Protein A亲和介质说明书
ProteinASepharose4FF产品使用说明书
Protein A Sepharose 4FF 产品使用说明书——高IgG结合特异性高流速低蛋白A脱落产品特点特点结合特异性强，基颗粒大小50-160 μm团脱落少推荐流速50-300cm/h基质4%的交联琼脂糖凝胶配基重组protein A 使用温度常温pH范围3-10配基密度6mg重组蛋白A/ml动态吸附载量60mg人IgG/ml 保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇蛋白A残留小于3ng蛋白A/mg IgG产品介绍Protein A sepharose介质是经过我们公司长期开发，在公司生产的native protein A 的基础上精致而成。
通过Protein A Sepharose 4FF，可分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。
本产品相对同类产品具有如下优势：1、偶联条件温和，更好的保持了protein A的构象，所以抗体载量高，同体积的介质，相同规模的纯化设备，相同体积介质，抗体的产量明显高于用同类产品，大大的降低了抗体药物生产成本。
2、非常稳定，不易脱落，用其生产的抗体中protein A的残留比同类产品的更少。
3、公司的Protein A 以及Protein A sepharose的生产都是在清洁车间生产，符合制药企业生产需求。
4、公司生产的Protein A sepharose使用寿命长，常规条件下能够重复使用100次以上。
使用说明（1）缓冲液的准备：平衡缓冲液：纯化不同动物和不同亚型抗体平衡缓冲液成分时所用平衡缓冲液是不同的，部分参照如下：抗体种类人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b 10mM 磷酸盐缓冲液，150mM NaCl，pH7.21人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3 50mM Tris-Cl，3M NaCl，pH7.8-8.5（2）样品的准备样品上柱前先用平衡缓冲液稀释5至10倍，从而确保样品液的成分和pH与平衡缓冲液相近。
蛋白A亲和层析介质
蛋白A亲和层析介质（征求意见稿）编制说明《蛋白A亲和层析介质》国家标准起草工作小组二〇一九年一月《蛋白A亲和层析介质》国家标准编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会专项《国家质量基础的共性技术研究与应用》项目《生物产业共性技术标准研究》中课题《海洋生物产品质量控制与检测技术标准研究》，项目编号“2016YFF0202304”。
本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2019年完成。
本标准起草工作组由中国科学院过程工程研究所等单位共同组成。
二、目的和意义单抗药物对生产制造纯化工艺的效能和成本要求非常高，单抗分离纯化成本占其生产总成本的50-70%，其中蛋白A亲和层析介质是其生产的关键原材料之一，其性质和成本将决定单抗产品的最终生产成本、纯度和收率。
目前，80%以上的抗体纯化使用蛋白A 亲和层析。
蛋白A亲和层析介质的载量、稳定性等是单抗纯化选择介质时的首要考虑。
蛋白A来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体分子Fc段特异性结合的结构域。
将蛋白A偶联至基质上（以琼脂糖基质为主）制成蛋白A亲和层析介质，可以与抗体特异性结合，选择性极高，一步亲和层析可达到95%以上的纯度。
蛋白A 亲和层析因特异性强、操作简单、处理量大等优势，已成为抗体药物研发和生产阶段的核心纯化步骤。
蛋白A亲和层析介质作为单抗药物生产过程的关键分离材料之一，其性质和成本决定单抗产品的最终纯度、收率和生产成本。
我国当前尚未建立相应的国家及行业标准，国内市场上的蛋白A亲和层析介质产品质量良莠不齐，缺乏产品生产、检验和质量规范。
这在一定程度上限制了我国蛋白A亲和层析介质的发展及相关层析技术的应用，更阻碍了国内单抗产业的发展水平。
因此建立蛋白A亲和层析分离介质的国家标准，对于规范蛋白A亲和介质行业，推进层析技术应用，以及促进单抗产业发展，均具有重要的理论和现实意义。
目前，蛋白A亲和层析介质的性能参数测定方法多种多样，以动态载量测定方法为例，一种是将介质装柱并连在层析仪上，平衡，上样抗体，待流出液浓度与上样浓度相等时上样结束，依次经淋洗、洗脱，收集洗脱液，测定洗脱液体积及洗脱液浓度，计算洗脱载量。
Protein A Resin纯化抗血清
Protein A Resin（Cat.No.L00210）纯化抗血清操作程序1实验原理Protein A亲和层析介质是纯化和分离IgG常用手段。
Protein A是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc片段结合哺乳动物IgG。
天然Protein A有5个IgG结合域和许多其它的未知功能域。
重组Protein A包含5个高IgG结合域(Ka=108/M)，并去除了其它非主要结合域以降低非特异性结合。
目前，Protein A亲和层析介质已经广泛用于从生物流体或细胞培液中分离纯化各种类型的IgG或者IgG片段。
实验已经证明，Protein A和IgG的相互作用仅涉及Fc区域，而不影响Fab片段和抗原的结合。
Protein A Resin（Cat.No.L00210）的特性Resin 体积5ml（10ml含5ml浆液）配体 E.coli表达的重组链球菌Protein A每个配体结合IgG位点的数目 5配体的分子量约34kDa配体的PI 5.17配体密度≈2mg重组蛋白A/mlresin静态结合能力大于20mg猪IgG/ml Resin基质4%琼脂糖凝胶颗粒大小90µm（45-165µm）储存液含20%乙醇的1XPBS储存条件4-8℃有效期未开封前可保存12个月2实验试剂和器材2.1实验试剂Na2HPO4、NaCl、甘氨酸、浓盐酸、Tris、蒸馏水、20%乙醇2.2实验器材Protein A Resin（金斯瑞生物科技L00210）、4℃冰箱、PH计或PH试纸、锥形瓶、量筒、漏斗、移液器、tip头、试剂瓶、0.22µm滤膜、注射器、纯化柱（约10ml）2.3样品抗血清2.5ml（约20mg IgG/ml Resin，根据血清中IgG含量正常范围 7.6～16.6g／L，每mlResin可以纯化至少1.2ml血清，本实验按2mlProteinA纯化抗血清2.5ml进行试验。
Protein At Beads 4FF 预装柱说明书
ProteinAt Beads 4FF 的预装柱说明书货号：YA2471规格：1*1mL /1*5mL /5*1mL /3*1mL+1*5mL /5*5mL保存：2-8℃产品说明：Protein At Beads 4FF 是用于分离和纯化单克隆抗体、多克隆抗体或Fc-融合蛋白的亲和层析介质。
Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc 片段结合哺乳动物IgG 。
