微生物生理生化反应
微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规实验法。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体个原理如下：1、淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（1—枯草杆菌，5—大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2、明胶水解试验：穿刺接种于明胶培养基中的细菌，若能产生明胶酶利用明胶，则该培养基在4摄氏度条件下会处于液体状态，从而区别于正常条件下4摄氏度时固态的明胶培养基。
3、糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
4、IMVC实验包括四个试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细胞血检查。
①吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
②甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙算和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
③柠檬酸盐利用试验：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，而有些细菌则不能利用。
由于细菌不断地利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基PH由中性变为碱性，培养基中的指示剂有浅绿色变为蓝色。
④伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验 VP）：某些细菌在代谢过程中，能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，后者与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者乙醛化合生成乙酰甲基甲醇。
实验八微生物生理生化试验
伏－普试验用于测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产 物的能力,如丙酮酸,丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇,此化合 物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的 精氨酸的呱基作用,生成红色化合物,即伏－普试验阳性,不产生红色化 合物为反应阴性,
实验八 微生物生理生化试验
一 实验器材 1 菌种 大肠杆菌,普通变形杆菌,金黄色葡萄球菌,产气肠杆菌 2 培养基 尿素琼脂试管,蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基,葡萄糖发酵管 和乳糖发酵管各3支, 3 溶液和试剂 甲基红指示剂,5％萘酚,乙醚和吲哚试剂 4 仪器和其他用品 接种针
二 目的要求 1 大分子物质水解试验
三 糖发酵试验 1 在发酵管上标明所接种的细菌名称, 2 取葡萄糖发酵管3支,分别接入大肠杆菌、普通变形杆菌,第三支不接 种,作为对照,另取乳糖发酵管3支,同样操作, 3 将接种和对照的发酵管置37 ℃培养24－48h, 4 观察发酵管的颜色和有无气泡,
各试验需接种的菌种:
1 明胶水解试验：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 20 ℃ 2－5 d
3 尿素试验 1 取2支尿素培养基试管,用记号笔表面各管欲接种的菌名, 2 分别接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌 两种细菌对尿素的分解速
度不同 ,需要观察2次, 3 将接种后的试管置35 ℃培养24－48h, 4 观察培养基颜色变化, 尿素酶存在时为红色,无尿素酶时为黄色,
二 IMViC试验
1 接种与培养 1 用接种针将大肠杆菌和产气肠杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基中
温15－30 min,红色为阳性,大肠杆菌阴性,产气肠杆菌阳性
思考题
1. 为什么尿素实验可用于鉴定变性杆菌属 细菌
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
细菌生理学检查法--微生物生化反应
－－微生物生化反应
生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来 鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
糖酵解试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（Methyl Red）试验 靛基质（Imdole）试验 枸椽酸盐试验： 尿素酶（Urease）试验 三糖铁（TSI）琼脂试验
细菌生理学检查法
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
细菌生理学检查法
－－沙门氏菌的TSI试验
1、未接种
2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性
细菌生理学检查法
－－三糖铁（TSI）琼脂试验
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变 黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触 空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来 又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
细菌生理学检查法
－－柠檬酸盐试验
某些细菌能利用柠檬酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为 二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变为兰色。
细菌生理学检查法
－－尿素酶（Urease）试验
有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性， 酚红呈粉红色。
细菌生理学检查法
－－甲基红（MR）试验
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中， 由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培 养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
实验六微生物的生理生化反应.
