抑制自噬促进贝伐珠单抗对结肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导
抑制自噬对贝伐单抗诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡的影响
抑制自噬对贝伐单抗诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡的影响柴婷;任爽;张燕燕;匡菁;杨家梅【摘要】目的:探讨抑制自噬对贝伐单抗诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡的影响.方法:用贝伐单抗、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理人结肠癌HCT116细胞48 h,Annexin V-FITC染色、流式细胞术检测细胞凋亡,吖啶橙染色、荧光显微镜观察细胞酸性自噬泡的变化,Western blot法检测细胞内自噬相关蛋白Beclin-1以及凋亡相关蛋白Caspase-9的表达.结果:贝伐单抗作用48 h对HCT116细胞的半数抑制剂量(IC50)为16 mg/L,3-MA的IC50为5 mmol/L.在此浓度下,3-MA单独作用可降低细胞中Beclin-1的表达,贝伐单抗单独作用可增强细胞中Beclin-1的表达,二者联用有拮抗作用(P<0.05).3-MA和贝伐单抗单独作用均可提高细胞凋亡率(P<0.05),增强细胞中Caspase-9蛋白的表达(P<0.05),二者联用有协同作用(P<0.05).结论:抑制自噬可增强贝伐单抗对结肠癌HCT116细胞的杀伤作用.%Aim: To study the effect of autophagy inhibition on bevacizumab-induced apoptosis of HCT116 cells.Methods: Human colon cancer HCT116 cells were treated with bevacizumab and autophagy inhibitor 3-methyl adenine(3-MA) alone or combined for 48 h, cell apoptosis rate was detected by Annexin V-FITC staining and flow cytometry, the changes of acidic autophagic vacuoles observed by acridine orange staining, the expressions of autophagy-related protein Beclin-1 and apoptosis-related protein Caspase-9 were detected by Western blot.Results: The median inhibition dose of bevacizumab for 48 h was 16 mg/L, and that of 3-MA was 5 mmol/L.At these doses,3-MA alone could decrease the expression of Beclin-1 in the cells(P<0.05), while bevacizumab alone could enhanceBeclin-1 expression(P<0.05), and the effects of bevacizumab and 3-MA were antagonistic(P<0.05).3-MA and bevacizumab alone could increase the apoptosis rate(P<0.05) and enhance the expression of Caspase-9 protein in the cells(P<0.05), and they had synergisticeffect(P<0.05).Conclusion: Autophagy inhibition may enhance the killing effect of bevacizumab on the human colon cancer HCT116 cells.【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(052)003【总页数】4页(P356-359)【关键词】自噬;贝伐单抗;结肠癌;凋亡【作者】柴婷;任爽;张燕燕;匡菁;杨家梅【作者单位】郑州大学第二附属医院肿瘤科郑州 450014;郑州大学第二附属医院肿瘤科郑州 450014;郑州大学第二附属医院肿瘤科郑州 450014;郑州大学第二附属医院肿瘤科郑州 450014;郑州大学第二附属医院肿瘤科郑州 450014【正文语种】中文【中图分类】R735.3#通信作者，女，1965年12月生，硕士，主任医师，研究方向：肿瘤化疗，E-mail：***************贝伐单抗是靶向血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的单克隆抗体，可以明显抑制肿瘤组织新生血管的形成，从而造成旺盛生长的肿瘤细胞的供血不足，导致肿瘤细胞缺血、缺氧[1]。
自噬在肝癌介入治疗中的研究进展
原发性肝癌是目前我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一。
根据全球疾病负担数据库2017年数据，肝癌的致死率在恶性肿瘤中仅次于肺癌，已成为第二大恶性肿瘤[1]。
介入治疗在肝癌的治疗中占重要地位。
根据《原发性肝癌诊疗指南（2022年版）》[2]，消融、经导管动脉化疗栓塞术（transcatheter arterial chemoembolization ，自噬在肝癌介入治疗中的研究进展余晨曦1，姚雪松2*（1.国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院深圳医院介入治疗科，广东深圳 518116；2. 国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院介入治疗科，北京 100021）摘要原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，介入治疗覆盖中国肝癌分期Ⅰa ～Ⅲb 期的患者。
自噬作为真核细胞特有的代谢过程，参与代谢性疾病、恶性肿瘤的发生、发展，在肝癌的发生、发展中发挥重要作用，尤其促进了肿瘤细胞对介入治疗的耐受，使得治疗效果不佳。
本文综述了原发性肝癌常见介入治疗方式对肿瘤细胞自噬现象的影响：消融治疗、经血管介入治疗及内放射治疗都会通过缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）/B 淋巴细胞瘤2/腺病毒E1B 相互作用蛋白3（B-cell lymphoma-2/adenovirus E1B 19-kDa-interacting protein 3，BNIP3）通路、磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）等细胞通路诱导肿瘤细胞自噬水平的提高，从而产生治疗抵抗。
体外试验中，自噬抑制剂的使用可以改善自噬引起的治疗抵抗。
关键词：自噬；原发性肝癌；介入治疗Research progress of autophagy in interventional therapy of primary hepaticcarcinomaYu Chenxi 1, Yao Xuesong 2*(1.Department of Interventional Therapy, National Cancer Center/National Clinical Research Center for Cancer/Cancer Hospital & Shenzhen Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Shenzhen 518116, Guangzhou, China; 2.Department of Interventional Therapy, National Cancer Center/National Clinical Research Center for Cancer/Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing100021, China)AbstractPrimary hepatic carcinoma is one of most common malignant tumors in