Protein At Beads 4FF 的配体蛋白Protein At 是在天然蛋白A 的基础上进行生物工程突变得到的一种耐碱蛋白A(Alkaline tolerate ，故缩写为At)。
Protein At Beads 4FF 是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化。
表1：介质性能参数介质高度交联的4%琼脂糖平均粒径～90μm配体耐碱性Protein A结合载量>40mg 人lgG/ml 介质化学稳定性可耐受抗体纯化过程中的所有试剂工作pH 3-12在线清洗0.1-0.5M NaOH 线性流速50-300cm/h 保存20%乙醇纯化流程：1、Buffer 的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液：0.15M NaCl 、20mM Na 2HPO 4，pH7.0洗脱液：0.1M 甘氨酸，pH 3.0中和液：1M Tris-HCl ，pH 8.5。
2、样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值，可以用平衡/洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂液透析。
样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3、样品纯化1.上柱：将泵管道中注满去离子水。
去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。
再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
rProtein A层析填料说明书
rProtein A Sepharose Fast Flow原理蛋白质A来自金黄色葡萄球菌属，包含5个区域，可以用来结合IgG的Fc区域。
作为一个亲和配基，蛋白质A偶联到Sepharose上，似的这些区域可以结合游离的IgG分子。
一份子的蛋白质A可以至少结合两分子的IgG。
尽管蛋白质A主要是与人类免疫球蛋白IgG进行结合，一些其他类型的免疫球蛋白也显示出能够结合蛋白质A。
蛋白质A能够与人初乳IgA发生相互作用，同时也可以和人类的骨髓瘤IgA2发生反应，但是不能与IgA1发生反应。
一些人类的单抗IgMs和一些来自正常的和巨球蛋白血症血清中的IgMs能够结合蛋白质A。
进行一个分离操作结合缓冲液：20mM磷酸纳，pH7.0洗脱缓冲液：100mM柠檬酸-柠檬酸钠，pH3~6中和缓冲液：1M Tris-HCl，pH9.01，用5倍柱体积的蒸馏水冲洗柱子。
2，用5倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。
3，上样，流速为1-4ml/min（1ml的柱子），或者5ml/min（5ml的柱子）。
收集流穿片段。
4，用5-10倍柱体积的结合缓冲液平衡分离柱，直到基线，即所有未结合物质都被冲洗出柱子（紫外检测器在280nm波长检测）。
5，用5倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱。
洗脱液立即用中和缓冲液（0.06ml~0.2ml 1M Tris-HCl，pH9.0每毫升馏分）中和至中性。
6，立即用5-10倍体积的结合缓冲液重新平衡柱子。
使用注意1，样品需要离心（10000g/20min）去除细胞和细胞碎片。
离心下来的上清经过一个0.45μm 的滤膜过滤。
2，来自多数物种的IgGs和亚类，在接近生理pH值和离子强度的条件下，可以结合到蛋白质A上。
如果蛋白质和配基之间的互相作用较弱，应该避免过度冲洗，因为这样可能会减少最终的产量。
3，对于一些抗体，比如小鼠IgG，当使用蛋白质A进行纯化时，可能需要向结合缓冲液中加入3M的氯化钠，达到最有效的结合，例如1.5M的甘氨酸和3M的氯化钠，pH为8.9。
蛋白AProteinA酶联检测试剂盒可拆卸说明书
蛋白A(Protein A)酶联检测试剂盒(可拆卸)说明书产品目录编号# AB000109C此试剂盒包含检测生物药物内蛋白A (Protein A) 杂质所需要的全部组分。
请在操作之前仔细阅读此说明书。
本试剂盒只能用于科学研究，不能用于医学诊断。
背景资料在单克隆抗体药物的纯化过程中，以蛋白A（Protein A）为基础的亲合层析是广泛应用的纯化方法之一，单克隆抗体可以有效的在此步骤中得到纯化。
蛋白A 的最初来源是细菌（Staphylococcus aureus）细胞壁中的一个蛋白质，研究表明蛋白A 可能对人体有潜在的危害，它的生物学作用包括刺激人体多种细胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的释放。
由于在蛋白A 亲合层析柱使用过程中会有微量的蛋白A 从层析柱上脱落下来，因此用精确灵敏的方法来确证单克隆抗体药物中蛋白A 的残留处于一个较低的和稳定的水平是单克隆抗体药物的质量标准之一。
蛋白A (Protein A) 酶联检测试剂盒是用来定量分析生物药物中蛋白A杂质的试剂盒。
首先，用不同浓度的蛋白A标准蛋白制作一条标准曲线，然后再根据标准曲线来分析生物药物中残留蛋白A的含量。
具体方法为：先将蛋白A标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好抗蛋白A抗体的96孔平板中。
经过1.5小时的保温，蛋白A与已经固定在平板上的抗体结合形成抗原－抗体复合物。
此复合物被随后加入的生物素标记的抗蛋白A的抗体结合并进一步形成更高级的复合物，反应45分钟后洗去未结合的物质。
再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物（Streptavidin-HRP Conjugate），静置30分钟。
因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合，从而使链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。
接下来冲洗掉未结合的物质，加入TMB底物。
固相上的酶催化底物产生颜色反应，待颜色反应一段时间后，终止反应。
用酶标仪在450 nm波长下测定其结果，此结果能间接地反应结合到平板上的蛋白A数量的多少。
蛋白a柱使用手册
蛋白a柱使用手册
蛋白A柱是一种亲和层析柱，常用于纯化含有Fc区域（浅链）
的抗体。
在使用蛋白A柱之前，需要将其活化。
活化方法：
1. 用20mM乙酰胺（pH5.0）或1M的乙酸钠（pH4.0）洗脱缓冲
液进行洗脱。
注意：洗脱缓冲液需要在使用前pH值平衡至目标 pH 值。
2. 在规定压力和流速下，将洗脱缓冲液穿过蛋白A柱。
3. 在一定的时间内保持连续流动，以确保蛋白A柱得到充分的
活化。
使用方法：
1. 使用浓盐缓冲液如2M NaCl或者制备完整抗体来预洗蛋白A 柱，以去除不特异性结合物。
2. 将条件适当的待纯化样品施加在蛋白A柱上，并以规定的压
