枯草杆菌基因组中的回文结构

合集下载

基因工程常用的工具酶

Py dCMP、dTMP Pu dAMP、dGMP
2024/10/14
.
6
识别序列呈典型的旋转对称型回文结构
EcoR I的切割位点
EcoR I的识别序列
5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’
回文结构:两条核苷酸链的核酸序列呈双重旋转对称排列的 DNA双螺旋结构
2024/10/14
.
14
第三节 DNA聚合酶
2024/10/14
.
15
DNA聚合酶：能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶
❖作用特点
能够把脱氧核苷酸分子连续的加到DNA分子引物链的3’-OH末端，催化核苷酸的聚合
❖作用条件
➢ 脱氧核苷酸原料：四种脱氧核苷三磷酸dNTP（dATP、dTTP、 dCTP、dGTP）
属名
种名
株名
Haemophilus influenzae d
HindΙ、 HindⅡ、 Hind Ⅲ
不同限制修饰系统
2024/10/14
.
4
三、Ⅱ型限制酶的特性-识别序列
识别双链DNA分子中特定的4 - 8对核苷酸序列
EcoR I的切割位点
EcoR I的识别序列
5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’
5‘ HO 3‘ HO
T4-PNP
5‘ p 3‘ HO
OH 3‘ OH 5‘
Mg2+ pppATP（g-32P-ATP）
OH 3‘
5‘ HO
BAP / CIP

名词解释——精选推荐

名词解释同裂酶:识别相同序列的限制性内切酶称为～。

它们的切割位点可能不同同尾酶（Isocaudarner）:不同的限制性内切酶切割DNA产生的末端是相同的，切是对称的，即相同的粘性末端星星活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称为～（star activity)。

klenow片段：大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ，经枯草杆菌蛋白酶处理后，分割成两个片段，其中大片段称为～。

具有5′-3′聚合酶和3′-5′外切酶活性核酸外切酶：核酸外切酶（exonucleases）是一类从多核苷酸链的一头开始按顺序降解核苷酸的酶。

质粒的不亲和性：也称不相容性，是指在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定共存的现象。

α-互补：LacZ′基因编码的α-肽链是β-半乳糖苷酶的氨基末端的短片段，它同失去了正常氨基末端的β-半乳糖苷酶突变体互补时，便会产生有功能活性的β-半乳糖苷酶分子。

于是便可以应用X-gal和IPTG显色技术检测转化子。

重组子为白斑，非重组子为蓝斑。

穿梭质粒载体（shuttle plasmid vector）:是一类有人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活的质粒载体穿梭质粒载体（shuttle plasmid vector）:是一类有人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活的质粒载体基因文库：来自于某种生物的不同DNA序列的集合基因组文库：用于构建文库的DNA来源于基因组DNAcDNA文库：用于构建文库的DNA是mRNA群体的拷贝（cDNA）基因治疗：A.对有基因缺陷的细胞进行修复，从而使其恢复正常，达到治疗疾病的目的B.把健康的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的C.运用人工诱变的方法，使有基因缺陷的细胞发生基因突变恢复正常D.运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾病的目的低拷贝数的质粒：每个寄主细胞中仅有1-3份拷贝，这类质粒为严谨型复制控制的质粒（stringent plasmid）高拷贝数的质粒：每个寄主细胞中可高达10-60份拷贝，这类质粒为松弛型复制控制的质粒（relaxed plasmid）回文结构：DNA局部双螺旋以某一对称轴旋转180度后，与另一侧的互补片段的顺序完全的DNA结构粘性末端（cohesive end）识别位点为回文对称结构的序列经限制性内切酶切割后，产生的末端为粘性末端，形成的两个末端是相同的，也是互补的同序同切酶: 识别序列和切割位置都相同同序异切酶（Isoschizomer) 识别序列相同，但切割位点不同. 结合型质粒（conjugative plasmid），又叫自我转移质粒，除了具有自主复制所必需的遗传信息之外，还带有一套控制细菌配对和质粒结合转移的基因非结合型质粒（non-conjugative plasmid），又称非自我转移的质粒，具有自主复制的遗传信息，但失去了控制细胞配对和结合转移的基因，因此，不能从一个细胞自我转移到另一个细胞质粒的迁移（mobilization），由共存的结合型质粒引发的非结合型质粒的转移过程，叫做质粒的迁移作用。

（完整版）生物技术制药考试题复习

（完整版）⽣物技术制药考试题复习⼀：选择题1、酶的主要来源是( C)A、⽣物体中分离纯化B、化学合成C、微⽣物⽣产D、动/ 植物细胞与组织培养2、所谓“第三代⽣物技术”是指(A)A、海洋⽣物技术B、细胞融合技术C、单克隆技术D、⼲细胞技术3、菌体⽣长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产⽣代谢副产物⼄酸：(A)A、⼤于B、等于C、⼩于D、⽆关4、促红细胞⽣长素( EPO)基因能在⼤肠杆菌中表达，但却不能⽤⼤肠杆菌的基因⼯程菌⽣产⼈的促红细胞⽣长素，这是因为：( E)A、⼈的促红细胞⽣长素对⼤肠杆菌有毒性作⽤B、⼈促红细胞⽣长素基因在⼤肠杆菌中极不稳定C、⼤肠杆菌内毒素与⼈的促红细胞⽣长素特异性结合并使其灭活D、⼈的促红细胞⽣长素对⼤肠杆菌蛋⽩⽔解酶极为敏感E、⼤肠杆菌不能使⼈的促红细胞⽣长素糖基化5、⽬前基因治疗最常⽤的载体是：(B)A、腺病毒B、反转录病毒C、腺相关病毒D、痘苗病毒E、疱疹病毒6、cDNA第⼀链合成所需的引物是：( D)A、Poly AB、Poly CC、Poly GD、Poly TE、发夹结构7、为了减轻⼯程菌的代谢负荷，提⾼外源基因的表达⽔平，可以采取的措施有：(A)A将宿主细胞⽣长和外源基因的表达分成两个阶段D、当宿主细胞快速⽣长时诱导重组质粒的复制8、基因⼯程制药在选择基因表达系统时，⾸先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能B、表达产物的产量 C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易9、疫苗出产前需进⾏理化鉴定、效⼒鉴定和(安全性鉴定)。