China. Interventional therapy plays an important role in primary hepatic carcinoma, suitable for Ia-IIIb stage patients according to China liver cancer staging (CNLC). As a metabolic process unique to eukaryotic cells, autophagy is involved in metabolic diseases and malignant tumors, and plays an important role in the tumorigenesis of primary hepatic carcinoma, especially promoting the tolerance of tumor cells to interventional therapy, which makes the treatment ineffective. In this paper, we review the effects of common interventional treatments for primary hepatic carcinoma on autophagy in tumor cells. Ablation therapy, transvascular interventional therapy, and internal radiation therapy can promote levels of autophagy in tumor cells by cellular pathways such as hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α)/B-cell lymphoma-2/adenovirus E1B 19-kDa-interacting protein 3 (BNIP3) pathway, phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/protein kinase B (AKT)/mammalian target of rapamycin (mTOR), resulting in treatment resistance. In vitro studies, the use of autophagy inhibitors has prevent therapeutic resistance from autophagy.Key words: Autophagy; Primary hepatic carcinoma; Interventional therapy余晨曦国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院深圳医院介入治疗科基金项目：深圳市科技计划（JCYJ20210324125609026）*通信作者：TACE）及内放射治疗等介入治疗适合人群已覆盖中国肝癌分期（China liver cancer staging，CNLC）Ⅰa～Ⅲb 期的患者。
贝伐珠单抗治疗结直肠癌的作用及耐药机制
THE RESISTANCE MECHANISM ANDROLES OF BEVACIZUMAB INTREATMENT OF COLORECTALCANCERABSTRACTBackground: Bevacizumab has been demonstrated to be effective in the treatment of colorectal cancer and becomes one of the most common drugs for the treatment of advanced colorectal cancer. However, the resistance of colorectal cancer to Bevacizumab affects the long-term use of Bevacizumab. The recent research results have shown that the Bevacizumab resistance may be related with tumor microenvironment, the activation of other angiogenesis pathway, immune suppression and so on. But the mechanisms involved Bevacizumab resistance are still fully understood.Objective: In this study, we have investigated the roles and mechanism of bevacizumab resistance.Methods: The colon cancer DLD-1 cells were injected s.c. into nude mice and generated a colon cancer xenograft model. When tumor size reached to 100 mm2, Bevacizumab was injected i.p. into nude mice twice each week. Tumor size was measured weekly.Four weeks after theinjection, the xenograft tumor tissues were harvested for isolation of tumor cells. The tumor cells isolated from tumor treated with Bevacizumab treatment were injected s.c. into nude mice to establish second xenograft model. Then Bevacizumab was injected i.p. into nude mice with second xenograft twice each week. Tumor size was measured weekly. Four weeks after the treatment, the xenograft tumor tissues were harvested for histological analysis and immunohistochemistry staining.Results:Bevacizumab treatment significantly inhibited colon cancer xenograft growth at first time treatment. For second generation of xenograft models using tumor cells isolated from Bevacizumab-treated tumor, Bevacizumab treatment still inhibited xenograft tumor growth. The results suggest that Bevacizumab for colon cancer treatment is still effective. Bevacizumab one cycle treatment is not enough to induce the resistance of Bevacizumab. Immunohistostaining showed that the expression of Survivin was gradually increased in the tumor tissues treated with bevacizumab from 3-week treatment to 9-week treatment. The number of CD31 positive cells was significantly lower in the xenograft tumor tissues from bevacizumab-treated mice that those from control-treated mice.Conclusion: Bevacizumab treatment could inhibit xenograft tumor growth even in the tumors that have once treated with bevacizumab. Survivin may play a certain role in mediating the resistance ofbevacizumab. The exact role of Survivin in mediated the resistance of bevacizumab will be further studied.KEY WORDS:colorectal cancer，Bevacizumab，drug resistance，Survivin目录第一章研究背景 (1)第二章贝伐珠单抗动物耐药模型构建 (6)1.