力和流速连续流加至柱子中。
3. 使用洗脱缓冲液（例如50mM甲基胆碱（pH5.0）或50mM乙醯
丙酮（pH4.0）去除不特异性结合物，如有必要，可以多次洗脱。
4. 使用醋酸钠或氯化钠等适宜的缓冲液或乙酰胺调节pH，并用
其他相关方法如聚焦脱盐或超滤等方法对目标蛋白进行进一步的纯化
和浓缩。
注意事项：
1. 蛋白A柱床高度和采用的缓冲液类型都可能对柱子的效果有
所影响，因此，建议在第一次使用时检查各个实验条件的最佳化。
2. 在样品很少且需要高效纯化的情况下，可以使用前列腺素A2
或乳糖脱盐来洗脱蛋白A柱。
3. 需要牢记的是，使用蛋白A柱时必须要注意操作稳定，避免
各种缓冲液和样品的混合，避免浓度冲击和质量不稳定的问题，以确
保高产和高纯度的结果。
ProteinA亲和层析介质
Protein A亲和层析介质使用说明书UniMab®NanoMab使用之前请认真阅读产品使用手册苏州纳微科技有限公司Suzhou Nano-Micro Tech, Co., Ltd通用缩略术语：AC：亲和层析，文献中也有被记为AC280 nm：在指定波长的紫外吸收M：物质的量的浓度单位，mol/l的简写mM: 物质的量的浓度单位，mmol/l的简写BV：柱体积，bed volume的简写Mr：相对分子量MPa：兆帕斯卡Bar：压强单位，工程上“公斤力”的单位psi：压强单位，磅每平方英寸压强单位之间换算：1 MPa = 10 bar ≈ 145 psi索引目录1.Protein A亲和层析产品简介 (4)2.Protein A亲和纯化操作步骤 (4)2.1 层析柱装填 (5)2.2 柱效评价 (5)2.3预装柱使用方法 (6)3.产品基本特性 (6)3.1 单分散高度均匀的粒径 (6)3.2 更快的流速、更高的效率 (7)3.3超高的结合载量 (7)3.4 更卓越的耐碱性和化学稳定性 (8)3.5 更低的配基脱落风险 (9)4.细胞培养液中单克隆抗体(mAb)捕获应用 (9)5.储存 (10)6.故障排除 (11)7.订购信息 (12)1.Protein A亲和层析介质简介纳微科技提供全球领先的Protein A亲和层析介质和预装柱产品，该产品以单分散均匀多孔型聚甲基丙烯酸酯（PMMA）或聚苯乙烯/二乙烯苯（PS/DVB）微球为基质，采用领先的基因工程优化的耐碱性重组rProtein A，通过独特的表面键合技术制成，专门用于单克隆抗体以和含有Fc片段的重组蛋白类生物大分子的分离纯化。
图1.1 纳微科技Protein A亲和介质的制备示意图产品系列UniMab®介质NanoMab介质分离原理Protein A亲和捕获Protein A亲和捕获基质聚甲基丙烯酸酯(PMMA) 聚苯乙烯/二乙烯苯(PS/DVB)配基耐碱性rProtein A 耐碱性rProtein A粒径（μm）50 μm 15 μm结合载量(人IgG)> 35 mg / mL（4 min驻留时间）>30 mg / mL（4 min驻留时间）纯化阶段捕获、中度纯化捕获、精细纯化或样品制备基本特点高载量、高耐压、高分离效率、耐清洗中高载量、极高耐压、高分辨率、耐清洗最大耐受压力116 psi（8 bar，0.8MPa ）870 psi ( 60bar，6MPa )pH稳定性 3 - 12 3 - 12CIP在位清洗0.1 - 0.5 M NaOH 0.1 - 0.5 M NaOH使用温度 4 ~ 40 摄氏度 4 ~ 40 摄氏度存储20%乙醇，2 – 8 摄氏度20%乙醇，2 – 8 摄氏度典型应用适合于大规模抗体和免疫球蛋白等纯化生产，比如当克隆抗体等。
耐碱ProteinA说明书 2
博格隆（上海）生物技术有限公司021-********耐碱Protein A Diamond耐碱Protein A Diamond是一种新型的由耐碱Protein A蛋白同高流速的琼脂糖基质通过环氧化学方式合成的亲和介质，填装后的层析柱可一次性纯化大量单克隆抗体。
1产品简述耐碱Protein A Diamond的配基通过大肠杆菌发酵获得，配基发酵及后续的纯化过程均无动物源产品，该配基专门用于生产具有耐碱性和高IgG载量的亲和介质。
其与传统的Protein A作用相同，都是与IgG的Fc区结合，一步纯化即可达到很好的效果。
新的耐碱Protein A配基，可用0.1-0.5M NaOH进行原位清洗，避免使用昂贵且具有腐蚀性的原位清洗试剂，可帮助企业节省成本，同时易于线性放大，这些优势使耐碱Protein A Diamond成为单克隆抗体纯化（临床应用）的理想选择。
耐碱Protein A Diamond的性质●基质高度交联琼脂糖●平均粒径75μm●配基重组耐碱Protein A（E.coli）●耦联方式环氧化学●化学稳定性Protein A介质常用的缓冲液中稳定●pH稳定性3-12●CIP稳定性0.1-0.5M NaOH●建议流速500cm/h●保存条件PBS，20％乙醇，4-8℃2推荐实验条件2.1缓冲液：结合缓冲液A:PBS洗脱缓冲液B:0.1M柠檬酸，PH2.7-3.62.2实验过程：2.2.15倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子2.2.2上少量抗体样品2.2.33-5倍柱体积的缓冲液A清洗柱子2.2.4线性洗脱，0-100%B洗脱10倍柱体积2.2.5收集洗脱产物，用1.0M Tris-HCl（pH9.0）进行中和（Tris-HCl体积约为洗脱产物的5-10%体积）2.2.63-5倍柱体积缓冲液B再生柱子2.2.73-5倍柱体积缓冲液A清洗柱子2.2.83-5倍柱体积0.1-0.5M NaOH原位清洗2.2.9用缓冲液A再次平衡柱子，以备下次使用为防止敏感抗体在低pH条件下发生变性，需通过预实验，优化洗脱的最佳pH，达到最好的洗脱效果，生产条件下选择逐步洗脱，可得到更高浓度的目标单克隆抗体，降低缓冲液的使用量，减少循环次数。
rProtein A、G Beads使用说明
rProtein A/G Beads使用说明货号：R8250规格：5ml保存：2-8℃产品介绍：rProtein A/G Beads是将rProtein A/G高密度定向偶联到琼脂糖凝胶微球表面，该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。
rProtein A/G Beads产品性能：指标性能基质4%琼脂糖微球配体重组蛋白A/G载量>30mg人lgG/ml介质粒径(µm)45-165最大流速0.1MPa,1barpH稳定范围3-10储存缓冲液20%乙醇储存温度2℃-8℃Protein A和Protein G对不同抗体的结合能力：种属亚型Protein A Protein G Protein A/GHuman IgA varible—++IgD———IgE———IgG1++++++++++++IgG2++++++++++++IgG3—++++++++IgG4++++++++++++IgM varible—++ Avian egg yolk IgY———Cow++++++++++ Dog++++++++++ Goat—++++++++ Guinea pigIgG1++++++++++IgG2++++++++++ Hamster+++Horse Total IgG++++++++++ Koala—+Liama—+Monkey(rhesus)++++++++++++Mouse IgG1+++++++ IgG2a++++++++++++ IgG2b+++++++++IgG3++++++++IgM variable——Pig++++++++++ Rabbit Total IgG+++++++++++Rat IgG1—+++ IgG2a—++++++++ IgG2b—++++ IgG3+++++Sheep Total IgG+/-++++ ++++=结合能力强； ++=结合能力中等； —=结合能力弱或没有结合纯化流程：本产品分为两种应用：抗体纯化流程和免疫沉淀流程，免疫沉淀流程还分为直接法和间接法。
