细菌室sop文件
细菌室SOP文件
细菌室SOP文件页码：第1页共7页临床细菌检验工作的基本要求和技术一、对临床细菌检验人员的要求1．负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。
2．一般细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌的知识。
3．通晓细菌室守则，并严格遵守。
4．负责人应不断更新知识，了解细菌学检验的新进展。
5．定期或随时与临床医师联系，主动参与临床病例讨论，了解病情及治疗情况，达到细菌检验与临床的密切联系。
6．工作人员应定期进行健康体检及必要的预防接种，增强自身抵抗能力。
二、工作人员守则在细菌室工作人员应注意，既不要给室内带来污染，也不要被室内的微生物感染。
工作人员必须遵守以下规则：1．穿专用的工作衣、帽入室；必要时应戴口罩。
2．不允许无关人员进入实验室。
3．室内禁止饮食、吸烟、闲谈等非专业活动。
4．养成在室内手不触及口、脸、头发及躯体的习惯。
5．操作中不可说话，以免口中飞沫污染标本。
6．每次完成工作和离开实验室前，应用肥皂洗手，接触了致病菌类，须用消毒剂消毒手。
7．个人物品不许带入室内。
8．当工作环境被细菌培养物污染，必须用适当的强消毒液泼撒覆盖污染物，并报告主管人员采取必要的措施。
9．工作人员被细菌培养物污染，应用弱或中等消毒剂清洗，必要时应给予药物治疗，并向主管负责人报告，进一步采用特殊措施。
细菌室SOP文件页码：第1页共7页基本染色方法染色的第一步是制作涂片。
菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。
菌落涂片时，先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。
涂片时必须注意应轻轻操作。
猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。
制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。
将固定后的涂片进行染色。
一、革兰染色本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。
染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
细菌测定系统SOP文件
安顺市平坝区人民医院检验科编写:蒋可乾、黄维华制定日期:2016、06、05平坝区平黎大道审核:蒋可乾修订日期:2016、06、200851- 核准:谭桂林执行日期:20016、06、20DL-96细菌测定系统标准操作程序1.目的规范DL-96细菌测定系统的操作程序,保证检验质量。
2.授权操作人经培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
3.原理DL-96细菌测定系统,就是对已分离培养出来的细菌、真菌等微生物进行种、属鉴定,并同时测定该菌对各种抗菌药物MIC的专用设备。
细菌测定系统由检测装置、嵌入式控制装置组成,测定系统采用比色、比浊法判定随机体外诊断试剂板微量反应孔阴阳性结果进行检测与分析,并自动生成细菌种类与抗菌药物MIC半定量分析结果。
试剂板由生化反应孔与抗菌药物MIC测定孔组成。
在生化反应孔中加入细菌悬液,经35-37℃孵育,在细菌代谢作用下生化反应直接产生颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化;抗菌药物MIC半定量测定采用微量肉汤稀释法,加入含有细菌的M-H肉汤培养基,经35-37℃孵育,试验孔就是否出现浑浊(沉淀)确定细菌就是否生长、测定系统采用比色法对各项生化反应进行结果(阴性或阳性)判定,按照细菌生化反应的概率来完成细菌的鉴定;测定系统通过比浊法对抗生素进行MIC半定量测定分析MIC值。
4、工作条件环境温度: 5℃～40℃; 相对湿度: ≤80%;大气压力: 76 kPa～106 kPa; 电源电压: AC220V+22V, 50Hz+1Hz; 光照度: 应避免阳光直射。
5.操作程序5、1 使用试剂板的基本要求5、1、1无特殊营养要求的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌与真菌等病原菌;5、1、2 经18-24小时分离培养的单个纯菌落(或纯培养物);5、2随机试剂板的选择5、2、1根据待测菌的培养特性、菌落特征、氧化酶试验、触酶试验结果及革兰染色情况,选择好相应试剂板。
5、2、2试剂板的选择:DL-96E、DL-96NE、DL-96STAPH、DL-96STREP、DL-96FUGNUS。
微生物实验室标准操作程序质量手册