材料 (6)1.1 实验动物 (6)1.2 试剂 (6)1.3 实验器材 (6)2.方法 (7)2.1 裸鼠移植瘤模型构建 (7)2.2 观察指标 (7)2.3 移植瘤处理 (7)3.结果 (7)4.讨论 (8)本章小结 (10)第三章探寻预测耐药的生物标志物 (12)1.材料 (12)1.1 组织标本 (12)1.2 主要试剂 (13)1.3 器材及设备 (13)2.方法 (13)2.1 组织脱水及石蜡包埋 (13)2.2 免疫组化染色步骤 (14)3.结果 (15)4.讨论 (19)本章小结 (20)第四章 Survivin稳定转染细胞株构建 (21)1.材料 (21)1.1 细胞株 (21)1.2 pcDNA3.1(+)-Survivin质粒及pcDNA3.1(+)质粒 (21)1.3 主要试剂 (21)1.4 实验器材 (22)2.实验方法 (22)2.1 细胞培养 (22)2.2 脂质体2000转染 (22)2.3 G418筛选克隆 (22)2.4 Western Blot实验验证稳转细胞株。
地屈孕酮与黄体酮在先兆流产治疗中的效果对比研究
3 讨论结肠癌是我国常见且高发癌症之一, 高发于45~50岁左右人群, 男性发病率略高于女性, 城市发病率远高于农村,且随着饮食结构不断变化, 年发病率呈明显上升趋势［5］。
贝伐珠单抗作为分子靶向药物之一, 现已用于多种晚期恶性肿瘤的治疗, 其可特异性结合血管内皮生长因子, 阻碍血管内皮细胞及新生血管生成, 减少新生血管为恶性肿瘤细胞供养, 抑制肿瘤细胞生长［6, 7］。
本文对结肠癌晚期患者实施贝伐珠单抗联合化疗治疗能有效提高近期疗效, 这与陈志勇等［8］研究结果一致, 贝伐珠单抗作为单克隆抗体, 能有效抗肿瘤血管生成, 持续抑制肿瘤血管新生及再生, 阻止肿瘤生长, 进而延缓疾病进展。
本文研究还发现, 使用贝伐珠单抗能在一定程度上提高患者细胞免疫功能, 这与周芳等［9］研究结果一致。
综上所述, 晚期结肠癌患者使用贝伐珠单抗联合化疗能增加近期疗效, 同时不增加细胞免疫及治疗期间不良反应, 在其抗癌治疗过程中可适度添加免疫增强剂, 提高患者自身免疫功能。
参考文献［1］ 秦琼, 杨林, 孙永琨, 等. 老年结肠癌患者根治术后辅助化疗疗效及影响预后的多因素分析. 中华老年医学杂志, 2016, 35(3):296-300.［2］ 钟漓, 赵志. 抑制自噬促进贝伐珠单抗对结肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导. 现代肿瘤医学, 2017, 25(3):345-351.［3］ 朱德祥, 任黎, 许剑民. 中国《结直肠癌肝转移诊断和综合治疗指南》(V2013)解析. 中华胃肠外科杂志, 2014(6):525-529.［4］ 丁婕, 戴旭, 孟宪运, 等. 实体瘤疗效评价标准的研究进展. 中国肿瘤临床与康复, 2015, 22(9):1150-1152.［5］ 张洁, 班丽英. 贝伐珠单抗联合化疗治疗晚期大肠癌的临床疗效. 世界华人消化杂志, 2015(10):1674-1678.［6］ 韩媛, 华于琴, 皇志琴, 等. 贝伐珠单抗联合化疗治疗结肠癌患者的护理. 当代医学, 2012, 18(16):119.［7］ 崔赛琼. 贝伐珠单抗联合化疗治疗晚期大肠癌的临床研究. 大连医科大学, 2013.［8］ 陈志勇, 陈珍, 丘金花, 等. 贝伐珠单抗联合mFOLFOX6方案治疗晚期结肠癌的临床效果及对血清CEA 的影响. 中国医药科学, 2017, 7(10):11-14.［9］ 周芳, 王建军, 程传耀, 等. 贝伐珠单抗联合FOLFIRI 方案治疗晚期结肠癌的临床观察. 中国药房, 2017, 28(23):3261-3265.［收稿日期：2019-01-08］地屈孕酮与黄体酮在先兆流产治疗中的效果对比研究常丽娜【摘要】 目的 研究地屈孕酮与黄体酮在先兆流产治疗中的效果。
贝伐珠单抗抗血管生成疗法治疗晚期结直肠癌的临床标志物的研究进展
贝伐珠单抗抗血管生成疗法治疗晚期结直肠癌的临床标志物的研究进展贝伐珠单抗（bevacizumab）是一种抗血管生成疗法药物，被用于治疗多种肿瘤，包括晚期结直肠癌。
随着临床标志物的研究不断深入，越来越多的研究发现贝伐珠单抗在治疗晚期结直肠癌中的疗效，以及其对患者预后的影响。
本文将对贝伐珠单抗抗血管生成疗法治疗晚期结直肠癌的临床标志物的研究进展进行探讨。
贝伐珠单抗是一种人源化的单克隆抗体，能够靶向抑制血管内皮生长因子（VEGF），从而抑制肿瘤新生血管的形成和发育，减少肿瘤的供血，使肿瘤萎缩。
贝伐珠单抗被广泛应用于肿瘤的治疗中，尤其是结直肠癌的治疗。
近年来，许多研究发现贝伐珠单抗在晚期结直肠癌的治疗中具有显著的疗效。
并非所有的患者对贝伐珠单抗都能够获得同样的疗效，因此临床上迫切需要寻找预测患者疗效和预后的标志物，以便更好地指导治疗方案的制定。
一些研究发现，血浆中的VEGF水平可以作为贝伐珠单抗治疗晚期结直肠癌患者预后的预测指标。
研究表明，治疗前血浆中VEGF水平高的患者，其预后往往较差，对贝伐珠单抗的疗效也较差。
可以考虑通过检测血浆中的VEGF水平，来筛选患者并制定个体化的治疗方案。
除了VEGF相关的标志物外，一些研究还发现，肿瘤组织中微血管密度（MVD）和血管壁点状缺陷（VPD）等血管生成相关的指标，也与患者的预后和对贝伐珠单抗的疗效相关。
这些指标可以通过免疫组织化学染色和影像学等技术来检测，为患者的治疗提供更多的信息。
除了肿瘤生物学标志物外，一些研究还发现，快速相关因子2α（HIF-2α）在晚期结直肠癌患者中的表达水平，也与贝伐珠单抗的疗效和预后相关。
HIF-2α是VEGF的上游调控因子，其高表达与肿瘤的血管生成和耐药性相关。
检测HIF-2α的表达水平也有望成为预测患者疗效和预后的重要标志物。
贝伐珠单抗抗血管生成疗法治疗晚期结直肠癌的临床标志物的研究进展日益深入，研究人员正在不断发现新的标志物，以期为临床医生提供更准确、更全面的信息，来指导患者的治疗。
贝伐珠单抗靶向治疗对晚期结肠癌患者血清肿瘤标志物及免疫功能的影响
无典型症状，多数患者机体出现明显变化时已进展 服，第1〜14日；3周为1个周期。观察组加用贝伐
至晚期，错失治疗最佳时机，仅可靠化疗维持生 珠单抗注射液（齐鲁制药有限公司，国药准字：
存⑶。常规化疗方案虽可延长患者生存时间，但毒 S20190040）治疗，静脉滴注5 mg/kg,首次控制在60
性反应较大，使得部分患者难以耐受，整体疗效欠
效果。现报道如下。
志物和免疫功能指标。（1）临床疗效:完全缓解:病
1资料与方法
灶消失，肿瘤标志物正常；部分缓解:病灶缩小30%
1.1 一般资料 选取2018年3月至2020年3月
以上;稳定：病灶缩小不足30%,且未出现新的病
90例于我院治疗的晚期结肠癌患者,按随机数字表 灶;进展，病灶增大超20%,或出现新病灶。疾病控
对照组 45 1.91 + 0.38 1.41 + 0.13 10.81 + 1.27 7.73 + 1.09
/值
0.519
0.676
0.113
1.374
P值
0.605
0.501
0.910
0.173
2.4不良反应 对照组出现4例骨髓抑制、2例手 足综合征、1例肝功能损伤、3例乏力，不良反应发生 率为22.22%(10/45);观察组出现2例骨髓抑制、2 例手足综合征、2例高血压、2例蛋白尿、1例便血, 不良反应发生率为20.00%(9/45)。两组不良反应 发生率相比，无统计学差异(x2 = 0. 067, P = 0.796)。 3讨论
法分为两组，各45例。对照组男25例，女20例;年 制率二完全缓解率+部分缓解率+稳定率。（2）血
龄46〜71岁，平均年龄（55.36 ±4.29）岁；组织学分 清肿瘤标志物:两组均以全自动分析仪测定糖链抗
抑制自噬对ce6-pdt诱导结直肠癌sw620细胞增殖和凋亡影响的实验研究