protein A 柱子使用说明
编号：FC-MR1002 Protein A/G-Plus Beads 抗体纯化柱 使用（预装柱）1、 说明： protein A 与Protein G 的抗体结合结构域融合后的重组蛋白和4％浓度的琼脂糖树脂偶联制成。
由于采用了重组表达的Protein A/G ，并去除了其白蛋白结合区，基质能够特异性地结合多种免疫球蛋白的Fc 区段，作为亲和树脂，可用来纯化不同来源的抗体和抗体亚型，以及在免疫共沉实验中捕获免疫复合物。
本产品使用了多位点交联技术，稳定性好、特异性高并具有广谱结合力，每ml 基质可特异性结合6-10 毫克抗体。
2、 组分：50％ Protein A/G Agarose 悬液，PBS ，20％乙醇。
3、 储存条件：4℃保存，有效期一年；常温（15-25℃）运输；切勿冻结！4、 纯化步骤：4.1 取适量Protein A/G Agarose 悬液，装入层析柱，用10倍柱体积的PBS （或者TBS ，下同）洗涤平衡层析柱。
4.2含抗体的血清或其它体液高速离心后，将上清与等体积2×PBS 缓冲液混合，调整pH 以及离子浓度后，缓慢加入层析柱。
4.3 用10倍柱体积以上的PBS 洗涤，至流出液无蛋白检出。
4.4加入2倍柱体积0.1 M 柠檬酸（Citrate Acid, pH 2.7），夹住流出管，静置5分钟后收集穿出液，重复三次。
测定OD 280估算抗体浓度，如果所得抗体较多可以使用SDS-PAGE 检测纯度。
也可以选择0.1 M 甘氨酸（Glycine, pH 3.0）洗脱。
4.5 洗脱后的抗体加入2/5体积的1 M Tris ，pH 8.0中和，使用Millipore 蛋白浓缩管切换到所需缓冲液，通常为2×PBS 含有0.02% NaN 3以及1 mM EDTA 。
4.6浓缩到所需体积，加入50%甘油；测定效价后，分装并保存在-20℃，避免冻结。
5、树脂处理：5.1 层析柱中Protein A/G Plus Bead 使用后需要及时处理，酸洗脱抗体以后，使用10倍柱体积P BS 洗柱平衡到中性，20%乙醇溶液充分洗涤后，封闭上下两端，保存在4℃。
纳微科技NMabTM Pro Protein A 亲和层析介质使用说明书
NMab TM Pro Protein A亲和层析介质产品使用说明书文件编号：NM-W-DF-0603版本号：A2NMab TMPro 层析介质使用说明产品简介Protein A 亲和层析是利用Protein A 配基与目标抗体具有专一结合力作用从而达到分离纯化抗体的目的。
Protein A 亲和层析大大简化抗体下游分离纯化工艺，成为抗体分离纯化的标准。
目前市场上的Protein A 亲和层析介质主要分为以多糖（琼脂糖、葡聚糖、纤维素）为基质和以合成高分子（聚丙烯酸酯，丙烯酰胺）为基质两大类。
琼脂糖基质在溶胀状态下具有网状结构，比表面积大，因而亲和载量比较高，但机械强度不高、耐压低。
随着上游发酵技术的进步，抗体表达量越来越高，下游亲和捕获成为抗体生产瓶颈，因此对下游Protein A 亲和层析介质的载量要求越来越高。
为了因应这一需求，纳微科技以琼脂糖为基球，利用特有的微球改性技术以增强其机械强度，并结合自主产权的Protein A图1. NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质电镜图配基技术，在NMab TM Protein A 的基础上成功开发出比其具有更高载量的NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质。
除了高载量外，NMab TM Pro 延续了其优良的结合特异性、耐碱性以及压力-流速特性，是抗体客户降低单抗纯化成本的最佳选择。
下表1是NMab TM Pro Protein A 层析介质的基本性质参数。
相较市场同类产品有如下独特优势：(a) 载量高：一般单抗项目平均动态载量约60-80 mg/mL ；(b) 耐碱性强：0.5 M NaOH 浸泡下24小时载量只下降20%；(c) 配基脱落低：小于20 ppm ；(d) 宿主蛋白（HCP ）残留低：一般在1000 ppm 以内，表现不亚于Prism A ； (e) 回收率高：大于90%；(f) 纯度高：亲和洗脱液纯度99 %以上；(g) 压力流速好：明显强于传统4FF/6FF 系列介质；表1. 纳微科技NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质技术参数压力流速曲线测试不同流速下压力变化如下，此压力-流速特性可满足工业生产上对填料流速要求，优于传统4FF/6FF 软胶系列填料。
proteina亲和层析原理
proteina亲和层析原理
蛋白质亲和层析是一种分离蛋白质的技术，它利用亲和力来分离蛋白质。
它的原理是：蛋白质与亲和层析介质之间的亲和力，使蛋白质在亲和层析介质中的分布受到控制，从而实现蛋白质的分离。
亲和层析介质是一种含有特定亲和力的物质，它可以与蛋白质结合，形成蛋白质-亲和层析介质复合物。
亲和力是一种特殊
的相互作用，它可以把蛋白质与亲和层析介质结合在一起，使蛋白质在亲和层析介质中的分布受到控制。
蛋白质亲和层析的过程可以分为三个步骤：第一步是将蛋白质溶液与亲和层析介质混合，形成蛋白质-亲和层析介质复合物；第二步是将混合物经过某种外力（如电场、离心力等）的作用，使蛋白质在亲和层析介质中的分布受到控制，从而实现蛋白质的分离；第三步是将分离的蛋白质从亲和层析介质中分离出来，从而实现蛋白质的分离。
蛋白质亲和层析是一种有效的蛋白质分离技术，它可以有效地分离出不同的蛋白质，从而为蛋白质结构和功能的研究提供了有效的工具。
ProteinA亲和层析介质
