DC与CIK共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究.

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DC与CIK共培养后对白血病细胞杀伤活性的研究

DC与CIK共培养后对白血病细胞杀伤活性的研究李曼;王春;陈宝安;李翠萍;傅强【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2005(20)5【摘要】目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与同源树突状细胞(DC)共培养后CIK细胞的增殖活性、表型的变化,及其对K562、HL-60白血病细胞细胞毒作用的影响.方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC),置于37℃,5%CO2培养箱培养2 h,收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,贴壁细胞诱导分化出成熟DC,将成熟DC和CIK细胞按1:5的比例混合培养3天,用MTT法检测DC-CIK共培养细胞杀伤K562和HL-60白血病细胞株的活性.结果DC-CIK共培养后增殖速度明显快于单纯CIK细胞组(P＜0.05);培养第14天,CIK中CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞的比率分别为58.6%±7.3和26.5%±6.2,DC-CIK的CD3+CD8+、CD3+CD56+的比率分别为72.5%±4.2和38.4%±6.1,表达差异显著(P＜0.05);在2.5:1～20:1的效靶比范围内,DC-CIK对K562、HL-60细胞的杀伤活性较单纯CIK细胞组的杀伤活性要高(P＜0.05).结论DC与CIK共培养细胞是增殖活性和细胞毒活性均高于CIK细胞的免疫活性细胞.【总页数】4页(P465-468)【作者】李曼;王春;陈宝安;李翠萍;傅强【作者单位】210008,南京大学附属鼓楼医院;210008,南京大学附属鼓楼医院;210009,东南大学附属中大医院;210009,南京红十字血液中心;210009,南京红十字血液中心【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.脐血DC与CIK共培养对白血病K562细胞杀伤活性的影响 [J], 李鹏鑫;李贵新;路中;张金龙;张敏2.肿瘤RNA转染DCs与同源CIKs共培养调控Akt/NF-κB细胞生存信号通道的实验研究 [J], 庞俊;湛海伦;刘伟鹏;高新3.树突状细胞与CIK细胞共培养诱生的DCCIK细胞群对肿瘤的杀伤作用 [J], 庄捷;曹晖;刘祥麟;张尚权4.抗原负载的DC和CIK共培养后对MGC-803的杀伤活性 [J], 杨葳;吴小娥;王云虹;高锦;徐铭宝5.慢性髓性白血病负载抗原的树突状细胞与CIK细胞共培养后体外增殖和特异性杀伤效率的研究 [J], 郑转珍;乔振华;鹿育晋;朱镭;李国霞;张丽;崔月娥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

DC-CIK 过继细胞免疫治疗原发性肝癌的研究进展

DC-CIK 过继细胞免疫治疗原发性肝癌的研究进展祖余琪;薛平【摘要】原发性肝癌（以下简称肝癌）临床往往较难早期发现，确诊时往往病情已进入中、晚期，病死率高。

目前肝癌的治疗主要是以手术切除、肝移植、局部消融、化学治疗栓塞及其他局部区域治疗、分子靶向治疗等，但这些方法的治疗效果并不理想，患者5年存活率仍然较低。

目前细胞免疫治疗现在得到了越来越多的重视，采用树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer， CIK）的细胞免疫治疗是其中方法之一。

DC 和 CIK 细胞是恶性肿瘤免疫治疗的两个重要因素，两者之间的相互作用及所诱发的免疫应答是免疫治疗的重要部分。

现就DC-CIK 过继细胞治疗原发性肝癌的研究进展予以综述。

%Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common malignant tumor in China. HCC is difficult to find and confirm in early stage. Most of patients were in advanced stage when the symptom or signs were presented.The various treatments of HCC,.such as liver resection, transplantation, local ablation , chemotherapy , and molecular targeted therapy , have not improved the 5-years survival rate efficiently. Cell-based therapies is now gaining more and more attention since some success have been achieved, and DC combined CIK cells therapy is one of these attempts. DC and CIK cells are two important factors for cancer immunotherapy..The interaction between them and induced immune response are important parts of the treatment. The advance of DC-CIK cell therapy for HCC is reviewed in this paper.【期刊名称】《岭南现代临床外科》【年(卷),期】2014(000)002【总页数】3页(P214-216)【关键词】DC-CIK 过继细胞免疫治疗;原发性肝癌【作者】祖余琪;薛平【作者单位】510288 广州广州医科大学附属第二医院肝胆外科;510288 广州广州医科大学附属第二医院肝胆外科【正文语种】中文【中图分类】R657原发性肝癌作为我国高发的恶性肿瘤，目前手术仍然是最重要的治疗方法，但总体效果不满意。

DC-CIK共培细胞联合其他方法治疗肝癌的研究进展

DC-CIK共培细胞联合其他方法治疗肝癌的研究进展罗涛;许仲平;吴传有;龚建平【摘要】肝癌是人类健康的主要威胁之一，特别是在我国慢性乙肝发病率非常高，因慢性乙肝最终发展成为原发性肝癌的患者数量也居全球之首。