目录摘要 (1)Abstract (3)前言 (5)研究内容与方法 (7)1 实验材料 (7)2 实验方法 (8)3 质量控制 (11)4 统计方法 (11)5 技术路线 (11)结果 (12)讨论 (26)小结 (31)致谢 (32)参考文献 (33)综述 (37)导师评阅表 (52)抑制自噬对Ce6-PDT诱导结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡影响的研究研究生：杨楷桢导师：康玲副教授摘要目的：通过自噬抑制剂联合Ce6-PDT对结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡影响的研究，明确抑制肿瘤细胞的自噬活性能否增强结直肠癌细胞在Ce6-PDT诱导下的抑制率和凋亡率，为自噬抑制剂提高Ce6-PDT治疗结直肠肿瘤的敏感性提供理论依据和实践基础。
方法：1．采用激光共聚焦显微镜结合细胞器荧光探针观察光敏剂Ce6在结肠癌细胞SW620中的亚细胞定位；2. 荧光显微镜观察Ce6-PDT后SW620细胞形态和结构的变化；3. 采用MTT法检测Ce6-PDT以及3MA-Ce6-PDT后SW620细胞的存活率；4．AnnexinV-PE/7-ADD联合流式细胞仪检测Ce6-PDT以及3MA-Ce6-PDT后SW620细胞的凋亡率；5．罗丹明123（Rh123）联合流式细胞仪检测Ce6-PDT以及3MA-Ce6-PDT后SW620细胞线粒体膜电位的变化；6. 吖啶橙（AO）染色联合荧光显微镜观察Ce6-PDT以及3MA-Ce6-PDT后SW620细胞自噬的发生情况；7．蛋白免疫印迹法（Western Blot）分别检测Ce6-PDT以及3MA-Ce6-PDT后SW620细胞凋亡相关蛋白caspase-3、bcl-2以及自噬相关蛋白LC3II/I的表达情况。
结果：1.内质网为Ce6的主要定位点，其次为线粒体和溶酶体，细胞核中几乎无分布；2. Ce6-PDT后，随着Ce6浓度的增加，细胞的正常形态发生明显变化，并且呈现出了典型的凋亡形态学特性；3.Ce6-PDT后，细胞存活率与Ce6浓度浓度呈负相关（r=-0.820，P<0.01）；4. Ce6-PDT后，细胞凋亡率与Ce6浓度浓度呈正相关（r=0.845，P<0.01），在Ce6浓度达到1μg/mL时，线粒体膜电位随着Ce6浓度的增加而降低（P<0.01）；5. Ce6-PDT后，凋亡相关蛋白caspase-3和bcl-2的表达以及自噬相关蛋白LC3II/I的比值随着Ce6浓度的增加而升高（P<0.05）；6. 3MA-Ce6-PDT组，相比Ce6-PDT组，细胞存活率降低（P<0.05），细胞凋亡率升高（P<0.05），细胞线粒体膜电位下降（P<0.05），自噬相关蛋白的表达降低（P<0.05），凋亡相关蛋白的表达增加（P<0.05）。
抑制自噬促进培美曲塞对A549细胞的增殖抑制作用
抑制自噬促进培美曲塞对A549细胞的增殖抑制作用赵大海;陆友金【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2015(000)005【摘要】Aim To explore the effect of pemetrexed on autophagy and the function of autohpagy activation in A549 cells.Methods The anti-proliferative effect of pemetrexed on A549 cells was detected by MTS. The formation of autophagosome was observed by trans-mission electron microscopy (TEM)and the expression of autophagy-related proteins was determined by West-ern blot.The inhibitory effects of the combination of pemetrexed and a selective autophagy inhibitor on A549 cells were measured by MTS.Results Peme-trexed inhibited the proliferation of A549 cells.Auto-phagy was activated in A549 cells by exposure topemtrexed.Autophagosome was increased in peme-trexed treatment cells compared with control group. Pemtrexed treatment led to the formationof autophago-some and the conversion of LC3-Ⅰto LC3-Ⅱ.The in-creaseof Beclin-1 and the decline of autophagy sub-strate of p62 were observedin pemtrexed treated A549 cells.The pharmacological autophagy inhibitor chloro-quine (CQ)sensitized A549 cells to pemetrexed treat-ment.The inhibitory rate was (28.42 ±2.45 )% for pemetrexed only,and (45 .36 ±3.52 )% for peme-trexed combined with CQ.Conclusions Pemetrexed could activate autophagy in A549 cell lines.The dis-ruption of autophagyfacilitates the anti-proliferative effect of pemetrexed on A549 cells,which provides a novel strategy in lung cancer treatment.%目的：研究培美曲塞对肺癌细胞A549自噬的作用及自噬的功能。
贝伐单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌的临床探讨
贝伐单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌的临床探讨前言结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，患者的治疗可能受多种因素的影响，包括年龄、疾病阶段、癌细胞的生长和扩散等。
根据病理分组、TNM 分期系统，结直肠癌可分为早期和晚期两种类型，其中晚期癌是不容忽视的严重疾病，因为失去了外科手术的治疗机会，需要依靠化疗、生物治疗等辅助治疗手段。
贝伐单抗贝伐单抗（Bevacizumab) 是一种人源化的单克隆抗体，针对人血管内皮生长因子A (VEGF-A)，可以阻止癌细胞生长并解除肿瘤对初始血管的依赖。
贝伐单抗常用于在晚期癌中作为辅助治疗的药物，被广泛应用于多种恶性肿瘤治疗中。
化疗化疗是治疗晚期癌最常用的方法之一。
使用化疗药物可以杀死癌细胞，控制癌症的进展。
在化疗过程中，使用单一药物或组合使用多种药物可以达到更好的治疗效果。
研究目的本研究的目的是探讨贝伐单抗联合化疗在晚期结直肠癌治疗中的效果和安全性，并为患者的临床治疗提供参考。
研究方法1.研究对象本次研究纳入的对象为2015年1月至2019年12月在我院及周边医院诊断为晚期结直肠癌的患者。
2.研究设计采用回顾性病例对照研究，将102例晚期结直肠癌患者分为两组。
其中实验组51例使用贝伐单抗联合化疗，对照组51例仅接受化疗治疗。
两组患者的临床资料进行对比分析，评估贝伐单抗联合化疗在晚期结直肠癌治疗中的疗效和安全性。
3.治疗方法实验组患者在化疗过程中使用贝伐单抗，并根据具体情况调整化疗方案。
对照组仅使用化疗药物进行治疗，不使用贝伐单抗。
研究结果1.治疗前实验组中男性30例，女性21例，平均年龄58岁。
对照组中男性29例，女性22例，平均年龄59岁。
两组年龄分布无明显差异。
2.疗效比对实验组患者总有效率为84.31%，对照组为68.63%。
实验组治疗效果较对照组明显。
3.安全性分析贝伐单抗联合化疗的不良反应主要为轻度恶心、呕吐、腹泻等，并经过及时处理后可以快速缓解。
两组患者除患者相对应的不良反应外，无其他严重不良反应发生。
贝伐珠单抗应用于非小细胞肺癌中的研究进展
贝伐珠单抗应用于非小细胞肺癌中的研究进展贝伐珠单抗是一种用于治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的靶向药物，近年来关于其在肺癌治疗中的研究进展引起了人们的广泛关注。
本文将对贝伐珠单抗在非小细胞肺癌中的研究进展进行详细介绍，以期为临床实践提供一定的参考价值。
一、贝伐珠单抗的药理作用与临床应用贝伐珠单抗是一种人源化的单克隆抗体，它可以靶向表皮生长因子受体（EGFR）的外胞质结构域，抑制EGFR的自身磷酸化，阻断了该受体的信号转导通路，抑制了肿瘤细胞的增殖和转移。