微生物实验室标准操作程序质量手册实验操作者:XXXXXXXX执行日期：X年X月X日启用日期:XX年X月X日标准操作程序文件01 试剂贮存和配制区工作制度02 标本处理区工作制度03 细菌自动分析区工作制度04 试剂贮存和配制区标准操作程序05 标本处理区标准操作程序06 细菌自动分析区标准操作程序07 紫外消毒标准操作程序08 消毒液配制使用标准操作程序09 普通冰箱使用标准操作程序10 超低温冰箱标准操作规程11 洁净工作台使用操作规程12 VITEK32型自动分析系统标准操作程序13 移液器使用标准操作程序14 高速离心机操作标准操作程序15 冰箱维护和保养标准操作程序16 电热恒温水浴箱操作程序17 洁净工作台维护和保养程序18 可移动紫外消毒车使用操作程序19 加样器校准标准操作程序20 离心机维护保养操作程序21 温度计校准程序22 试剂的质检操作程序23_微生物实验室岗位职责（暂行）24 临床标本的保存程序25 临床检验及收费程序26 微生物检验收收费价格27 普通培养阴性操作程序28 真菌培养阴性操作程序29 苛养菌培养阴性操作程序30 抗酸杆菌培养阴性操作程序31 支原体培养检验操作程序标本处理区工作制度进入本区需穿工作服、工作鞋。
本区只能进行:临床标本的保存,标本接种、培养、及其菌株检验前处理、菌悬液制备、染色标本检查、非上机鉴定与药敏试验操作等危险操作，其它操作不得在此区进行.在整个本区的实验操作过程中，操作者必须戴手套、口罩和帽子，严格按照操作规程进行。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁或消毒.非本实验室工作人员未经允许不得进入。
试剂配制和无菌区工作制度进入该区需穿专用工作服和工作鞋.本区只能进行贮存试剂的制备、试剂的分装和平板的制备。
在整个本区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程进行.工作结束后必须立即对工作区进行清洁和消毒。
非本实验室工作人员未经允许不得进入。
检验科细菌耐药性监测标准操作程序SOP文件
检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。
（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。
苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。
结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。
凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。
对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。
2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。
（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。
二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。
2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。
药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。
微生物检验SOP
制作：
日期：
日期：
日期：
2018.09.15
文件名
微生物检验SOP
文件编号
C05
主办部门
研发品管部
版本别
D
页次
8/9
6.9附表1：双料及单料管操作说明
6.9.1取样量（稀释后）大于１ml的用双料，小于１ml（包括１ml）的用单料
6.9.2具体取单料还是双料我一般是根据产品标准要求定的，主要包括3类情况：
检验项目
周一
周二
周三
周四
周五
备注
成品
√
√
√
√
√
所有无防产品、果粉、水晶、Q果、黑森林果粒产品；其它产品随机抽样
包装人员手部、桌面、灌装机
每月20-28号、10-16号各抽检一次
工作服
每月8-16号抽检一次
车间环境
每月8-16号、20-28号各检测一次
培养基空白试验
√
√
√
√
√
超净工作台
每月8-16号、20-28号各检测一次
6.5.1.3菌落数的报告：菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，可采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。稀释度选择及菌落数报告方式具体见附表2。
6.5.2霉菌及酵母菌的读数及注意事项
6.5.2.1基本要求：霉菌培养应用专用培养箱，培养温度在25～30℃之间对结果影响不大。为尽快得到结果，我们以27℃为培养温度。菌落计数应于培养后的72小时进行第一次观察。这时主要是观察那些密集生长的平皿，以免到第五天之后，菌落生长成片而难以计数。
3.权责：
(完整版)微生物室sop文件
细菌室操作规程鹤壁市中医院检验科目录第一篇细菌室操作程序文件1.细菌室人员岗位职责…………………………………………………….。