10、基因⼯程药物的化学本质属于：(C)A. 糖类B.脂类C.蛋⽩质和多肽类D.氨基酸类11、⽤聚⼆⼄醇( PEG)诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分⼦量⼤，促进融合率⾼B、PEG的浓度⾼，促进融合率⾼C、PEG 的相对分⼦量⼩，促进融合率⾼D、PEG的最佳相对分⼦量为400012、以⼤肠杆菌为⽬的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋⽩质B、表达产物存在的部位是在菌体内C、容易培养，产物提纯简单 D 、表达产物为天然产物13、⼈类第⼀个基因⼯程药物是：(A)A、⼈胰岛素B、重组链激酶C、促红细胞⽣成素D、⼄型肝炎疫苗14、下列不属于加⼯改造后的抗体是：(C)A、⼈-⿏嵌合抗体B、单链抗体C 、⿏源性单克隆抗体D、单域抗体15、动物细胞培养的条件中，不正确的是：(D)A. 最适pH为7.2-7.4B. 最适温度为37±0.5CC.最理想的渗透压为290-300mOsm/kgD.氧浓度为100%16、第三代抗体是指：(D)A、B 淋巴细胞合成和分泌的球蛋⽩B、多发性⾻髓瘤细胞产⽣的免疫球蛋⽩C、融合细胞产⽣的单克隆抗体 D 、利⽤基因⼯程技术制备的基因⼯程抗17、现代⽣物技术的标志是：(C)A、DNA互补双螺旋结构模型的提出B、DNA测序技术的诞⽣C、第⼀只克隆⽺“多莉”的诞⽣D、⼈类基因组草图的完成18、获得⽬的基因最常⽤的⽅法是：(B)A、化学合成法D、DNA探针技术19、疫苗组成是由抗原和(佐剂)组成20、鸟枪法克隆⽬的基因的战略适⽤于( A)A、原核细菌 B 、酵母菌 C 、丝状真菌D 、植物E 、⼈类21、cDNA法获得⽬的基因的优点是：( B) A. 成功率⾼B.不含内含⼦C.操作简便 D.表达产物可以分泌 E. 能纠正密码⼦的偏爱性22、有机相酶反应的优点：1．有利于疏⽔性底物的反应；2．可提⾼酶的热稳定性；3．从低沸点的溶剂中易分离纯化产物；4．热⼒学平衡向产物⽅向移动如脂合成和肽合成；5．减少由⽔引起的副反应，如⽔解反应；6．酶易于实现固定化；7．酶和产24、25、凝胶过滤层析进⾏分离的依据是：分⼦⼤⼩26、质粒载体必备三要素：复制⼦、选择标记、多克隆位点。

基因工程试题(完整)

答案：基因操作。

将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。

名词解释问题： Interrupted genes参考答案：间断基因。

序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA 间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。

我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。

名词解释问题： Promotor参考答案：启动子。

DNA 分子可以与RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。

名词解释问题： Subcloning参考答案：亚克隆。

当初始克隆中的外源DNA 片段较长，含有许多目的基因以外的DNA 片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段DNA 找出来，这个过程叫“亚克隆”。

填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning），gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。

参考答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题：（）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。

它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）参考答案：基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）填空题问题：基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。

参考答案：表达；调控；检测；改造填空题问题：启动子（Promotor）是指（）。

通常一个Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。

在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。

参考答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶填空题问题：原核生物的RNA polymerase 主要由两部分组成：（）和（），其中σ-因子并不参与RNA 的合成，它的作用主要是（）。

西安大学生物工程学院2020级《生物化学》考试试卷(2425)

西安大学生物工程学院2020级《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 质膜中与膜蛋白和膜脂共价结合的糖都朝向细胞外侧定位。

（）答案：正确解析：2. 糖的变旋现象是由于糖在溶液中起了化学作用。

（）答案：错误解析：糖的变旋现象不在意由于现象糖在溶液中起了化学作用，而是由于其分子结构在溶液不仅如此了变化，从α型变成β型或相反地从β型变成α型。

3. 就已有文献资料来看，核酶（ribozyme）不符合催化剂概念。

（）答案：错误解析：4. 当底物处于饱和水平时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。

（）。

答案：正确解析：5. 酶的Kcat型抑制剂比Km型抑制剂专一性更强。

（）。

答案：正确解析：6. 基因表达的最终产物都是蛋白质。

（）答案：错误解析：基因表达的产物可以是蛋白质或RNA。

7. DNA分子中含有等摩尔数的A、G、C、T。

（）答案：错误解析：8. 真核生物成熟mRNA的两端均带有游离的3′OH。

（）答案：正确解析：真核生物成熟mRNA的5′为帽子结构即，因此5′端也是3′OH。

9. DNA核蛋白及RNA核蛋白可用0.14molL NaCl溶液抽提出来。

（）答案：错误解析：DNA核蛋白及RNA核蛋白一般用1molL NaCl抽提。

10. 自然界中只存在右手螺旋的DNA双螺旋。

（）答案：错误解析：2、名词解释题（25分，每题5分）1. 鞘糖脂（glycosphingolipid）答案：鞘糖脂（glycosphingolipid）是指单糖或寡糖的糖链与神经酰胺C1上的羟基以糖苷键相连而形成的化合物，主要包括脑苷脂和神经节苷脂。

