华支睾吸虫CsSCCRO基因的克隆表达和蛋白纯化

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华支睾吸虫19kDa分泌型蛋白(CsSP19)基因的克隆、表达与免疫学功能研究

维普资讯
２００７，２（１３１）
ＣｈｉｅｅＪｒａｆＺｏｏｓｓｎｓＯｕｎｌｏｏｎｅ
中国人兽共患病学报
１９Ｏ７
文章编号：０２６４２０１１７ —０１０ —２９（０７１ — ０９４Ｊ
疫学功能。方法利用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫全长ｃＮＡ质粒文库中发现一个编码分泌型蛋白的新基因（隆Ｄ克
号Ｃ０４０）将去除信号肽序列的编码序列克隆到原核表达质粒ｐＴ２ａ＋），ＰＧ诱导表达，物经亲和层析纯化，ｓ０ｆ３，Ｅ一８（中１Ｔ产并制备大鼠免疫血清，ｅｔｒ—ｌｔ法分析其抗原性和分泌性。结果Ｗｓｅｎｂ方ｏＣＳ１ｓＰ９开放阅读框（ＲＦ有５４ｐ编码１８个氨基Ｏ）６ｂ，８
ｐｅｓｄｉｃｌＢ／ｒｓｅｎＥ．ｏｉＬ２ＤＥ３ａｔｒｉｄｃｉｎｗｉｈＩＴＧ．Ｍｅｎｉ，ｈｘｒｓｅｒｄｃｆｅｕｉｉａｉｎｗｉｆｉｉｙｃｒ — １ｆｅｕｔｔＰｎｏａｗｈｌｔｅｅｐｅｓｄｐｏｕｔａｔｒｐｒｆｔｔａｆｎｔｈｏｅｃｏｈ
ＡＢＴＳＲＡＣＴ：ｃＡＤＮＡｌｎｎｏｉｇａｎｖｌｅｒｔｒｒｔｉｓｉｏａｅｒｍｄｕｔＣｌｎｒｈｓｉｅｓｓｆｌｌｎｔＤＮＡｃｏｅｅｃｄｎｏｅｃｅｏｙｐｏｅｎｗａｌｔｄｆｏａｌｓｓｏｏｃｉｎｎｉｕｌｅｇｈｃｓ

华支睾吸虫Rho GTPase重组蛋白免疫保护效果

华支睾吸虫Rho GTPase重组蛋白免疫保护效果谢红艳;胡旭初;徐劲;余新炳【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2010(28)3【摘要】目的探讨华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)Rho GTPase重组蛋白的免疫保护效果。

方法将20只8周龄SD大鼠随机均分为2组,重组蛋白实验组(A 组)和PBS对照组(B组)。

A组共免疫5次,首次和第2周分别用Cs-Rho GTPase重组蛋白(90μg/ml)1ml加等体积福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂稀释后背部、足垫多点皮下注射,第4、7和11周分别用Cs-Rho GTPase重组蛋白(90μg/ml)1ml 腹腔注射。

B组用PBS加佐剂免疫小鼠。

末次免疫后,即灌胃感染华支睾吸虫囊蚴(50个/只),感染后第21天起每隔3～5d粪检1次,待查见虫卵后,计数虫卵数,并用乙醚麻醉处死大鼠,剖检胆管和胆囊中华支睾吸虫成虫。

采集各次免疫前小鼠尾静脉血,ELISA法测定血清IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。

统计分析各组平均成虫数、虫卵数及抗体水平差异。

结果 A组检获平均成虫数为(9.2±9.9)条、每克粪便平均虫卵数为(956.8±1062.5)个,B组分别为(23.25±15.75)条和(3062.5±2501.8)个,两组差异有统计学意义(P<0.05)。

A组血清的抗体吸光度(A450值)分别为IgG(0.1、0.45、0.65、0.6、0.65)、IgG1(0.1、0.45、1.1、1.0、1.1)、IgG2a(0.1、0.7、1.1、1.1、1.1),而B组IgG、IgG1和IgG2a吸光度(A450值)均维持在0.1水平,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。

结论 Cs-Rho GTPase重组蛋白可诱导SD大鼠产生较好的抗华支睾吸虫感染的免疫保护作用。

【总页数】4页(P176-179)【关键词】华支睾吸虫;Rho;GTPase;免疫【作者】谢红艳;胡旭初;徐劲;余新炳【作者单位】广州医学院基础学院机能学实验中心;中山大学基础医学院寄生虫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R383.22【相关文献】1.华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析 [J], 赵俊红;胡旭初;徐劲;胡凤玉;周红娟;胡慧霞;郑小凌;李艳文;余新炳2.华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定 [J], 谢红艳;胡旭初;徐劲;吕刚;陈守义;魏全德;李艳文;吴忠道;余新炳3.日本血吸虫Rho GTPaseDNA及重组蛋白免疫保护效果研究 [J], 张冉;易新元;曾宪芳;张顺科;Larry McReynolds4.巨型艾美球虫重组蛋白Gam82-Y和重组质粒pcDNA-gam82的免疫保护效果研究 [J], 彭昊;许金俊;刘丹丹;李建梅;陶建平5.日本血吸虫Rho GTPase DNA疫苗及重组蛋白疫苗免疫保护机制初探 [J], 张冉;易新元;曾宪芳;张顺科;蔡春;Larry McReynolds因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析