目前，贝伐珠单抗已经在非小细胞肺癌的治疗中得到了广泛的应用。
二、贝伐珠单抗在非小细胞肺癌治疗中的研究现状1.适应症扩大最初，贝伐珠单抗主要适用于EGFR敏感突变的NSCLC患者，但是随着临床研究的不断深入，人们发现贝伐珠单抗还可以适用于EGFR阳性、ALK阴性的NSCLC患者。
一系列的临床试验表明，在这个群体中，贝伐珠单抗与化疗或其他靶向药物的联合治疗效果显著，有效提高了治疗的有效率和生存期。
2.治疗方案优化在贝伐珠单抗的临床应用中，研究者们还不断尝试优化治疗方案，使其更具个性化和精准化。
一些研究表明，贝伐珠单抗与其他靶向药物或化疗药物的联合应用可以取得更好的治疗效果，减缓肿瘤的进展，延长患者的生存期。
3.治疗效果预测由于贝伐珠单抗不同患者的治疗效果存在差异，因此研究者们试图寻找有效的生物标志物来预测患者对贝伐珠单抗的治疗反应。
一些研究表明，EGFR突变、p-Akt、PTEN等因子的表达状态可能与患者对贝伐珠单抗的治疗反应相关。
4.治疗耐药机制研究尽管贝伐珠单抗在治疗非小细胞肺癌中取得了显著的疗效，但是随着治疗时间的延长，一部分患者会出现药物耐药的现象。
研究者们也着力探讨贝伐珠单抗耐药机制，以期找到更有效的治疗策略。
目前，有关贝伐珠单抗耐药机制的研究主要涵盖了EGFR突变、MET扩增、KRAS突变、HER2突变等因素。
三、展望贝伐珠单抗在非小细胞肺癌治疗中的研究进展为肺癌患者带来了许多新的治疗选择，并且为治疗方案的优化和个性化提供了更多的可能。
贝伐珠单抗治疗结直肠癌的作用及耐药机制
贝伐珠单抗治疗结直肠癌的作用及耐药机制研究背景:贝伐珠单抗已经证明能够抑制结肠癌的生长,已经成为晚期结直肠癌患者的常用靶向治疗药物之一,但贝伐珠单抗最终会产生耐药,影响了其长期应用。
目前的研究显示贝伐珠单抗耐药主要涉及肿瘤微环境的改变、其他血管生成通路激活及免疫抑制等机制,但确切的耐药机制仍未完全阐明。
研究目的:本课题进一步研究贝伐珠单抗对结肠癌的抑制作用,探讨结肠癌耐受贝伐珠单抗的机制。
研究方法:通过建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,应用贝伐珠单抗治疗移植瘤,观察移植瘤体积及生长速度的变化,并收集移植瘤组织。
提取第一次经贝伐珠单抗治疗过的移植瘤,建立原代细胞,体外培养后再接种裸鼠,建立第二次移植瘤模型;再用贝伐珠单抗进行治疗,观察移植瘤的生长。
收集治疗后的移植瘤,进行免疫组化染色,检测相关的耐药基因的表达。
并选取相关高表达的基因,进行深入的机制研究。
研究结果:贝伐珠单抗第一次治疗可以显著抑制结肠癌移植瘤的生长。
发现对应用贝伐珠单抗第一次治疗后的移植瘤细胞再接种建立的第二代移植瘤,贝伐珠单抗仍能抑制其生长,显著抑制了肿瘤的血管生成。
这些结果,提示贝伐珠单抗对其治疗过的肿瘤依然有效,单次治疗并不能诱导贝伐珠单抗耐药,贝伐珠能够重复应用治疗结肠癌。
免疫组化染色结果显示,经过贝伐珠单抗治疗的移植瘤Survivin的表达随着治疗时间延长而逐渐增高,提示Survivin可能与结直肠癌对贝伐珠单抗的耐药有关。
同时我们建立了Survivin高表达稳定转染细胞株,为了进一步研究Survivin在贝伐珠单抗耐药中的作用奠定了基础。
结论:贝伐珠单抗对其治疗后的移植瘤仍然有效。
单次贝伐珠单抗治疗不足以诱导稳定耐药的动物模型,可能需要对贝伐珠单抗治疗后移植瘤多次接种反复治疗才能得到稳定的耐药动物模型。
Survivin在贝伐珠单抗耐药中的作用需要进一步证实。
抑制自噬对X射线诱导结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响
抑制自噬对X射线诱导结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响辛丞; 何艳桃; 孔飞飞; 魏笑; 马会明【期刊名称】《《宁夏医科大学学报》》【年(卷),期】2019(041)006【总页数】4页(P568-571)【关键词】结肠癌; X射线; 自噬; 增殖; 凋亡【作者】辛丞; 何艳桃; 孔飞飞; 魏笑; 马会明【作者单位】宁夏医科大学银川 750004; 生育力保持教育部重点实验室银川750004【正文语种】中文【中图分类】R735.35结肠癌（colon cancer）是常见的危害人类健康的恶性肿瘤之一，根据最新的统计数据表明[1]，在世界范围内，结肠癌的发病率在恶性肿瘤排名第三，死亡率排名第二，2018年将有180多万例新增病例和881,000例死亡病例。
目前，结肠癌放射治疗效果良好，成本相对低廉，是临床上治疗结肠癌的主要手段之一，其原理是利用X射线所产生的电离辐射使结肠癌细胞内DNA产生损伤并进一步诱导细胞凋亡[2]，从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。
但是大部分病人确诊时已经属于中晚期，对放射治疗不敏感，需要加大照射剂量，给病人带来严重的副作用和并发症，甚至出现放射抵抗[3]。
因此，急需一种新的放疗策略来解决放射治疗敏感性问题。
研究已证实细胞自噬（autophagy）与凋亡（apoptosis）在某些情况下可以相互拮抗或促进，在放化疗过程中可先后发生或共存于同一细胞，在机体内不同细胞中也可分别诱发正常细胞和肿瘤细胞的自噬或凋亡。
已报道自噬在肿瘤的治疗过程中发挥着“双刃剑”的作用，同时也是导致肿瘤放射治疗抵抗和化疗多耐药中的重要代谢过程[4-5]。
本实验以结肠癌细胞HCT116为模型，通过X射线与自噬抑制剂3-MA联合使用，观察抑制自噬后X射线对细胞增殖和凋亡的影响，探讨自噬和凋亡与X射线放疗敏感性的关系。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 主要细胞人结肠癌细胞株HCT116由宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室保存并长期培养。
β-谷甾醇对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响
β-谷甾醇对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响陈喜;李若男;李晶;赵李娜;徐志立【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2024(62)9【摘要】目的探究β-谷甾醇对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响及其对磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)信号通路的调控作用。
方法体外培养结肠癌细胞HCT116并分为β-谷甾醇高(240μmol/L)、中(120μmol/L)、低剂量(60μmol/L)组,设置空白对照组(0μmol/L)。
应用不同浓度的β-谷甾醇处理HCT116细胞。
24h后应用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测β-谷甾醇对HCT116细胞增殖的影响,并在显微镜下观察细胞的形态变化;应用Hoechst 33342细胞核染色法检测β-谷甾醇对HCT116细胞凋亡的影响;应用细胞克隆集落形成实验检测HCT116细胞的集落形成能力;应用蛋白质印迹技术检测HCT116细胞中PI3K、磷酸化Akt、Akt、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax等相关蛋白的表达情况;利用AutoDock 软件实现β-谷甾醇与PI3K和Akt蛋白的分子对接。
结果与对照组比较,β-谷甾醇可浓度依赖性地抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,抑制细胞的集落形成能力,促进细胞的凋亡;抑制HCT116细胞中磷酸化Akt、PI3K、Bcl-2蛋白的表达,促进Bax蛋白的表达;β-谷甾醇与PI3K、Akt蛋白的结合均较为稳定。
结论β-谷甾醇可通过抑制PI3K/Akt信号通路调节HCT116细胞的增殖与凋亡。
【总页数】5页(P78-81)【作者】陈喜;李若男;李晶;赵李娜;徐志立【作者单位】辽宁中医药大学药学院【正文语种】中文【中图分类】R285【相关文献】1.RNA干扰靶向抑制自噬调控基因Beclin 1对结肠癌细胞株HCT116自噬活性及增殖/凋亡的影响2.JS-K对人结肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响3.拟康氏木霉胞外多糖对人结肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响4.过表达FGFRL1抑制HCT116人结肠癌细胞的增殖和迁移并促进其凋亡5.EGCG对人结肠癌细胞株HCT116、SW116增殖、凋亡及JAK／STAT3信号通路的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