细胞免疫疗法近年来成为肿瘤治疗研究的热点，其中尤以DC-CIK细胞最为突出，将DC和CIK细胞共培养用于各种恶性肿瘤的临床治疗中均取得了不俗的成绩。

目前国内临床医生也将DC-CIK细胞治疗与目前存在的各种治疗方法相结合，用于治疗原发性肝癌，取得了较好的疗效。

本文就DC-CIK联合其他方法治疗原发性肝癌做一综述。

【期刊名称】《现代临床医学》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P168-171)【关键词】肝肿瘤;细胞免疫疗法;DC-CIK细胞【作者】罗涛;许仲平;吴传有;龚建平【作者单位】重庆市渝北区中医院普外科，重庆 401120;重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010;重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010;重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝癌是人类健康的主要威胁之一，特别是在我国慢性乙肝发病率非常高，因慢性乙肝最终发展成为原发性肝癌的患者数量也居全球之首。

2008年全球约748 300例新发肝癌病例和695 900例肝癌死亡病例[1]，其中半数死亡病例发生在中国。

基于中国肝癌大国的国情，国内学者投入了大量的精力研究肝癌的发病机理及治疗方法的革新。

到目前为止，肝癌切除术仍然是治疗原发性肝癌的最佳治疗方式，但其他如射频消融、肝动脉栓塞化疗、碘粒子放射治疗、细胞免疫治疗等治疗方法也得到了长足的发展。

为取得更好的疗效，临床上探索将各种治疗方式相结合的方式治疗肝癌，形成了一些新的治疗模式。

随着细胞免疫疗法在各种恶性肿瘤的治疗中显示出了突出的优势和巨大的发展潜力，近年来成为了肿瘤治疗研究的热点，其中尤以DC-CIK细胞最为突出。

不同来源CIK与DC细胞联合治疗中晚期肺癌的临床研究1

ｃａｓｅｓ
ａｎｄｕｎｂｉｉｉｃａｌｃｏｒｄ
ｂｌｏｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ
ｏｆ
ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ（ＣＲ），７
ｏｆ
ｏｆ
ｐａｒｔｉａｌ
ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ（ＰＲ）ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎｔｈｅ２１ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｌｉｆｅｑｕａｌｉｔｙｈａｖｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅ＆Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０１）ａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ
ｔｒｅａｔ
ｗｅｒｅ
２ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｈａｒｍａｃｙＡｂｓｔｒａｃｔｈｏｍ０１０９０ｕｓ
ｗｅｒｅ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ａｎｄ
Ｔｏｉｎｄｉｖｄｕａｌｉｚｅｄｃｏｒｄｂｌｏｏｄ
ａｄｖａｎｃｅｄ
ｃａｎｃｅｒ。Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒ
１材料和方法
１．１．１临床资料２００５年９月～２００７年９月在我院住院并经病理确诊的肺癌患者２１例，年龄５９．３±９．７岁，男性ｌＯ例，女性１１例：其中肺鳞癌４例，腺癌１５例，小细胞肺癌２例：按ＴＮＭ国际分期法：ＩＩＩ期５例，Ⅳ期１６例；２１例有可测量病灶，远处转移１６例，其中转移肝４例，肾上
ａｎｅｗ
ｆｏｒｔｈｅｍｏｄｅｒａｔｅ
ａｎｄａｄｖａｎｃｅｄ
ｌｕｎｇｔｈｅｍ。
ａｃｃｏｒｄｉｎｇ
ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｐｒｏｖｉｄｅ
ａｎｄｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓｉｎｍｕｎｉｔｙｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔｏｏｌ
ｓｔａｇｅ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

自体DC—CIK细胞联合替吉奥治疗中晚期肝癌的疗效观察

ＨＩＥ是新生儿窒息最常见的并发症之一．也是造成围产期新生儿死亡和儿童伤残的重要原因之一，如何改善其预后，提高生存质量，备受关注。
ｌ资料和方法
１．１对象２００８年３月至２００８年６月在本院儿科住院和随访的ＨＩＥ患儿４４例，符合《实用新生儿学》的诊断标准，其中男孩３０例，女孩１４例。中度ＨＩＥ３８例，重度ＨＩＥ６例。根据随机分配原则分为干预组和对照组各２２例。１．２方法两组患儿在住院期间，均给予常规治疗，在此基础上，对照组仅对＋ＪＬ进行简单的育儿和健康指导。干预组在常规治疗的同时，早期给予抚触（头颅、躯干、四肢等），每日早晚各１次，１５ｍｉｎ／次：每日定时播放轻柔背景音乐、摇铃、床旁悬挂红球。出院后争取家长同意和配合，建立保健随访卡，制定早期干预措施，包括神经细胞药物康复治疗和功能康复治疗。神经细胞康复治疗包括营养神经细胞药物如脑蛋白水解物、胞二磷胆碱等，７ｄ为１个疗程，次／月，共６个月。功能康复治疗包括物理治疗（Ｐ，ｒ）、语言治疗（ｓＴ）和感知、视听、语言、记忆和动作训练；指导家长在家中进行按摩和做婴儿操。由专人负责随访，每个月指导家长１次，每２次指导间期进行电话督导。指导或督导家长在家庭中对小儿进行视听、运动、感知觉方面的训练，如在ｄ，ＪＤ觉醒时，给予全身抚触、观看鲜艳的玩具或气球，收听音乐或玩具的响声，在日常喂养和护理中不断给小儿讲话、唱歌，增进亲子间的感情交流，在适宜的环境下协助婴儿做体操等。两组患儿于生后３、６、１２个月由经过专门培训的医务人员进行体格和精神运动两方面的检查，体格发育检查包括身高、体重和头同等的测量；精神运动发育商检查采用首都儿科研究所修订的发育评价表，从粗大运动、精细动作、前语言、认知及社会交往５个方面进行评价，发育商（ＤＱ）＝（测得的发育成熟年龄／实际年龄）×１００，ＤＱ＞９０为正常，９０～７５为可疑异常，＜７５为异常。１．３统计学方法计量资料以Ｘ± ｓ表示，采用ｔ检验。