进一步研究该蛋白的功能奠定隆；织蛋白酶Ｄ；冬氨酸蛋白酶；疫原性华基组天免
中图分类号：３３２文献标识码：Ｒ８．Ａ
ＣｌｎｎｇａｒｋｒｏｉｘｅｓｏｆｃｔｅｓｎＤｉｓｒｉｏｅｓｅｅｏｉｎｄｐｏａｙｔｃｅｐｒｓｉｎｏａｈｐｉｌｋｅａｐａｔｃｐｒｔａｅｇｎｏｏｏｃｉｉｅｓｓａｄａａｙｉｆｉｕｏｅｉｉｙｏｈｅｏｉａｔｐｏｅｎｆＣｌｎｒｈｓｓｎｎｉｎｎｌｓｓｏｍｍｎｇｎｃｔｆｔｅｒｃｍｂｎｎｒｔｉ
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２００８，２（）４１
中国人兽共患病学报
ＣｈｉｓｏｕｎａｆＺｏｏｓｓｎｅｅＪｒｌｏｏｎｅ５
文章编号：０２６４２０）１０５４１０ —２９（０８０ —００ —０
ＺＨＡＯｕ — ｏｇ，ＪｎｈｎＨＵ — ｈ，ＸｕｃｕＸＵｉＨＵｎ－ｕ，Ｊｎ，ＦｅｇｙＺＨＯＵｎ－ｕｎ，ＨｏｇｊａＨＵｉｉ，Ｈｕ— ａｘ
ＺＨＥＮＧａ —ｉＸｉｏｌｎｇ，ｎ— ｎ，ＬＩＹａｗｅＹＵｎｂｉＸｉ — ｎ（ｐｒｍｅｔｆＰａａｉｏｏｙ．ｈｎｓａｄｉａｃｏｌｕｔｓｎＵｎｖｒｉｙ，ＤｅａｔｎｒｓｔｌｇＺｏｇｈｎＭｅｃｌＳｈｏ，ＳｎＹａ—ｅｉｅｓｔｏＫｅｂｒｔｒｏｏｉａｓａｅＣｎｒｌａｄＰｒｖｎｉｎｏｈｎｓｒｆＥｄｕａｉｎ，Ｃｕｎｈｕ５０８ｙＬａｏａｏｙｆｒＴｒｐｃｌＤｉｅｓｏｔｏｎｅｔｏｆｔｅＭｉｉｔｙｏｅｃｔｏｒａｇｚｏ００，Ｃｉａ１ｈｎ）

华支睾吸虫病诊断抗原的筛选及ELISA诊断试剂盒的研制的开题报告

华支睾吸虫病诊断抗原的筛选及ELISA诊断试剂盒的研制的开题报告一、研究背景和意义华支睾吸虫病是人畜共患的寄生虫病，广泛分布于亚洲、非洲和南美洲等地。

其主要传播途径是通过食用未煮熟或未煮透的淡水鱼类感染。

病人主要表现为肝功能异常、腹水、黄疸等症状，严重时可出现肝硬化和肝癌等并发症。

目前，华支睾吸虫病的诊断方法主要是通过病人血液或粪便中检测虫卵进行诊断，这种方法不仅存在误诊率高，而且还需要人工显微镜检查，影响诊断效率。

因此，开发一种敏感、快速、准确的诊断试剂盒，对于华支睾吸虫病的早期诊断和治疗具有重要的意义。

二、研究内容和目标本研究旨在筛选出适于华支睾吸虫病抗原检测的IgG单克隆抗体，利用该抗体研制华支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒。

具体研究内容包括：1. 病人血清样本的筛选：筛选出具有明确诊断的病人血清样本。

2. 抗原的制备：利用华支睾吸虫成虫体提取抗原。

3. 重组抗原的制备：利用基因工程技术制备华支睾吸虫病抗原。

4. 单克隆抗体的制备：通过酶联免疫吸附试验等方法，筛选出适于华支睾吸虫抗原检测的IgG单克隆抗体。

5. 试剂盒的制备：利用该单克隆抗体研制华支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒，并进行初步验证。

研究目标是成功筛选出适用于华支睾吸虫病抗原检测的IgG单克隆抗体，并研制出华支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒。