贝伐珠单抗原理
贝伐珠单抗原理
贝伐珠单抗是一种治疗癌症的生物制剂，也被称为人源化单克隆抗体。
它的作用机制是通过靶向抑制人体内的某些蛋白质，从而阻止肿瘤细胞的生长和扩散。
具体来说，贝伐珠单抗针对一种名为HER2（人皮生长因子受体2）的蛋白质，这种蛋白质在某些癌症细胞中异常活跃且过表达，从而促进了肿瘤的发展。
贝伐珠单抗能够与HER2蛋白质结合，从而下调其活性并诱导细胞凋亡，杀灭肿瘤细胞。
贝伐珠单抗的剂量和给药方式需严格遵照医生的建议，以确保最大限度地发挥其治疗效果。
同时，由于贝伐珠单抗是一种高度特异性的生物制剂，需密切关注患者的不良反应并采取适当措施。
贝伐单抗 (Bevacizumab) 抗癌药物
贝伐单抗 (Bevacizumab) 抗癌药物贝伐单抗 (Bevacizumab) 抗癌药物贝伐单抗(Bevacizumab) 是一种用于治疗多种恶性肿瘤的抗癌药物。
它属于一类被称为血管生成抑制剂的药物，通过抑制肿瘤血供的形成，阻碍肿瘤的生长和转移。
贝伐单抗已经被广泛应用于多种肿瘤的治疗中，包括结直肠癌、乳腺癌和肺癌等。
本文将对贝伐单抗的药理作用、临床应用和副作用等方面进行介绍。
一、贝伐单抗的药理作用贝伐单抗作为一种血管生成抑制剂，通过靶向肿瘤相关的血管生成因子，主要是血管内皮生长因子（VEGF），来发挥其抗肿瘤作用。
VEGF是一种促进血管新生的重要因子，它在肿瘤细胞中过度表达，导致肿瘤血管生成增加。
贝伐单抗通过结合VEGF，阻止其与受体结合，从而抑制血管生成，减少肿瘤的血供，限制肿瘤的生长和转移。
二、贝伐单抗的临床应用贝伐单抗在临床上被广泛应用于多种恶性肿瘤的治疗中。
其中最常见的应用领域是结直肠癌的治疗。
贝伐单抗可以与化疗药物联合应用，提高疗效，延长患者的生存期。
此外，贝伐单抗还可以用于乳腺癌、肺癌、卵巢癌等多种肿瘤的治疗。
在乳腺癌患者中，贝伐单抗可与化疗或内分泌治疗联合应用，有效控制肿瘤的生长和转移。
对于肺癌患者，贝伐单抗可以与化疗药物或放疗联合应用，提高生存期和生活质量。
此外，贝伐单抗还可以与免疫治疗药物联合应用，增强肿瘤的治疗效果。
三、贝伐单抗的副作用贝伐单抗虽然在肿瘤治疗中表现出很好的疗效，但也伴随着一些副作用。
最常见的副作用是高血压，部分患者在使用贝伐单抗后会出现血压升高的情况。
此外，贝伐单抗还可能导致出血、血栓形成、蛋白尿等不良反应。
因此，在使用贝伐单抗时，医生需要密切监测患者的血压和肾功能等指标，以及早发现并处理副作用。
四、贝伐单抗的发展前景贝伐单抗作为一种新型的抗癌药物，具有重要的临床应用前景。
随着对其药理作用的深入研究，可以进一步优化贝伐单抗的治疗方案，提高其疗效，并减少副作用的发生。
贝伐珠单抗在晚期非鳞状非小细胞肺癌中的应用
贝伐珠单抗在晚期非鳞状非小细胞肺癌中的应用引言晚期非鳞状非小细胞肺癌（advanced non-squamous non-small cell lung cancer，NSCLC）是一种严重的肺癌类型，其治疗方式较为困难。
贝伐珠单抗（bevacizumab）作为一种靶向治疗药物，已经在晚期NSCLC的治疗中得到广泛应用，取得了显著的疗效。
本文将针对贝伐珠单抗在晚期NSCLC中的应用进行详细介绍。
1. 贝伐珠单抗的机制贝伐珠单抗是一种人源化的单克隆抗体，通过靶向肿瘤血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），抑制肿瘤血管的形成和生长，从而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。
2. 贝伐珠单抗的临床研究贝伐珠单抗在晚期NSCLC的治疗中已经进行了多项临床研究，其中包括Phase II和Phase III临床试验。
这些研究结果显示，贝伐珠单抗联合化疗与单纯化疗相比，可以显著提高患者的生存期和生存质量。
2.1 Phase II临床试验Phase II临床试验通常在患者数量较少的情况下进行，旨在评估新药物的疗效和安全性。
已经进行的Phase II临床试验显示，贝伐珠单抗联合化疗在晚期NSCLC患者中表现出良好的疗效和耐受性。
2.2 Phase III临床试验Phase III临床试验通常在较大的患者群中进行，目的是评估新药物与标准治疗的比较效果。
已经进行的Phase III临床试验显示，贝伐珠单抗联合化疗可以显著延长患者的总生存期和无进展生存期。
3. 贝伐珠单抗的不良反应虽然贝伐珠单抗在治疗晚期NSCLC中显示出了显著的疗效，但也存在一些不良反应。
常见的不良反应包括高血压、出血、消化道不良反应等。
在使用贝伐珠单抗治疗晚期NSCLC时，需要密切监测患者的不良反应，并采取相应的干预措施。
4. 贝伐珠单抗的临床应用指南根据相关的临床指南，贝伐珠单抗联合化疗已成为晚期NSCLC治疗的标准方案之一。
贝伐珠单抗应用于非小细胞肺癌中的研究进展
贝伐珠单抗应用于非小细胞肺癌中的研究进展
贝伐珠单抗（Bevacizumab）是一种针对血管内皮生长因子（VEGF）的单克隆抗体，
在肿瘤治疗中具有广泛应用。
非小细胞肺癌（NSCLC）是世界范围内死亡率最高的肿瘤之一，多数患者在确诊时已处于晚期，因此，发展有效的治疗方法是至关重要的。
本文将就
贝伐珠单抗在NSCLC中的研究进展进行综述。
研究表明，NSCLC病人中VEGF表达显著增加，其中VEGF-A/B/C和VEGFRs均有所上调。
这种上调导致肿瘤血管生成，进而增强肿瘤的供血和营养，同时也促进了肿瘤细胞的迁移
和浸润。
因此，阻断VEGF在NSCLC的生物学过程中具有潜在的治疗作用。
贝伐珠单抗是一种在NSCLC治疗中应用广泛的药物，其主要机制是通过抗VEGF，抑制肿瘤血管生成，从而限制肿瘤的生长和扩散。
研究表明，贝伐珠单抗可与化疗、放疗等其
他治疗方法联合应用，增强每一种治疗的效果。
在未联合其他治疗方法的情况下，单一应
用贝伐珠单抗也可提高NSCLC病人的生存率。
但同时需要注意的是，尽管贝伐珠单抗在很
多方面都表现出极高的治疗效果，但也有一定的副作用，如感染、出血等。
总之，贝伐珠单抗在NSCLC治疗中具有极高的潜力。
它与化疗、放疗等其他治疗方法
联合应用可获得更好的治疗效果。
此外，最新的研究还表明，贝伐珠单抗可以改变NSCLC
患者体内的miR-210表达水平，为NSCLC治疗提供新的、可靠的检测标志物和治疗方案。
然而，未来需要进一步完善和深入研究贝伐珠单抗的使用，以提高治疗效果和减少不良反应。
贝伐珠单抗在结直肠癌中的疗效及不良反应探讨
1242021年2月第7卷第2期*肿瘤治疗工程*贝伐珠单抗在结直肠癌中的疗效及不良反应探讨崔艳艳1,霍山21.赤峰学院附属医院肿瘤内科，内蒙古赤峰 024000 ；2.赤峰市妇产医院放射科，内蒙古赤峰 024000摘要目的探讨在治疗结直肠癌中贝伐珠单抗的临床效果和不良反应情况。
方法纳入该院于2018年7月一2020年7月阶段收治的70例中晚期结直肠癌患者,采用随机数表法均分为研究组和对照组。
对照组行FLOFOX 化疗方案，研究组在上述基础 上加行贝伐珠单抗。
记录两组临床疗效和安全性。
结果研究组治疗后其客观缓解率40.00%，高于对照组（17.14%）,两组对比差异有统计学意义（！2二4.480 ,!二0.034）；研究组的III 〜IV 级胃肠道不适反应为3例（8.57%）,血液学毒性反应发生6例（17.14%）；对照组【II 〜IV 级胃肠道不适反应为4例（n.431）,血液学毒性反应发生2例（20.00%）,两组对比差异无统计学意义（!2二。
.764,!二0.382）。
结论贝伐珠单抗应用于结直肠癌中，于患者临床疗效的，且不会 的增加。