Protein A亲和层析介质使用说明书UniMab®NanoMab使用之前请认真阅读产品使用手册苏州纳微科技有限公司Suzhou Nano-Micro Tech, Co., Ltd通用缩略术语：AC：亲和层析，文献中也有被记为AC280 nm：在指定波长的紫外吸收M：物质的量的浓度单位，mol/l的简写mM: 物质的量的浓度单位，mmol/l的简写BV：柱体积，bed volume的简写Mr：相对分子量MPa：兆帕斯卡Bar：压强单位，工程上“公斤力”的单位psi：压强单位，磅每平方英寸压强单位之间换算：1 MPa = 10 bar ≈ 145 psi索引目录1.Protein A亲和层析产品简介 (4)2.Protein A亲和纯化操作步骤 (4)2.1 层析柱装填 (5)2.2 柱效评价 (5)2.3预装柱使用方法 (6)3.产品基本特性 (6)3.1 单分散高度均匀的粒径 (6)3.2 更快的流速、更高的效率 (7)3.3超高的结合载量 (7)3.4 更卓越的耐碱性和化学稳定性 (8)3.5 更低的配基脱落风险 (9)4.细胞培养液中单克隆抗体(mAb)捕获应用 (9)5.储存 (10)6.故障排除 (11)7.订购信息 (12)1.Protein A亲和层析介质简介纳微科技提供全球领先的Protein A亲和层析介质和预装柱产品，该产品以单分散均匀多孔型聚甲基丙烯酸酯（PMMA）或聚苯乙烯/二乙烯苯（PS/DVB）微球为基质，采用领先的基因工程优化的耐碱性重组rProtein A，通过独特的表面键合技术制成，专门用于单克隆抗体以和含有Fc片段的重组蛋白类生物大分子的分离纯化。
图1.1 纳微科技Protein A亲和介质的制备示意图产品系列UniMab®介质NanoMab介质分离原理Protein A亲和捕获Protein A亲和捕获基质聚甲基丙烯酸酯(PMMA) 聚苯乙烯/二乙烯苯(PS/DVB)配基耐碱性rProtein A 耐碱性rProtein A粒径（μm）50 μm 15 μm结合载量(人IgG)> 35 mg / mL（4 min驻留时间）>30 mg / mL（4 min驻留时间）纯化阶段捕获、中度纯化捕获、精细纯化或样品制备基本特点高载量、高耐压、高分离效率、耐清洗中高载量、极高耐压、高分辨率、耐清洗最大耐受压力116 psi（8 bar，0.8MPa ）870 psi ( 60bar，6MPa )pH稳定性 3 - 12 3 - 12CIP在位清洗0.1 - 0.5 M NaOH 0.1 - 0.5 M NaOH使用温度 4 ~ 40 摄氏度 4 ~ 40 摄氏度存储20%乙醇，2 – 8 摄氏度20%乙醇，2 – 8 摄氏度典型应用适合于大规模抗体和免疫球蛋白等纯化生产，比如当克隆抗体等。
Protein A亲和层析柱亲和层析纯化人IgG1类嵌合抗体
技术方法名称:Protein A sepharose 4 fast flow亲和层析柱纯化人IgG1类嵌合抗体基本原理：葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A）在pH值中性或碱性条件下与多种哺乳类动物IgG分子的Fc段特异结合，而在酸性条件下可以解离，可用于纯化人和小鼠IgG及其亚类（IgG3除外）。
sepharose 4 fast flow是高度交联的4%的agarose衍生物，具有很好的动力学，在固相亲合吸附中有很好的层析质量，其刚性使其可理想地用于生产规模。
Protein A sepharose 4 fast flow是protein A 与固相基质sepharose 4 fast flow的结合，是高特异、高稳定性凝胶，当凝胶装填柱床后，能够特异性捕获目的抗体。
用途及受限因素：1、Protein A sepharose 4 fast flow的IgG高载量和允许样品通过的高流速，使其成为实验室和生产规模制备抗体的理想凝胶。
2、Protein A sepharose 4 fast flow在纯化过程中会有少量集团脱落，如需去除用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤superdex 200。
3、在不同IgG亚类之内，甚至在相同亚类之内，都存在着天然的多样性，因此对于每个待纯化的单抗都必须首先优化选择结合和洗脱系统。
4、层析几批样品之后，尤其流速明显减慢之后，需重装柱子。
实验材料：1.1ml Protein A Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱生产厂商：pharmacia公司2.有抗体分泌的细胞上清（本实验室构建的嵌合抗体为人IgG1类嵌合抗体，宿主细胞CHO）3.柱体平衡液：0.1M PB缓冲液（PH7.0）4.抗体洗脱液：0.1mol/L柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（PH3.0）5.1mol/L Tris碱溶液（不调PH）6.透析液：0.01M PBS （PH7.4）7.20%乙醇8.0.45μm滤器9.真空泵（本操作流程操作程序以1ml凝胶为例）实验设计：1．样品处理：●取一定体积的有抗体分泌的细胞培养上清。
Protein G亲和介质说明书
国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所西区 电话/传真：010- 82544957 邮编：100190Protein A 亲和介质（Protein G QZT 4FF ）产品说明书1. 产品简介Protein G 能特异性地与抗体的Fc 区结合，所以Protein G 亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。
Protein G QZT 4FF 亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组Protein G 为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。
2. 产品特性3. 使用方法Protein G QZT 4FF 广泛用于各种抗体的分离纯化。
层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
平衡：用5~10CV 的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，添加适当浓度的NaCl 抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH 不变（与平衡液一致）。
进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。
固体样品可用平衡液溶解配制；低浓National Engineering Research Center forBiotechnology (Beijing)Add ：No.1 Bei er tiao, Zhongguancun, Haidian District, Beijing, ChinaTel/Fax ： 010- 82544957 Post code ：100190度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。
为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm ）处理。
进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM 柠檬酸，pH 2.5-3.5；或0.1M 甘氨酸，pH 3.0；或20 mM 乙酸钠，pH 3.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH 或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。