三、研究方法和步骤1. 病人血清样本的收集和筛选：利用常规方法采集病人外周血，进行病人诊断和病程观察，筛选出符合分析要求的病人血清样本。

2. 抗原的制备：采用华支睾吸虫成虫体提取抗原，液氮冻存处理。

3. 重组抗原的制备：采用PCR扩增华支睾吸虫基因，克隆到表达载体中，大量表达纯化。

4. 单克隆抗体的制备：采用酶联免疫吸附试验等方法，筛选出适于华支睾吸虫抗原检测的IgG单克隆抗体。

5. 试剂盒的制备：利用该单克隆抗体研制华支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒。

包括：（1）涂层抗原的制备：液氮冻存的华支睾吸虫抗原，充分溶解并浓缩，铺涂于96孔微板中。

华支睾吸虫PPMP型抗原基因的克隆、表达与免疫原性鉴定

华支睾吸虫PPMP型抗原基因的克隆、表达与免疫原性鉴定许学年;周岩;董玉婷;谭裕光;包意芳;徐斌;程娜;许洪波;黎学铭;冯正【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2010(28)6【摘要】目的筛选华支睾吸虫成虫cDNA表达文库,寻找和鉴别新颖的抗原基因,并分析其重组蛋白的免疫原性方法以华支睾吸虫病患者混合血清免疫筛选华支睾吸虫成虫λZAP cDNA表达文库,将阳性噬菌体克隆、测序,对获得的核苷酸序列进行生物信息学分析。

将目的基因成熟肽的编码区克隆至原核表达质粒pET28b(+),转化至大肠埃希菌BLR(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。

用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化表达产物,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。

以纯化的重组蛋白pET28b-Cs2免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,ELISA检测抗体水平。

结果共获得44个阳性克隆,其中3个克隆的氨基酸序列中均含有PPMP重复序列,将其命名为华支睾吸虫PPMP型抗原,将其中含有KPPMPGDRDA、QPPMPGGRDA串联重复多肽序列的抗原分别称为PPMPⅠ型和PPMPⅡ型抗原。

经核苷酸序列同源性比较,PPMP型抗原是一个新的华支睾吸虫特异性抗原家族。

PPMPⅠ型的Cs2基因和PPMPⅡ型的Cs3基因的成熟肽编码区在大肠埃希菌BLR(DE3)或BLR(DE3)pLysS中表达,并获得可溶性重组蛋白,2个重组蛋白的相对分子质量分别为M_r 22 000和M_r 39 000。

重组蛋白可被华支睾吸虫病患者血清所识别。

ELISA结果显示,免疫小鼠可产生高滴度(1:64000)特异性IgG抗体。

结论发现华支睾吸虫PPMP型抗原基因家族,其重组蛋白具有较强的免疫原性。

【总页数】5页(P401-405)【关键词】华支睾吸虫;免疫学筛选;克隆;序列分析;原核表达;免疫原性【作者】许学年;周岩;董玉婷;谭裕光;包意芳;徐斌;程娜;许洪波;黎学铭;冯正【作者单位】中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,上海200025;广西壮族自治区疾病预防控制中心,南宁530028【正文语种】中文【中图分类】R383.22【相关文献】1.华支睾吸虫特异性富甘氨酸2a类抗原基因的克隆、表达和免疫学诊断价值评价[J], 许学年;周岩;张鸿满;包意芳;徐斌;欧阳颐;程娜;黎学铭;冯正2.华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析 [J], 张波;郑葵阳;张蓓蓓;李波;华慧;李向阳;刘转转;颜超;付琳琳;汤仁仙3.华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价 [J], 周岩;许学年;姚恺龄;张鸿满;程娜;包意芳;张陆娟;徐斌;江河;黎学铭;Peter Chun;冯正4.大豆主要过敏原Gly m Bd 30K的抗原表位区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定 [J], 林苏霞;王晓梅;刘志刚;曾梦雅;吴研;陈家杰5.华支睾吸虫F_0-ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析[J], 周红娟;胡旭初;胡凤玉;徐劲;马长玲;郑小凌;陈晓湘;余新炳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫组织蛋白酶Cathepsin L1样基因全长序列的克隆和生物信息学分析

华支睾吸虫组织蛋白酶Cathepsin L1样基因全长序列的克隆和生物信息学分析胡旭初;李艳文;徐劲;胡凤玉;赵俊红;余新炳【期刊名称】《中国病原生物学杂志》【年(卷),期】2008(3)7【摘要】目的预测华支睾吸虫全长cDNA质粒文库中cs002d09号EST序列的结构和功能特征及编码蛋白的应用前景。

方法利用NCBI和ExPaSy等生物信息学网站在线分析工具和Vector NTIsuite及PcGene等软件包，分析华支睾吸虫全长cDNA质粒文库中cs002d09号EST序列及其编码蛋白的理化性质、结构与功能特征。

结果BLASTx分析该ESF序列是组织蛋白酶Cathepsin L1的同源基因，全序列长为1458bp，包含完整的编码区80～1191，编码371个氨基酸，前18个氨基酸是分泌信号肽，蛋白的理化性质较稳定。

该蛋白有2个空间构象相对独立功能域：N端的抑制功能域和C端的活性功能域，抑制功能域含有3个线性B细胞抗原表位，同源性较低；C端活性功能域同源性较高，Cys177，His318和Asn338组成催化中心，位于底物结合裂缝的底部。

