丹酚酸B_丹参注射液_去铁胺对大鼠脑匀浆铁依赖性脂质过氧化的影响

丹酚酸B 、丹参注射液、去铁胺对大鼠脑匀浆铁依赖性脂质过氧化的影响11　广东省重点学科资助课题;2　湖南湘潭锰矿医院;3　湖南医科大学湘雅医院儿科作者简介:周永刚,男,32岁,硕士研究生,主要从事衰老生化研究,现在桂林医学院生化教研室周永刚　肖　鹰2　杨于嘉3　陈　翔3　陶永光3　祝其锋　(广东医学院医用生化研究所,湛江　524023) 摘　要　研究了去铁胺(D FX )、丹酚酸B (Sal B )、丹参注射液(IS M )对大鼠脑匀浆I DL PO 的影响;结果发现三者均能抑制大鼠脑匀浆丙二醛的生成,且呈明显的量效关系,Sal B 的抑制作用是D FX 的5倍,提示中药丹参在临床上的作用机理可能与铁螯合有关。

关键词　丹酚酸B 丹参注射液　去铁胺　丙二醛 近年的来研究发现铁依赖性脂质过氧化(I DL PO )在脑损伤的发生发展过程中起极其重要的作用〔1,2〕。

据此,人们试图寻找具有抑制I DL PO 作用的抗脑损伤新药。

已证实,铁螯合剂去铁胺(D FX )能够抑制I DL PO ,但具有较大的毒性,限制了临床应用。

丹参片或丹参注射液(IS M )在临床上已广泛用于血栓形成、心脑缺血性疾病和慢性肝炎等的治疗,但其确切机理不甚清楚。

本实验的目的是比较丹酚酸B (Sal B ,一种从丹参中提取的水溶性单体)、IS M 和D FX 对大鼠脑匀浆I DL PO 的影响,为临床上防治疾病提供理论依据。

1　材料与方法111　试剂　D FX 购自美国Sigm a 公司,称取D FX 21826m g 溶于015m l 生理盐水(N S )中配成10×10-3mo l L 。

Sal B 由中国医学科学院药物研究所提供,硫酸亚铁为广东台山化工厂产品(分析纯),IS M 为上海新冈制药厂产品,丙二醛(M DA )试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

112　正常大鼠脑组织体外实验　SD 大鼠,雄性,由湖南医科大学动物中心提供,戊巴比妥钠(40m g kg )腹腔注射麻醉,打开腹腔,腹主动脉插管,然后用预冷N S 灌注(30m g 100g ),同时剪断两侧颈外静脉,灌至肝脏发白为止。

迅速取脑于冰N S 中,用滤纸吸干,称重,加入预冷N S (W V 1 10),在冰浴中制匀浆,3000r m in 离心10m in ,取上清液供下述实验:实验一:Sal B 、IS M 、D FX 对不同浓度Fe 2+引起脑匀浆M DA 增加的影响。

实验分组:Fe 2+组:上清液011m l +01125m l N S +Fe 2+25Λl (终浓度分别为10-7、10-6、10-5、10-4、10-3mo l L 下同),总反应体积为0125m l ;Sal B 组:上清液011m l +25Λl Sal B +25Λl Fe 2++011m l N S ;IS M 组:上清液011m l +0125Λl IS M +25Λl Fe 2++011m l N S ;D FX 组:上清液011m l +25Λl D FX +25Λl Fe 2++011N S 。

上述4组在加入Fe 2+后迅速置37℃水浴20m in 取出,置4℃水中冷却中止反应,并立即取反应测定M DA 含量。

实验二:不同浓度的Sal B 、IS M 、D FX 对200Λmo l L Fe 2+引起的M DA 生成量的影响。

实验分组:Sal B +Fe 2+、IS M +Fe 2+、D FX +Fe 2+组。

上述3组加反应物的浓度方法同实验一。

113　M DA 的测定　取上述处理的脑匀浆011m l 按试剂盒说明测定。

2　结　果211　药物对不同浓度Fe 2+脑匀浆I DL PO 反应的影响　随着Fe 2+浓度的增加,脂质过氧化产物M DA 也随着增加。

固定药物浓度分别加不同浓度的Fe 2+,当Fe 2+浓度在10-7～10-5mo l L 范围时,三者均能抑制Fe 2+依赖性脂质过氧化。

当Fe 2+浓度为10-3mo l L 时,Sal B 和IS M 的抑制作用要比D FX 强,其中Sal B 的浓度(100Λmo l L )只是D FX (500Λmo l L )的15(见图1)。

212　不同药物浓度对I DL PO 的影响　在脑匀浆中,固定Fe 2+的浓度(200Λmo l L )分别加不同浓度的药物,随着药物浓度的增加,对M DA 的抑制率也增加(见图2)。

在10-3mo l L 浓度时,Sal B 抑制率为8111%,D FX 为7812%,IS M 在0115g m l 时的抑制率为8515%。

・061・中国老年学杂志1997年6月第17卷图1　Sal B 、I S M 、D FX 对不同浓度Fe 2+引起的大鼠 脑匀浆MDA增加的影响图2　不同浓度Sal B 、I S M 、D FX 对200Λm ol L Fe 2+引起的大鼠脑匀浆MDA 增加的影响213　颜色反应　在大鼠脑匀浆中,D FX 与铁螯合呈棕黄色反应;Sal B 及IS M 与铁作用呈紫蓝色反应,而在非匀浆中单独作用时,则不呈颜色反应。

