Clonging关于克隆的方法

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从生物体克隆目的基因的方法有哪些?

从生物体克隆目的基因的方法有哪些?

从生物体克隆目的基因的方法有哪些?1.PCR扩增克隆法PCR扩增克隆法是在已知植物基因序列的基础上,进行基因序列克隆的一种方法。

先从基因文库(genebank)中找到有关基因序列,据此合成一对寡聚核苷酸引物,从植物中提取染色体DNA或RNA,进行PCR扩增。

扩增的片段纯化后插入合适的质粒载体上,用酶切分析和序列分析检测重组子,并与已知基因序列比较,以获得目的基因。

2.功能克隆法功能克隆(functionalcloning)是根据性状的基本生化特征,在鉴定已知基因功能后进行克隆。

该法在纯化相应的编码蛋白质后,构建cDNA文库或基因组文库。

然后从文库中用下述两种方法进行基因筛选,其一是将纯化的蛋白质进行氨基酸测序,据此合成寡核苷酸探针,从cDNA文库或基因组文库中筛选编码基因;其二是将编码蛋白质制成相应抗体探针,从cDNA载体表达文库中筛选相应克隆。

实行功能克隆的关键步骤是分离出高纯度蛋白质。

对于产物不明的基因,不能利用这一方法进行克隆。

3.定位(图位)克隆法定位(图位)克隆法(positionalcloning)根据目的基因在染色体上的位置,进而通过染色体步移(chromosomewalking)进行克隆。

需预先建立具有目的基因的适宜遗传分离群体(近等基因系或分离群体),将目的基因精确定位在染色体特定的位置之后,用目的基因两侧紧密连锁的分子标记(RFLP标记)为探针,筛选基因组文库,得到阳性克隆,然后以阳性克隆的末端作为探针,获得含有目标基因的大片段克隆,然后以这些新的DNA为探针,获得更趋近目的基因的DNA片段,不断缩小筛选区域,逐步向目的基因靠近,最终克隆到该基因。

4.转座子标记法转座子(transposon)是可从一个基因位置转移到另一位置的DNA片段,而原来位置的DNA片段(转座子)并未消失,发生转移的只是转座子的拷贝。

基因转座可引起插入突变,使插入位置的基因失活,并诱导产生突变型。

通过标记基因就可以检测出突变基因的位置,进而克隆该突变基因。

分子克隆的基本步骤

分子克隆的基本步骤

分子克隆的基本步骤嘿,各位科学小达人,今天咱们就来聊聊分子克隆的基本步骤,这可是实验室里的“高级魔术”,我保证,听完我的讲解,你也能变成一个“DNA巫师”。

首先,得准备好我们的“魔法材料”,也就是那些瓶瓶罐罐里的“液体宝贝”。

什么“PCR试剂”、“限制酶”、“连接酶”啦,这些都是我们“克隆大业”的必备良药。

第一步,来个“DNA热舞派对”,也就是PCR扩增。

把我们的目标DNA扔进“PCR机器”里,让它跟着高温曲线一起“热舞”,直到它“子孙满堂”,复制出成千上万的DNA副本。

第二步,给DNA来个“精致修剪”,这就是传说中的“酶切反应”。

我们用限制酶这个“分子剪刀”把DNA切成我们想要的形状,这可是个精细活儿,稍微手一抖,就可能变成“DNA碎片”。

接下来,是“DNA联姻”环节,也就是“连接反应”。

我们把修剪好的DNA片段和载体DNA“牵线搭桥”,让它们在连接酶的“见证”下,成为“一家人”。

这就像是在实验室里举办了一场“分子婚礼”。

然后,是“细胞变身”时间,也就是“转化反应”。

我们把连接好的DNA“送入”细菌细胞,让它们变成“DNA搬运工”。

这个过程就像是在细胞界搞了一场“特工行动”。

紧接着,得来个“D NA身份验证”,也就是“筛选转化子”。

我们把这些“可能怀孕”的细胞放在含有抗生素的培养基上,只有那些成功“怀孕”的细胞才能存活下来,这就像是在玩“细胞版”的“谁是卧底”。

最后,我们要进行“DNA产前检查”,也就是“DNA测序”。

通过测序,我们可以确认我们的克隆是否“健康成长”,没有出现“基因突变”这类“家庭悲剧”。

总之,分子克隆这事儿,听起来高大上,其实就是一场实验室里的“魔法表演”。

只要掌握了这些“咒语”和“魔法棒”,你也能在DNA的世界里,玩转“克隆大法”。

别忘了,每个科学家心里都住着一个小巫师,分子克隆,只是我们施展魔法的一部分!。

克隆是怎么克隆的

克隆是怎么克隆的

克隆是怎么克隆的
克隆技术的原理是无性繁殖。

克隆的基本过程是先将含有遗传物质的供体细胞的核
移植到去除了细胞核的卵细胞中,利用微电流刺激等使两者融合为一体,然后促使这一新细
胞分裂繁殖发育成胚胎。

当胚胎发育到一定程度后,再被植入动物子宫中使动物怀孕,便可产下与提供细胞者
基因相同的动物。

这一过程中如果对供体细胞进行基因改造,那么无性繁殖的动物后代基
因就会发生相同的变化。

“克隆”的含义已不仅仅就是“无性繁殖”,凡是源自同一个祖先,无性繁殖出来的
一群个体,也叫做“克隆”。

这种源自同一个祖先的无性繁殖的后代群体也叫做“无性繁
殖系则”,缩写无性系。

直观谈就是一种人工诱导的无性繁殖方式,但克隆与无性繁殖就
是相同的。

克隆技术现已被人们用来通过营养方式繁殖病毒等微生物和植物的纯种,从而保证了
这些生物基因组的准确连续性。

现在,克隆这个词还包括单个自主遗传因子的分离与保存。

细胞生物的克隆只须要营养培养基,而基因的克隆则须要某种载体复制子、特定的宿
主细胞和营养培养基。

各种类型生物的克隆技术在生物工程中均存有其关键促进作用。

克隆的相关知识-推荐下载

克隆的相关知识-推荐下载

克隆的相关知识克隆是英文"clone"或"cloning"的音译,而英文"clone"则起源于希腊文"Klone",原意是指以幼苗或嫩枝插条,以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物,如扦插和嫁接。