结论华支睾吸虫Cathepsin Ll 基因与多个物种的Cathepsin L1基因同源，编码蛋白可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分，在华支睾吸虫病的免疫诊断和疫苗研究方面有较好的应用前景。

【总页数】6页(P508-513)【关键词】华支睾吸虫;Cathepsin;L1;生物信息学;免疫诊断;疫苗【作者】胡旭初;李艳文;徐劲;胡凤玉;赵俊红;余新炳【作者单位】中山大学基础医学院寄生虫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R383.22【相关文献】1.华支睾吸虫Rap2B样基因的生物信息学分析及其克隆、表达 [J], 王乐旬;余新炳;黄灿;刘玲;胡旭初;徐劲2.华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析 [J], 赵俊红;胡旭初;徐劲;胡凤玉;周红娟;胡慧霞;郑小凌;李艳文;余新炳3.华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶全长基因的生物信息学分析 [J], 胡凤玉;赵俊红;胡旭初;徐劲;余新炳4.日本血吸虫组织蛋白酶L1基因的编码区全序列分析及克隆 [J], 雷智刚;孟锦绣;何蔼;李卓雅;易冰;詹希美5.肝片吸虫组织蛋白酶L1基因cDNA序列的克隆与分析 [J], 张韧;李海云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫CsTMP630基因的克隆、表达及感染者抗体亚类分析

ｇｅｎｅＣｓＴＭＰ６３０．Ｍｉｃｅｗｉｔｈａｎｔｉｂｏｄｙｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｗｅｒｅｅｖａｌｕｓｔｅｄ．Ａｎｔｉｂｏｄｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｗａｓ
学诊断效果。方法：根据ＣｓＴＭＰ６３ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ序列号：ＡＦ０９３２４２）基因序列，拼接其多个跨膜区片段，人工
合成新基因ＣｓＴＭＰ６３０，制备抗原免疫小鼠，检测抗体效价，建立抗体检测系统，初步分析感染者针对ＴＭＰ６３０的特异性抗ｃ基因，全长２０１３ｂｐ，由大肠杆菌表达、纯化．得到分子量为３８ｋＤ的重组蛋白。免疫大鼠后，抗体效价较低；感染者的抗体亚类分布以
ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＨＵＸｕ．ｃｈｕＥ．ｍａｉｌ：ｈｎｈｘｃｈ０５１３＠１６３．ｃｏｎｒ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｉｔｖｅＴｏｃｌｏｎｅａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅＣｓＴＭＰ６３０ｇｅｎｅ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓｅｆｆｅｅｔｏｎｔｈｅｉｎｆｅｃｔｅｒｓａｎｔｉｂｏｄｙｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＣｓＴＭＰ６３ｃ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎ：

华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的扩增、克隆及表达

华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的扩增、克隆及表达吴德;余新炳;徐劲;吴忠道;陈守义;何东苟【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2004(22)5【摘要】目的构建编码华支睾吸虫 3 磷酸甘油酸激酶基因的原核表达载体 ,并分析其在大肠埃希菌中的表达。

方法用Trizol法从华支睾吸虫 3 成虫体内提取总RNA ,并将其反转录成cDNA。

根据华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶的已知基因 ,利用DNAclub和PCRdesign软件设计合成一对特异引物 ,从合成的cDNA中 ,用PCR技术扩增出目的片段。

将目的片段和原核表达载体同时双酶切后连接 ,重组体转入JM10 9大肠埃希菌 ,用双酶切、PCR和测序筛选阳性克隆。

挑选 1个阳性菌落 ,用异丙基β D 硫代半乳糖苷诱导表达 ,表达产物进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)鉴定。

结果用逆转录聚合酶链反应技术扩增出 1条12 48bp大小的片段 ,PCR产物测序鉴定正确 ;转化后得到 10个克隆 ,双酶切、PCR扩增鉴定 ,其中 6个为阳性克隆 ;表达产物用SDS PAGE鉴定 ,在相对分子质量 70 0 0 0处有 1条与理论预测的融合蛋白大小相一致的特异条带。

结论成功构建重组原核表达载体pGEX 4T 1 PGK 。

【总页数】3页(P306-308)【关键词】华支睾吸虫;原核表达载体;扩增;大肠埃希菌;酶基因;鉴定;油酸;激酶;阳性克隆;酶切【作者】吴德;余新炳;徐劲;吴忠道;陈守义;何东苟【作者单位】中山大学中山医学院病原生物学部【正文语种】中文【中图分类】R383.22;Q78【相关文献】1.华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆和表达 [J], 吴德;余新炳;吴忠道;徐劲;陈守义;胡旭初;彭寨玉;何东苟2.酿酒酵母3—磷酸甘油酸激酶基因（PGK1）启动子片段的亚克隆 [J], 刘玉方;朱邦民3.华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析 [J], 吴德;吴忠道;胡旭初;何东苟;黄艳;余新炳4.日本血吸虫磷酸甘油酸激酶基因T/A克隆及序列分析 [J], 梁瑜;肖建华;廖力;伍和平;张愉快;刘传爱;杨秋林5.华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶基因的分子表达、蛋白纯化与定性 [J], 裴福全;长野功;吴志良;崔惠儿;张贤昌;高桥优三因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