DC-GPC3联合CIK细胞的体外抗肝癌作用

DC-GPC3联合CIK 细胞的体外抗肝癌作用韩秋青1，姜锦2，王玉亮3,4△摘要：目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）基因转染的树突状细胞（DC-GPC3）与细胞因子诱导杀伤细胞（CIK ）共培养（DCIK-GPC3）后，对CIK 的生物活性及体外抗肝癌细胞作用。

方法流式细胞术检测DCIK-GPC3、DC-CIK 及CIK 各组效应细胞免疫表型，MTT 法检测各组效应细胞培养上清液中白细胞介素（IL ）-2生物活性，酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测细胞培养上清液中IL-2、干扰素γ（IFN-γ）浓度。

乳酸脱氢酶释放实验分别检测各组效应细胞对肝癌HepG2细胞的细胞毒活性。

结果DCIK-GPC3表面高表达CD3+CD8+和CD3+CD56+双阳性细胞，与DCIK 及CIK 比较差异有统计学意义（P ＜0.05）；CIK 、DCIK 、DCIK-GPC3培养上清液中IL-2生物活性、浓度以及IFN-γ浓度均依次升高，组间多重比较差异有统计学意义（P ＜0.05）；在20∶1及50∶1效靶比，CIK 、DCIK 、DCIK-GPC3对HepG2细胞的细胞毒活性依次升高，组间多重比较差异均有统计学意义（P ＜0.05）。

结论CIK 与DC-GPC3共培养可获得更强的体外杀伤肝癌细胞活性，为DCIK-GPC3用于临床免疫治疗提供了理论和实验依据。

关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖类；树突细胞；细胞因子类；肝肿瘤；白细胞介素2中图分类号：Q784文献标志码：ADOI ：10.11958/20170998Antitumor effects of DC-GPC3cocultured with CIK on hepatocellular carcinoma in vitroHAN Qiu-qing 1,JIANG Jin 2,WANG Yu-liang 3,4△1Tianjin Ninghe District Miaozhuang Town,Health Center,Tianjin 301507,China;2Department of Stomatology,Tianjin First Central Hospital;3Department of Clinical Laboratory Medicine,the 2nd Hospital ofTianjin Medical University;4Tianjin Institute of Urology△Corresponding Author E-mail:wang_yu_l@Abstract:Objective To investigate biological activity and antitumor effects of phosphatidylinositol-3(GPC3)genetransfected dendritic cells (DC,DC-GPC3)co-cultured with cytokine induced killer cells (CIK)on hepatocellular carcinoma (HCC).MethodsThe phenotypes of effector cells were analyzed by flow cytometry.Levels of interleukin (IL)-2andinterferon (IFN)–γwere determined by MTT colorimetry and enzyme-linked immunosorbent assay,respectively.The cytotoxic activity against hepatocarcinoma cells (HepG2)was measured by lactate dehydrogenase release.ResultsTheproportions of CD3+CD8+and CD3+CD56+double-positive cells were significantly elevated in the DCIK-GPC3compared with the DCIK and CIK (P ＜0.05).Compared with the DCIK and CIK,the DCIK-GPC3showed significantly higher levels of secreted IL-2and IFN-γin the supernatants (P ＜0.05).The antitumor effect of DCIK-GPC3against HepG2was the highestthan that of DCIK and CIK at an effector-target ratio ranging from 20∶1to 50∶1(P ＜0.05).Conclusion DCIK-GPC3canenhance the cytotoxic activity against hepatocarcinoma cells in vitro .This study provides a theoretical and experimental basis for clinical immunotherapy using DCIK-GPC3.Key words:glypican;dendritic cells;cytokines;liver neoplasms;interleukin-2基金项目：天津市卫生行业重点攻关项目（16KG105）；国家自然科学基金资助项目（81470982）作者单位：1天津市宁河区苗庄镇卫生院（邮编301507）；2天津市第一中心医院口腔科；3天津医科大学第二医院检验科；4天津市泌尿外科研究所作者简介：韩秋青（1971），男，大专，副主任技师，主要从事临床检验研究△通讯作者E-mail ：wang_yu_l@肝癌是全球第五大恶性肿瘤，具有很高的发病率和死亡率，全球每年约有62万患者被新诊断为肝癌［1］。

DC—CIK细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤机理研究

DC—CIK细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤机理研究目的患者外周血贴壁单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）诱导的树突状细胞（dendritic cells，DCs）与杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK）对人肝癌HEPG2细胞系周期、凋亡的影响。

方法用经GM-CSF，TNF、及IL-4等诱导该患者PBMC产生的DCs。

用IFN-y，IL-2和人CD3单克隆抗体（human CD3 monoclonal antibody hCD3mAb）等诱导该PBMC的悬浮细胞产生CIK细胞。