;结直肠癌;安全性；效中图分类号 R735.34文献标志码 A doil0.il 966/j.issn.2095-994X. 2021.07.02.41Study on the Efficacy and Adverse Reactions of Bevacizumab in Colorectal CancerCUI Yan-yan 1, HUO Shan 2收稿日期：2021—01—06；修回日期：2021—01—27作者简介：崔艳艳（1974-）,女，硕士，主任医师，研究方向为恶性肿瘤靶向治疗1 .Department of Oncology, Affiliated Hospital of Chifeng University, Chifeng,Inner Mongolia Autonomous Region, 024000 China; 2.Department of Radiology, Chifeng Maternity Hospital, Chifeng,Inner Mongolia Autonomous Region, 024000 ChinaAbstract Objective To investigate the clinical effects and adverse reactions of bevacizumab in the treatment of colorectal cancer.Methods A total of 70 patients with advanced colorectal cancer who were admitted to the hospital between July 2018 and July 2020were enrolled. They were divided into study group and control group by random number table method. The control group receivedFLOFOX chemotherapy, and the study group received bevacizumab on the above basis. The clinical efficacy and safety of the two groups were recorded. Results After treatment, the objective remission rate of the study group was 40.00%, which was higher than of the control group (17.14%). The difference between the two groups was statistically significant 仪2二4.480, !二0.034); the level III-IV gastrointestinal discomfort of the study group was 3 cases (8.57%),and the incidence of hematological toxicity was 6 cases (17.14%);the control group III-IV gastrointestinal discomfort was 4 cases (11.43%), and the incidence of hematological toxicity was 2 cases (20.00%), the comparison of the two groups was not statistically significantly difference(x 2=0.764, !二0.382). Conclusion The use of be -vacizumab in colorectal cancer is beneficial to the improvement of the clinical efficacy of patients, and will not lead to an increase in adverse reactions.Key words Bevacizumab; Colorectal cancer; Safety; Effect analysis结直肠癌是目前临床中较为多发的一种实体性恶性 肿瘤,无论是发病率还是病死率,均占全部恶性肿瘤中的 第2位。
一种用于制备促进结肠癌细胞凋亡和抑制结肠癌细胞迁移的基因抑制
专利名称：一种用于制备促进结肠癌细胞凋亡和抑制结肠癌细胞迁移的基因抑制剂
专利类型：发明专利
发明人：唐正晓
申请号：CN202010674940.4
申请日：20200714
公开号：CN111743912A
公开日：
20201009
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种用于制备促进结肠癌细胞凋亡和抑制结肠癌细胞迁移的基因抑制剂，属于生物医学技术领域。
本发明通过实验证明，LINC02360基因抑制剂能够促进结肠癌细胞的凋亡，并且能够通过调E‑cadherin和N‑cadherin的蛋白表达来抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭。
因
此，LINC02360的siRNA能够用于制备促进结肠癌细胞凋亡的药物，并且可以用于制备抑制结肠癌细胞迁移和侵袭的药物。
申请人：济南帕斯维德生物科技有限公司
地址：250014 山东省济南市历下区二环东路5812号三单元602
国籍：CN
代理机构：济南智圆行方专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：梁轶聪
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硫化氢促进结肠癌细胞的生长
硫化氢促进结肠癌细胞的生长
蔡文杰;王艳;随力;王铭洁
【期刊名称】《中国药理学通报》
【年(卷),期】2014(30)12
【摘要】硫化氢（H2S）是一种具有广泛生物学效应的气体信号分子[1]，我们曾报道了H2S具有促血管新生的能力[2-3]，而血管新生可促进肿瘤细胞的增殖和扩散。
结肠癌细胞能表达合成H2S的两个酶：胱硫醚-β-合酶（CBS）和胱硫醚一吖一裂解酶（CSE），其中CSE含量远大于CBS的含量[4]。
本实验通过干扰内源性H2S的生成来探讨其对肿瘤生长的影响。
【总页数】2页(P1774-1774,1775)
【作者】蔡文杰;王艳;随力;王铭洁
【作者单位】上海理工大学医疗器械与食品学院医学基础教研室，上海 200093;上海理工大学医疗器械与食品学院医学基础教研室，上海 200093;上海理工大学医疗器械与食品学院医学基础教研室，上海 200093;复旦大学上海医学院生理与病理生理学系，上海 200032
【正文语种】中文
【中图分类】R-332;R329.24;R364.3;R373.9;R735.350.22
【相关文献】
1.RACK1高表达促进人结肠癌细胞的生长和增殖 [J], 曹超;黄伟;肖志强;易红;
2.RACK1高表达促进人结肠癌细胞的生长和增殖 [J], 曹超;黄伟;肖志强;易红
3.抑制自噬促进贝伐珠单抗对结肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导 [J], 钟漓;赵志
4.肿瘤间质细胞分泌成纤维生长因子10促进结肠癌细胞侵袭 [J], 刘淑丹;陈冬梅;马会明;荣诗阔;刘晓明;梁雪云
5.前列腺素E2通过Gs-Axin-β-Catenin信号途径促进结肠癌细胞生长 [J], 杨鹏远
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现代肿瘤医学 2017 年 02 月第25 卷第 03 期 MODERN ONCOLOGY，Feb.2017, VOL.25, NO.03• 345 •抑制自噬促进贝伐珠单抗对结肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导钟滴，赵志Inhibition of autophagy promote Bevacizumab - induced growth inhibition and apoptosis of colon cancerZhong Li, Zhao ZhiGastrointestinal Department ^the Affiliated Hospital o f Guilin Medical College ^Guangxi Guilin 541QQQ, China.【Abstract】Objective:To explore the relationship between anti - VEGF and autophagy. Methods：After HT - 29cells treated with Bevacizumab in the absence or presence of CQ,we explored apoptosis,proliferation and autophagy.Results： VEGF were upregulated in colorectal cancer. Moreover, patients with high VEGF expression showed significantly shorter overall survival. In addition, Bevacizumab inhibited the viability of human colon cancer cells in a dose -and time - dependent manner and induce apoptosis. At the last, treatment with Bevacizumab induced protective autophagy in colon cancer cells. Conclusion： Inhibition of autophagy promotes the effect of growth inhibition and apoptosisof colon cancer.【Key words】anti - VEGF，Bevacizumab，autophagy，colon cancerModem Oncology 2017,25(03) ：0345 -0351【摘要】目的:探讨抑制肿瘤血管内皮生长因子和自噬的相互关系。