解析：空2. 亲和层析、离子交换层析答案：（1）特异是指利用共价连接有亲和层析配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或底物其他分子的层析技术。

微生物历年考研真题及答案

部分招生单位研究生入学历年考试真题2004年北京师范大学攻读硕士研究生入学考试试题一、名词解释（每题3分，共45分）1．Ames试验 2．包膜 J．胞吞作用 4．不亲和性 5．Col质粒 6．端粒7．附加体 8．感染复数 9．回文结构 10.末端重复 11.轻链 12.噬菌体展示 13.卫星RNA 14.致育因子 15.原毒素二、简要回答题（每题5分，共45分）1．说明控制微生物生长繁殖的主要方法及原理。

2．SASR病毒粒子及其基因组的基本结构是什么？3．以简要的图示和文字说明酿酒酵母菌的生活史。

4．溶源性细菌有哪些特性？5．什么是细菌群体的生长曲线？它在生产上有哪些应用？6．病毒壳体结构有哪几种对称形式？病毒粒子主要结构类型有哪些？7．固氮微生物中大多为好氧菌，它们如何保证固氮酶既不被氧灭活，又能提供必要的氧产生ATP进行固氮？8．说明红硫细菌，枯草杆菌，硝化细菌的营养及获能方式。

9．什么是病毒的一步生长曲线？该曲线中各时期的特点是什么？三、试验设计（每题15分，共30分）1．设计一个实验程序，以确保在对未知菌进行革兰氏染色时操作正确，结果可靠。

2．设计一套从自然界筛选分离一株对聚氯联苯类农药降解能力高的菌株的方案。

四、问答题（每题15分，共30分）1．什么是营养缺陷型？如何从诱变菌株中筛选出营养缺陷型。

2．光合细菌有哪几类？细菌的光合作用与绿色植物的光合作用之间有什么不同？2005年北京师范大学攻读硕士研究生入学考试试题一、名词解释（每题3分，共45分）1．半抗原 2．表型 3．病毒入胞 4．病毒因子 5．超敏反应 6．反向末端重复 7．分段基因组 8．富集培养 9．干扰素 IO.感受态细胞 11.核壳12.类囊体 13.免疫原性 14．原养型 15．微生物传感器二、简要回答题（每题5分，共45分）1．RNA是微生物的遗传物质吗？为什么？2．HIV病毒粒子中的逆转录酶的生物学功能是什么？3．以简要的图示和文字说明路德类酵母菌的生活史。

基因和基因组

Protein
Replication Replication
15
(一) 原核生物的mRNA是多顺反子mRNA
DNA Promoter Gene 1 Gene 2 Gene 3 Terminator
Transcription
mR多NA顺原反核子5生′mR物NA的1 一(p个olym2cRiNsAtr分on子3ic带m有RN几A3′)个: 结构基因T的ra遗ns传lat信ion息，利用共同的启动子调Pr及控ote终单in止元s 信。号，组成操纵子的基因表达
47
复制起始区（OriC）
48
大肠杆菌强启动子
TTGAC
TATAAT 转录起始
49
终止子： GC丰富区、AT丰富区
DNA 5’…GCCGCCAGTTCGGCTGGCGGCATTTT…
3’
RNA 5’…GCCGCCAGUUCGGCUGGCGGCAUUUU…
3’
U CG
U G 强终止子：有反向重复顺
OriC
0
4000K
大肠杆菌 1000K
C-Value: 4.6×106bp
3000K
2000K
TerC
大肠杆菌染色体DNA
41
(二) 结构基因大多组成操纵子
po z
y
at
promoter operator structural gene terminator
ß-galactosidase半乳糖苷酶 z ß-galactoside permease透酶 y ß-galactoside transacetylase 半乳糖苷乙酰转移酶 a
-30
-25
+1
9
➢ CAAT盒（CAAT Box）

医学细胞与分子生物学习题库标准答案

医学细胞与分子生物学习题库标准答案一、名词解释：1．高度重复基因：在真核生物细胞基因组中重复出现可达106次以上的DNA序列，称为高度重复序列基因或高度重复序列DNA。

2．断裂基因：真核生物大部分基因含有内含子，基因是不连续的，故称断裂基因。

3．基因组：细胞或生物体的整套(单倍体)遗传物质，称为基因组。

基因组的大小用全部DNA的碱基对总数表示。

4．基因：是核酸分子中遗传信息的基本单位，是指RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。

现代分子生物学的基因概念是合成有功能的蛋白质或RNA所必需的全部DNA序列（除部分病毒RNA），即一个基因不仅包括编码蛋白质或RNA的核酸序列，还应包括为保证转录所必需的调控序列。

5．微卫星DNA：6．基因文库：是指含有某种生物体（或组织、细胞）全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。

7．内含子：真核生物DNA分子中插入外显子之间的非编码序列。

8．外显子：真核生物DNA分子中编码蛋白质的序列。

9．基因表达的调控：机体的各种细胞中含有相同的遗传信息(相同的结构基因)，但并非在所有细胞中同时表达，而必须根据机体的不同发育阶段、不同的组织细胞及不同的功能状态，选择性、程序性地表达特定数量的特定基因，这就叫基因表达的调控。