用Transwell培养小室将DC-CIK细胞与HEPG2细胞在同一培养体系内经该小室膜分隔培养24.48 h。

流式细胞仪检测该HEPG2细胞的周期；Annexin VII双染法检测其凋亡。

RT-CR，Western blot分别检测凋亡相关基因Bax及其编码蛋白的表达。

结果DC-CIK细胞可明显影响人HEPG2细胞生长周期，两者共培养，可将HEPG2细胞系阻滞于G期。

DC-CIK细胞能显著诱导HEPG2细胞的凋亡，与对照相比，其凋亡诱导率差异显著（P 2”之疗效。

为提高晚期实体瘤患者的生活质量并延长其生存期，我们将自身CIK细胞联合自身DC 用于110例晚期恶性实体瘤患者，取得了较好的在体疗效。

本实验从离体水平研究细胞因子从肝癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell PBMC）诱导的树突状细胞（dendritic cell，DC）与杀伤（cytokine induced killer，CIK）细胞对肝癌HEPG2细胞系周期、凋亡的影响，探讨DC与CIK细胞的离体杀瘤效应及其机制，为肿瘤的自体细胞免疫治疗奠定基础。

肝癌属极常见的恶性肿瘤，现代生物技术的迅猛发展为肝癌的治疗带来了新的希望。

肿瘤生物治疗（免疫细胞、基因、分子靶向、内分泌及干细胞等治疗）己成为继手术、放疗、化疗后第4种治疗手段，并显示出良好的应用前景，受众多医学工作者的广泛关注与高度重视，其中免疫细胞治疗最广泛，亦最能体现生物治疗特色，包括淋巴因子激活的杀伤（LAK）细胞、肿瘤浸润淋巴（TIL）细胞与CD3单抗激活的杀伤（CD3AK）细胞等，体外均具有一定的杀瘤活性，但因细胞的扩增量少，细胞毒力不强，故其临床应用受限。

DC与CIK共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究

DC与CIK共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究【摘要】本研究的目的是观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与同源树突状细胞(DC)共培养后DC-CIK细胞的增殖活性、表型的变化,及其对肝癌细胞细胞毒作用的影响。

采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC),置于37℃,5% CO2培养箱培养2小时,收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,贴壁细胞诱导分化出成熟DC,将成熟DC和CIK细胞按1∶5的比例混合培养3天,用MTT法检测DC-CIK共培养细胞杀伤SMMC-7721肝癌细胞株的活性。

结果显示: DC与CIK细胞共培养后,DC-CIK细胞群的增殖活性和杀伤活性较单纯的CIK细胞更高。

结论:DC与CIK共培养细胞是一种增殖活性和细胞毒活性均高于CIK细胞的免疫活性细胞。

【关键词】肝癌细胞Killing Activity in DC and CIK Co-culture against Hepatocar-cinoma CellsCHEN Bao-An,LI Man,SUN Zai-Yang,LI Cui-Ping,GAO Chong, Sun Yun-YuDepartment of Hematology,Zhongda Hospital,SoutheastUniversity,Nanjing 210009,China; 1Nanjing Red Cross Blood Centre, Nanjing 210092,ChinaAbstract This study was aimed to investigate the proliferation activities and phenotype changes of DC,CIK and DC-CIK,and their cytotoxicity against hepatocarcinoma cells in co-culture of DC withCIK. Peripheral blood mononuclear cells(PBMNC) were isolated from heathy adult donors. After incubation of PBMNC for 2 hours,DCs were induced from adherent cells by some cytokines and CIKs were generated from non-adherent cells. Mature DCs were harvested after incubation for9 days,and then were co-cultured with CIK at ratio of 1:5 for 3 days. The cytotoxicity activity against SMMC-7721 hepatocellular carcinomacell line was detected by MTT assay. The results showed that CIK cells were able to lyse SMMC-7721 hepatocellular carcinoma cells at low ratios of effector to target. This effect was significantly enhanced by co-culture with DCs. It is concluded that CIK cells have high lyticactivity against 7721 hepatocellular carcinoma cell line,which can be enhanced by co-culture with DC. DC-CIK cells are highly effective immune cells.Key word Dendritic cells; cytokine induced killer cells; Immune therapy近年来随着细胞免疫学和分子生物学的发展,恶性肿瘤的细胞免疫治疗已经开始在临床应用,并取得一定疗效。

DC—CIK生物免疫疗法配合放疗在原发性肝癌患者中的临床效果及对生存期的影响研究

DC—CIK生物免疫疗法配合放疗在原发性肝癌患者中的临床效果及对生存期的影响研究目的探讨DC-CIK生物免疫疗法配合放疗在原发性肝癌患者中的临床效果及对生存期的影响。

方法选择2017年1月～2018年2月入院治疗的原发性肝癌患者70例，根据治疗方法分为对照组（n=35例）和观察组（n=35例）。

对照组采用放疗治疗，观察组在对照组基础上联合DC-CIK生物免疫疗法，两组均行3个月，治疗完毕后对患者效果进行评估，比较两组临床疗效及对生存期的影响。

结果观察组治疗后1个月生存率为94.29%（33/35）、3个月生存率为77.14%（27/35）、6个月生存率为65.71%（23/35），均高于对照组（1个月生存率为85.71%（30/35）、3个月生存率为60.00%（21/35）、6个月生存率为48.57%（17/35））（P＜0.05）。