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握i 微生物（细菌）鉴定中主要生化反应的常规实验法二、实验原理（一）大分子物质（如淀粉、明胶）在常规条件下不被降解成小分子物质，但某些微生物细胞能分泌胞外酶，使大分子物质降解。
大分子物质在微生物分泌的胞外酶的作用下分解成小分子物质。
1. 淀粉水解实验根据淀粉遇碘变蓝的原理，向含有淀粉培养基中加入碘产生淀粉酶无色透明圈微生物细胞无淀粉酶蓝色2. 明胶水解实验产生明胶酶的，明胶培养基在4 度时成液体状微生物细胞无明胶酶时，在明胶培养基在4 度成固体状（二）糖发酵实验不同的细菌分解糖，醇的能力不同，有些细菌分解某些糖产酸并产气，有的分解糖仅产酸而不产气，因此，可根据其分解利用糖的差异作为鉴定菌种的依据之一。
在糖发酵实验中，用溴甲酚紫作为指示剂，PH6.8时为紫色，当PH< 5.2时变为黄色，若细菌分解糖产酸，则培养液由紫色变为黄色，有无气体产生，可以从德汗氏小管中观察。
（三）IMVC 实验IMVC 实验主要包括吲哚（indol test）试验、甲基红（methyl red test）试验、柠檬酸盐（citrate test）试验、伏-普（Voges-Prokauer test）试验，这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细菌学检查甲基红试验（M.R.试验）某些细菌在糖代谢过程中，分解培养基中的糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸，乙酸等，使培养基的PH 值降至4.5 以下。
酸的产生可由甲基红的变色来指示。
甲基红的变色范围是PH4.2-6.3，PH4.2 时为红色，PH6.3 时为黄色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少时，则培养基PH 值在6.3以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。
伏普试验有些细菌可以分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸通过缩合和脱羧产生乙酰甲基甲醇。
在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，二乙酰可以与培养基中的蛋白胨中的精氨酸的胍基产生红色化合物。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。
在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。
本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。
1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。
如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。
2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。
如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。
3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。
如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。
通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。
4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。
如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。
通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。
关于微生物的生理生化反应
【试验器材】
白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰
1．菌种
吲哚〔红色〕。但并非全部的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，
枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，一般变
因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标。
形杆菌，产气肠杆菌。
色氨酸水解反应：
2．培育基
1
在接种后，轻缓摇动试管，使其匀称，防止倒置的小管进入气泡。
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〔3〕将接过种和作为对比的 6 支试管均置 37℃中培育 24~48h。
变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性。
〔4〕观看各试管颜色改变及德汉氏小管中有无气泡。
【试验结果】
卢戈氏碘液，甲基红指示பைடு நூலகம்等。
基红指示剂由橙黄色〔pH6.3〕转变为红色〔pH4.2〕，即甲基红反应。尽
4．仪器和其他用品
管全部的肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但这个试验在区分大肠
无菌平板，无菌试管，接种环，试管架等。
杆菌和产气肠杆菌上仍旧是有价值的。这两个细菌在培育的早期均产生有
【操作步骤】
机酸，但大肠杆菌在培育后期仍能维持酸性 pH4，而产气肠杆菌则转化有
1．淀粉水解试验
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〔1〕将固体淀粉培育基溶化后冷却至 50℃左右，无菌操作制成平板。
〔2〕用记号笔在平板底部划成 4 部分，分别在 4 部分表上菌名。
〔2〕用记号笔在平板底部划成 4 个部分。
〔3〕用无菌操作将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜
微生物鉴定的生理生化反应汇总
微生物鉴定的生理生化反应各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。
用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。
利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。
生物化学试验的方法很多，主要有以下几类。
一、碳水化合物的代谢试验1．糖（醇、苷）类发酵试验（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。