在大陆译为“无性繁殖”在台湾与港澳一般意译为复制或转殖或群殖。

中文也有更加确切的词表达克隆,“无性繁殖”、“无性系化”以及“纯系化”。

克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖,以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。

通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个1963年J.B.S.Haldane在题为“人类种族在未来二万年的生物可能性”的演讲上采用“克隆(Clone)”的术语。

科学家把人工遗传操克隆羊技术流程示意图作动物繁殖的过程叫“克隆”,这门生物技术叫“克隆技术”,其本身的含义是无性繁殖(中国大陆的翻译),即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系,该细胞系中每个细胞的基因彼此相同。

克隆也可以理解为复制、拷贝和翻倍(港澳台的意译),就是从原型中产生出同样的复制品,它的外表及遗传基因与原型完全相同,但大多行为思想不同。

时至今日,“克隆”的含义已不仅仅是“无性繁殖”,凡是来自同一个祖先,无性繁殖出的一群个体,也叫“克隆”。

这种来自同一个祖先的无性繁殖的后代群体也叫“无性繁殖系”,简称无性系。

简单讲就是一种人工诱导的无性繁殖方式。

但克隆与无性繁殖是不同的。

克隆是指人工操作动物繁殖的过程,无性繁殖是指:不经过两性生殖细胞的结合由母体直接产生新个体的生殖方式,常见的有孢子生殖、被子生殖出芽生殖和分裂生殖。

由植物的根、茎、叶等经过压条、扦插或嫁接等方式产生新个体也叫无克隆驴性繁殖。

绵羊、猴子和牛等动物没有人工操作是不能进行无性繁殖的。

——因此,高中一些练习题里将扦插排除在“克隆”之外。

另外,花药离体培养成单倍体,不受精的卵细胞孤雌发育成个体如雄蜂雄蚁,叫做单性繁殖,严格来说也不算克隆。

一步一步告诉你克隆是怎样做成的(冷泉港经典动画中文版)

一步一步告诉你克隆是怎样做成的(冷泉港经典动画中文版)

