二级菌种和三级菌种的制备

成，即可接种。
5.操作时，动作轻盈，头、手尽量置于接种 材料的下风侧，接种用具放在台面两侧。 6.接种结束，移去接种材料，再停止运转。 7.如经常使用，每2～3个月检查一次空气的 无菌程度。如不合标准，应及时更换超细纤 维过滤板。
●接种箱（室）的杂菌检查
1.制备6支PDA或牛肉膏的斜面或平板。 2.斜面打开棉塞，直立放置0.5h。培养皿开盖5min， 并在接种过程中和接种完毕时，进行同样检查。写 明标签，检查熏蒸、喷雾消毒药液及紫外线灯光杀 菌的效果。 3.将检查的6支斜面或6个培养皿，置于30℃下培养 48h，检查菌落生长数。
适用于平菇、凤尾菇、木耳、猴头、灵 芝、金针菇、榆黄蘑等菌种的培养。
棉籽壳、蔗糖培养基
﹡棉籽壳78%，麸皮20%，蔗 糖 1%，石膏粉1%。棉籽 Nhomakorabea、蔗糖培养基
﹡棉籽壳96%，蔗糖2%，过磷酸钙1%， 石膏粉1%。
适用于平菇、凤尾菇、毛木耳、金针 菇等菌种的培养。
玉米芯、花生壳培养基
﹡玉米芯%，米糠或麸皮20%，蔗糖 1%，石膏粉1%。
5.接种工具彻底灼烧灭菌（包括进入试管的其他部 位）。
6.接种过程中，管口或瓶口，应立即烧灼，以烧死 多数杂菌。在操作时，试管口或瓶口不得离开火焰 附近，在无菌区即可。 7.烧灼的接种工具冷却后，取少许菌种迅速抽出。 注意不要碰到管、瓶壁，取出时不可通过火焰，以 免烧死菌丝。
5.注意安全。如棉塞着火，用手紧握或用 湿布扑灭，勿吹。若有带菌物洒落，用抹布 沾石炭酸，收拾到废物桶内，用酒精棉球擦 手后再继续操作。
●超净工作台使用规程
1.把超净工作台用75％酒精擦净。 2.搬入培养料和菌种。 3.接种工具事先高温灭菌备用。双手用酒精
棉球擦净。 4.开动机器约20min后，接种区空气净化完
4.平板内≤3个菌落，斜面上无菌落的为合格。 否则为污染严重。霉菌多时，用石炭酸喷雾 后用甲醛熏蒸。如细菌多，可用乳酸和甲醛 交替熏蒸。
二、二级菌种和三级菌种的接种
●接种的无菌操作规程 ●二级菌种的接种 ●三级菌种的接种 ●塑料袋接种 ●几种简易的接种方法
●接种的无菌操作规程
1.按种空间彻底灭菌。凡是菌种所暴露的部位或 通过的空间，都必须是无菌区。 2.酒精灯火焰封口(瓶口或管口)。 3.接种工具灼烧后冷却，再取菌种，所取菌种不得 在火焰旁停留，也不要通过火焰，以免菌种烧伤。 4.封口物，不要随便放在台面上, 管口或瓶口不得和 其他物体接触。
●灭菌效果的检验
随机抽样，置于25～30℃的条件 下，培养3～5d，若没有杂菌长出，说 明灭菌彻底。
第二节 接种与培养
一、接种设备的使用规程 二、二级菌种和三级菌种的接种 三、二级菌种和三级菌种的培养
一、接种设备的使用规程
●接种室使用规程 ●超净工作台使用规程 ●接种箱（室）的杂菌检查
●接种室使用规程
玉米芯、花生壳培养基
﹡玉米芯80%，米糠10%，玉米粉8%， 石膏粉1%，磷酸二氢钾0.2%。
玉米芯、花生壳培养基
﹡花生壳78%，米糠20%，蔗糖1.5%，石膏粉 1%。 适用于平菇、香菇、木耳、猴头、灵芝等菌种 的培养。