检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。
(2)方法：在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。
所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表6-4-1。
将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。
若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。
(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。
不分解糖则无变化。
(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。
即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。
表6-4-1 常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类单糖四碳糖：赤藓糖, 五碳糖：核糖核酮糖木糖阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖果糖半乳糖甘露糖双糖蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麦芽糖（两分子葡萄糖）三糖棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖菊糖（多分子果糖）淀粉醇类侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇非糖类肌醇2．葡萄糖代谢类型鉴别试验(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。
实验九微生物的生理生化反应
思考题
1. 假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发 酵试验应该出现什么结果？（P120，2 ） 2. 解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理， 为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色 氨的酶活性的指示剂，而不用丙酮酸? P123，2（2）
糖 发 酵 试 验
• • • • •
IMViC反应： 吲哚实验： 甲基红实验 V.P.实验 柠檬酸盐实验
• H2S实验
吲哚试验: 检查吲哚的产生 有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中
的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲 基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
甲基红试验：检查微生物利用葡萄糖产酸的情况 细菌代谢糖产生的有机酸会使培养基变酸，可通过 加入的甲基红指示剂（PH6.3 橘黄色-PH4.2 红色）。 尽管所用的肠道菌都能发酵葡萄糖产生有机酸，大肠杆 菌和产气杆菌在培养早期均产生有机酸，但大肠杆菌在 培养后期仍能维持酸性PH4.0， 而产气杆菌则转化有机 酸为非酸性末端产物，如乙醇，丙酮酸等。
结果观察
实验名称 糖发 葡萄糖发 酵实 酵 验 乳糖发酵 吲哚实验 IMVi 甲基红实 C反 验 应 V.P实验 柠檬酸盐 实验 H2S实验 培养基 葡萄糖发酵培 养基 乳糖发酵培养 基 蛋白胨水培养 基 葡萄糖蛋白胨 水培养基 葡萄糖蛋白胨 水培养基 柠檬酸盐培养 基 H2S培养基 菌种 大肠、产气 大肠、产气 大肠、产气 大肠、产气 大肠、产气 大肠、产气 大肠、变形 产生红色玫瑰吲哚 丙酮酸分解为小分子酸， 使得培养基颜色变红 丙酮酸不分解，氧化后与 α-萘酚形成红色 可以利用柠檬酸盐，pH升 高，颜色变蓝 产生PbS黑色沉淀 现象 颜色变化、有气泡积聚
• 硫化氢试验：检测硫化氢 的产生
有些细菌能分解含硫的有 机物，如胱氨酸、半胱氨酸 和甲硫氨酸等产生硫化氢，
实验6-微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应1、实验目的探究菌株在碳源同化、氮源利用、乙醇发酵和抗生素效价分析等方面不同的生长特性，观察并简要分析不同微生物的生理生化特征及其形成机理。
2、实验过程简述2.1 培养基与试剂准备2.1.1碳源同化培养基准备碳源为葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、海藻糖、松三糖、可溶性淀粉、α-甲基葡萄糖苷的YNB 培养基，放入一根杜氏管。
2.1.2氮源同化培养基准备氮源为硫酸铵，尿素，蛋白胨，硝酸钾，无氮源YNB 的固体、液体培养基。
2.1.3 乙醇发酵用种子培养基：YPD 培养基2.1.4乙醇发酵用发酵培养基葡萄糖，酵母粉，蛋白胨，尿素，磷酸二氢钾，硫酸镁，氯化钙。
2.1.5抗生素效价测定用培养基：LB 培养基2.1.6青霉素：用pH 6.0 磷酸缓冲液配制，浓度为100 mg/ml，0.22μm 孔径过滤灭菌。
2.2 微生物的碳源同化和发酵1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200 μl 菌悬液，分别转接于含杜氏管的小试管中，静置培养48 h。
3、每24 h 观察记录生长和产气情况。
4、根据实验结果判断不同菌株对不同碳源的同化或发酵。
2.3 微生物的氮源利用1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200μl 菌悬液，分别转接于上述培养基小试管中，30℃或37℃静置培养48 h。
3、各取20μl 菌悬液，分别划线于不同氮源的固体平板上，待菌液被吸收后，培养皿倒置，静置培养48 h。
4、每24 h 观察记录生长情况，48 h 测定液体培养物的OD 600。
5、根据实验结果判断不同菌株对不同氮源的利用能力或偏好性。
2.4 酵母菌的乙醇发酵1、种子液培养：将酿酒酵母从菌种斜面上接一接种环至YPD 种子培养基中，30℃，200rpm，培养18 h。
2、乙醇发酵：按照10%（v/v）的比例将培养好的种子液接入100 ml 发酵培养基中，用无菌塑料布将封口密封，30℃，静置培养，每24 h 手摇1 次，发酵3-4 d。
微生物鉴定的生理生化反应汇总
微生物鉴定的生理生化反应各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。
用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。