12.标本采集及保存要求 (3)3.显微镜检查法操作规程 (5)4.细菌室标本操作流程 (6)5.细菌的形态检查操作规程 (8)6.细菌生化反应鉴定及其它实验操作规程 (11)7.细菌的接种与培养方法操作规程 (17)8.支原体培养、鉴定及药敏操作规程 (19)9.血液感染病原体检验操作规程 (20)10.中枢神经系统感染病原体检验操作规程 (22)11.下呼吸道感染病原体检验操作规程 (24)12.尿路感染病原体检验操作规程 (26)13.消化道感染病原体检验操作规程 (29)14.脓汁及病灶分泌物细菌学检验操作规程 (31)15.生殖系统标本的处理 (33)16.抗菌药物敏感试验 (34)第二篇医院微生物感染控制检测17.消毒灭菌效果监测 (37)19.采样及检查原则……………………。
…………。
……………………….。
3920.各部位的消毒 (43)细菌室人员岗位职责1、上班后先搞好室内卫生、核查各个培养箱、冰箱的工作温度是否在设定的范围内，并做好记录。
检查各种仪器工作是否正常，做好记录。
2、接收样本：核对各样本号与申请单联号是否一致，如不一致马上与病房联系以便作出相应的处理，如退单或重送样本等，并做好联系情况的记录。
核查各送检样本是否符合要求。
①痰液样本：先看外观、再直接涂片镜检,以白细胞≥25个/低倍镜视野,而上皮细胞≤10个/低倍镜视野，为合格痰液。
②无菌体液样本:检查各种无菌体液样本的盛放器皿是否符合要求。
③容易干燥的样本：对一些容易干燥的样本如大便、咽拭子、脓液拭子、泌尿生殖道拭子等是否已经干燥.对不符合要求的样本必需与临床联系，以便作出相应处理,方法如联号不符的样本,做好记录.对符合的样本进行原始单的登记.3、样本编号:对符合的样本作出编号,普通细菌培养：痰液、咽拭子、血液增菌培养、尿液、胸、腹水、脑脊液、胆汁、脓液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培养。
临床细菌学室内质量控制sop
临床细菌学室内质量控制目的：细菌室内质控是细菌检验工作的核心，是做好室间质评的基础和前提，做好此项工作，才能在室间质评中取得好成绩，也就能更好地为患者的诊疗服务。
一、细菌检验人员及其培养教育：须在实践中继续学习，不断提高理论水平和技术操作能力，编写操作手册。
二、仪器设备的功能监测（一）灭菌器械的效果监测：高压灭菌器每月一次，我室采用嗜热脂肪芽胞杆菌监测。
（二）恒温孵育箱、水浴箱及冰箱，每天记录其温度，开始工作及工作结束时均应记录，并绘制温度控制图，孵育箱温度应为35℃±1℃，水浴箱37℃±0.5，冰箱冷藏为4℃±2℃，冷冻为-20℃±5℃三、培养基的质量控制（一）制备培养基的记录：包括收到日期，制备时培养基名称、配方、日期，制作者签名。
成品培养基记录购入日期及使用日期，并按条件贮存，用已知阳性或阴性菌株进行检测。
（二）培养基的外观检查：对制备或购入成品培养基，要观察其颜色和透明度。
发现异常要停止使用。
（三）培养基的性能监测：对于分离、选择、鉴别培养基，要对其用参考菌株进行监测，性能符合标准方可使用。
一、试剂、染色液及抗血清的质量控制试剂、染液，配制后注明名称，配制日期及配制者，用已知阳性和阴性参考菌株进行监测，合格后方能应用。
（一）根据试剂和染色液本身稳定性和使用频度定期检查核对：较稳定如靛基质每周检测，H2O2每天用时均应检测，氧化酶纸片应避光低温保存，各种生物制品应置4℃冰箱保存等。
（二）抗血清的质量控制：应记录收到日期，观察其外观是否符合标准，使用时前先用已知阴、阳性菌株检查是否合格，期间每三个月用标准菌株检测一次其敏感性及特异性，有效期内使用，置4℃冰箱保存。
二、处理临床标本的质量控制（一）标本采集和运送1、标本采集（1）时间：早期、急性期、症状典型时或用药前。
（2）方法：据不同的菌种而不同。
（3）技术：除痰、粪、肛拭子、咽拭子等，均应无菌操作并盛于无菌容器内。
sop细菌内毒素检查操作规程
1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。
2 范围适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。
3 责任化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。
4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1仪器、用具4.1.1旋涡混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射针（6号、9号）、保鲜纸、试管（10×75 mm）、镊子（金属）、金属盒。
4.1.2用具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在250℃干烤30分钟或180℃干烤120分钟。
4.2试剂4.2.1细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2.2细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应不小于2EU，不大于50EU。
4.2.3细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37℃±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
4.2.4鲎试剂：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml）。