结论将DC-CIK生物免疫疗法配合放疗用于原发性肝癌患者中有助于提高临床疗效，延长患者生存期，值得推广应用。

标签：DC-CIK生物免疫疗法；放疗；原发性肝癌；临床疗效；生存期原发性肝癌是临床上常见的恶性肿瘤，多发生在东南沿海地区，且男性发病率高于女性。

目前，临床上对于原发肝癌发病机制尚不完全知晓，普遍认为与病毒、病毒性肝炎及黄曲霉素等化学物质有关。

由于原发性肝癌发病早期临床症状不典型，多数患者一旦确诊时已经是中、晚期，丧失了最佳手术治疗时机。

为了延长患者寿命，多数患者选择放疗，虽然能延缓病情发展，但是远期预后较差，毒副反应发生率较高，难以达到预期的治疗效果。

研究表明：将DC-CIK生物免疫疗法配合放疗用于原发性肝癌患者中有助于提高临床疗效，延长患者生存期，但是该结论有待验证。

因此，本研究中以2017年1月～2018年2月入院治疗的原发性肝癌患者70例，探讨DC-CIK生物免疫疗法配合放疗在原发性肝癌患者中的临床效果及对生存期的影响，报道如下。

1 资料与方法1.1 临床资料选择2017年1月～2018年2月入院治疗的原发性肝癌患者70例，根据治疗方法分为对照组和观察组。

DC、CIK 联合培养对肿瘤细胞杀伤作用的实验研究

DC、CIK 联合培养对肿瘤细胞杀伤作用的实验研究赵鑫;常颖;刘玉侠;卢卫平;王宝;王哲;于鸿;王启文;王斌【摘要】Objective To discussion of cytotoxicity effects of DC (dendritic cells)and CIK (cytokine-induced cells) co-cultured on lung adenocarcinoma cell line A549,and Compare with CIK alone on A549 killing activity,Provide an ef-fective method for tumor biotherapy.Methods respectively cultured DC,CIK cell,and co-cultured after the identifica-tion,after 3 days,to killing activity experiments on A549 cell,detect cytotoxicity of DC joint CIK and separate CIK a-gainst A549,While using flow cytometry detect lymphocyte subsets expression of DC joint CIK and CIK alone.Results The cytotoxicity of DC joint CIK on A549 was 88.38%,CIK was 66.24%,there were significant differences of cyto-toxic activity on A549(P <0.01)between,the number of lymphocyte subsets (CD3 + ,CD4 + ,NK,NKT,CD3 + HLA-DR+ ,CD8+CD28+ cell)of DC joint CIK was significantly higher than CIK.Conclusion The killing activity of DC and CIK co-cultured on A549 lung cancer has significantly higher than that of single CIK cytotoxicity on A549(P <0.01).%目的：探讨 DC（dendritic cells）、CIK（cytokine-induced killer cells）联合培养对肺腺癌细胞 A549的杀伤活性的影响，并与单独 CIK 对 A549杀伤活性进行比较，为肿瘤生物治疗提供有效方法。

肿瘤全细胞抗原负载的DC及CIK共培养对肾癌细胞杀伤活性的研究

ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ＡｄｏｐｔＣＣＫ－８ｋｉｔｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｋｉｌｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣＩＫＣ，Ｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ、＾，ｉｍＤＣｌｏａｄｅｄｂｙａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ
ｏｒ
ｖａｒｉａｎｔｔｕｍｏｒ
ａｎｔｉｇｅｎ，ａｎｄ
ｓｉｎｇｌｅｃｕｌｔｕｒｅＣＩＫｆｏｒａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｒｅｎａｌ
志ＣＤ８３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＬＡ．ＤＲ的表达，ＣＩＫ细胞检测ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５６的表达。
三、ＤＣ．ＣＩＫ诱导的特异性杀伤作用检测
应用ＣＣＫ．８法检测ＣＩＫ，ＣＩＫ．ＤＣ，ＣＩＫ－ＤＣ．自体Ａ，ＣＩＫ．ＤＣ．异体Ａ分别对肾癌
细胞系７６９．Ｐ及原代培养肾癌细胞的杀瘤活性。
结
果
一、肾癌细胞培养
・中文论著摘要・
肿瘤全细胞抗原负载的ＤＣ与ＣＩＫ共培养对肾癌细胞杀伤活性的研究
目的
采用ＣＣＫ．８检测自体／异体抗原负载的ＤＣ与ＣＩＫ共培养以及无抗原负载的ＤＣ与ＣＩＫ共培养、单独培养ＣＩＫ对自体原代培养肾癌细胞的杀伤活性，探讨肾癌免疫治疗体外不同免疫细胞杀瘤活性差异，为临床上肿瘤抗原不明确的肾癌免疫治疗提供一种新的研究思路。
二、ＤＣ、ＣＩＫ的体外诱导扩增、抗原负载及表型检测
分离自体及健康供外周血单个核细胞体外诱导制备ＤＣ、ＣＩＫ细胞。于第８ｄ天收集ＤＣ、ＣＩＫ细胞，进行共培养，分为无抗原ＤＣ组，自体肿瘤全细胞抗原递呈ＤＣ组，异体肿瘤细胞裂解物抗原递呈ＤＣ组，以ｌＯ：１的比例与培养至第８ｄ的ＣＩＫ混合培养，三天后进行靶细胞杀伤实验。流式细胞仪检测ＤＣ表面成熟标
方法
一、肾癌细胞培养及肿瘤胞抗原制备
采用组织块贴壁法、机械分散法及差速贴壁分离法，混合酶消化法及差速贴壁分离法分离肾癌细胞，比较这几种方法培养肾癌细胞的优劣并优化，体外培养出实验所需短期原代肾癌细胞。超声破碎法获取原代培养肾癌细胞自体肿瘤细胞全抗原，反复冻融法获取异体肾癌细胞系７６９．Ｐ肿瘤细胞全抗原。