㈢培养料配制工艺流程
●称料 ●拌料 ●调节pH ●分装培养料 ●分装容器的封口
1.使用前半小时，把所需物品搬入接种 场所喷雾消毒，关闭门窗，开启紫外线 灯照射0.5h。 2.穿上工作服和鞋，戴好口罩、帽，用 2％来苏尔洗手。
3.操作前，用酒精棉球擦手。操作时，减 少空气波动。两人操作时应配合默契，用 完的废棉球等应丢到废物桶内。
4.接种结束及时收拾台面，然后用石炭酸 喷洒。
﹡袋装容器的封口：用无棉盖体封口、拧口、折 口等。
二、培养料的灭菌
●常压蒸气灭菌 ●高压蒸气灭菌 ●灭菌效果的检验
●常压蒸气灭菌
当低层培养料的温度达到100℃ 时，保持8～12h，培养料内的杂菌 已被彻底杀死。
●高压蒸气灭菌
在121～128℃、0.11～0.14MPa下， 木屑、棉耔壳培养料保持1～1.5h，谷粒 培养料则需2.0～2.5h。
●称料
将预处理过的培养料（以不刺破容器 为准，过4目的筛子），按生产规模进行称 取。先称主料，后称辅料。
●拌料
将不溶性的料干混均匀，可溶性的 料加少量的水配成母液，边泼浇边混拌， 含水量为60%。
●调节pH
将培养料堆闷0.5～1.0h后，测定酸 碱度，因为灭菌后pH下降1～1.5，所以 高调1～1.5，调致6.5～7.0较为合适。
●分装培养料
分装培养料时，边装边压，松紧适中 （中下部稍松，上部稍紧），然后平整料面， 在料中央打洞。
﹡料中央打洞的目的
1.增加培养料与空气的接触面积以利菌丝 生长； 2.便于固定接种块； 3.让部分菌种掉进洞内，增加接种点，缩 短发菌周期。
●分装容器的封口
﹡瓶装容器的封口：罐头瓶用12㎝×12㎝ ×0.004㎝的低压聚乙烯或聚炳烯膜封口；
㈡培养料常用配方
木屑培养基 棉籽壳、蔗糖培养基 玉米芯、花生壳培养基
木屑培养基
﹡阔叶树木屑78%，米糠或麸皮20%， 蔗糖1%，石膏粉1%。
木屑培养基
﹡阔叶树木屑93%，米糠或麸皮5%， 蔗糖1%，尿素0.4%，碳酸钙0.4%， 磷酸二氢钾0.2%。
木屑培养基
﹡阔叶树木屑75%，麸皮22%，蔗糖 1.5%，石膏粉1.4%，维生素B10.1%。
第一节 培养料的配制与灭菌
一、培养料的配制 二、培养料的灭菌
一、培养基的配制
㈠培养料配制的原则 ㈡培养料常用配方 ㈢培养料配制工艺流程
㈠培养料配制的原则
●要选择适宜的营养物质 ●营养物质配制的比例要适当 ●选择经济使用来源广泛的原料 ●适宜的酸碱度
㈡培养料常用配方
常用的配方为78：20：1：1 78：指供应碳源的主料，包括木屑、玉米 芯、秸秆、稻草等。 20：指米糠、麸皮。 1：指糖。 1：石灰、石膏等
二级菌种和三级菌种的制备
二级菌种和三级菌种接种
第三章 二级菌种和三级菌种的制备
食用菌生产多采用三级菌种繁育体系， 也有采用二级菌种繁育体系的。经过扩大培 养，增加菌丝体的适应能力，使其粗壮;并 检验菌种生活力、纯度;扩大菌种数量，满 足生产需要。
第三章 二级菌种和三级菌种的制备
第一节 培养料的配制与灭菌 第二节 接种与培养 第三节 质量鉴定 第四节 液体菌种生产和使用