一步一步告诉你克隆是怎样做成的(冷泉港经典动画中文版)什么是克隆?很简单,克隆是指具有完全相同遗传信息的(几个)个体。

换言之,它(他/她)们的DNA 碱基序列是完全相同的。

在多利羊出生之前,克隆早已在自然界和实验室被发现。

当一对夫妇有两个一模一样的双胞胎(或者三个一模一样的三胞胎,等)这些孩子各自都是另一个的克隆。

切下一片叶子可以产生一株克隆植株1996年之前,人们认为克隆整个动物只能通过胚胎(干)细胞——胚胎早期发育过程中存在的细胞来实现。

在20世纪50年代,科学家用青蛙的胚胎细胞培养出整个青蛙个体。

通过几次细胞分裂,胚胎(干)细胞开始变化为个体所需要的不同类型的细胞,包括肌肉细胞,血液细胞,肝细胞,等等。

这个过程叫做“分化”。

尽管这些(分化后)的细胞仍然有相同的遗传信息,每个细胞只能表达它特定功能相关的基因。

在Roslin研究所做多利羊实验之前,人们认为一旦细胞分化了,它们就不能产生整个个体。

比如,对于羊来说,乳腺细胞可以(培养)产生其他的乳腺细胞,但不能产生整个个体。

(注意此处动物与植物不同,植物每个细胞都能形成一个个体,称为“植物细胞的全能性”)Roslin研究所的科学家解决了这个问题。

他们把羊的乳腺细胞在饥饿环境下培养,这样就将细胞的状态调节为类似胚胎细胞的状态,称作G0期。

从另外一头羊中获取一个卵细胞。

把卵细胞的细胞核(包含遗传信息)用非常细的针头吸出。

随后用电击的方法将饥饿的乳腺细胞与无核的卵细胞融合。

共产生了277个融合细胞。

尽管卵细胞来自黑脸的羊,但带有遗传信息的细胞核却来自白脸的羊。

这些融合的卵细胞随后注射入几个不同的代孕羊子宫。

这些代孕羊同样是黑脸的。

在277个融合细胞中,最后只有一个发育为成体的羊,那就是多利。

多利生于1996年7月5日。

科学家发现多利羊是白脸的,说明它含有与乳腺细胞供体羊相同的DNA。

她是那些乳腺细胞的克隆。

多利随后用自然生产的方式产下小羊Bonnie。

克隆技术原理及其应用

克隆技术原理及其应用

克隆技术原理及其应用克隆技术,简称为克隆,是一种生物技术,旨在复制出完全一模一样的生物体或组织。

这种技术应用广泛,它不仅可以用来复制植物和动物的基因,还可以用来扩大种群数量、繁殖珍贵稀有物种,甚至用来治疗疾病。

本文将展开介绍克隆技术原理和其应用方式。

一、克隆技术原理克隆技术分为两种方法:一是生殖细胞核移植法,这种方法通俗理解即为“克隆”,而是同源染色体转移法。

1. 生殖细胞核移植法生殖细胞核移植法是现实中普遍运用的一种技术。

简单的讲,生殖细胞核移植法主要分三个步骤:第一步: 先从体细胞中获取细胞核。

第二步: 从一只已经发育成熟的生殖细胞(即卵细胞)中除去自身的细胞核,再将已经获取到的细胞核植入其中。

第三步: 将重组好的卵细胞植入一只“代孕母牛”体内,让其发育变成一只成熟的生殖体,从而完成了克隆的过程。

2. 同源染色体转移法同源染色体转移法通常运用在细菌基因工程等领域。

这种方法主要是将自由状态的脱氧核糖核酸(DNA)插入到宿主的染色体上,从而实现了新的表达。

同时,这种方法也一定程度上旨在和探究細胞自身的基因调查。

二、克隆技术的应用克隆技术作为一种新兴技术,应用的范围非常广阔,以下是一些克隆技术的应用场景:1. 种群扩大方式珍稀物种的保护已经成为当代社会关注的热点。

例如,在繁殖熊猫方面,现在应用比较普遍的就是克隆技术。

利用动物体细胞核移植完成动物体的克隆,可扩大珍稀物种的数量。

2. 农业领域在农业领域中,应用的场景也是非常丰富多彩的,比如克隆技术可以帮助种植业提高商品作物和食物的产量。

克隆技术还可以改良牛、猪、鸡等经济动物,进一步提高农业产品的质量和生产效率。

3. 神经退行性疾病治疗克隆技术的应用还可以解决许多人类疾病的预防和治疗,如心脏病、糖尿病、神经退行性疾病等更为严重的疾病。

一些实验结果显示,利用病人自己的细胞进行进行植入操作,可以显著地改善这些疾病。

4. 基因工程克隆技术还可以在基因工程领域裡作出贡献。

clone()方法

clone()方法

clone()方法在使用clone之前看一下=复制一个类是咋样的。

Address address=new Address("中国","浙江","杭州");Person p=new Person("张三",24,address);Person p2=p;即用=复制一个类之后,会产生一个新的对象,然后二者都指向,堆内存中的对象,且通过任意一个引用修改对象,二者都会发生变化,因为都是指向同一个对象。

接下来看clone记住要对clone进行重写,重写规则为:实现接口class Person implements Cloneableclone 源代码重写规则:浅克隆上述中可以克隆出一个新的对象p1,修改p1,p的实例变量不会发生改变,即name 和age,但是Address这种引用数据类型的数据变量会一起发生改变,这就是说明克隆失败了,修改的是同一个address,这称为浅克隆,如果想在修改克隆类的同时,不修改原类的address,那么需要深克隆。

即浅克隆,是在堆内存生成了一个新的对象Person,(这时候有两个Person对象)但是!引用数据类型class的对象Address,他们是共用一个,所以,通过引用修改其中任何一个,另外一个引用指向的Address对象也会变。

深克隆class Address implements Cloneable重写再在person 类的重写clone方法中加一句p.address=address.clone(;所以潜克隆和深克隆针对引用数据类型,如果有引用数据类型,那么要在引用数据类型中重写clone,才可以实现,修改克隆的,原类不受影响,否则引用数据类型的类数据将受牵连。

ligation independent cloning-分子克隆技术

ligation independent cloning-分子克隆技术
优点:依赖连接酶的克隆方法简单 高效,是克隆单个基因的常用的方 法。
不足:一方面,插入片段要经过限 制性内切酶处理,这样在实验设计 时就要考虑目的基因的DNA序列, 不能实现多基因的平行操作,不适 合高通量;另一方面,该过程使用 连接酶,不但延长了实验的周期, 而且也会带来载体自连背景,增加 了筛选工作量。
GCCGCCCTGCAGGACTCGAGTTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAAATCTT
TEV酶切位点:ENLYFQ^S
TGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCT CTCACCATCACCATCACCATGAAAACCTGTACTTCCAATCCAATATTGGAAGTGGATAACGGATCCGCGATCG
双酶切
PCR 双酶切
连接
2
整理课件
ligation-independent cloning
在很多情况下,重组DNA技术的应用都会受到 基因序列中原有的酶切位点的限制,尤其是多基 因片段的重组往往更容易受到限制酶酶切位点序 列的限制,研究者不得不使用一些非常稀有的酶 切位点或者采用其它的DNA重组方法,大大增 加了DNA重组的工作量和难度。因此,开发一 种不受序列限制而且需要准确重组的新方法就显 得十分重要。
8 【参考】NusA技术:显著增强大肠杆菌表达可溶、活性蛋白:/experiment/430/465/469/25129.htm
整理课件
2BT
>2BT Ecoli T7 ColE1-ori LICv1 transfer His6-tev-yORF AMP (全长4876bp)
TCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACG CGAGAACGGGTGCGCATAGAAATTGCATCAACGCATATAGCGCTAGCAGCACGCCATAGTGACTGGCGATGC