4.3鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂灵敏度的标示值（λ，此处λ=0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合15分钟，然后制备成合适的稀释浓度，1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
按检查法项下试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。
sop微生物检查操作规程
sop微生物检查操作规程1目的建立微生物限度检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2 范围适用于本厂质监科化验室对本厂生产的固体制剂及物料进行微生物限度的检查。
3 责任化验员有责任按照本操作规程进行检验、判定,并对检验结果负责。
4 定义微生物限度检查法是指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包含染菌量及操纵菌的检查。
5 内容5.1 总则：5.1.1供试品应随机抽样。
通常抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
5.1.2 供试品在检查前不得开启，检查全过程均应严格遵守无菌操作规程，严防再污染。
5.1.3 操纵菌的污染检查应做相应的已知菌参照试验，参照菌株为大肠杆菌[CMCC（B）44102]，每批试验已知菌加入量为50-100个。
5.1.4 染菌量的检查或者操纵菌的检查均应做空白参照试验。
5.1.5 供试品稀释成稀释液后应在均匀状态下取样，凡有抑菌成份或者防腐剂的供试品应做特殊处理后进行检验。
5.1.6 供试品稀释后应在1小时内操作完毕。
第2页/共6页5.1.7 除另有规定外，细菌培养温度为30-35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25-28℃，操纵菌培养温度为36℃±1℃。
5.1.8细菌、霉菌检验结果的报告以1g、1ml或者10cm2为单位；操纵菌检验报告以每1g、每1ml或者每10cm2为单位报告“检出”或者“未检出”。
5.2仪器、用具恒温培养箱、隔水式生化培养箱、电子天平，移液管(1ml、10ml)、试管、离心管、双碟、镊子、剪刀、不锈钢吸管筒、酒精灯、取样勺、称量纸、研钵一个、不锈钢双碟筒。
5.2.1用具的包扎移液管：用纱布包住移液管，然后放入不锈钢灭菌筒内。
试管、双碟：试管在管口塞上纱布棉塞、双碟放入不锈钢双碟筒内。
无菌衣、裤、帽、口罩：用布口袋将洗净的衣裤、帽子、口罩配套后装入，扎紧袋口，再用牛皮纸包好。
5.2.2用具的灭菌将包扎好的用具，在121±0.5 ℃蒸汽灭菌柜中灭菌30 分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽凝造成负压，易致染菌，应置烘箱烘干。
微生物SOP文件
一、简易SOP文件：1。
1、标本接收筛选方案:1.1。
1、痰标本:目测：黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、稠厚，呈现团块状的标本为合格标本;而无色、白色、有黑色小点，清稀，呈现泡沫状，有明显食物渣滓、纸屑灰尘、泥土的为不合格标本.显微镜下筛选：对经过目测筛选的标本须经过显微镜下再次筛选，凡脓细胞>25/HP且复层鳞状上皮<10/HP的标本为合格标本，可进入下一步程序；而脓细胞〈10/HP或复层鳞状上皮〉25/HP的标本为不合格标本，应拒收.1.1。
2、尿标本：目测:采用一次性无菌杯，杯盖严密者为初步合格；显微镜下筛选：标本经过离心后镜检，凡有较多复层鳞状上皮的，脓细胞较少而细菌数量较多的、或有大量尿结晶析出的均为不合格标本，应拒收。
1.1.3、大便标本：采用一次性无菌杯，杯盖严密，无明显灰尘、泥土或纸屑者为合格标本. 1。
1。
4、咽拭子标本：须采用显微镜下筛选，凡无脓细胞的标本为不合格标本，应拒收；而脓细胞>10/HP的为合格标本。
——怀疑为风湿热、猩红热的病人除外。
1。
1。
5、血液、骨髓、心包液：凡未接种于血培养瓶中的均为不合格标本，应拒收。
1。
1.6、各种穿刺液：所有标本均采用无菌容器送检或未接种于血培养瓶中,否则为不合格标本，应拒收。
1.1.7、脑脊液、生殖道标本：采用一次性无菌杯或直接接种于血培养瓶中，由医护人员（住院病人）或病人家属（门诊病人）当面交送给专业微生物检验人员，经过询问是在30min内，保温保湿条件下运送的方为合格标本，否则应拒收。
1。
1.8、其他标本：必须是采用无菌容器运送的，且在相应规定时间内送检的才是合格标本. 1。
2、标本预处理:1.2。
1、痰标本：按《全国临床检验操作规程》（第二版）相关章节，采用先用20ml生理盐水洗涤两次,经过10ml生理盐水稀疏后，用接种钩钩取脓性部分，采用压片法制作痰涂片，再在杯中加入胰蛋白酶消化1-2小时后接种。
1.2。