浅论华支睾吸虫病免疫学诊断方法的研究进展

浅论华支睾吸虫病免疫学诊断方法的研究进展【摘要】华支睾吸虫寄生于人和犬、猫等动物的肝胆管内，造成肝胆的一系列疾病，是一种重要的人兽共患寄生虫病。

选择快速、准确的诊断方法对防治该病十分重要，免疫学检测方法现已广泛用于华支睾吸虫病的诊断，本文就目前华支睾吸虫病免疫学检测方法的研究进展作一概述。

【关键词】华支睾吸虫病;免疫;诊断Training Center of Air Force Academy,Jinzhou 121000 China)Abstract: Clonorchis sinensis parasitises in the bile ducts of human and dogs, cats and other animals. Clonorchiasis is a serious zoonotic parasitic disease causing a series of liver and gallbladder disease. So choosing fast and accurate diagnostic way of treatment is important to prevent and cure the disease. Nowadays, immunologicaldetection has been widely used in the diagnosis of clonorchiasis. This paper provides an overview on research progress in ways of immunological detection of clonorchiasis.Key words: clonorchiasis sinensis; immunization; diagnosis华支睾吸虫病(Clonorchiasis)，又称肝吸虫病，是因生食或半生食含有华支睾吸虫幼虫的淡水鱼虾而感染的一种重要的人畜共患寄生虫病。

华支睾吸虫CsTC基因产物的体外制备及免疫学研究

华支睾吸虫CsTC基因产物的体外制备及免疫学研究张咏莉;吴德;徐劲;吴忠道;余新炳【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2007(023)003【摘要】目的体外制备华支睾吸虫CsTC基因工程蛋白,并进行免疫学研究.方法用组氨酸标签亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白CsTC.将CsTC蛋白免疫BALB/c小鼠,制备其多抗血清.酶联免疫吸附(ELISA)检测抗血清抗体滴度,蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其抗血清的特异性.结果纯化蛋白CsTC的浓度为(0.78±0.03)mg/ml,纯度达90%.间接ELISA结果显示,免疫过程中抗体滴度持续上升.Western-blot结果显示,免疫小鼠血清具有抗CsTC特异性.结论本研究制备的CsTC基因工程蛋白和抗CsTC抗血清可较好地用于后续CsTC的基因功能鉴定.【总页数】4页(P259-261,268)【作者】张咏莉;吴德;徐劲;吴忠道;余新炳【作者单位】广东药学院基础学院生物教研室,广州,510224;广东省疾病控制中心,广州,510300;中山大学基础医学院病原生物学部寄生虫教研室,广州,510089;中山大学基础医学院病原生物学部寄生虫教研室,广州,510089;中山大学基础医学院病原生物学部寄生虫教研室,广州,510089【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.华支睾吸虫19kDa分泌型蛋白(CsSP19)基因的克隆、表达与免疫学功能研究[J], 郑小凌;胡旭初;马长玲;周红娟;胡慧霞;魏泉德;赵俊红;余新炳2.华支睾吸虫病的免疫学诊断研究进展 [J], 孙彦涛;彭鸿娟3.华支睾吸虫病免疫学诊断方法的研究进展 [J], 徐鹏;刘孝刚;付平4.华支睾吸虫病免疫学诊断方法的研究进展 [J], 李妍;于申业;刘相叶;王瑞;王佳;魏利斌5.华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白的纯化、酶学活性及免疫学研究 [J], 张咏莉;吴德;余新炳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫蛋白酶体β2新基因的识别与克隆表达