克隆简单理解

克隆简单理解

克隆简单理解1 什么是克隆?克隆(Cloning)即复制,是指将一个细胞或多个细胞复制制成相同的个体,它是现代生物技术的一个必要技术手段。

目前实际上使用的大多是分子克隆技术,即使用基因重组技术在体外大量复制出哪一个基因。

这种技术已经广泛应用于基因工程、医学、农业等领域。

另外,最早产生的克隆动物是1966年诞生的多莉,也就是公元1997年由苏格兰爱丁堡罗斯林研究所的伊恩·威尔穆特博士克隆出来的那只羊。

2 克隆的原理克隆技术在分子生物学的研究中应用广泛,其基本原理是:将想要复制的dna序列扩增、插入到载体上,然后通过酶切和连接等步骤使得该片段能够被重复制。

该技术主要包含以下几个步骤:1. 提取目标dna:从目标生物的细胞中提取所需的dna片段。

2. 扩增dna片段:将所提取的dna片段扩增到目标长度。

这里主要使用PCR法、ligation法等等。

3. 将扩增的dna片段与载体连接:用限制性内切酶将扩增的dna 片段与载体上对应的酶切位点合成后,进行接头作用。

4. 将连接后的 dna 插入到宿主细胞中:将目标矢量转化到适合的宿主细胞中,宿主细胞可是细菌、霉菌、哺乳动物细胞等。

3 克隆的应用克隆技术的应用范围非常广泛,包括基因工程的分子克隆、细胞、组织和器官的克隆,以及克隆动物等。

克隆技术的应用,可以帮助解决环境污染、新药开发、生物界研究等许多问题。

例如,利用克隆技术进行基因工程,在植物中增加抗虫、抗旱、抗病的基因,可以增加作物产量、改良作物品质等,而最近非常火爆的基因编辑,类似克隆技术一样,但是更加高效、准确,可以帮助我们解决到更为严重的疾病,如恶性肿瘤、先天性疾病等等。

同时,利用克隆技术可以研究动物基因功能,增加对疾病的理解并做好相关研究,制备特定药物,为人类的医学研究、生物研究和农业等领域提供重要的技术支持。

4 克隆技术的争议克隆技术的应用也引起了许多争议,例如克隆动物是否具有人性、幸存率如何等等。

编程克隆知识点总结高中

编程克隆知识点总结高中

编程克隆知识点总结高中一、克隆的定义在进行编程克隆知识点总结前,首先需要了解什么是克隆。

在编程领域中,克隆是指从一个已存在的对象或实例中创建一个新的副本。

这个副本与原对象具有相同的数据和结构,但是在内存中具有独立的地址。

克隆在编程中经常用于创建新的对象,或者在处理对象副本时避免对原对象产生副作用。

二、克隆的分类在编程中,根据克隆的范围和目的,可以将克隆分为浅克隆和深克隆两种类型。

具体定义如下:1. 浅克隆:浅克隆是指将对象的基本数据类型成员变量进行复制,而对于引用类型成员变量则只是进行引用复制,即指向同一个对象。

这意味着对于引用类型成员变量所指向的对象的修改会影响克隆后的对象。

浅克隆在Java中可以使用Object类的clone方法实现。

2. 深克隆:深克隆是指将对象的基本数据类型成员变量进行复制,对于引用类型成员变量则创建新的对象并进行复制,从而使得克隆对象与原对象完全独立。

深克隆需要程序员通过编程自行实现,通常需要重写clone方法或使用序列化和反序列化等技术来实现。

在具体的编程实践中,根据需求和对象结构的复杂程度,可以选择使用浅克隆或深克隆。

三、实现克隆的方式1. 使用clone方法:在Java中,所有类都继承自Object类,而Object类提供了一个protected的clone方法,可以用于创建对象的浅克隆。

如果一个类需要支持克隆,则需要实现Cloneable接口,并重写clone方法来实现对象的克隆。

示例代码:```javapublic class Person implements Cloneable {private String name;private int age;public Person(String name, int age) { = name;this.age = age;}@Overrideprotected Object clone() throws CloneNotSupportedException {return super.clone();}}```2. 使用序列化和反序列化:对于对象进行深克隆,一种常用的方式是通过序列化和反序列化来实现。

C#关于Clone()方法的介绍

C#关于Clone()方法的介绍

C#关于Clone()⽅法的介绍前⾔:⽇常啪啪啪代码的时候,常常遇到浅复制与深复制的问题,下⾯就⾃⼰经验写写Clone()有时候在项⽬中需要得到⼀个对象在某个状态下的副本,为了避免重新创建⼀个对象再⼀⼀赋值,便可以使⽤克隆来处理,克隆分为浅拷贝和深拷贝。

浅拷贝浅拷贝⾃带⽅法MemberwiseClone() 对于值类型和String类型成员,浅拷贝会在副本中重新创建成员;对于引⽤类型,对象和副本对象引⽤同⼀个内存地址,当在对象或者副本对象修改引⽤成员后,引⽤类型的成员就发⽣变化。

class Program{static void Main(string[] args){Person p = new Person() { Age=12, Name="张三" };Person p2 = (Person)p.Clone(); = "李四";Console.WriteLine("="+ );Console.WriteLine("=" + );Console.ReadKey();}}public class Person:System.ICloneable{public string Name { get; set; }public int Age { get; set; }public object Clone(){return this.MemberwiseClone();}}输出结果:深拷贝深拷贝不管是值类型还是引⽤类型,对象和副本对象修改成员属性都只会改变各⾃对象的值,两个对象是完全独⽴的实体。

1. 第⼀种实现⽅式class People{public int _age;public string _name;public People(int Age,string Name){_age = Age; _name = Name;}public object Clone(){People MySelf = new People(this._age,this._name);return MySelf; }}2. 第⼆种实现⽅式class Program{static void Main(string[] args){Person p = new Person() {Age=12,Name="张三" ,Address = new Address(){Provice = "上海",City = "上海市"}};//浅拷贝Person p2 = (Person)p.Clone();p2 .UserName = "浅拷贝⽤户名";p2 .Address.Provice = "浅拷贝上海";//通过序列化、反序列化实现深拷贝Person p3= JsonConvert.DesperializeObject<Person>(JsonConvert.SerializeObject(p)); erName = "深拷贝⽤户名";p3.Address.Provice = "深拷贝上海";}}public class Address{public string Provice { get; set; }public string City { get; set; }}public class Person:System.ICloneable{public string Name { get; set; }public int Age { get; set; }public object Clone(){return this.MemberwiseClone();}}。

Clonging关于克隆的方法

Clonging关于克隆的方法

基因克隆方法(1) 目的基因片断扩增1.引物设计利用DNAMAN等软件设计合适的引物, 并根据目的基因内切酶位点分析结果,分别在正、反向引物的5’端加上相应酶切位点,并分别加上内切酶保护碱基。