2、尿标本：WBC<5/HP的尿标本不用进行培养，因为很少会出现没有细胞渗出的尿路感染.当WBC>5/HP时，取4 ml离心后，弃去上清液,留下200µl混匀后接种，剩余标本涂片干燥后染色；不离心标本用于菌落计数，方法，取5ml生理盐水，加入50µl尿液标本，混匀后取100µl接种，结果×1000为每毫升菌落数。
SOP-QM-8190-03菌种传代、保存、使用、销毁标准操作规程
S O P-Q M-8190-03菌种传代、保存、使用、销毁标准操作规程(共7页)-本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-山东鲁西药业有限公司GMP文件题目菌种传代、保存、使用、销毁标准操作规程新订修订√文件编码编制部门质量部制定人审核人批准人制定日期年月日审核日期年月日批准日期年月日颁发部门QA办生效日期年月日分发部门质量部目的：建立检定用菌种的管理制度，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
责任：QC主管负责菌种的申购、接受、保存、分发；微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
1、定义：标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
2、规程：检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）或传代用菌种，菌种购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。
检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4-8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
检定菌的保存工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
临床微生物实验室管理程序
SOP_06-15 临床微生物实验室管理程序一、目的：为贯彻《传染病防治法》、《临床输血技术规范》、《传染病防治实施办法》，《医院感染管理规范》、《微生物和生物医学实验室SW AQ》，以确保临床微生物实验与AQ。
二、适用范围：微生物实验室。
三、支持性文件：《临床实验室管理办法》、《全国临床检验操作规程》、《微生物和生物医学实验室SWAQ》等四、执行人员：微生物实验与值班人员。
五、操作程序：微生物实验室管理程序微生物实验室临床微生物室是进行细菌学实验的场所，在此完成标本接种、孵育、分离、细菌鉴定和药敏试验等工作。
实验室的内部装饰，应注意与外界有良好的隔离条件，并具备紧急的消防、AQ、急救设施。
细菌室应该符合以下条件：1、实验室必须安装严密的门窗，以防外部污浊气体和昆虫进入室内污染环境。
室内禁用电扇，以避免加速气体流动，造成细菌播散。
2、细菌室必须装有供空气消毒的紫外线灯，置于离操作台面1m的高度，每天开始工作前照射20min。
对紫外线灯的消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。
3、室内备有工作人员洗手使用的肥皂和自来水源。
此水源不可与处理标本相关的水源共用。
须设置消毒剂水盆，供操作后浸手用。
4、室内必须常备消毒剂，如来苏或过氧乙酸，一旦发生菌液溅落试验台面或地面，应能立即进行消毒处理。
5、室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少每周用消毒剂擦洗1次。
6、室内对接收的标本和消毒过的器具，要分别指定地点放置，特别是对无菌和有菌的器具要明显隔开。
用过的试管、平皿必须及时高压灭菌处理。
7、不能或不便高压灭菌的标本和废弃物品须焚化处理。
8、细菌室根据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌实验工作。
9、设置必要的消防设备。
无菌实验室对无菌实验室以及在其中操作的要求如下：1、无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。
无菌室与外界开有一拉门小窗，供传递器具用。
2、在无菌室中仅限于分装无菌的培养基等操作，不进行有菌标本的分离及其他操作。
SOP-微生物检测标准操作程序
1.细菌、真菌检测：1.1取1ml 培养上清液，均匀涂布于羊血平皿、沙保弱氏平皿中。
1.2倒置平板，写上患者姓名、日期、批号。
1.3分别于37℃、25℃生化培养箱中培养。
1.4 24h 、48h 、72h 看结果。
1.5 做好记录。
2.支原体检测在获得能提供系统发育学信息的16S rRNA 分子时需要利用通用PCR 引物对16S rRNA 分子进行扩增。
16S rRNA 序列的对比分析需要在这类“通用引物”的脱氧核糖核酸分子的辅助下完成。
27F 5`-----aga gtt tga tcy tgg yty ag----3`519R 5`-----gwa tta ccg cgg ckg ctg-----3` 2.1取1ml 细胞上清液，1000rpm ，离心3min 。
(注：此步骤针对悬浮细胞）2.2取上清至另一个1.5ml EP 管中，13000rpm ，离心10min 。