3　讨　论生理状态下,体内的铁主要以铁蛋白的形式储存,它是所有细胞代谢和生长所必需的。

但在病理状态下,铁可以释放出现,参与Fenton 型H aber 2W eiss 反应(Fe 3++O 2→Fe 2++O 2,Fe 2++H 2O 2→Fe 3++HO +OH -)而产生大量的HO ,HO 又可以攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸引发脂质过氧化反应,从而产生包括M DA 在内的脂质过氧化产物。

但有人认为Fe 2+不需要通过Fenton 型H aber 2W eiss反应即可直接作用于细胞膜而使M DA 产生增多,即所谓铁依赖性脂质过氧化〔3〕。

本实验所用脑匀浆经灌洗,排除血液中铁的影响,而且所用试剂均在实验前半小时配制,以防止硫酸亚铁氧化成硫酸铁。

从本实验结果可以看出,单独加入亚铁离子,也可引发脂质过氧化。

这主要取决于Fe 2+与Fe 3+的比率。

这与B rangher 等〔3〕的实验结果一致。

用丹参喂养老年小鼠,能提高其红细胞和肝脏中的超氧化物歧化酶(SOD )活性,降低血清和肝脏中过氧化脂质水平〔4〕。

丹参酮 A 对低密度脂蛋白引起的牛血管内皮细胞损伤有保护作用〔5〕。

复方丹参注射液可降低老年肺心病患者血浆M DA 水平,改善红细胞变形能力,使全血粘度下降〔6〕。

这些实验证据表明,丹参具有抑制自由基2脂质过氧化反应的功能。

丹参水溶性提取物对大鼠心、肝、脑、睾丸脂质过氧化有抑制作用〔7〕,且对Fe 2+2V it C 和T riton X 2100引起的线粒体肿胀有保护作用〔8〕。

有作者证明,Sal B 对脂质过氧化有很强的抑制作用〔9〕。

我们近期的研究发现,Sal B 可改善老化红细胞的免疫功能,提高红细胞C 3b 受体花环率、红细胞免疫复合物花环率和红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力,同时降低老化红细胞过氧化脂质水平,这提示Sal B 提高老化红细胞免疫功能与其抗氧化作用有关〔10〕。

但是,丹参与其水溶性单体抗氧化的具体机理目前尚不十分清楚。

D FX 是铁螯合剂,它能抑制铁依赖性脂质过氧化物生成〔11〕。

本实验以D FX 为阳性对照,发现Sal B 和IS M 具有“去铁胺样”作用,也能抑制铁依赖性脂质过氧化物的生成。

从图1可以看出,两条曲线几乎重合,Sal B 的螯合能力是D FX 的5倍。

D FX 与铁螯合呈棕黄色,而Sal B 及IS M 与铁螯合呈蓝紫色。

结果提示Sal B 和IS M 可能是很好的铁螯合剂,且无毒副作用,因此临床上用丹参类药物治疗与铁释放有关的疾病(如脑血栓、心肌梗塞等)可能会收到良好的效果。

4　参考文献1　D i p loch A J ,A nti oxidants and disease p reventi on,M o lA sp M ed ,1994;15(4):2952　Zalesska MM 1R egi onal li p id peroxidati on in rat brainin vitra po ssible ro le of endogenous iron 1N eurochem R es,1985;10:3973　B raugh ler JM ,D uncan LA ,Chase RL et al 1T he in 2vo lvem ent of iron in li p id peroxidati on J B i o l 1Chem ,1986;261(22):102824　郭忠兴,赵秀丽,李福全et al 1丹参对老年小鼠超氧化物歧化酶活动性和过氧化脂质含量影响的研究1佳木・161・　周永刚等　丹酚酸B 、丹参注射液、去铁胺对大鼠脑匀浆铁依赖性脂质过氧化的影响　第3期斯医学院学报,1993;16(1):45　王新星,游杰美,靳　芳et al 1丹参酮 A 对低密度脂蛋白引起牛血管内皮细胞损伤的影响1中国药理学与毒理学杂志,1993;7(2):1576　李慧萍,祝其锋,黄　丰et al 1复方丹参注射液对老年肺心病患者血浆丙二醛水平和红细胞变形能力的影响1中国老年学杂志,1995;15(2):877　危一松1丹参水溶性提取物对大鼠心、肝、脑、睾丸脂质过氧化的抑制作用1赣南医学院学报,1990;10(4):2118　危一松1丹参水溶性提取物对Fe2+2V itC 和T ritonX 2100引起线粒体肿胀的保护作用1赣南医学院学报,1992;12(1):219　黄诒森,张均田1丹参中三种成分的体外抗氧化作用1药学学报,1992;(2):9610　王　伟,祝其锋,郭　峰1丹酚酸B 对老化红细胞免疫功能的影响及其与L PO 水平关系的探讨1中国免疫学杂志,1995;11(增刊):24711　H erbert V ,Shaw S ,Jayaticle B et a l ,M o st free radicalinjury is iron 2related :it is p romo ted by iron ,hem in ,ho loferritin and vitam in C ,and inh ibited by desferox 2am ine and apoferritin 1Stem Cells ,1994;12:289〔1996209212收稿　〕(编辑　曲　莉)热量限制延长寿命机制的实验研究——对大鼠糖代谢及胰岛素抗性的影响11　本课题由美国能源部、美国食品与药物管理局部分资助作者简介:陈　澍,男,43岁,副教授,主要研究,热量限制延长寿命机制陈　澍　(广州医学院第二附属医院老年病科,广州　510260)L eakey JEA (N ati onal Cen ter fo r Tox ico logical R esearch ,Jefferson ,A R 1U SA ) 摘　要　探讨热量限制(CR )对雌性大鼠糖代谢及胰岛素抗性的影响。