华支睾吸虫蛋白酶体β2新基因的识别与克隆表达杨光;荆春霞;朱佩娴;徐劲;吴忠道;余新炳【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2006(022)008【摘要】目的识别华支睾吸虫蛋白酶体β2亚单位新基因(CsPSMB2),表达其重组蛋白,为进一步研究CsPSMB2的功能奠定基础.方法通过大规模cDNA文库随机测序,发现CsPSMB2新基因.并将其定向插入到pGEX-4T-1载体中.构建成功的载体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定.结果发现了编码PSMB2基因的一个新成员CsPSMB2,CsPSMB2全长708个核苷酸,编码一个201个氨基酸残基的蛋白,理论分子量为22.5kD,预测的蛋白与人的PSMB2蛋白同源性为58%并且含有一个蛋白酶体结构域,成功登录GeneBank,登录号为AY849972.构建成功重组质粒pGEX-4T-1-CsPSMB2,经IPTG诱导后表达出PSMB2的GST融合蛋白.结论发现华支睾吸虫新基因CsPSMB2,成功构建了pGEX-4T-1-CsPSMB2重组表达载体并表达出了CsPSMB2的GST融合蛋白.为进一步研究CsPSMB2在华支睾吸虫中的功能和可能的应用研究奠定基础.【总页数】4页(P720-723)【作者】杨光;荆春霞;朱佩娴;徐劲;吴忠道;余新炳【作者单位】暨南大学医学院寄生虫教研室,广州,510632;暨南大学医学院流行病学教研室,广州,510632;暨南大学医学院寄生虫教研室,广州,510632;中山大学基础医学院寄生虫学教研室;中山大学基础医学院寄生虫学教研室;中山大学基础医学院寄生虫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.华支睾吸虫卵黄前体蛋白B基因的识别、序列分析和克隆表达 [J], 黄艳;吴忠道;吴德;胡旭初;余新炳2.华支睾吸虫蛋白酶体α2新基因的生物信息学分析与克隆表达 [J], 杨光;周天鸿;李月琴;荆春霞;胡旭初;余新炳3.华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定 [J], 谢红艳;胡旭初;徐劲;吕刚;陈守义;魏全德;李艳文;吴忠道;余新炳4.华支睾吸虫蛋白酶体β1新基因克隆与表达 [J], 杨光;荆春霞;朱佩娴;吴忠道;徐劲;余新炳5.日本血吸虫新基因——蛋白酶体激活因子PA28亚单位的发现与克隆 [J], 彭鸿娟;王瑾雯;陈晓光;高锦雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

两个华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因克隆、表达与定性(英文)

两个华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因克隆、表达与定性(英文)裴福全;Isao Nagano;吴军;WuZhi-liang;崔惠儿;Yuzo Takahashi;潘波;方悦怡【期刊名称】《热带医学杂志》【年(卷),期】2004(4)1【摘要】目的寻找对华支睾吸虫病诊断有效的抗原基因,以便生物合成并研究其应用价值。

方法选取两个Genbank已报告的基因序列AF271091(CysA)及AF093242(CysB)分别克隆与表达融合蛋白,亲和层析纯化后进行免疫定性。

结果CysA与CysB均获得成功克隆与表达,Western blot分析显示CysA与华支睾吸虫病阳性血清有强反应,与日本血吸虫病阳性血清只有很弱的交叉反应,而CysA与华支睾吸虫感染血清无反应。

免疫组化显示,被表达的两个半胱氨酸蛋白酶在华支睾吸虫体内的免疫定位无显著不同,主要在成虫肠道及虫卵。

结论成功表达的两个半胱氨酸蛋白酶中,CysB针对华支睾吸虫病血清有良好的抗原活性,值得视为诊断抗原候选做进一步的研究。

【总页数】6页(P10-14)【关键词】华支睾吸虫;重组半胱氨酸蛋白酶;基因表达;克隆;华支睾吸虫病;诊断【作者】裴福全;Isao Nagano;吴军;WuZhi-liang;崔惠儿;Yuzo Takahashi;潘波;方悦怡【作者单位】广东省疾病预防控制中心寄生虫病防治研究所;Department of Parasitology,Gifu University School of Medicine,Gifu 500-8705,Japan【正文语种】中文【中图分类】R383.22;R394【相关文献】1.华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析 [J], 赵俊红;胡旭初;徐劲;胡凤玉;周红娟;胡慧霞;郑小凌;李艳文;余新炳2.华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆和表达 [J], 吴德;余新炳;吴忠道;徐劲;陈守义;胡旭初;彭寨玉;何东苟3.镰形扇头蜱两个组织蛋白酶L-样半胱氨酸蛋白酶新基因的克隆与序列分析 [J], 陈灵芝;周金林;周勇志;龚海燕;李培英4.华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆表达及其生物信息学分析 [J], 何勉;梁凯;郑宝;唐莉莉;何姗姗;刘登宇;李艳文5.华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因表达与在ELISA诊断上的应用研究(英文) [J], 裴福全 ;Isao Nagano ;Zhiliang Wu ;吴军 ;阮彩文 ;崔惠儿 ;Yuzo Takahashi ;方悦怡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫的一个μ型GST基因的表达、纯化与免疫反应性鉴定