10．卫星DNA：是出现在非编码区的串联重复序列。

11．基因表达：是指原核生物和真核生物基因组中特定的结构基因所携带的遗传信息，经过转录、翻译等一系列过程，合成具有特定的生物学功能的各种蛋白质。

表现出特定的生物学效应的全过程。

12．增强子：指位于启动子上游或下游并通过启动子增强邻近基因转录效率的DNA 顺序，增强子本身不具备启动子活性。

13．顺式作用元件：指某些能影响基因表达但不编码蛋白质和RNA的DNA序列，按照功能分为启动子、增强子、终止子、沉默子和衰减子等。

14．SD序列：SD序列是与细菌16S rRNA 3，端互补的序列。

原核生物在起始密码AUG上游方向4-13个碱基之间有一段富含嘌呤的序列，其一致序列为AGGAGG，称为SD序列。

基因工程1

第四章酶同尾酶：有一类限制性内切核酸酶，他们来源各异，识别的靶序列也不同，但切割后能产生相同的粘性末端，称为同尾酶。

同裂酶：是一类来源于不同的微生物，能识别相同的靶序列的限制性内切核酸酶。

首次发现的酶叫原型酶，而后发现的与原型酶识别序列相同的酶叫做原型酶的同裂酶。

其中，识别序列相同、而切割位点与原型酶不同的酶叫做新裂酶。

Klenow酶：枯草杆菌蛋白酶可以将DNA聚合酶Ⅰ水解为N端的小片段和C端的大片段。

其中的大片段被称为Klenow片段。

它保留了DNA聚合酶Ⅰ的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。

Klenow酶的3'→5'外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性。

反转录酶：即依赖于RNA的DNA聚合酶，具有5′→3′DNA合成活性和很强的RNAaseH活性，但是无3′→5′外切活性。

反转录酶能以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）。

限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并切割DNA双链结构的内切核酸酶。

DNA连接酶：是能催化双链DNA片段靠在一起的3‘-OH末端与5’-P末端之间通过生成磷酸二酯键，使两末端连接的一种核酸酶黏性末端：指DNA分子在限制性内切核酸酶的作用下形成的具有互补碱基的单链延伸形成的末端结构，他们能够通过互补碱基间的配对而重新连接起来。

平末端：平末端指DNA分子两条链在限制性内切酶作用下断裂的位置是处在一个对称结构的中心，形成的一种平齐的末端结构类型。

星号活性(staractivity):也称星活性，同一类限制性内切酶在某些反应条件变化时酶的专一性发生改变，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，最值这种现象称为星号活性。

限制与修饰现象：限制作用：即在一种宿主细胞生长良好的入噬菌体，但在另一种宿主细胞中生长很差。

基因工程复习(含答案)

基因工程复习题一、名词解释: （10～20%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶得Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交: 将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上, 然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术, 该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。

粘性末端: 双链DNA被限制性内切酶切割后, 形成得两条链错开几个碱基, 而不就是平齐得末端。

Northern印迹杂交: 将RNA进行变性电泳后, 再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术, 可用于检测目得基因得转录水平。

转位: 一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移到另一个位置得现象。

基因工程: 在体外, 用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA, 继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞, 最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程, 又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。

目得基因：基因工程中, 那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。

连接器: 人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段, 连接到目得基因得两端, 便于基因重组中得切割与连接。

转化: 受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。

停滞效应: PCR中后期, 随着目得DNA扩展产物逐渐积累, 酶得催化反应趋于饱与, DNA扩增产物得增加减慢, 进入相对稳定状态, 即为停滞效应, 又称平台期。

逆转录PCR: 以mRNA为原始模板进行得PCR反应。

PCR: 即聚合酶链式反应。

在模板, 引物, 4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下, 特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。

α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中, 插入了lac 启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列（又称α-肽）, 该序列不能产生有活性得β-半乳糖苷酶。

