实验九 环境因素对微生物生长发育的影响

实验九环境因素对微生物生长发育的影响
★基本原理
环境因素（包括物理因素、化学因素和生物因素），如温度、渗透压、紫外线、pH、氧气、某些化学药品及拮抗菌等对微生物的生长繁殖、生理生化过程产生影响。

不良的环境条件使微生物的生长受到抑制，甚至导致菌体的死亡。

但是某些微生物产生的芽胞，对恶劣的环境条件有较强的抵抗能力。

我们可以通过控制环境条件，使有害微生物的生长繁殖受到抑制，甚至被杀死；而使有益微生物得到发展。

☆物理因素对微生物生长的影响
★微生物生长的最适温度
不同的微生物生长繁殖所要求的最适温度不同，根据微生物生长的最适温度范围，可分为高温菌、中温菌和低温菌，自然界中绝大部分微生物属中温菌。

(1)取8支装灭过菌的肉膏蛋白胨培养液试管，每管装 5 ml，分别标明20℃,28℃,37℃和45℃四种温度，每种温度2管。

(2)向每管接入培养18--20 h的大肠杆菌菌液0.1 ml, 混匀。

(3)取8支装灭过菌的豆芽汁葡萄糖培养液试管，每管装5 ml，分别标明20℃,28 ℃,37℃和45℃四种温度，每种温度2管。

(4)向每管接入培养18-20 h的酿酒酵母菌液0. 1 ml，混匀。

(5)将上述各管分别按不同温度进行振荡培养24 h观察结果。

根据菌液的混浊度（肉眼观察或测OD值）判断大肠杆菌和酿酒酵母菌生长繁殖的最适温度。

★渗透压对微生物的影响
微生物在等渗溶液中可以正常生长繁殖;在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，因为大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，细胞一般不会裂解，可以正常生长，但在低渗溶液中溶质（包括营养物质）含量低，在某些情况下也会影响微生物的生长。

而不同类型微生物对渗透压变化的适应能力不尽相同。

（大肠杆菌在0.5~3% NaCl条件下生长良好；盐沼盐杆菌在20~30% NaCl条件下生长良好）
（1）大肠杆菌和酿酒酵母菌适温振荡培养18—20h。

（2）以察氏培养基为基础，把其含糖量分别2%、10%、20%、40%配制培养液，每种糖量2管，每管装5ml，灭菌后，各取一管分别接入大肠杆菌菌液0.1ml （或2滴），另各一管分别接入酿酒酵母菌0.1ml（或2滴）（接种大肠杆菌的各管调pH7.0-7.2）。

（3）以肉膏蛋白胨培养基为基础，把其氯化钠含量分别为1%、10%、20%、40%配制培养液，每种NaCl量2管，每管装5ml，灭菌后，各取一管分别接入大肠杆菌菌液0.1ml（或2滴），另各一管分别接入酿酒酵母菌0.1ml（或2滴）（接种酵母菌的各管调pH6.4-6.5）。

（4）将接种大肠杆菌和各管置37℃温箱中培养24 h后观察结果；接种酿酒酵母菌的各管置28℃培养24 h观察结果。

以“一”表示不生长，“＋”表示生长，并以“＋”，“＋＋”“＋＋十”表示不同生长量记录结果。

★不同药物的杀菌试验
(1)取培养18-20 h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各1支，分别加入4 ml无菌水，用接种环将菌苔轻轻刮下、振荡，制成均匀的菌悬液。

(2）取3个无菌培养皿，每试验菌一皿，在皿底写明菌名及测试药品名称（见下图) 。

图圆滤纸片法测药物杀菌作用
1.滤纸片；2．细菌生长区；3．抑菌区
(3)分别用无菌滴管加4滴（或0. 2 ml)菌液于相应的无菌培养皿中。

(4)将融化并冷却至45—50℃的肉膏蛋白胨培养基倾入皿中约15 ml，迅速与菌液混匀，冷凝，制成含菌平板。

(5)用镊子取分别浸泡在土霉素、复方新诺明、新洁尔灭、红汞和结晶紫药品溶液中的圆滤纸片各一张，置于同一含菌平板上。

(6)将平板倒置于37 ℃温箱中，培养24 h后观察结果，测量并记录抑菌圈的直径。

根据其直径的大小，可初步确定测试药品的抑菌效能。

★不同pH对微生物生长的影响
(1）配制肉膏蛋白胨液体培养基，分别调pH至3、5、7、9和11，每种3管，每管盛培养液5 ml，灭菌备用。

(2)取培养18--20 h的大肠杆菌斜面1支，加入无菌水4 ml，制成菌悬液。

(3）每管肉膏蛋白胨液体培养基中接种大肠杆菌液1滴（或0. 1 ml)，摇匀，置37℃温箱中培养。

(4）配制豆芽汁葡萄糖液体培养基，分别调pH至3、5、7、9和11，每种pH 3管，每管盛培养液5 ml，灭菌备用。

(5)按上法制成酿酒酵母菌悬液，每管接种1滴（或0. 1 ml)，摇匀，置28℃温箱中培养。

(6)培养24 h后观察结果，根据菌液的混浊程度判定微生物在不同pH生长情况。