Protein A CIP Resin 产品说明书
1Protein A CIP ResinCat. No. L00433 Technical Manual No. TM0640Version 09182012 I Description......................................................................................... 1 II Key Features.. (1)III Buffer Preparation………………………………………………………...………………..5 IV Purification Protocol…………………………………………...................................... 6 6V Cleaning-in-Place (7)VI Storage................................................................................................7 VII Troubleshooting.. (8)VIII Ordering information (8)I. DescriptionProtein A affinity chromatography resin is the most commonly applied method for the isolation and purification of IgG. Protein A is a cell wall component found in several strains of Staphylococcus aureus . It has five high affinity binding sites capable of binding specifically to the Fc region of immunoglobulin molecules from several species. Covalently immobilized Protein A matrices have been extensively used to purify IgG from several species of mammals. The alkali tolerant protein A Resin (Protein A CIP Resin ，Cat. No. L00433) is made of recombinant protein A as ligand, which not only keeps the specific binding capacity to Fc region of immunoglobulin molecules, but also tolerates alkaline conditions. It can withstand rigorous Cleaning-in-place (CIP) procedure with 0.1 to 0.5 M NaOH. As a high quality antibody purification resin, it can be used for large scale antibody purification, and meet the purification requirements of industry-scale customers.II. Key Featuresz High IgG binding capacityBinding capacity of > 50 mg human IgG/ml of settled resin.z Good pressure resistanceMade with rigid base matrix, the resin can withstand pressure up to 0.3 MPa2z Low ligand leakage during elutionThe leakage is less than 15 ng ligand (protein A)/ mg purified human Ig G.z Enhanced alkali stability There is no significant decrease of binding capacity after CIP with 0.1M NaOH for 200 cycles; After CIP with 0.5M NaOH for 100 cycles, the resin retains 80% of its initial binding capacity.The combination of these four key features makes the Protein A CIP Resin an ideal choice formonoclonal antibody purification, especially at industrial scale. The characteristics of the medium are summarized in Table 1.Table 1. Product Characteristics of Protein A CIP ResinPackage formatAvailable in several package sizes of 50% slurry MatrixHighly-crosslinked 4% beaded agarose Average bead size～ 90 μm Ligand Recombinant protein A Binding capacity> 50 mg human IgG/ml settled resin Chemical StabilityStable with all commonly used reagents during the purification process Working pH3-12 Clean in place0.1-0.5M NaOH Linear flow velocity50-300cm/h Storage20% ethanol ， 2 - 8℃Table 2. Chemical reagents compatible with Protein A CIP ResinDetergents Reductants Chelates Other1% NP-401% Triton X-1000.1% SDS2 mM β-mercaptoethanol 20mM EDTA 1mM PMSF 5% glycerol3Alkali tolerance (stability in alkaline conditions) of Protein A CIP Resin was tested in terms