现代分子生物学试题及答案

现代分子生物学习题与答案一、填空题1．基因工程是70年代发展起来的遗传学的一个分支学科. 2．基因工程的两个基本特点是：<1>分子水平上的操作,<2>细胞水平上的表达3．基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的限制性酶切图谱.5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自属名的第一个字母,第二、三两个字母取自_种名的前两个字母,第四个字母则用株名表示.6．部分酶切可采取的措施有：<1>减少酶量；<2>缩短反应时间；<3>增大反应体积等.7．第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_ EcoRl.8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同,但识别的序列都是GGCC,它们属于异源同工酶.9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性：<1>5'-3'合成酶的活性；<2>3'-5'外切核酸酶的活性.10．为了防止DNA的自身环化,可用碱性磷酸酶去双链DNA_5’端的磷酸基团.11．EGTA是_Ca2+_离子螯合剂.12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶,它只有_5'-3'合成酶的活性,而没有3'-5'外切酶的活性.13．切口移位<nick translation>法标记DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的__5'一3'外切核酸酶和5'一3'合成酶的作用.14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式,通常可采用____S1核酸酶切割或DNA聚合酶补平.15．反转录酶除了催化DNA的合成外,还具有__核酸水解酶H的作用,可以将DNA-RNA杂种双链中的_RNA_水解掉.16．基因工程中有3种主要类型的载体：质粒DNA,病毒DNA,质粒和病毒DNA杂合体.17．就克隆一个基因<DNA片段>来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分：__复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入.另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量.18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后,一部分细胞中已测不出质粒,这种现象叫质粒消除<或治愈>.19．pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于pMBl,它的四环素抗性基因来自于pSCl01,它的氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124<R质粒>.20．YAC的最大容载能力是1000kb,BAC载体的最大容载能力是300kb.21．pSCl01是一种严紧复制的质粒.22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体.pUC系列的载体是通过pBR322和M13两种质粒改造而来.它的复制子来自pMBl,Amp抗性基因则是来自转座子.23．噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因：一是它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增；二是对某些噬菌体<如λ噬菌>的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽. 24．野生型的M13不适合用作基因工程载体,主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记.25．黏粒<cosmid>是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自质粒、COS位点序列来自λ噬菌体,最大的克隆片段达到45 kb.26．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是：<1>分子量大,<2>酶的多切点,<3>无选择标记27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的,其中来自质粒的主要结构是复制区,而来自噬菌体的主要结构是IG区. 28．噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源DNA片段后,总的长度应在噬菌体基因组的75％～105％的X围内.29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是螯合Mg2+离子,抑制核酸酶的活性.30．用乙醇沉淀DNA时,通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子,如NaCl和NaAc,其目的是中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力.31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：<1>合成探针；<2>合成cDNA；<3>用于PCR反应；<4>进行序列分析32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端,而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子.根据这一发现设计了克隆PCR产物的T—载体.33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶,其作用是切除在第二链合成时形成的发夹环34．乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脱水. 35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必须考虑其表达的三个基本条件：<1>保持正确的可读框<2>能够使其转录的启动子<3>具有翻译的起始和终止信号36．受体细胞的感受态是接受外源DNA的生理状态_. 37．DNA重组连接的方法大致分为四种：<1>黏性末端连接；<2>平末端连接；<3>同聚物接尾连接；<4>接头连接法. 38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组DNA克隆_,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组DNA文库.39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个_cDNA克隆,源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_ cDNA文库_.40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用_聚合酶链式反应<PCR>可以将这段DNA进行百万倍的扩增. 41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为0︒C 时吸附DNA, 42︒C _时摄人DNA.42．目前,在重组体的筛选中,已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法.大致可以分为：<1>遗传学方法；<2>物理筛选法；<3>核酸杂交法；<4>表达产物分析法等.43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法,它适合于_插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选. 44．核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针.其中DNA探针又分为___基因组DNA探针和cDNA 探针. 45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端,则可以用_Klenow酶填补的方法_进行3’末端标记.如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端,可以用__T4DNA聚合酶进行3’末端标记.46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：<1>用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；<2>从mRNA反转录合成单链cDNA探针；<3>用不对称PCR合成单链DNA探针.47．根据Northern杂交的结果可以说明：外源基因是否进行了转录_.48．差示杂交<differential hybridization>技术需要__两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因.49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开,然后被转移到一X硝酸纤维素膜<尼龙膜>上,同一放射DNA探针杂交的技术称__ Northern印迹_. 50．在__Southern印迹_技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜<或尼龙膜>上,然后与放射性的DNA探针杂交.51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有__5’→3’合成酶_和_3’→5’外切核酸酶_的活性. 52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素：<1>克隆的是完整的基因；<2>使用的是表达载体；<3>不含内含子.53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：<1>印迹的对象不同：Northern是RNA,Southern是DNA；<2>电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件. 54．放射免疫筛选的原理基于以下三点：<1>抗体能够被吸附到固体支持物上；<2>同一个抗原可以同几种抗体结合；<3>抗体能够被标记二、选择题<单选或多选>1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是< ><a>A．Kornberg W．Gilbert <c>P．Berg <d>B．McClintock2．第一个作为重组DNA载体的质粒是< ><a>pBR322 ColEl <c>pSCl01 <d>pUCl83．关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有< >不太恰当.<a>由作用于同一DNA序列的两种酶构成这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶<c>这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰<d>不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4．