2.3吸弃上清，留沉淀作为PCR 模板。
2.4 配制反应体系20ul ：Taq 酶（R028A ）（DNA 聚合酶） 10ulPrimer F （前引物） 0.5ulPrimer R （后引物） 0.5ulTemplate （模板） 2ul灭菌水 补足至20ul 细胞制品细菌、真菌、支原体检测标准操作程序制定部门：同济大学医学院干细胞研究同济医院临床转化中心编号：SOP-TJSC-QM-005页数：1/2生效日期 年 月 日 目的：严格按照标准操作规程检测 范围：所有用于细胞制品的检测 职责：实验室质检员2.5反应条件95℃ 5min95℃ 30s55℃ 30s 32 cycles72℃ 50s72℃ 10min2.6 PCR产物扩增完后，配制1.5%琼脂糖支持介质（例：35mLTAE（一倍）缓冲液则加0.525g琼脂糖），凝固待用。
每个EP管加4ul 6×Loading buffer（指示剂、增加密度）。
2.7上样（每格5ul）：凝胶板第一格加DL2000 DNA Marker 5ul凝胶板第二格加阳性对照凝胶板第三格加阴性对照三格以后加检测样品2.7 120V，20min电泳检测。
细菌室,sop文件
郑州大学第五附属医院文件编号:ZDWFY-WSW 科室管理诊疗规范文件责任部门:检验科微生物室羊水标本经腹壁羊膜腔穿刺收集。
子宫内压力导管或剖腹产术过程中用注射器抽取标本。
宫内置物标本用手术方法取出内置物，避免宫颈和阴道菌群的污染，整个内置物及分泌物置一无菌容器内送检。
前庭大腺标本用碘付等无刺激性消毒液消毒皮肤。
急性感染用拭子采取腺管分泌物。
脓肿形成时，用注射器吸取脓液。
3.标本运送采集的标本，尤其是拭子标本应即刻被放置入合适的运送培养基运送。
下生殖道标本置改良的stuart s运送培养基转送，置于转运培养基的拭子可在2~8℃存放过夜。
上生殖道感染常有厌氧菌的混合感染，相应标本应置厌氧运送培养基转送。
淋病奈瑟菌应在床边即刻接种在选择或非选择性培养中并置5%CO2 环境培养。
由于杜克嗜血杆菌在运送培养基中存活差，标本应尽量直接接种在分离培养基上。
4.标本验收实验室应拒收不合格的标本，标准见下表。
申请错误下生殖道标本厌氧培养或淋病奈瑟菌镜检。
标识错误没有标识或标识不完整，或标本标识与申请单标识不一致；没有标出标本采集时间及部位；没有在申请单上指出检验要求等。
容器错误没有应用灭菌容器，容器泄露或破裂。
运送错误运送温度错误；运送培养基错误；运送时间延长；拭子标本未置合适的转运培养基。
双份标本同时或同一天两份相同检测的标本（应与申请医师协商处理）5．实验室检查5．1涂片检查5．1．1一般细菌及；淋病奈瑟菌涂片检查：制成涂片后，干后进行革兰染色，镜检发现革兰阳性或阴性细菌，既可根据形态作出报告。
检查淋病奈瑟菌时见白细胞内有革兰阴性双球菌，呈肾形，应立即通知临床，再经培养鉴定证实，发出正式报告。
5．1．2杜克嗜血杆菌涂片检查：涂片行革兰染色，镜检，发现有细小的革兰阴性杆菌，单独存在或成丛，有时有两极浓染现象者，可作出初步报告。
5．1．3结核分枝杆菌涂片检查：涂片做抗酸染色。
5．1．4念珠菌涂片检查：用生理盐水制湿片，加盖玻片，直接镜检或行革兰染色。
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细菌室工作守则1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。
2.入室前应穿工作服,并做好实验前的各项准备工作。
3.实验室内应保持肃静,不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。
尽量减少室内活动,以免引起风动,无关人员禁入。
4.非必要物品禁止带入实验室,必要资料和书籍带入后,应远离操作台。
5.做好标本的登记、编号及试验记录。
未发出报告前,请勿丢弃标本。
6.标本处理及各项试验应在操作间进行,接种环用完后应立即火焰灭菌,沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。
7.实验时手部污染,应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5-10分,再用肥皂洗手并冲洗干净;如误入口内,应立即吐出,并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口,根据实际情况服用有关药物。
、8.实验过程中,如污染了实验台或地面,应用3%来苏儿覆盖其上半小时,然后清洗;如污染工作服,应立即脱下,高压灭菌。
9.若出现着火情况,应沉着处理,切勿慌张,立即关闭电闸,积极灭火。
易燃物品(如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等)必须远离火源,妥善保存。
10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭,观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况,用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净,并将试剂、用具等放回原处,清理台面,未污染的废弃物扔进污物桶,有菌废弃物应送高压灭菌后处理。