2.按照如下体系进行PCR扩增,测试引物ddH2O 16.0 ul10×PCR buffer (with 15 uM Mg2+) 2.0 uldNTP (10mM) 0.4 ulprimer (F/R;10uM) 0.4 ulTemplate DNA (100ng/ul) 1.0 ulTaq (5U/ul) 0.2 ul94℃5min94℃30sTm-2℃30s 35-40 cycles72℃1min/k72℃10min扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。

3. 按照如下体系高保真扩增启动子DNA50ul体系:ddH2O 33.5 ulKOD-plus 10×PCR buffer 5.0 ulMgSO4 (25mM) 2.0 uldNTP (2mM) 5.0 ulprimer (F/R;10uM) 1.5 ulTemplate DNA 2.0 ulKOD-plus (1U/ul) 1.0 ul94℃5min94℃30sTm-5℃30s 35-40 cycles68℃1min/k68℃10min扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。

(2)目的基因片断回收(离心柱型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒)1.配制1%琼脂糖凝胶,然后将PCR产物全部点入胶孔,进行琼脂糖凝胶电泳。

2.在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面液体。

3.用电子天平称量凝胶的重量,以1 mg=100ul换算凝胶体积。

4.加入3倍胶体积溶胶液,50℃水浴放置10分钟,其间不断上下翻转(温和的)至胶完全溶解,放置至室温。

5.将已经溶解的溶液加至吸附柱,并将吸附柱放入收集管中,8000rpm离心30s;将收集管中的液体重复加至吸附柱,8000rpm离心30s,将收集管中的废液倒掉。

克隆技术的原理及其在生物研究中的应用

克隆技术的原理及其在生物研究中的应用

克隆技术的原理及其在生物研究中的应用自人类开始研究生物,就一直希望能够对生物进行鉴定、分类、繁殖等操作。

克隆技术的出现给了生物学家一个实现这个愿望的机会。

通过克隆技术,可以将具有某种生物特征或者功能的细胞或基因,繁殖成大量的相同细胞或基因,从而大大降低了生物研究的成本和难度。

本文将详细讲解克隆技术的原理及其在生物研究中的应用。

一、克隆技术的概述克隆( cloning)指的是在无性繁殖过程中,某个个体的后代与它基本相同,包括遗传物质和体型特征。

而在基因工程领域中,克隆则是指在细胞水平上复制基因或某个细胞。

那么,在生物学上,克隆是如何实现的呢?二、克隆技术的原理克隆技术原理主要包括体细胞核转移克隆、基因克隆和细胞克隆三种:1. 体细胞核转移克隆体细胞核转移克隆是指,将个体的某个基础细胞(通常是卵细胞)的细胞核除去,再将该个体的另一个基础细胞的细胞核,植入到先前除去了细胞核的卵细胞内。

通过电击或者其他手段,使新的细胞成长和分裂达到形成新个体的目的。

这种克隆方式通常被用于动物繁殖或者生物体的复制等方面。

2. 基因克隆基因克隆是指,利用回收、扩增、定向重组等各种技术手段,将有特定功能的基因从一个群体的细胞中提取出来,再注入另一个群体的细胞中,使得这一”新”基因在新的表达环境下发挥出相应的功能。

这种克隆方式通常被应用于生物药物的研制和生物学原理研究等方面。

3. 细胞克隆细胞克隆是指,将一只动物个体的单个细胞分离成单个细胞,并通过细胞分离和培养方法,繁殖出大量相同的细胞,从而达到研究生物特征和性质的目的。

这种克隆方式通常被应用于医学诊断和治疗等方面。

三、克隆技术在生物研究中的应用克隆技术在生物学领域中的应用就非常重要了。

下面是它在生物研究中的具体应用:1. 研究生物学基本规律克隆技术可以用来复制出许多相同的细胞,从而研究生物在不同条件和环境下的基本性质、生长特征和生产力等。

此外,通过克隆基因,可以在不影响个体标准发育的基础上,对某些生物所具有的功能进行研究,寻找相应生物规律的证据。

编程克隆知识点总结

编程克隆知识点总结

编程克隆知识点总结在本文中,我们将对编程克隆进行详细的知识点总结,包括编程克隆的定义、类型、检测方法、管理原则和未来趋势等方面,以帮助读者更全面地了解和掌握编程克隆相关知识。

一、编程克隆的定义编程克隆是指在软件开发过程中,通过复制和粘贴已有的一段代码来创建新的代码。

克隆代码通常包括两种形式:完全克隆(Exact Clones)和改变克隆(Changed Clones)。

完全克隆是指完全一样的代码片段,而改变克隆是指在完全克隆的基础上进行了一定的修改。

二、编程克隆的类型1. 语法克隆(Syntactic Clones):语法克隆是指在语法上完全一样的代码片段,但语义可能并不相同。

这种克隆类型通常出现在复制粘贴代码的情况下,往往是由于开发人员快速复制粘贴导致的。

2. 语义克隆(Semantic Clones):语义克隆是指在语义上相似但在语法上并不相同的代码片段。

这种克隆类型通常出现在复制粘贴后对代码进行一定程度的修改后的情况。

三、编程克隆的检测方法检测编程克隆是软件工程研究的重要问题,通常有以下几种方法:1. 基于文本比对的方法:该方法通过文本比对算法(如编辑距离算法、特征向量算法等)来比对代码文件,从而识别出相似的代码片段。