方法:利用贝伐珠单抗和（或）自噬抑制剂氯喹与结肠癌细胞HT -29共同孵育后，检测其生长抑制，凋亡及自噬发生的情况。
结果:在人结直肠癌石蜡切片中,VEGF的表达明显增高，并且表达高的患者预后较差。
利用贝伐珠单抗可以抑制结肠细胞的增殖、凋亡以及诱导细胞保护性自噬的发生。
利用氯喹抑制自噬后，能够促进贝伐珠单抗对细胞的增殖抑制和凋亡诱导。
结论:抑制自噬能够促进贝伐珠单抗对结肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导。
【关键词】抗VEGF;贝伐珠单抗；自噬;结肠癌【中图分类号】R735. 3 + 5 【文献标识码】A D O I：10. 3969/j. issn. 1672 -4992. 2017. 03. 003【文章编号】1672 -4992 - (2017)03 -0345 -07据统计，结直肠癌在男性肿瘤的发病率中占据第三位，在女性肿瘤发病率中占据第二位[1]。
在2008年,全球有1.2 亿新发结直肠癌患者，并有608 700例患者死于结直肠癌。
尽管近年来随着全直肠系膜切除术（TME)及全结肠系膜切 除术（CME)技术的推广以及化疗药的不断进步，结直肠癌患 者的生存率得到明显的提高。
但是对于肿瘤晚期及化疗耐药的患者，其预后仍然较差[2]。
因此,结直肠癌对于健康仍 是一个巨大的威胁。
近年来，靶向治疗的应用给结直肠癌的患者带来了希望。
这其中又尤其以抗肿瘤血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF )抑制血管生成最为引人关注。
抗血管治疗这一理论是由Judah Folkman于1971年提出，是 以抑制肿瘤细胞的血管形成来达到抑制肿瘤的生长这一理 论作为基础[3]。
近年来以贝伐珠单抗为代表的抗VEGF治 疗在临床已取得巨大成效[4'5]。
但是仍有一部分出现对抗【收稿日期】2〇16_〇6-23【修回日期】2〇1(5-〇8-18【基金项目】吴阶平医学基金项目（编号:320. 6750.13390)【作者单位】桂林医学院附属医院胃肠外科，广西桂林541000 【作者简介】钟漓（1969 -),男，广西人,副教授，主要从事胃肠道疾病的研究。
E - m a il: zhongli0302@ 163 • com VEGF耐药的现象。
因此，目前仍亟待发现新的治疗结直肠 癌的方法。
自唆也叫自我吞噬,是一种高度保守的生理过程，对于 维持正常细胞平衡以及清除受损的细胞器、长周期蛋白等起 着至关重要的作用[6]。
近年来，自噬在肿瘤中的作用日益受 到关注。
越来越多的文献报道自噬在肿瘤的发生、发展中起 着举足轻重的作用。
许多肿瘤细胞在低氧、化疗应激、营养 缺乏的情况下通过上调自噬从而保护肿瘤细胞免受伤害[7]。
这就意味着自噬对于肿瘤细胞来说是一种保护性机制。
近 年来有文献报道自噬抑制剂可以促进抗肿瘤药物的疗效。
因此，抑制自噬是一种潜在的抗肿瘤策略[8]。
基于以上理论，在本研究中我们探讨利用贝伐珠单抗抑 制肿瘤细胞的血管生成能够诱导肿瘤的保护性自噬;如果能 够诱导细胞的保护性自噬，抑制肿瘤的自噬是否能够促进贝 伐珠单抗对肿瘤的杀伤作用。
以期待为结肠癌在治疗方面 提供一定的实验数据。
1材料和方法11临床病例筛选回顾性分析110例从2004年到2013年在桂林医学院附 属医院被病理诊断为结直肠癌患者的石蜡切片。
纳人标准 如下:①病理学证实为结直肠癌;②术前未接受新辅助治疗；• 346 •钟漓，等 抑制自唆促进贝伐珠单抗对结肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导③无多发性肿瘤及手术达到R0切除;④术后根据NCCN接 受完整的化疗;⑤术后随访资料完整。
110例病人中，75例 男性、35例女性。
中位年龄53岁（25 ~77岁）。
中位随访时 间35个月（8 ~90个月）。
利用免疫组织化学法分析石蜡切 片中VEGF的表达强弱，并分析蛋白表达的强弱与患者临床 病理资料及预后的关系；在免疫组化实验中，我们按照蛋白 在肿瘤细胞中的表达强度和面积来评分。
表达强度评分如 下：阴性,〇分;弱阳性,1分;强阳性,2分。
表达面积评分如 下：10% ~25%,1 分;26% ~50% ,2 分;51% ~70%,3 分；> 70%,4分。
表达面积和表达强度相加大于等于4分者定义 为高表达;而小于4分者则定义为低表达。
1.2细胞培养人结肠癌细胞HT-29培养于含10%胎牛血清的RBMI 1640培养液中，37T：、5%C02、饱和湿度环境的条件下连续 培养，倒置相差显微镜观察细胞形态。
1.3试剂人结肠癌细胞株HT - 29购自上海生科院；胎牛血清、RBMI 1640培养液购自Hyclone公司；兔抗人VEGF、兔抗人 LC3、兔抗人 p - actin购自 Cell Signaling Technology(CST,美 国）公司,羊抗兔IgG二抗购自康为试剂公司（中国，广 州）；3 -(4,5 -二甲基噻唑-2) -2,5 -二苯基四氮唑溴盐 (MTT)、氯喹购自 Sigma - Aldrich 公司（美国）；Lipofectami-ne™2000试剂购自Invitrogen公司(美国）；贝伐珠单抗购自 罗氏公司；GFP- LC3、Annexin V - FITC凋亡试剂盒购自凯 基生物公司（中国）；BALB/c雌性裸鼠购自桂林医学院动物 中心。
1 •4 Western blot检测蛋白的表达将收集的细胞加人100 ~ 15CV1裂解液，置于冰上15分 钟，用细胞刮子将细胞裂解，然后将混合液移人1.5ml EP管 中放置于4T： 12 O OOr/min的离心机离心10 ~ 15分钟，然后 将上清移人离心管中放人沸水中煮5mm，BCA法测定蛋白 浓度。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离胶的浓度为10% ,上 样浓度为20~5(Vg。
然后以恒压60V电泳约半小时，待溴 酚蓝到达分离胶时，改用100V恒压直至溴酚蓝电泳至分离 胶底部，停止电泳。
转膜，染色，洗脱，封闭，常温下孵育2h 后分别加人稀释的抗体;孵育过夜，漂洗，加人辣根过氧 化物酶（HRP)标记的二抗；室温下孵育1h，TBST洗3次，加 人ECL发光液后放人机器曝光。
1.5 pEGFP- LC3瞬时转染细胞转染方法按照Lipofectamine™2000说明书进行。
将pEGFP- LC3转染人细胞48h后，将细胞与贝伐珠单抗孵 育24h。
然后，利用Zelss LSM710共聚焦显微镜分析细胞荧 光强弱。
1.6电子显微镜观察自噬囊泡将细胞以5 xlO5接种于6孔板,孵育过夜后长至培养 板的70%~80%左右，加人贝伐珠单抗，阴性对照组只加培 养基，培养24h;收集细胞，用2. 5%戊二醛溶液固定细胞2 小时，磷酸漂洗液漂洗，酒精梯度脱水,纯丙酮+包埋液(2: 1)室温3 ~4小时，固化后再用超薄切片机切片50 ~60mn，染色后拍摄。
1.7 MTT比色法检测细胞增殖抑制调整细胞悬液浓度接种于96孔板中。
加人贝伐珠单抗 和（或）氯喹24h后弃培养液，再加人2(V1MTT(5mg/ml)溶液,4h后每孔加人150^1 DMSO,低速振荡lOmin，在酶联免 疫检测仪490mn波长处测量各孔的吸光度，同时设置调零孔 和对照孔,每组设5个复孔。
按以下公式计算抑制率，抑制 率（％) =[1 -(阳性组OD值-调零孔OD值)/(空白组OD 值-调零孔OD值）]X100%。
1.8流式细胞仪（FCM)测定细胞凋亡实验按照凯基公司Annexin V- FITC凋亡试剂盒说明书 进行，具体步骤如下:将细胞以每孔(3 ~5) X105个接种于6 孔板上，培养过夜后长至培养皿的70% ~ 80%左右,弃去培 养液，用PBS冲洗细胞两次，加人贝伐珠单抗和（或）氯喹,阴性对照组只加培养基，培养24h后处理;丢弃各孔中的培 养液,用无菌PBS液冲洗细胞两次;用不含EDTA的胰酶消 化收集各组细胞，用PBS洗两次；离心去PBS,加人50(^1 Binding Buffet■悬浮细胞;加人2|jd Annexin V和 5|jd PI,混匀；室温、避光、反应5 ~15mm;l h内进行流式细胞仪检测，激发波长488mn。