Ⅱ型限制性内切核酸酶：< ><a>有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供<c>限制性识别非甲基化的核苷酸序列<d>有外切核酸酶和甲基化酶活性<e>仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供5．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?< ><a>限制酶是外切酶而不是内切酶限制酶在特异序列<识别位点>对DNA进行切割<c>同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的<d>一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端<e>一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端6．第一个被分离的Ⅱ类酶是：< ><a>EcoK HindⅢ<c>HindⅡ<d>EcoB7．在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好?< ><a>反应时间酶量<c>反应体积<d>酶反应的温度8．在下列试剂中,那一种可以螯合Ca2+离子?< ><a>EDTA 柠檬酸钠<c>SDS <d>EGTA 9．在下列工具酶中,那一种可以被EGTA抑制活性?< ><a>S1单链核酸酶末端转移酶<c>碱性磷酸酶<d>Bal 31核酸酶10．限制性内切核酸酶可以特异性地识别：< ><a>双链DNA的特定碱基对双链DNA的特定碱基序列<c>特定的三联密码<d>以上都正确11．下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中,正确一项的是< >.<a>Sau3A I E．coRI <c>hind III <d>Sau 3A1 12．限制性内切核酸酶的星号活性是指：< ><a>在非常规条件下,识别和切割序列发生变化的活性.活性大大提高<c>切割速度大大加快<d>识别序列与原来的完全不同13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?< ><a>甘油含量过高反应体系中含有有机溶剂<c>含有非Mg2+的二价阳离子<d>酶切反应时酶浓度过低14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有< >不太恰当<a>由作用于同一DNA序列的两种酶构成这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶<c>这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰<d>不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用< ><a>T4DNA聚合酶Klenow酶．<c>大肠杆菌DNA聚合酶I <d>T7DNA聚合酶16．末端转移酶是合成酶类,< ><a>作用时不需要模板在Ca2+的存在下,可以在突出的3,末端延长DNA链<c>在Ca2+的存在下,可以在隐蔽的3,末端延长DNA链<d>上述说法有两种是正确的17．在基因工程中,可用碱性磷酸酶< ><a>防止DNA的自身环化同多核苷酸激酶一起进行DNA的5,末端标记<c>制备突出的3,末端<d>上述说法都正确18．下列酶中,除< >外都具有磷酸酶的活性<a>λ核酸外切酶外切酶Ⅲ<c>单核苷酸激酶<d>碱性磷酸酶19．下列哪一种酶作用时需要引物? < ><a>限制酶末端转移酶<c>反转录酶<d>DNA连接酶20．S1核酸酶的功能是< ><a>切割双链的DNA 切割单链的RNA <c>切割发夹环<d>以上有两项是正确的21．Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了< >的活性.<a>5,--3,合成酶, 3,--5,外切酶<c>5,---3,外切酶<d>转移酶22．下面关于松弛型质粒<relaxed plasmid>性质的描述中,< >是不正确的<a>质粒的复制只受本身的遗传结构的控制,而不受染色体复制机制的制约,因而有较多的拷贝数可以在氯霉素作用下进行扩增<c>通常带有抗药性标记<d>同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子23．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的,真正的天然质粒载体很少,在下列载体中只有< >被视为用作基因工程载体的天然质粒载体<a>pBR322 pSCl01 <c>pUBll0 <d>pUCl824．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?< ><a>质粒黏粒<c>酵母人工染色体<YAC><d> 噬菌体<e> cDNA表达载体25. 松弛型质粒：< ><a>在寄主细胞中拷贝数较多可用氯霉素扩增<c>一般没有选择标记<d>上述<a>、两项正确26．Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒,这种质粒：< ><a>是松弛复制型〔b>具有,四环素抗性<c>能被氯霉素扩增<d>能产生肠杆菌素27．同一种质粒DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是：< ><a>OCDNA>SCDNA>LDNASCDNA>LDNA>OCDNA<c>LDNA>OCDNA>SCDNA<d>SCDNA>OCDNA>LDNA28．pBR322是一种改造型的质粒,含有两个抗性基因,其中四环素抗性基因来自：< ><a>ColEl Ri质粒<c>pSCl01 <d>pUCl8 29．关于穿梭质粒载体,下面哪一种说法最正确?< ><a>在不同的宿主中具有不同的复制机制在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点<c>在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶<d>在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率30．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是< ><a>charomid plasmid <C>cosmid <d>phagemid 31．第一个作为重组DNA载体的质粒是< ><a>pBR322 ColEl <c>pSCl01 <d>pUCl832. Ti质粒：< ><a>可从农杆菌转到植物细胞中作为双链DNA 被转移<c>在植物中导致肿瘤<d>介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素<e>需要细菌的vir基因帮助转移<f>在植物细胞中作为染色体外质粒33．黏粒<cosmid>是一种人工建造的载体,< ><a>它具有COS位点,因而可进行体外包装它具有质粒DNA的复制特性<c>进入受体细胞后,可引起裂解反应<d>进入受体细胞后,可引起溶源化反应34．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法<Maxam-Glbert>和酶学序列分析法<Sanger>.酶学测序法的基本原理／优点是：< ><a>碱基与特殊染料间不同的相互作用一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止<c>限制性位点与DNA末端标记的相关性<d>可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序<e>反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰.这样既减少纯化步骤,也节约了开支.35．关于cDNA的最正确的说法是：< ><a>同mRNA互补的单链DNA 同mRNA 互补的双链DNA<c>以mRNA为模板合成的双链DNA <d>以上都正确36．用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为：< ><a>染色体DNA断成了碎片染色体DNA分子量大,而不能释放<c>染色体变性后来不与复性<d>染色体未同蛋白质分开而沉淀37. 关于碱解法分离质粒DNA,下面哪一种说法不正确?< ><a>溶液I的作用是悬浮菌体溶液Ⅱ的作用是使DNA变性<c>溶液Ⅲ的作用是使DNA复性<d>质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性38. Clark做了一个有趣的实验,发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板,在双链DNA的末端加一个碱基,主要是加< > ．<a>dGTP dATP <c>dCTP <d>dTTP 39．根据构建方法的不同,基因文库分为基因组文库、cDNA 文库等.在下列文库中,< >属cDNA文库<a> YAC文库 MAC文库<c> 扣减文库<d> BAC文库40．下面关于多克隆位点<multiple clone site,MCS>的描述,不正确的—句是< ><a>仅位于质粒载体中具有多种酶的识别序列<c>不同酶的识别序列可以有重叠<d>一般是人工合成后添加到载体中41．在cDNA技术中,所形成的发夹环可用< ><a>限制性内切核酸酶切除用3¹外切核酸酶切除<c>用S1核酸酶切除<d>用5¹外切核酸酶切除42．在DNA的酶切反应系统中,通常：< ><a>用SSC缓冲液加入Mg2+作辅助因子<c>加入BSA等保护剂<d>上述说法中,有两项是正确的43．黏性末端连接法,不仅操作方便,而且< ><a>产生新切点易于回收外源片段<c>载体不易环化<d>影响外源基因的表达44．在下列表型中,< >是基因工程上理想的受体菌表型<a>r+m+rec*r-m-rec-<C>r-m-rec+ <d>r+m+rec-45．关于DNA接头在基因工程中的作用,下列说法中哪一项不正确?< ><a>给外源DNA添加适当的切点人工构建载体<c>调整外源基因的可读框<d>增加调控元件46．cDNA文库包括该种生物的< ><a>某些蛋白质的结构基因所有蛋白质的结构基因<c>所有结构基因<d>内含子和调控区47．下列关于建立cDNA文库的叙述中,哪一项是错误的?< ><a>从特定组织或细胞中提取DNA或RNA用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA<c>以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA<d>新合成的双链DNA甲基化48．下列对黏性末端连接法的评价中,哪一项是不正确的?< ><a>操作方便易于回收片段<c>易于定向重组<d>载体易于自身环化,降低重组率49．关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确?< ><功具有可诱导性具有可转移性<c>细菌生长的任何时期都可以出现<d>不同细菌出现感受态的比例是不同的50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中< >是不正确的.<a>既能标记DNA,又能标记RNA 既能标记双链DNA又能标记单链DNA<c>只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端<d>DNA或RNA必须有5'-OH的存在51．Southem印迹的DNA探针< >杂交.<a>只与完全相同的片段可与任何含有相同序列的DNA片段<c>可与任何含有互补序列的DNA片段’．<d>可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段<e>以上都是52．