11.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒,并用肥皂和清水洗净。
12.爱护仪器设备,经常清洁,注意防尘和防潮。
细菌室消毒隔离措施1.每天工作前用消毒液消毒工作台,上班前、下班后开紫外灯(最少半小时)进行空气消毒。
2.非必要品禁止带入实验室,必要资料和书籍带入后,应远离操作台。
3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡,经煮沸后清洗或丢弃。
4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒,所有用于试验的反应板、吸头等用消毒液浸泡(至少24小时以上)后清洗或丢弃。
5.所有微生物培养物(细菌、支原体、真菌等培养物),不管标本阳性或阴性均- 1 -用消毒液浸泡后,经煮沸消毒,才能清洗或丢弃。
6.取材、最好采用一次性工具,不能采用一次性工具者,每次取材前均应彻底消毒。
7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。
8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台,不要立即用水冲洗,应先用纸巾、布等敷料加上消毒液(如5%石炭酸、3%来苏儿等)消毒30分钟以上,然后再清洗。
如污染工作服,应立即脱下,高压灭菌。
9.实验时手部污染,应立即用肥皂洗手并冲洗干净,再外用消毒药水,如误入口内,应立即吐出,并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口,必要时根据实际情况服用有关药物。
微生物实验室安全与防护1.在工作区内禁止饮食,吸烟和存放食物及使用化妆品。
2.实验室里应保持整洁,不存放与工作无关的杂物。
3.工作台每天至少用消毒剂清洁一次,在溢渗传染物后要立即消毒、清洗;4.进入无菌室必须穿工作服,戴口罩、帽子。
5.在各种操作进程中均应尽量避免或减少气溶胶产生。
6.实验工作区禁止无关人员出入,尤其要严禁儿童进入。
7.工作人员在处理传染性物质或动物之后,以及在离开实验室时要洗手。
8.凡发生溢漏事故或接触传染性物质后,均应立即报告实验室监督员或实验室主任,并做好书面记录及采取相应措施。
结核杆菌的培养及标本涂片务必在生物安全柜里操作。
9.有涉及感染性材料的操作应在生物安全柜中进行,如结核杆菌培养、感染性组织等。
10.工作人员在进入实验室工作区前,应在专用的更衣室(或缓冲间)穿着背开式工作服或其它防护服。
工作完毕后必须脱下工作服,不得穿工作服离开实验室。
可再次使用的工作服必须先消毒后清洗。
11.工作时必须戴手套(两副为宜)。
一次性手套必须先消毒后丢弃。
12.在实验室中必须配备有效的消毒剂、眼部清洗剂或生理盐水,且易于取用。
可配备应急药品。
临床微生物及实验室的医院感染管理检验科医院感染管理应达到以下要求:1.工作人员必须穿工作服,戴工作帽,必要时穿隔离衣,胶鞋,戴口罩,手套。
2.使用合格的一次性检验用品,用后进行无害化处理。
3.严格执行无菌技术操作规程,静脉采血必须一人一针一管一巾一带;微量采血应做到一人一针一管一片;对每位病人操作前洗手或手消毒。
4.无菌物品如棉签,棉球,纱布等及其容器应在有效期内使用,开启后使用时间不得超过24小时.使用后的废弃物品,应及时进行无害化处理,不得随意丢弃。
5.各种器具应及时消毒,清洗;各种废弃标本应分类处理(焚烧,入污水池,消毒或灭菌)。
6.报告单应消毒后发放。
7.检验人员结束操作后应及时洗手,毛巾专用,每天消毒。
8.保持室内清洁卫生.每天对空气,各种物表及地面进行常规消毒.在进行各种检验时,应避免污染;在进行特殊传染病检验后,应及时进行消毒,遇有场地,工作服或体表污染时应及时处理,防止扩散,并视污染情况向上级报告。
9.菌种、毒种按《传染病防治法》进行管理。
10.实验室的医院感染管理参照检验科的管理要求.实验动物应严格管理,防止逃逸或造成人与实验室动物的交叉感染;实验后的动物必须焚化进行无害化处理。
细菌室操作1.细菌鉴定和药敏试验操作按全国临床检验操作规程。
2.负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。
3.从事细菌专业技术人员,应了解医院监测知识,掌握其检测方法,定期统计分析医院感染细菌分布,耐药变迁,并将其结果反馈临床。
4.细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌知识。
5.细菌专业人员不断更新知识,了解细菌学检验新进展。
6.定期或随时与临床联系,主动参与病例讨论了解病情及治疗情况,达到细菌检验与临床的密切联系。
7.每天发出的微生物报告应认真复审,分析报告、评价报告。
8.工作人员加强有菌观念,无菌操作。
9.当工作环境被细菌污染,必须立即消毒处理,报告主管人员,采取必要措施。
10.工作人员被细菌培养物污染应消毒处理,必要时给予药物治疗,并向主管负责人报告,采取特殊措施。
