的应用作者：赵光涛田清影李傅霞陈丽颖来源：《理科爱好者·教育教学版》2010年第03期摘要:神经系统退行性疾病一直是困扰医学界的难题,因此抗神经系统退行性疾病药物的开发也就成为了研究的重点,而能在该研究中发挥重要作用的体外研究手段也必会受到研究者们的重视,因此,本文就PC12细胞在抗神经系统退行性疾病药物开发中的应用做一综述。

关键词:PC12细胞神经系统退行性疾病帕金森病阿尔茨海默病药物开发【中图分类号】 G644.5 【文献标识码】 A 【文章编号】1671-8437(2010)03-00145-02PC12细胞是来源于Rattus norvegicus(褐家鼠)肾上腺嗜铬细胞瘤,是一种交感神经系统的肿瘤细胞,为儿茶酚胺能细胞,因此该细胞被广泛应用于神经系统疾病的体外研究,并有众多学者利用该细胞制作体外疾病细胞模型来研究不同发病因素在神经系统疾病发病过程中的作用,同时也被用来做抗神经系统退行性疾病药物开发。

一 PC12细胞在治疗帕金森病药物开发中的应用帕金森病(Parkinson’s disease,PD)主要源于中脑黑质致密部(substantia nigra parscompacta,SNpc)多巴胺神经元退行性变导致的神经元死亡,路易小体为其主要病理性特征,而组成这一路易小体的主要成分为α-突触核蛋白(α-synuclein)。

众多学者即以PC12细胞为体外模型较为充分的揭示了α-synuclein在帕金森病发病过程中的作用,并成功模拟了帕金森病的主要病理特征[1-2],也因此许多抗帕金森病的药物开发出来后,PC12细胞也就成为了评价这些药物疗效的必不可少的体外实验手段。

如Tianhong Pan等通过利用PC12细胞研究发现,雷帕霉素可以通过增强细胞的自吞噬作用来清除帕金森病发病过程中的异常蛋白的聚集,如路易小体等[3]。

雷帕霉素也因此发挥着神经保护的作用,可能被用来作为抗神经系统疾病的药物。

化学低氧诱导剂二氯化钴对PC12细胞自噬的影响

化学低氧诱导剂二氯化钴对PC12细胞自噬的影响韩苗苗; 叶丹蕾; 吴玉兰; 汪惠丽【期刊名称】《《合肥工业大学学报（自然科学版）》》【年(卷),期】2019(042)010【总页数】4页(P1411-1414)【关键词】二氯化钴; 缺氧; PC12细胞; 自噬; 抑制【作者】韩苗苗; 叶丹蕾; 吴玉兰; 汪惠丽【作者单位】合肥工业大学食品与生物工程学院安徽合肥 230009【正文语种】中文【中图分类】Q56随着社会老龄化问题的日益加重,各种疾病的发病率逐年上升[1]。

其中脑、心脏等人体重要器官缺氧是导致发病后高致残率和高死亡率的关键[2-3]。

因此,对于脑、心脏等人体重要器官缺氧的研究是目前探究各种疾病发病后引起一系列损伤机理的重点。

目前,体外缺氧研究的造模方法主要有物理缺氧法和化学缺氧法。

二氯化钴(CoCl2)是常用的模拟细胞体外缺氧的化学性造模试剂[4]。

其作用机理是利用CoCl2的二价钴离子诱导细胞内缺氧诱导因子(Hypoxia,HIF)及其调控基因的表达,从而模拟细胞缺氧损伤[5]。

自噬是一种进化上保守的代谢机制/降解途径,在此过程中,细胞内错误折叠的蛋白质、衰老或者损伤的细胞器以及一些大分子积聚体被自噬体包裹后,最终传递到溶酶体进行降解[6]。

在哺乳动物细胞中,自噬有巨自噬、微自噬以及分子伴侣介导的自噬(Chaperone-mediated autophagy,CMA)3种类型,其中巨自噬即为研究较为广泛的自噬。

自噬是机体的一种自我保护机制,生物体内基础水平的自噬对于细胞的基本功能和生命活动至关重要[7]。

有文献表明,异常的自噬不仅会对细胞的生命活动产生影响,甚至会促进细胞的死亡[8-10]。

PC12细胞是广泛用于神经系统疾病体外研究的一种细胞系,本文选用PC12细胞来研究常用的化学性缺氧诱导剂CoCl2对自噬的影响。

1 材料与方法1.1 材料大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,由中国科学技术大学实验室赠予。