of dynamic binding capacity using 0.1 or 0.5 M NaOH CIP. The testing data were shown in the figurebelow (Figure 1.).Figure 1. Changes of the dynamic binding capacity of Protein A CIP Resin during 200 Cleaning-in-place cycles with 0.1 M or 0.5 M NaOH.Each Cleaning-in-place (CIP ）cycle in figure 1 includes the following 4 steps ：z Wash with 5-fold (5x) column volume binding buffer;z Loading sample;z Wash resin with 10x column volume of binding buffer;z Wash with 5x column volume of elution buffer;z Wash with 0.1M NaOH or 0.5M NaOH ，for 15min;z Wash with 5x column volume of binding buffer;The binding capacity was tested with human IgG every 20 cycles. The binding capacity of MabSelect SuRe (An alkali tolerant protein A resin from GE Healthcare-Life Science) is also included in the comparison.4ExampleFigure 2 shows an example of purification of a monoclonal antibody from a clarified mammalian cell culture medium when using Protein A CIP Resin. The antibody sample was loaded on the column at 30 mg humanIgG per mL settled resin. The final recovery rate of the antibody is over 95%.Figure 2. Profile of A 280 and pH monitored during the purification of a monoclonal antibody.Protein A CIP Resin has a characteristic of low ligand leakage (< 15 ng/mg antibody) .The leakage ofligand was measured every 20 cycles as shown in Figure 3.Figure 3. Ligand leakage of Protein A CIP Resin during 200 washing cycles with 0.1M NaOH.5The linear flow velocity of Protein A CIP Resin under different pressure (Figure 4).Figure 4. Pressure/flow rate correlation for a pre-packed column with 1ml Protein A CIP Resin. 20111228 and 20111229 represented different batches of the resin.III. Buffer PreparationAll solution should be made of double deionized water. It is recommended to filter the buffers and samples through a 0.45 μm filter before use.。
单克隆抗体纯化工艺中Protein A层析介质的选择
单克隆抗体纯化工艺中Protein A层析介质的选择1.单抗分离纯化中的亲和层析介质亲和层析具有专一、高效的特性。
一般使用亲和层析纯化后，抗体的纯度一般大于95%以上，收率在95%以上；所以在抗体纯化工艺中一般使用亲和层析作为单抗纯化工艺的捕获步骤。
在单抗分离纯化中使用的亲和层析主要是有：ａ．嵌合抗体，人源化，全抗体一般使用Protein A 或Protein G层析介质为捕获步骤；b. FC融蛋白一般使用Protein Ａ层析介质做捕获步骤；c． Fab片段，或scFv 单链抗体一般使用Protein L层析介质捕获， Protein L (Capto L) 对轻链kappa片段有特异吸附。
如果轻链的种类是Lambda，可以选择Lambda Select 特异的捕获。
d．单区域抗体sdAb一般有V H区域，也可以使用protein A，如MabSelect 作为捕获步骤。
1.1Protein A 的性质金黄色葡萄球菌A蛋白（Staphylococal Protein A，SPA）是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。
能特异性地与人或哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区域结合。
天然的protein A SPA是十种氨基酸组成。
由于不含有胱氨酸及半胱氨酸，所以无二硫键。
紫外光谱和吸收系数为A275nm %=1.65，等电点为pH5.1。
SPA十分稳定，用4mol/L尿素、硫氰盐酸、6mol/L的盐酸胍和pH2.5的酸性条件，以及加热煮沸均不影响其活性。
分子量：全长的SPA 54KD，去掉与细胞壁结合部分的SPA 42KD。
SPA与IgG结合的亚类主要是IgG1、IgG2和IgG4。
近几年来基因工程的SPA出现，解决了天然protein A的耐碱性问题，MabSelect Sure是基因工程的SPA，去掉了天然SPA的DACE 区域，对于B区域进行了修饰，将不耐受NaOH的氨基酸去掉。
使修饰后的SPA可以耐受0.1-0.5M的NaOH；这就很好的解决了层析介质CIP的问题，同时修饰后的SPA也耐受蛋白酶。
ProteinA-QD产品使用说明书
Protein A- QD产品使用说明书
技术背景：天然蛋白A（Protein A）是一种由细菌Staphylococcus aureus表达的56kD 蛋白，可与多种免疫球蛋白的Fc区结合（表1）。
然而天然蛋白A的非特异性较强，本产品采用分子生物学改造后的重组蛋白A在基本保持原结合特性的同时，可提高特异性，增强生物标记的灵敏度。
重组蛋白A由大肠杆菌异源表达，经过亲和纯化后纯度在95%以上，通过与低非特异性吸附的量子点偶联，获得特异性结合免疫球蛋白Fc区的荧光探针，可用于多种免疫标记及相关荧光分析实验。