DC—CIK细胞联合手术治疗原发性肝癌的临床研究

・
临床研究・
２２９第卷２０年月９第５１期
ＤＣ— ＩＣＫ细胞联合手术治疗原发性肝癌的临床研究
王郑
重庆市开县人民医院外二科，庆重
４５００４０
ｆ要】目的观察手术联合Ｄ — Ｉ摘ＣＣＫ细胞回输患者的临床疗效及３年生存率，为原发性肝癌的生物免疫治疗提供理论依据。方法采集患者外周血单个核细胞进行体外培养获取ＤＣ和ＣＫ细胞，式细胞仪检测；７Ｉ流对６例原发性肝癌患者（实验组）进行手术联合自体Ｄ — ＩＣＣＫ细胞回输，ＲＥＩＴ评价标准进行疗效评价，后随访３年，算生按ＣＳ术计
ｅｈｎｅｔｅｏｅａｌｆｃｅｃｎｅｒｕｖｖｌａｅＴｅｅｏｅｔｅｃｍｂｎｔｎｔｅａｙｍｅｈｄｈｓｇｅｔｒｃｉａａｕ．ｎａｃｈｖｒｌｅｉｎｙａｄ３ｙａｓｓｒｉａｔ．ｈｒｆｒ，ｈｏｉａｉｒｐｔｏａｒａａｔｌｌｅｉｒｏｈｐｃｖ
【ｙｗｒｓＤＣｃｌ；ＩｅｓＰｍｒｖｒａｃｒＣｍｂｎｔｎｔｅａｙＫｅｏｄ】ｅｌＣＫｃｌ；ｒａｙｌｅｎｅ；ｏｉａｉｒｐｓｌｉｉｃｏｈ
原发性肝癌作为一种恶性肿瘤，单纯的肝切除手术治疗不能达到满意的效果。肝癌的发生、发展与机体免疫密切相关Ｉ随着免疫分子和细胞生物学的发展，突状细胞（Ｃ） ” 。树Ｄ与细胞因子诱导的杀伤细胞（Ｉ联合介导的过继免疫细胞ＣＫ）

DC／CIK细胞治疗对肝功能的影响

次，补加Ｉ一。培养至第９Ｌ２天时加入Ｄ细胞共同培养。第１天时收集Ｃ４
Ｄ／Ｉ细胞，将收集培养的细胞用无菌生理盐水洗涤３，细胞分成ＣＣＫ次６，每袋分别加入５袋％人血白蛋白配成１０含细胞的悬液进行静脉５ｍＬ回输。每天回输一次，每次回输细胞数量在（．～２ ×ｔ１５）０，连输６次为１个疗程，细胞总数在（～１） ×１间。每个病人完成２９２０之个疗
转氨酶是一组参与细胞内蛋白质代谢的氨基转移酶，几乎存在于
所有器官和组织细胞中，但以肝脏含量最为丰富。常用于肝功能检查
的主要有丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶。正常时，这两种酶血清内
含量很低。当肝细胞受损后，肝细胞膜通透性增高，血清酶活性迅速
增加，因此，丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶成为肝细胞损伤最敏感的指标，迄今依然被认为是肝细胞损害的 “ 金标准Ｉ细胞第Ｏ加入含ＩＮ－ｄＦｖ、抗Ｃ３Ｄ单抗等无血清生长培养基。
２ｈ４后加人含Ｉ一、Ｉ一等无血清生长培养基。每２ｄＬ１Ｌ２～３更换培养基一
强，杀瘤谱广，无论是对自体还是异体甚至异种肿瘤细胞均可表现出
经病理学或细胞学确诊的晚期癌症１２，男９例，女５例。年５例７５龄２～８岁，中位年龄６岁。肺癌６例，肝癌ｌ例，结肠癌ｌ例，直１３０３４２肠癌８，乳腺癌９，胰腺癌５，卵巢癌５，鼻咽癌５，宫颈癌例例例例例
【要】目的探讨Ｄ／Ｉ摘ＣＣＫ细胞治疗对肝功能的影响。方法回顾性分析１２例接受Ｄ／Ｉ５ＣＣＫ细胞治疗的癌症患者的肝功能资料。结果１２患者中有１５例３例出现肝功能异常，发生率为８５．％。按ＷＨＯ抗癌药物毒性反应分度标准，１３例均为Ｉ。结论Ｄ／Ｉ度ＣＣＫ细胞治疗对癌症患者肝功能有一定影响。但是，如果给予高度重视，早期发现，早期处理，可避免严重后果。

DC 和 CIK 免疫细胞及其在原发性肝癌治疗中的应用进展

DC 和 CIK 免疫细胞及其在原发性肝癌治疗中的应用进展喻晓;孙振纲
【期刊名称】《长江大学学报（自然版）理工卷》
【年(卷),期】2015(000)006
【摘要】树突状细胞（DC）是目前功能最强的免疫提呈细胞，能将抗原信息提呈给淋巴细胞，刺激初始 T 淋巴细胞，完成 T 细胞免疫应答的初始阶段。