2. 基于语法树的方法:该方法将代码片段转换成语法树表示,然后通过比对语法树的方法来检测克隆代码。

3. 基于标记的方法:该方法通过给代码片段打上标记(如哈希值、标签等)来表示其特征,并通过比对标记的方式来检测克隆代码。

4. 基于度量的方法:该方法通过一些代码度量指标(如代码长度、分支数、循环数等)来度量代码片段的相似性,从而检测克隆代码。

以上四种方法各有优缺点,应根据实际情况选择合适的方法来进行编程克隆的检测。

四、编程克隆的管理原则1. 避免盲目克隆:开发人员在编程过程中应避免盲目克隆他人代码,应该根据实际需求进行合理的抽象和封装,提高代码的可复用性。

2. 使用克隆检测工具:开发团队可以使用一些克隆检测工具来帮助识别潜在的克隆代码,从而及时采取措施进行管理和优化。

cloning(基因重组克隆技术)

cloning(基因重组克隆技术)

Sections
Section A Section B Section C
Legal and Moral Implications of
Cloning Who Will Take Advantage of Human
Cloning? Twins Years Apart
Section A
Legal and Moral Implications of
Comprehension of the Text (3)
3. According to the author, why are twins more alike than clones?
Because clones are only physically identical while twins share the same environment within the mother and are usually raised in the same family.
Comprehension of the Text (1)
1. How did the world react to the first successfully cloned sheep?
The world was amazed by the news at first, then worried about and puzzled over a long list of wild possibilities.
Group Discussions (1)
1. As far as you know, what are the advantages and disadvantages that cloning brings to us?

神奇的克隆课文

神奇的克隆课文

神奇的克隆课文引言克隆(Cloning)是一项引人入胜且备受争议的科技,它给人们的生活带来了巨大的改变。

克隆技术的发展突破了自然的限制,使得人类可以复制出与原始个体完全相同的个体。

神奇的克隆课文将带领我们一起了解克隆技术的定义、原理和应用。

克隆的定义克隆是指通过无性生殖方式生成一个与原始个体完全相同的生物体。

这种复制过程不需要受精过程,也不需要两个细胞的合并。

因此,克隆个体不会产生遗传上的变异,具有与其原始个体完全相同的基因组。

克隆的原理克隆技术主要有两种方式,即胚胎克隆和体细胞核转移克隆。

胚胎克隆胚胎克隆是指在体外培养过程中,通过细胞分裂的方式实现个体的复制。

这种克隆方式通常使用体外受精的方法,将一个体细胞和一个卵细胞结合,形成受精卵。

随后,这个受精卵会继续进行细胞分裂,最终形成一个与原始个体完全相同的胚胎。

体细胞核转移克隆体细胞核转移克隆是指将一个体细胞的细胞核移植到一个没有细胞核的卵细胞内,进而重建一个与原始个体完全相同的个体。

这种克隆方式主要用于繁殖已经死亡的动物或者保存即将灭绝的物种。

克隆的应用克隆技术在农业、医学和科学研究等领域都有广泛的应用。

•农业方面,克隆技术可以用于繁殖具有优良性状的农作物和家畜,提高农作物和家畜的产量和品质。

此外,通过克隆技术还可以复制出抗病虫害的植物和耐寒性强的农作物。

•医学方面,克隆技术可以用于人体组织和器官的生产。

通过克隆技术,科学家可以复制出与患者完全匹配的组织和器官,从而为患者提供更精准的治疗措施。

•科学研究方面,克隆技术为科学家提供了探究人类生命周期和细胞发育过程的机会。

通过克隆技术,科学家可以复制出大量相同的细胞,以便进行研究。

克隆的争议尽管克隆技术带来了许多潜在的好处,但也面临着伦理和道德方面的争议。

以下是一些常见的争议点:1.人类克隆:人类克隆引发了许多伦理和道德问题。

一些人担心克隆技术可能导致人类被“复制”出来,违背了人类独特性和尊严的原则。

clone 方法原理

clone 方法原理

clone 方法原理
clone方法是Java中的一个重要方法,用于创建一个对象的副本。

在使用clone方法时,需要保证被复制的对象实现了Cloneable 接口。

具体来讲,clone方法首先会创建一个新的对象,然后将被复制对象的所有非静态字段复制给新对象。

如果被复制对象的字段是基本数据类型,那么它们会被直接复制;如果是引用类型,那么复制的是引用指向的对象,而不是对象本身。

在默认情况下,clone方法是浅拷贝,即复制的是对象的引用而不是对象本身。

如果需要实现深拷贝,需要在clone方法中手动实现。

需要注意的是,clone方法是一个受保护的方法,只能被同一包中的类或子类所调用。

在使用时需要小心,避免出现意外错误。

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编程克隆知识点总结

编程克隆知识点总结

编程克隆知识点总结1. 什么是编程克隆编程克隆是指在软件开发过程中,通过复制和粘贴现有的代码片段来实现代码的重用和扩展。

克隆代码可以是来自同一个代码库的其他模块或类,也可以是其他项目或开源代码中的片段。

2. 编程克隆的优点2.1 提高开发效率通过编程克隆,开发人员可以重用已经存在的代码片段,无需从头开始编写相似的代码。

这样可以节省大量的时间和精力,提高开发效率。

2.2 减少错误率克隆代码已经经过测试和验证,因此可以认为是可靠的代码。

使用已经存在的克隆代码片段可以减少错误的可能性,提高代码的质量。

2.3 便于维护和更新如果多个模块或项目使用相同的克隆代码片段,当需要对这些代码进行更新或修复时,只需要修改一处即可,而不需要逐个查找和修改每一个使用该代码片段的地方。

这样可大大简化维护工作。

3. 编程克隆的风险3.1 代码冗余克隆代码的存在可能导致代码冗余。

当需要对克隆代码片段进行修改时,需要对每一个使用该片段的地方进行修改,这增加了维护的难度。

3.2 代码一致性如果多个模块或项目使用相同的克隆代码片段,当需要对该片段进行更新或修复时,如果不同模块或项目的更新不同步,可能会导致代码一致性的问题,增加了维护的复杂性。