华支睾吸虫的一个μ型GST基因的表达、纯化与免疫反应性鉴定伍忠銮;余新炳;吴德;徐劲;吴忠道;胡旭初【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2004(025)002【摘要】[目的]扩增华支睾吸虫一个μ型谷胱甘肽转移酶(mu-class glutathione transferase of Clonorchis sinensis,CsGSTM)基因,明确是否存在内含子,进行原核表达,纯化其表达产物,鉴定免疫反应性.[方法]用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增出目的基因,测序,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,按照Ni-NTAagarose说明书纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、薄层色谱(thin-layer chromatography,TLC)和免疫印迹(Western blotting)分析.[结果]CsGSTM基因全长657 bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a(+)-CsGSTM在大肠杆菌中得到了有效表达,Mr,pET-30a(+)-CsGSTM=31×103.重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度为98%,重组蛋白在纯化前后均有免疫反应性.[结论]CsGSTM基因没有内含子,在大肠杆菌中能有效表达,纯化前后的重组蛋白都具有免疫反应性.【总页数】5页(P105-109)【作者】伍忠銮;余新炳;吴德;徐劲;吴忠道;胡旭初【作者单位】中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广东,广州,510080;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广东,广州,510080;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广东,广州,510080;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广东,广州,510080;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广东,广州,510080;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R383.2+2【相关文献】1.日本血吸虫PA28亚单位蛋白的表达与鉴定、纯化及免疫反应性的评价 [J], 彭鸿娟;陈晓光;李华;王春梅2.登革Ⅱ型病毒E蛋白第三结构域在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫反应性鉴定[J], 雷子庆;苏裕心;郑学礼3.弓形虫SAG1的高密度发酵表达、纯化及免疫反应性鉴定 [J], 李华;言慧;陈白虹;刘敏;陈晓光4.截短形式弓形虫SAG1抗原在大肠杆菌中的可溶性高效表达、纯化及免疫反应性鉴定 [J], 言慧;李华;周晓红;吴昆;陈晓光5.华支睾吸虫GST的新编码基因的克隆与纯化 [J], 伍忠銮;余新炳;吴德;徐劲;吴忠道;王海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫一个谷胱甘肽转移酶新基因的克隆与表达

华支睾吸虫一个谷胱甘肽转移酶新基因的克隆与表达伍忠銮;余新炳;吴德;徐劲;吴忠道;胡旭初【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2004(020)006【摘要】目的克隆华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)谷胱甘肽转移酶(glutathione transferase,GST)的一个新基因,并在大肠杆菌中表达.方法用PCR方法从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库中扩增新基因CsGST1,对DNA及其推导的氨基酸进行序列分析.将CsGST1克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,用SDS-PAGE鉴定重组蛋白.结果从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库扩增出642 bp的CsGST1,序列分析显示它所编码的氨基酸序列与麝猫后睾吸虫GST的同源性最高(88%),并具有GST N-末端和C-末端的保守功能域.构建了重组质粒pET-30a(+)-CsGST1,SDS-PAGE显示CsGST1在大肠杆菌中得到了高效表达,PET-30a(+)-CsGST1的蛋白条带的分子量约为30 kDa.结论成功构建了CsGST1的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达,为进一步研究该基因的功能打下了基础.【总页数】3页(P489-491)【作者】伍忠銮;余新炳;吴德;徐劲;吴忠道;胡旭初【作者单位】中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广州,510089;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广州,510089;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广州,510089;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广州,510089;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广州,510089;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广州,510089【正文语种】中文【中图分类】R383.2【相关文献】1.华山松大小蠹谷胱甘肽S-转移酶基因DaGSTe1的克隆与表达 [J], 马俊宁;代鲁鲁;张然然;陈辉2.犬源华支睾吸虫28 ku谷胱甘肽S-转移酶的原核表达与反应原性分析 [J], 陈爱华;王春仁;陈佳;王宇;朱兴全;程玉楠;倪宏波3.虾夷马粪海胆谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆与表达分析[J], 丁君;常亚青;孙巍4.葡萄风信子谷胱甘肽S转移酶基因克隆与表达分析 [J], 杨慧萍;刘雅莉;娄倩;刘妮妮5.华支睾吸虫蛋白酶体β1新基因克隆与表达 [J], 杨光;荆春霞;朱佩娴;吴忠道;徐劲;余新炳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析

华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析吴德;吴忠道;胡旭初;何东苟;黄艳;余新炳【期刊名称】《中国寄生虫病防治杂志》【年(卷),期】2005(18)1【摘要】目的通过筛选华支睾吸虫成虫 cDNA质粒文库,寻找、识别新基因,并将其编码区克隆到原核表达质粒pGEX 4T 1中,表达出融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础。

方法用文库通用引物对华支睾吸虫 cDNA 质粒文库进行PCR扩增,对产物为500 bp以上的质粒进行测序,测序结果在NCBI 和ExPasy 网站上进行序列分析,识别华支睾吸虫新基因,并应用ORFfind、ClustalW、NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行开放阅读框、进化树及结构域分析。

根据 pGEX 4T 1上的多克隆位点及所发现的新基因cDNA 编码序列设计引物,进行PCR 扩增,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1 上。

构建的重组表达质粒经 PCR、双酶切及测序鉴定,并对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS PAGE电泳鉴定。