利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。
生物化学试验的方法很多，主要有以下几类。
一、碳水化合物的代谢试验1．糖（醇、苷）类发酵试验（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。
检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。
(2)方法：在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。
所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表6-4-1。
将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。
若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。
(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。
不分解糖则无变化。
(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。
即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。
表6-4-1 常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类单糖四碳糖：赤藓糖, 五碳糖：核糖核酮糖木糖阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖果糖半乳糖甘露糖双糖蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麦芽糖（两分子葡萄糖）三糖棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖菊糖（多分子果糖）淀粉醇类侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇非糖类肌醇2．葡萄糖代谢类型鉴别试验(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告背景细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。
生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。
本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。
分析1. 嗜热/嗜冷性嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。
常用实验方法包括在不同温度条件下进行培养观察，并记录生长情况。
根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。
2. 好氧/厌氧性好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。
常用实验方法包括在含氧和不含氧的培养条件下观察细菌生长情况。
根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。
3. 革兰氏染色革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。
该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。
根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。
4. 淀粉酶活性淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。
透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。
5. 水解酪蛋白活性水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。
颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
6. 氧化/发酵代谢氧化/发酵代谢实验用于检测细菌在代谢过程中产生的产物。
该实验将待测细菌接种于含有碳源的培养基中，并根据pH指示剂颜色变化观察细菌是通过氧化代谢还是发酵代谢产生能量。
氧化代谢通常伴随着pH值升高，培养基呈碱性；而发酵代谢则通常伴随着pH值降低，培养基呈酸性。
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微生物生理生化反应
实验原理
通过测定微生物细胞内某些酶类的有无、对某些底物的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物代谢的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，当吲哚遇到含有对二甲基氨基苯甲醛试剂，形成红色的玫瑰红吲哚，为吲哚反应阳性。
V-P反应也称乙酰甲基甲醇试验。
微生物发酵葡萄糖产生丙酮酸，2分子丙酮酸脱羧形成乙酰乳酸，继续脱羧形成乙酰甲基甲醇，后者在碱性条件下与胍类、肌酸类物质反应，形成红色化合物，为V-P反应阳性。
有些细菌发酵糖类产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，使发酵液变红色。
某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。
实验材料和方法：
材料：
培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖和蔗糖）、酚红半固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基；
菌种：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus arueus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）；
试剂：V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲酚紫指示剂、抗生素；
仪器及用具：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅、试管、移液管、滴管、杜氏小管、记号笔等。
实验方法：
1.V-P反应
取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。