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）是一种新型的免疫活性细胞， CIK 增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。

DC 联合 CIK 细胞体外共同培养后回输体内疗法已成为当前治疗肿瘤的热点。

现综述这一疗法在原发性肝癌中的应用。

【总页数】3页(P82-84)
【作者】喻晓;孙振纲
【作者单位】长江大学医学院，湖北荆州 434020;长江大学荆州临床医学院荆州市中心医院肝胆外科，湖北荆州434020
【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
【相关文献】
1.抗原致敏DC联合CIK在原发性肝癌治疗中的应用 [J], 钟国成;张小玉;孙薏;匡红;敬新蓉;闵敏;廖皓;陈健
2.DC 和 CIK 免疫细胞及其在原发性肝癌治疗中的应用进展 [J], 喻晓;孙振纲
3.DC 和 CIK 免疫细胞及其在原发性肝癌治疗中的应用进展 [J], 喻晓;孙振纲
4.射频消融在原发性肝癌治疗中的应用进展 [J], 吴垒;孟弘婧;董胜利
5.DC-CIK免疫治疗在原发性肝癌治疗中的应用进展 [J], 吴永杰;赵振林
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负载抗原的DC与CIK共培养对多药耐药肝癌细胞HepG2／ADM的杀伤作用及其机制研究

负载抗原的DC与CIK共培养对多药耐药肝癌细胞HepG2／ADM的杀伤作用及其机制研究徐巧元;杨志祥;罗阔【摘要】Objective To observe the killing effects of the antigen‐loaded dendritic cells(DC) and cytokine‐in‐duced killer cells(CIK ) on multidrug resistance liver cancer line HepG2/ADM with highly expressed permeability glycoprotein(P‐gp) and to explore its potential mechanisms .Methods DC cells and CIK cells were induced from the peripheral blood in healthy volunteers ′by the conventional methods ,and DC cells were impacted with HepG2/ADM cells aft er frozen‐thawed antigen ,which were co‐cultured with CIK cells for 24 ,48 ,72 ,96 h respectively .The DC cells without antigen‐loading and CIK cells were co‐cultured as control .The cell phenotype of DC and CIK was identified by the flow cytometry ,the cell proliferation vitality of HepG2/ADM was detected by CCK‐8 ;The expression of mdr‐1 mRNA was determined by realtime‐PCR ,the P‐gp protein level was detected by Western blot .Results Compared with non‐antigen‐loaded DC‐CIK group ,the expression of surface molecules in the antigen‐loaded DC‐CIK group was significantly increased(P< 0 .05) ,the vitality of HepG2 cells was inhibited more significantly (P < 0 .05) .The RT‐PCR and Western blot results showed that with the time extension ,the expression of mdr‐1 mRNA and P‐gp protein both were significantly decreased in the above two groups respectively(P<0 .05) ;Furthermore ,the inhibitory effects was more significant in theantigen‐loaded group(P< 0 .05) .Conclusion The co‐culture of DC and CIK after antigen im pact could improve its killing activity to multidrug‐resistant HepG2/ADM cell line ,its potential mechanism may be via inhibiting the MDR closely related mdr‐1 gene expression and its encoded P‐gp protein level .%目的：观察负载抗原的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK ）对高表达 P‐糖蛋白（P‐gp）的多药耐药（MDR）的肝癌细胞株 HepG2／ADM 细胞的杀伤作用和机制研究。

DC-CIK逆转晚期肝癌

DC-CIK逆转晚期肝癌陈先生36岁，是国务院某部委干部。

近段日子经常腹胀、乏力，整个人消瘦了许多。

作为国家干部，陈先生深知身体是革命的本钱，决定去医院做个全身检查。

英年早逝难道真是命运的安排?检查显示肝癌已经到晚期，犹如晴天霹雳的结果让陈先生一时间无法接受，难道英年早逝就是自己的命运吗?说到底，如今落下的这病是因长期工作繁忙，操劳过度所致。

为了看病，陈先生不得不休假。

辗转多处病情却越来越糟辗转多家医院治疗，可陈先生的病不但没有半点起色，反而身体状况越来越糟了，化疗、放疗这些传统的治疗方法都已经尝试过，却无济于事。

如今病灶波及全肝，多发门脉癌栓，腹水明显，失去了多种治疗方法，肝移植也困难。

北京301医院以及他家乡华西医科大学拒绝收治。

难道只能等死吗?陈先生不甘心，继续寻找着治疗晚期肝癌的办法，皇天不负苦心人，几经周折，陈先生终于从一个远房亲戚那里得知沧州人民医院肿瘤生物医学科运用DC-CIK生物细胞免疫治疗肝癌。

DC-CIK生物细胞治疗晚期肝癌得以逆转抱着试试看的态度，陈先生来到沧州人民医院肿瘤生物医学科，找到了吴彬教授治疗。

经过检查和详细的问诊之后，吴彬教授如实告诉他，依目前的病情，已经无法做放化疗和手术，推荐他DC-CIK生物细胞免疫治疗。

DC-CIK生物细胞免疫技术是提取肿瘤患者自体外周血免疫细胞提取后，利用科技手段进行培养、扩增、激活后，再回输入患者体内，根据细胞特异性全身游走循环，靶向杀死癌细胞，并且不受年龄身体素质限制，无特殊要求，适用于多数肿瘤患者。