标本采集及保存要求1总则:用于细菌培养的标本在收集时应注意严格无菌操作和及时送检,检测后标本应妥善保存。
2临床标本的采集:2.1下呼吸道分泌物(痰液):令患者早上起床后用清水濑口,不要刷牙,立即从下部呼吸道咳出第一口痰,吐在无菌塑料痰盒中,及时送检。
2.2尿液(中段尿):护理人员协助采取中段尿约3ml入无菌试管中,及时送检。
2.3粪便:取有粘液、脓血部分的粪便置玻璃大便专用管中,如为稀水便,可直接收集于玻璃管中,及时送检。
2.4眼、耳、鼻、喉拭子:将棉拭子沾取少许无菌生理盐水(如沾取的太多,可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份),然后采取可疑部位的分泌物,倒悬于无菌试管内,及时送检。
2.5脓液:用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液,要尽量多取一些,然后将棉拭置于无菌试管中,及时送检。
2.6血液:2.6.1凡怀疑菌血症和败血病的患者,采血培养时,应尽量在未使用抗菌素前采血,如已使用抗菌素,应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血,应在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
当然在病人发热或寒颤时采集也可。
2.6.2成人每次采血5—10ml,小儿采血2—3m。
2.6.3严格消毒病人采血部位和血培养瓶口,抽一定量血液后,无菌注入血培养瓶内,轻轻摇匀,2.6.4从抽血到接种入瓶,动作要快,防止血液凝固,同时要及时送检。
2.7穿刺液:胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液:严格无菌抽取后, 注入含肝素抗凝的无菌试管中,轻轻颠倒试管10余次,使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的,或直接无菌注入血培养瓶内及时送检。
2.8胆汁:由专科医生以无菌方法取引流液10ml注入无菌试管。
2.9脑脊液:以无菌方法取脑脊液3-5ml,置无菌试管内,常温保存送检, 如只做培养可直接无菌注入血培养瓶内,及时送检。
2.10烧伤标本:以无菌棉拭子直接采取多个部位创面的脓汁分泌物放入无菌试管中.3临床标本的保存:细菌室标本原则上要求及时送检、及时处理,不得保存。
标本拒收标准1.支原体培养、鉴定、计数、药敏操作:若送检标本不是运送培养基送检则为不合格标本。
2.找抗酸杆菌:穿刺液标本如发现严重凝固则拒收。
3.脑脊液培养:如标本为非无菌管采集则拒收。
4.中段尿培养:如标本为非无菌管采集则拒收。
5.下呼吸道标本培养:挑取痰标本直接涂片镜检,WBC<10/LP,上皮细胞>25/LP 不适合做细菌培养。
6.脓液及创伤分泌物培养:如标本为非无菌管采集则拒收。
7.穿刺液培养:如标本为非无菌管采集则拒收。
8.各类培养标本原则上都要求无菌采集并及时送检、及时接种、及时培养,不能保存。
除非特殊情况可置于冰箱保存,对分离怕冷的细菌时,应注意标本的保暖。
无菌间规章制度1.每一个工作人员必须树立无菌观念,严格进行无菌操作。
2.在无菌室内必须戴帽子、口罩,进行无菌操作。
3.每天早上8:00—8:30用紫外线消毒,每月检查一次紫外灯的无菌效果。
4.无菌室内各种废弃物品必须煮沸消毒。
5.实验完毕后,用含氯制剂1000mg/L消毒桌面、地面。
温度失控处理措施1.每天上班记录培养箱、冰箱的温度于温度记录本上,如发现普通培养箱的温度超过37℃(不包括37℃)或低于34℃(不包括34℃);冷藏冰箱的温度超过8℃(不包括8℃)或低于2℃(不包括2℃),应立即追溯其失控的时间和原因。
1.1如失控的原因可以马上纠正(如冰箱断电、冰箱门未关好、温控调节器未正确控制、冰箱严重结霜、温度计损坏等),则由本室人员马上纠正并填写失控报告。
1.2如冰箱、培养箱本身出现机械故障,本室人员应马上通知维修部或维修商,同时根据排除故障时间的长短是否会对其中的物品质量造成影响而采取相应的措施(如把里面的物品转移到能满足需要条件的环境中),并填写失控报告单。
2.培养箱中的培养物应全部拿到工作台,检查培养物的生长情况。
2.1. 如果培养基的菌落生长良好,则按常规程序进行检验。
2.2.如果培养基的菌落生长受抑制,则取标本重新接种,如标本确实无法再次接种,则应与临床医生联系、解释并请医生重新采集标本送检。
2.3.如有细菌生长,则应补做药敏试验。
3.故障处理过程中应及时贴上红色标识,并在温度记录本上用红笔记录失控的温度度数,故障处理后应利用培养箱、冰箱的温度调节器,把温度调回到规定范围的中值,并把专业人员的检查的结果记录在仪器档案袋中。
当温度再次是失控时,再次记录温度的读数,并且上报负责人。
超净工作台1.目的:规范净化工作台操作与维护工作,确保仪器正常运作。
2. 适用范围:本实验方法适用于微生物检验中净化工作台操作与维护管理。
3. 检验人员职责:负责此仪器操作和维护管理4. 操作及维护规程4.1 操作规程4.1.1使用工作台时,应提前50分钟开机,同时开启紫外杀菌灯,处理操作区内表面积累的微生物,30分钟后关闭杀菌灯(此时日光灯即开启),启动风机。