3.3 代码可理解性克隆代码片段可能存在于不同的上下文中,不同的命名规范和编码风格。

这可能导致代码可理解性的问题,使得代码更加难以阅读和理解。

4. 如何使用编程克隆4.1 识别和管理克隆代码在使用编程克隆时,开发人员应该注意识别和管理克隆代码。

可以使用专门的代码分析工具来检测和管理克隆代码,如代码重复率检测工具。

4.2 重构和抽象克隆代码当发现克隆代码时,可以考虑对其进行重构和抽象。

通过抽象克隆代码的共性,可以减少代码冗余,提高代码的可维护性和可读性。

4.3 细粒度的重用在使用克隆代码时,应尽量使用细粒度的克隆代码片段,而不是整个模块或类。

这样可以降低代码冗余的风险,并使得代码更具可维护性。

5. 编程克隆的未来发展随着软件开发的不断发展和演进,编程克隆的研究也在不断进步。

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LMC Protocol for Gene CloningBy Caonan 2009.3.14(1) 目的基因片断扩增1.引物设计利用DNAMAN等软件设计合适的引物, 并根据目的基因内切酶位点分析结果,分别在正、反向引物的5’端加上相应酶切位点,并分别加上内切酶保护碱基。

2.按照如下体系进行PCR扩增,测试引物ddH2O 16.0 ul10×PCR buffer (with 15 uM Mg2+) 2.0 uldNTP (10mM) 0.4 ulprimer (F/R;10uM) 0.4 ulTemplate DNA (100ng/ul) 1.0 ulTaq (5U/ul) 0.2 ul94℃5min94℃30sTm-2℃30s 35-40 cycles72℃1min/k72℃10min扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。

3. 按照如下体系高保真扩增启动子DNA50ul体系:ddH2O 33.5 ulKOD-plus 10×PCR buffer 5.0 ulMgSO4 (25mM) 2.0 uldNTP (2mM) 5.0 ulprimer (F/R;10uM) 1.5 ulTemplate DNA 2.0 ulKOD-plus (1U/ul) 1.0 ul94℃5min94℃30sTm-5℃30s 35-40 cycles68℃1min/k68℃10min扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。

(2)目的基因片断回收(离心柱型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒)1.配制1%琼脂糖凝胶,然后将PCR产物全部点入胶孔,进行琼脂糖凝胶电泳。

2.在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面液体。

3.用电子天平称量凝胶的重量,以1 mg=100ul换算凝胶体积。

4.加入3倍胶体积溶胶液,50℃水浴放置10分钟,其间不断上下翻转(温和的)至胶完全溶解,放置至室温。

5.将已经溶解的溶液加至吸附柱,并将吸附柱放入收集管中,8000rpm离心30s;将收集管中的液体重复加至吸附柱,8000rpm离心30s,将收集管中的废液倒掉。

6.向吸附柱中加入700ul漂洗液(确认已加入乙醇),12000rpm离心30s,将收集管中的废液倒掉。

向吸附柱中加入500ul漂洗液重复操作一次。

7.13000rpm 离心2min ,尽量去除漂洗液,在37 ℃培养箱中晾5分钟。

8.吸附柱放入一个干净的离心管,加入30ul65~ 70℃预热的ddH2O,室温下静置2min,13000rpm离心1min。

将离心得到的溶液加入吸附柱中重复操作一次。

9.1%琼脂糖凝胶电泳检测并根据marker的上样量估计回收产物的浓度。

(3)目的片断连入pGEM-T easy 载体(或直接进入(4)酶切)①PCR扩增产物末端加腺嘌呤核苷酸(A)1.取用KOD-plus聚合酶扩增的PCR产物1ul,加至10ul Taq PCR 体系。

2.70℃温育15到30分钟②PCR产物连接入pGEM-T easy载体连接体系2×Rapid Ligation buffer 5ulV ector (50ng/ul) 1ulPCR product XulT4 DNA Ligase (3weiss units/ul) 1ulX的值为:载体质量(ng)×插入片断大小(Kb)×[ 插入片断:载体的摩尔比(3:1)]载体的大小(Kb)最后补水至10ul同时设立对照组:2×Rapid Ligation buffer 5ulV ector (50ng/ul) 1ulControl insert DNA (4ng/ul) 2 ulT4 DNA Ligase (3weiss units/ul) 1 ulddH2O 1ul(4)对载体和回收得到的目的基因片断进行酶切1. 在Fermentas网站上(/doubledigest/index.html)确认所用内切酶双切体系。

一般酶用量为10U/ug;酶的体积不能超过酶切体系的十分之一;体积允许的情况下用30ul 酶切体系。

以下以E co RⅠ- V spⅠ双切为例。

2. 载体酶切体系ddH2O 13.0 ul10×tango buffer 4.0 ulV ector(1ug/ul) 1.0 ulE co RⅠ(10U/ul) 1.0 ulV spⅠ(10U/ul) 1 .0ul同时设立两个对照:ddH2O 14.0 ul10×tango buffer 4 .0ulV ector (1ug/ul) 1.0 ulE co RⅠ(10U/ul) 1.0 ulV spⅠ(10U/ul) ---ddH2O 14.0 ul10×tango buffer 4.0 ulV ector (1ug/ul) 1 .0ulE co RⅠ(10U/ul) ---V spⅠ(10U/ul) ---370C酶切3个小时;1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。

3.目的基因片断酶切体系:ddH2O 8 .0ul10×tango buffer 10.0 ulhCN promoter (25ng/ul) 30.0 ulE co RⅠ(10U/ul) 1.0 ulV spⅠ(10U/ul) 1.0 ul370C酶切2个小时;1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。