用下列方法进行重组体的筛选,只有< >说明外源基因进行了表达.<a>Southem印迹杂交Northem印迹杂交<c>Western印迹<d>原位菌落杂交53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?< ><a>用限制酶消化DNA <a>DNA与载体的连接<c>用凝胶电泳分离DNA片段<d>DNA片段转移至硝酸纤维素膜上<e>用一个标记的探针与膜杂交54．报告基因< ><a>以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区<c>能用于检测启动子的活性<d>能用于确定启动子何时何处有活性55．在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是< ><a>诱导宿主的α肽的合成诱导宿主的ω肽的合成<c>作为酶的作用底物<d>作为显色反应的指示剂56. 切口移位是指在< >作用下,使< >带上放射性标记.<a>DNA聚合酶I,RNA DNA聚合酶I,DNA<c>DNA聚合酶Ⅲ,RNA <d>DNA聚合酶Ⅲ,DNA 57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的< ><a>DNA RNA <c>抗体<d>抗原58．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段,而Northern 印迹则是：< ><a>用RNA探针检测DNA片段用RNA探针检测RNA片段<c>用DNA探针检测RNA片段<d>用DNA探针检测蛋白质片段59．用免疫化学法筛选重组体的原理是< ><a>根据外源基因的表达根据载体基因的表达<c>根据mRNA同DNA的杂交<d>根据DNA同DNA的杂交60．随机引物标记探针,下列各项中哪一项是不正确的?< ><a>双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的不需要用Dnase I预处理<c>反应时可用Klenow酶<d>反应时可用DNA 聚合酶161．在切口移位标记DNA探针时只能使用< ><a>Klenow酶DNA聚合酶I <c>DNA聚合酶Ⅱ<d>DNA聚合酶Ⅲ62．要对一双链的DNA分子进行3¹末端标记,可用< ><a>Klenow酶DNA聚合酶I <c>T4DNA聚合酶<d>T7DNA聚合酶答案1．c；2．c；3．b；4．b 5．b,C,d,e；6．c；7．b；8．d；9．d；10．B；11．d；12．a；13．d；14．b 15．d；16．c；17．a,b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C；23．b；24．C；25．d；26．a,C,d；27．b；28．c；29．b；30．a；31．c；32．a,c,d,e, 33．a,b,c；34．b；35．c；36．c；37．d；38．b；39．c；40．a；41．c；42．a,b,c；43．b；44．b；45．d；46．a；47．a；48．c；49．c；50．b；51．c；52．c；53．b；54．a,c,d；55．a；56．b；57．a,b；58．c；59．a；60．d；61．b；62．c；三、简答题1．说明Sanger DNA测序法的原理.Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：<1>核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合<DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程>；<2>可延伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端,双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末端,因此会终止聚合反应的进行.如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应,则会获得4组长度不同的DNA片段.通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列.2．某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时,出现了星号活性,请分析可能的原因?盐离子浓度不对,温度不对,甘油浓度过高.3．在序列5'-CGAACA TA TGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列,该位点的序列可能是什么?回文序列是：5'-CATA TG-3,4．下面几种序列中你认为哪一个<哪些>最有可能是Ⅱ类酶的识别序列：GAATCG,AAATTT, GATATC, ACGGCA? 为什么?GA TATC；AAA TTT,因为它们是回文序列.5．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时,若要进行双酶切,应采取什么措施?为什么?注意星活性,先低盐,后高盐；先低温酶,后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活,再加第二种酶,否则,易产生星活性.或使用通用缓冲液.6．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?由于反转录酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的3'-5'外切核酸酶活性,所以聚合反应往往会出错,在高浓度的dNTP和Mg2+下,每500个碱基中可能有一个错配.7．什么是测序酶<sequenaseTM>?所谓测序酶即是修饰了的T7 DNA聚合酶,是采用缺失的方法,从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸,这样使T7 DNA聚合酶完全失去了3'-5'的外切核酸酶活性,只有5'---3'聚合酶的活性,而且聚合能力提高了3～9倍,测序时常用此酶.8．什么是S1核酸酶作图<S1 nuclease mapping>?S1核酸酶作图是一种对RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法9 Y AC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时,YAC具有优越性?YAC带有天然染色体所有的功能元件,包括一个着丝粒,一个DNA复制起点,两个端粒.Y AC能够容纳长达几百kb的外源DNA,这是质粒和黏粒办不到的.大片段的插入更有可能包含完整的基因,在染色体步移中每次允许更大的步移距离,同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目.10．列举质粒载体必须具备的4个基本特性.<1>独立复制；<2>有选择标记；<3>有独特的酶切位点；<4>能转化但不扩散. 11．什么叫穿梭载体？含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒,有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记,所以,很容易从一宿主转到另一个宿主<来回穿梭>. 12．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体?<1>削减分子量<除去非必需区和整合区>；<2>削减酶切位点；<3>添加选择标记；<4>引入终止突变13．PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因,必须预先得到什么样的信息?<1>DNA半保留复制的原理,在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸.<2>至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列.14．cDNA克隆与基因组克隆有何不同?基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子.15．怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR I限制位点中去?化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段,然后与待克隆片段两端连接起来,如果用EcoRI切割这种连接片段,就会产生EcoRI的单链末端.这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性内切酶位点中16．简述以黏粒为载体构建基因文库的原理.<1>COS位点可以自身环化；<2>可以利用COS位点包装λ噬菌体颗粒；<3>可以感染寄主细胞；<4>利用质粒复制子复制,不整合、不裂解.17．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在,必须有哪些基本的结构?<1>着丝粒；<2>端粒；<3>ARS序列.18．何谓YAC? 主要特性是什么?<1>含有来自其他生物DNA的酵母人工染色体,叫YAC；<2>主要特性是可以克隆较大的外源片段.19．Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?PCR用双引物,体内复制用单引物.20．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物<如E．coli>中进行表达,克隆时应注意哪些问题?应注意的问题有：启动子、密码子、剪接、分泌.21．假定你分离到一个E．coli的Thy- 突变体,并推测有可能是ThyA基因突变.请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因,测定突变的序列.<注：E．coli 野生型的ThyA基因的序列是已知的>为了扩增突变体的thyA基因,先设计一对引物,其中一个引物的序列与thyA基因的5’端相同,另一个引物同该基因的3’端互补.在引物的5’端加上合适Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列,以便于后来的克隆.将染色体DNA同引物混合后,进行PCR扩增.然后进行琼脂糖凝胶电泳,纯化扩增片段,可以直接测序或克隆到合适的载体再测序.22．你在做Southern印迹分析,并且刚完成了凝胶电泳这一步.根据方案,下面一步骤是用NaOH溶液浸泡凝胶,使DNA变性为单链.为了节省时间,你略过了这一步,直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上.然后用标记探针杂交,最后发现放射自显影片是空白.错在哪里?如果你的杂交探针是双链的,可能因为在加人杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结果.23．切口移位<nick translation>标记探针的主要步骤有哪些?<1>DNaseI造成切口；<2>DNA聚合酶III的5’→3’外切核酸酶进行切割；<3>DNA聚合酶Ⅲ的5’→3’合成酶进行修补；<4>在修补过程中,随着切口<nick>的移动,将放射性的底物掺人到双链DNA中.24．用EcoRI和Hind Ⅲ分别切割同一来源的染色体DNA,并进行克隆,在前者的克隆中筛选到A基因,但在后者的克隆中未筛选到A基因,请说明原因.原因是：HindⅢ的切点在A基因内.25．什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上,然后用特异性的抗体进行检测.它与Southern的不同在于探针的性质不同,在Western印迹中使用的探针是抗。