目前较常用的细胞治疗包括DC(树突状细胞)、CIK(细胞因子诱导杀伤细胞)、CTL(特异性肿瘤杀伤细胞)、NK(自然杀伤细胞)等，生物细胞技术发展迅速，不断进步创新，被称为治疗肿瘤的“第四大支柱”，其与手术、化疗、放疗相结合起到了肿瘤领域治疗的重要地位，2013年《科学》杂志将肿瘤免疫治疗评为年度十大科技进展之首,在第37-39届美国临床肿瘤学会(ASCO)上,肿瘤免疫治疗仍是大会的焦点，是目前肿瘤治疗手段最为安全、无痛、无副的治疗手段。

DC-CIK细胞对人肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响研究的开题报告

DC-CIK细胞对人肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响研究的开题报告一、研究背景和意义肝癌是一种最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率在全球范围内均呈上升趋势。

传统的治疗手段如外科手术、化疗以及放疗等效果均有限。

因此，越来越多的研究者开始探索新的治疗策略。

免疫治疗是近年来备受关注的新兴治疗方式之一。

DC-CIK细胞作为一种免疫治疗手段，在治疗肝癌方面具有很大的潜力。

DC-CIK细胞是由外周血中的单核细胞经过特殊的处理和培养而得到的，具有高度的免疫活性。

DC-CIK细胞不仅能够抑制肝癌细胞的增殖和迁移，还能够促进人体免疫细胞的活性，从而增强肝癌患者的自身免疫能力，遏制肿瘤的发展。

因此，DC-CIK细胞作为肝癌治疗的一种新的方法受到了广泛的关注。

目前，大量的研究表明，DC-CIK 细胞具有显著的抗肿瘤活性，但关于其具体的分子机制以及对肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响情况，还有待进一步的探讨和研究。

本研究旨在进一步研究DC-CIK 细胞对人肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响，以期为临床治疗提供重要的参考。

二、研究方法1. 实验材料HepG2 肝癌细胞系、DC-CIK 组织细胞学试剂盒、CCK8 细胞增殖试剂盒、Annexin V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒、Transwell 渗透器、PCR 仪、Western blot 仪等。

2. 实验设计①组织细胞学检测肝癌细胞表面标志物；②细胞周期分析；③细胞凋亡检测；④细胞增殖检测；⑤细胞迁移检测；⑥分子机制研究，包括 Western blot 分析等。

三、预期结果本研究旨在探究 DC-CIK 细胞对肝癌细胞的抗癌作用和机制，预计将得到以下几个方面的研究结果：① DC-CIK 细胞能够显著影响肝癌细胞的细胞周期，增加 S 期的比例；② DC-CIK 细胞能够显著诱导肝癌细胞凋亡；③ DC-CIK 细胞能够显著抑制肝癌细胞的增殖；④ DC-CIK 细胞能够显著抑制肝癌细胞的迁移；⑤ DC-CIK 细胞能够通过一系列的分子机制参与到肝癌细胞的抗癌作用中。

DC—CIK细胞疗法对肝癌患者免疫功能的影响

DC—CIK细胞疗法对肝癌患者免疫功能的影响目的探讨DC-CIK细胞疗法对肝癌患者免疫功能的影响。

方法选取2012年12月～2013年12月来我院就治患有肝癌的患者36例来分析DC-CIK细胞疗法对肝癌患者免疫功能的影响以及疗效，通过对比这些患者之间均没有显著性差异，因此，具有可比性，P>0.05，将这些患者进行随机分组，即治疗组（16例）与对照组（20例），对治疗组患者给予常规治疗+DC-CIK细胞疗法来进行临床治疗，而对对照组患者给予常规治疗+CIK细胞疗法来进行治疗，通过治疗3个疗程后来观察、对比两组患者的治疗疗效以及对患者免疫功能的影响。

结果治疗组患者的总有效率为81.3%，而对照组患者的总有效率为70%，因此，治疗组患者的治疗疗效高于对照组患者的治疗疗效，两组患者之间具有显著性的差异，具有统计学意义，P 0.05。

1.2 方法对治疗组患者给予常规治疗+DC-CIK细胞疗法来进行临床治疗，而对对照组患者给予常规治疗+DC-CIK细胞疗法来进行治疗，通过治疗3个疗程后来观察、对比两组患者的治疗疗效以及对患者免疫功能的影响。

1.3 检测方法这些患者经过治疗3个疗程后，对其抽取40μl的外周抗凝血，并且其中加入4μl抗体，然后再加入PBS进行混匀、离心、弃上清，然后对溶液进行检测，检测患者外在血液中的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比率以及Th1/Th2 细胞因子水平[2]。

1.4 统计学方法对这两组患者进行使用SPSS15.0统计软件做统计学分析。

治疗前后均数间比较采用配对t 检验，组间均数比较采用成组t 检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2结果治疗组患者的总有效率为81.3%，而对照组患者的总有效率为70%，并且患者的Th1/ Th2 细胞因子水平也明显高于对照组患者细胞因子水平[3]，因此，治疗组患者的治疗方法优于对照组患者的治疗方法，两组患者之间具有显著性差异，P＜0.05，见表1。