4.载体和目的基因片断回收1.方法如上述。

2.回收电泳是对insert和vector进行定量,确定其相对质量比例。

根据相对分子量换算为两者摩尔比。

(5)回收产物酶切进行连接反应连接反应体系:10× ligase reaction buffer 2ul (室温溶至无沉淀)V ector 3ulInsert 14ulT4 ligase 1ulddH2O ---同时设立自连对照:10× ligase reaction buffer 2ul (室温溶至无沉淀)V ector 3ulT4 ligase 1ulddH2O 14ul23℃连接1小时,或16℃连接过夜。

注:对于大小在500bp -1500bp的片段,可以不定量按照上述标准体系连接。

连接体系总的DNA量在50-250ng。

(6)连接产物转化感受态大肠杆菌(E.coli)1.从-70℃冰箱中取出感受态E.coli(100ul一管),立即放入冰中。

2.5分钟之后感受态E.coli开始溶化时分装为50ul/tube,加入连接产物10ul,冰上放置20min。

3.42℃水浴60-90s;之后冰上放置2分钟(这一步注意动作尽量轻)。

4.加入新鲜的无选择性LB培养基450ul,37℃水浴60分钟。

5.4000rpm离心5min,留100ul上清5.取Kan/Amp抗性LB平板,加入100ul转化后的感受态大肠杆菌(E.coli)涂板,37℃培养箱培养14-16小时。

6.第二天观察结果,从转化的细菌平板中挑取中等大小,饱满而且没有和其他克隆相接触的单克隆,接种到3ml 卡那霉素选择性LB培养基中。

置于37ºC恒温摇床培养14~16个小时。

准备质粒的小量抽提。

(7)阳性克隆鉴定①菌落PCR法1.配Taq PCR体系母液,按每个平板挑8管,20ul/管计算。

2.取一PCR排管,每孔加入ddH2O 10ul,做好相应编号;另外准备相应抗性的干净平板一块,做好编号标记。

3.用小枪头从转化的细菌平板中挑取中等大小,饱满且没有和其他克隆相接触的单克隆,在平板上相应编号处轻点一下接种,然后放入相应编号的ddH2O管中。

4.接种平板放入370C培养;取2ul菌悬液进行PCR,剩余8ul菌悬液保存在40C5.鉴定为阳性的克隆,将8ul菌悬液接种到3mlKan/Amp选择性LB培养基中。

置于37ºC 恒温摇床培养14~16个小时。

若时间间隔过长未摇出菌,可第二天用保种平板接种摇菌。

5.送测序。

②快速抽提质粒法鉴定1.从转化的细菌平板中挑取中等大小,饱满而且没有和其他克隆相接触的单克隆,接种到3ml Kan/Amp选择性LB培养基中。

置于37ºC恒温摇床培养8小时以上。

2.取30ul菌液(菌较少时可离心后重悬至30ul)加入等体积酚/氯仿,V ortex数次。

3.加入5ul Loading Buffer。

4.12000rpm离心10min(40C)5.取上清电泳,同阳性V ector比较大小。

5.大小正确的送测序或进一步酶切鉴定。

③抽提质粒酶切鉴定(1)质粒的小量抽提(采用QIANGEN质粒纯化试剂盒进行质粒的小量抽提)1.取1.5 ml菌液,14000 rpm离心2分钟,然后弃去上清。

2.悬浮:加入P1溶液200 ul,然后使沉淀的菌体悬浮。

3.裂解:加入P2溶液200 ul,然后颠倒4~6次。

4.中和:加入P3溶液200 ul,然后颠倒4~6次。

5.12000 rpm冷冻离心10分钟,然后小心吸取上清液于另一洁净离心管内。

6.加入420 ul异丙醇,混匀,12000 rpm冷冻离心15分钟,然后弃去上清。

7.加入70%乙醇200 ul,冷冻离心5分钟。

8.取出晾干,大约5分钟左右。

9.加入20 ul TE缓冲溶液,反复吹吸50次左右,使质粒DNA溶于TE缓冲溶液之中。

取少量样品进行琼脂糖凝胶电泳。

(2)小量抽提质粒内切酶酶切鉴定选取插入片段上和载体上都有的酶切位点,取相应量质粒进行酶切,看是否符合预计片段大小。

(8)质粒的大量抽提(采用QIAGEN质粒纯化试剂盒进行质粒的大量抽提)1.从转化的细菌平板中挑取中等大小,饱满而且没有和其他克隆相接触的单克隆,接种到3ml Kan选择性LB培养基中。

37ºC恒温摇床培养14~16个小时。

2.从小量培养物中取1 ml用作小量抽提,然后作酶切鉴定,选取阳性克隆的培养物,以1:500的比例接种到200 ml选择性LB培养基中。

37ºC恒温摇床培养14~16个小时。

3.从大量培养物中取700 ul菌液,再加入300ul甘油冻存。

4.把200 ml菌液倒入250 ml离心管中,4ºC,8500rpm离心15分钟。

5.弃去上清,然后倒扣于吸水纸上片刻。

然后加入5 ml 4ºC预冷的细胞重悬液buffer P1(确认已经加了Rnase),反复吹打沉淀至没有悬浮的菌块为止。

然后将悬浮液转移到50 ml的离心管中。

6.加入5 ml细胞裂解液buffer P2,彻底且轻柔地颠倒4~6次,在室温下孵育不要超过5分钟(从加入buffer P2开始计时,时间过长会使质粒DNA断裂)。

注意:样品不要涡旋,否则会有基因组污染。

buffer P2用完后也要及时地盖好盖子,以免被空气中的二氧化碳酸化。

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