置于37℃恒温箱中培养48小时。
取出培养物，分别从中取出2.5mL培养液，再加入等量V-P试剂，充分震荡后放置在37℃培养箱中温育30min。
若培养液呈红色，记录为V-P试验阳性反应；无色者为V-P试验阴性反应；粉红色者为弱阳性。
2.甲基红试验
分别从V-P实验中的培养物中取出2.5mL培养液，分别加入2～3滴甲基红指示剂，立即观察培养液颜色变化。
若培养液变成红色，即为阳性反应，橘色或黄色为阴性反应，橘红色为弱阳性。
3.吲哚试验
取5只装有蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。
置于37℃恒温箱中培养48小时。
在通风橱中向培养基中加入乙醚1～2mL，振荡使吲哚尽量被完全萃取至乙醚中，沿管壁缓慢加入5～10滴吲哚试剂，加入后不能摇动。
若乙醚层呈现玫瑰红色，即为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。
4.糖发酵试验
取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管个4支，内装有倒置杜氏小管，杜氏小管内
充满培养液，每种糖发酵试管中均分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌和普通变形菌，并有空白对照组，置于37℃恒温箱中培养48小时。
与对照试管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖；若培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，若培养液内地杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气。
5.微生物与氧的关系
在无菌条件下分别向3支酚红半固体培养基中穿刺接种大量枯草杆菌、大肠杆菌、丙酮丁醇梭菌，可进行三次穿刺接种，然后在37℃恒温箱中培养48小时，观察各种菌种生长状况。
6.抗生素抗菌谱及微生物抗药性
用倒平板法制作两个牛肉膏蛋白胨培养基，待冷却后想两培养基中分别接种大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
然后分别将两培养基划分为6个等大的区域，做好标记，分别在6个区域中放置红霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素、青霉素和链霉素。
在37℃恒温箱中培养48小时，根据各种抑菌圈的大小判断各种抗生素的抗性。
7.乳酸发酵（酸奶制作）
在一个干净的纸杯中分别加入180ml纯牛奶、10g蔗糖、两勺酸奶，搅拌均匀后在42～45℃条件下培养3小时，然后放入冰箱中培养45小时。
8.细菌数量的测定
稀释：取大肠杆菌菌液，稀释后待用（浓度约为106~107cfu/mL）
加样：用吸管将大肠杆菌稀释液吹吸均匀，然后吸去少量稀释液，从计数板一侧中间平台边缘处加样，让菌液自行渗入并充满计数室，多余菌液用滤纸吸去。
在计数室上方盖上盖玻片。
定位计数室：先在低倍镜下寻找计数板大方格网的位置，转换高倍镜后，适当调暗光亮度至菌体和计数室线条清晰为止，再将计数室一角的小格移至视野中。
顺着大方格线移动计数板，使计数室位于视野中央。
计数：计数时，使用规格为25*16型的计数板，选取左下、左上、右下、右上、中央的5个中方格（各16个小格）计数。
计数时当遇到中方格分界线上的细菌时，则“计上不计下，计左不计右”。
实验结果：
1-4：
试验项目V-P反应甲基红试验吲哚试验
糖发酵试验
葡萄糖乳糖蔗糖
大肠杆菌红色黄色阳性+、○+、○
产气肠杆菌红色黄色阴性+ +（微）
变形杆菌红色黄色阴性+ +（微）+、○枯草芽孢杆菌淡红色红色阳性——————（表一：微生物生理生化的测定结果，+代表产酸，○代表产气）
(V-P反应) （微生物与氧的关系）
（甲基红实验）（吲哚实验）
（糖酵解：葡萄糖，从左至右：大肠杆菌、（糖酵解：蔗糖，从左至右：大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌、对照组）产气肠杆菌、变形杆菌、对照组）
（糖酵解：蔗糖，从左至右：大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌、对照组）
5.微生物与氧的关系
大肠杆菌：在培养基上下部都生长，上中下均有气泡，基部完全被气体占据；
枯草杆菌：只在培养基表面生长；
丙酮丁醇梭菌：细菌在底部生长，产生大量气体，把培养基顶起。
6.抗生素抗菌谱及微生物抗性
氯霉素氨苄霉素卡那霉素链霉素无菌水
大肠杆菌 3.2 1.6 2.15 3.45 0
金黄色葡萄球菌 1.05 0.75 0.75 0.65 0
（表二：不同抗生素抑菌圈的直径长度，单位：cm）
7.乳酸发酵（酸奶制作）
自制的酸奶美味可口，但味道比市场上的酸奶稍微甜了一些。
可能是蔗糖放多了的原因。
8.细菌数量的测定
视野位置左上左下右上右下中央平均数
细菌数目128 192 180 161 144 161
（表三：平板计数法数每个中格的菌落数）
每立方毫米的菌落数为：161*25*103=4.03*106
分析讨论：
1.V. P. 试验
从实验结果中可以看出，大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌都呈阴性，但理论上产气肠杆菌为阳性反应，这可能是实验操作问题，所以原因还待进一步探究。
2.甲基红试验
从实验结果中可以看出，大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌都呈阳性，理论结果产气肠杆菌为阴性，这可能是实验操作问题。
3.吲哚实验
实验结果显示大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均产生玫瑰红色的阳性反应，但理论结果是阳性反应还有变形杆菌。
这可能是我们小组实验操作问题。
4.糖发酵试验原理
从实验结果中能够看出，三种细菌（大肠杆菌、变形杆菌、产气肠杆菌）在葡萄糖中发酵都能产酸，只有大肠杆菌能产气(理论上还应该包含产气肠杆菌)；在乳糖中，三种菌能够产酸，只有大肠杆菌能产气；在蔗糖中，只有变形杆菌能够产酸产气。
5.微生物与氧的关系
根据实验结果可以得出：大肠杆菌是兼性厌氧性细菌；丙酮丁醇梭菌是厌氧菌；枯草杆菌是好氧菌，所以它一般长在培养基的上面，仔细观察的话，可看到培养基的表面变颜色。
6.抗生素抗菌谱及微生物抗性
通过对抑菌圈直径长度的测量，表明氨苄霉素、氯霉素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用，卡那霉素抑制作用要比前两者弱一些，而链霉素的抑制作用更弱。
观察抑菌圈时一般把培养基对光观察。
有的抑菌圈里有少量菌落的生长，这有可能是其他的杂菌（抗性较强），或是培养基上的菌的突变体。