本产品量子点组成为CdSSe/ZnS，发射波长为525-655nm可调，表面偶联重组蛋白A，经过纯化保存于pH7.4的10mM PB缓冲液中，使用时请注意蛋白A与大多数免疫球蛋白结合的pH范围应在7-8之间。
应用：免疫组化、免疫荧光、蛋白印记、细胞相关分析实验、流式细胞术。
产品推荐使用浓度：Western blotting/1:100-1:500
Cell staining/1:100-1:1000
具体实验过程中，应根据不同用途选择合适的量子点标记物工作浓度。
保存说明：自生产之日起，避光、4℃可保存三个月；为了更好保存、使用试剂，使用前后请适当离心（盖帽）；切勿冷冻。
备注：本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
表1 蛋白A对不同种属源性的抗体结合能力。
“+”号数量代表亲和力强弱，“++++”为强结合，“++”为中等结合，“-”为弱或无结合活性，“可变”表明该类抗体来源不同表现结合力不同。
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Protein A 亲和介质（Protein A QZT 4FF ）产品说明书
1. 产品简介
Protein A 能特异性地与抗体的Fc 区结合，所以Protein A 亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。
Protein A QZT 4FF 亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组Protein A 为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。
2. 产品特性
3. 使用方法
Protein A QZT 4FF 广泛用于各种抗体的分离纯化。
层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
平衡：用5~10CV 的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，添加适当浓度的NaCl 抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH 不变（与平衡液一致）。
进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。
固体样品可用平衡液溶解配制；低浓
National Engineering Research Center for
Biotechnology (Beijing)
Add ：No.1 Bei er tiao, Zhongguancun, Haidian District, Beijing, China
Tel/Fax ： 010- 82544957 Post code ：100190
度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。
为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm ）处理。
进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM 柠檬酸，pH 3.0-4.0；或0.1M 甘氨酸，pH 3.0；或20 mM 乙酸钠，pH 3.0-4.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH 或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。
洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1M Tris/HCl, pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH ，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。
再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。
（1）用0.1M 的乙酸或0.1M 的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5CV ，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；
（2）也可用0.05M NaOH+1M NaCl 或6M 盐酸胍淋洗柱子3-5CV ，并用3~10 CV 的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。
其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
4. 具体应用
1 载量分析：利用人免疫球蛋白（血浆来源，纯度95%，3mg/ml ）进行载量分析（柱体积2ml ；Buffer A ：20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，Buffer B ：0.1M 甘氨酸，pH 3.0；流速：0.5ml/min ；上样量：40ml ），层析谱图如图1（A ：进口介质；B ：本中心介质）所示，结果表明两种介质的层析谱图（穿透行为、洗脱峰）基本一致，无明显差异。
洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明，二者的载量相似，均在40-45mg h-IgG/ml 介质之间。
2 纯化效果分析：利用小鼠腹水（Buffer A 稀释4倍）上样进行亲和层析，考察介质的分离纯化效果（柱体积2ml ；Buffer A ：20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，Buffer B ：20mM 柠檬酸，pH 3.0；流速：0.5ml/min ；上样量：4ml ），层析谱图如图2所示，纯度分析结果表明，经过一步亲和层析，即可得到纯度95%以上的IgG 。
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图1 h-IgG 在Protein A 介质上的动态穿透曲线（A ：对照介质；B ：本中心介质）
图2 Protein A 亲和层析谱图（小鼠腹水）
5 特色服务
（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。
（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。
（3）按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。
（4）为客户提供专业的售前和售后服务。
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