结果发现CsGAPDH基因,完整阅读框含1 017 个碱基对,编码339 个氨基酸,理论分子质量单位为37.024 09 ku ,理论pI为6.66 。

序列分析显示,CsGAPDH与曼氏血吸虫GAPDH的同源性为78%,具有GAPDH保守功能域。

所构建的重组原核表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符。

SDS PAGE电泳显示表达产物在63 ku处有1条特异性条带。

结论发现华支睾吸虫 GAPDH基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。

【总页数】5页(P28-32)【关键词】华支睾吸虫;磷酸甘油醛脱氢酶;克隆;原核表达;序列分析【作者】吴德;吴忠道;胡旭初;何东苟;黄艳;余新炳【作者单位】中山大学中山医学院病原生物学部【正文语种】中文【中图分类】R383.22【相关文献】1.樟叶越桔甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因VdGAPDH1的cDNA克隆与序列分析 [J], 熊宏;陈海涛;宋健;赵平;刘小烛;丁勇2.箭箸豌豆甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因片段的克隆及序列分析 [J], 张磊;刘志鹏;张吉宇;张妙青;王彦荣3.粘虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因cDNA的克隆、序列分析及表达量检测 [J], 李柯;阴环;奚耕思;廉振民4.斑玉蕈甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因克隆与序列分析 [J], 张津京;陈辉;冯志勇;陈明杰;汪虹5.毛竹甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与序列分析 [J], 杨洋;张智俊;罗淑萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华支睾吸虫抗原定位,生化及免疫学特性初步分析

华支睾吸虫抗原定位,生化及免疫学特性初步分析
王四清;邝丽贤
【期刊名称】《中国人兽共患病杂志》
【年(卷),期】1993(009)006
【摘要】本文在制备了华支睾吸虫全虫粗抗原（ＣｓＡｇ）、代谢抗原（ＥｓＡｇ）、表膜抗原（ＭＡｇ）及其相应抗血清的基础上，应用石蜡和冰冻两种连续组织切片、ＩＦＡＴ、ＩＧＳＳ、ＰＡＰ三和免疫化学方法对华支睾吸虫抗原定位进行了较系统的研究。

结果表明：虫体定位器官主要是肠管，睾丸，储精囊和虫卵卵黄膜。

两种切片抗原定位的主要区别是虫体皮层，石蜡切片未见皮层有抗原性，而冰冻切片虫体皮层有抗原性性。

在此基础上应用ＩＥ、Ｓ
【总页数】4页(P16-19)
【作者】王四清;邝丽贤
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R383.2
【相关文献】
1.华支睾吸虫膜抗原/排泄分泌抗原酸性磷酸酶的克隆、表达、生物学特征分析及
组织定位 [J], 郑明慧;胡坤华;张彤;刘炜;余新炳
2.细粒棘球蚴(中国大陆株)抗原zw-5基因的表达、纯化及免疫学特性初步分析 [J], 于晶晶;王娅娜;于辛酉;师志云;卜阳;赵巍
3.华支睾吸虫成虫代射抗原的化学及免疫学特性的研究 [J], 崔巍;王尊哲
4.日本血吸虫排泄分泌抗原的生化及免疫学特性研究 [J], 宋小平;刘多
5.华支睾吸虫成虫三种抗原的免疫学特性比较 [J], 崔巍;王尊哲;黄红;梁瑞文;耿秀芳
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华支睾吸虫分泌蛋白基因(CsCrSP)的克隆和生物信息学分析

5.华支睾吸虫组织蛋白酶Cathepsin L1样基因全长序列的克隆和生物信息学分析 [J], 胡旭初;李艳文;徐劲;胡凤玉;赵俊红;余新炳
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【总页数】3页(P212-214)
【关键词】华支睾吸虫;分泌蛋白;克隆
【作者】陈守义;李军涛;徐劲;魏权德;谢红艳;胡旭初;余新炳
【作者单位】中山大学基础医学院;广州市疾病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】R383.22
【相关文献】
1.华支睾吸虫蛋白酶体α2新基因的生物信息学分析与克隆表达 [J], 杨光;周天鸿;李月琴;荆春霞;胡旭初;余新炳
2.华支睾吸虫Rap2B样基因的生物信息学分析及其克隆、表达 [J], 王乐旬;余新炳;黄灿;刘玲;胡旭初;徐劲
3.华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆表达及其生物信息学分析 [J], 何勉;梁凯;郑宝;唐莉莉;何姗姗;刘登宇;李艳文
4.吉陶单极虫可分泌蛋白酶基因的克隆与生物信息学分析 [J], 张凤丽; 杨雅麟; 夏锐; 高辰华支睾吸虫分泌蛋白基因(CsCrSP)的克隆和生物信息学分析
陈守义;李军涛;徐劲;魏权德;谢红艳;胡旭初;余新炳
【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
【年(卷),期】2006(2对,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifscan,NCBIConservedDo-mainSearch等程序对其进行结构域及进化树分析。结果筛选出华支睾吸虫未知基因Pcs004f03序列,含689bp;应用VecterNTI分析,理论相对分子质量(Mr)为21000,完整的ORF含561bp,编码187aa。该基因有潜在的糖激化位点、3个N肉豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、cAMP-andcGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点。利用软件在线搜索发现在第1～50aa内有一明显的信号肽,初步推断CsCrSP为一种分泌蛋白。结论CsCrSP基因为华支睾吸虫富含半胱氨酸分泌蛋白基因。