生物技术专业基因工程（2011）

生物技术专业基因工程复习题一、选择题001 下列有关基因工程定义的论述，错误的是【下列有关基因工程定义的论述，错误的是【 E 】A 基因工程涉及DNA的体外拼接，因此又称为重组DNA技术技术 B 基因工程主要是在基因水平上进行定位突变和遗传操作基因工程主要是在基因水平上进行定位突变和遗传操作C 基因工程包括上游技术和下游技术两个组成部分基因工程包括上游技术和下游技术两个组成部分D 基因工程涉及外源DNA片段的无性繁殖，因此也称为分子克隆技术片段的无性繁殖，因此也称为分子克隆技术 E 基因工程也包括动植物转基因技术基因工程也包括动植物转基因技术002 基因工程操作过程中所涉及到的供体通常是指【基因工程操作过程中所涉及到的供体通常是指【 D 】A 细胞多糖细胞 B 蛋白质蛋白质 C RNA D DNA E 多糖003 基因工程操作的下游技术通常是指【C】酶固相技术 Ⅲ分离纯化技术分离纯化技术发酵技术 Ⅱ酶固相技术Ⅰ发酵技术A ⅠB Ⅰ+ ⅡC Ⅰ+ ⅢD Ⅱ +Ⅲ+ ⅢE Ⅰ+ Ⅱ +Ⅲ+ Ⅲ004 第二代基因工程是指【A】A 蛋白质工程蛋白质工程B 基因组工程基因组工程C 染色体工程染色体工程D 细胞工程细胞工程E 途径工程途径工程005基因工程的基本用途包括【基因工程的基本用途包括【 E 】规模化产生蛋白质 Ⅲ生物物种改良生物物种改良基因的分离克隆 Ⅱ规模化产生蛋白质Ⅰ基因的分离克隆A ⅠB Ⅰ+ ⅡC Ⅰ+ ⅢD Ⅱ +Ⅲ+ ⅢE Ⅰ+ Ⅱ ++ ⅢⅢ006启动子的生物学功能是【启动子的生物学功能是【 A 】A DNA复制的起点复制的起点B 基因转录的开关基因转录的开关C 蛋白质合成的场所蛋白质合成的场所D 蛋白质分泌的元件蛋白质分泌的元件E 蛋白质修饰的位点蛋白质修饰的位点007原核细菌蛋白质生物合成的调控元件是【原核细菌蛋白质生物合成的调控元件是【 C 】A SD序列终止子内含子 E 终止子序列 B 增强子增强子 C 操纵子操纵子 D 内含子008核酸凝胶电泳技术的主要用途是【核酸凝胶电泳技术的主要用途是【 C】A 序列特异性切割核酸链序列特异性切割核酸链B 序列特异性修饰核酸分子序列特异性修饰核酸分子C 测定核酸分子的大小测定核酸分子的大小D 将蛋白质与核酸分开将蛋白质与核酸分开E 将DNA与RNA分开分开009很多在大肠杆菌中表达的人蛋白质编码基因都采用人工合成的方法获得，其原因是【A】A 人工合成外源基因工作量更小人工合成外源基因工作量更小B 人工合成外源基因获得的样品纯度更高人工合成外源基因获得的样品纯度更高C 人工合成外源基因准确性更大人工合成外源基因准确性更大D 人工合成外源基因获得的样品量更多人工合成外源基因获得的样品量更多E 人工合成外源基因便于纠正密码子的偏爱性人工合成外源基因便于纠正密码子的偏爱性010在基因工程中，控制质粒拷贝数的意义在于【在基因工程中，控制质粒拷贝数的意义在于【 C 】A 使重组质粒更加稳定使重组质粒更加稳定B 使外源基因表达量更高使外源基因表达量更高C 使外源蛋白在细胞内更稳定使外源蛋白在细胞内更稳定D 使外源基因表达产物更易被修饰使外源基因表达产物更易被修饰E 使细胞生长速度更快使细胞生长速度更快011大肠杆菌基因工程菌中包涵体的主要成分是【大肠杆菌基因工程菌中包涵体的主要成分是【 B 】A 脂类多糖蛋白质 C RNA D DNA E 多糖脂类 B 蛋白质012需要进行蛋白质变复性处理的外源基因表达法是【需要进行蛋白质变复性处理的外源基因表达法是【】A 包涵体表达法包涵体表达法B 融合型表达法融合型表达法C 分泌型表达法分泌型表达法D 寡聚型表达法寡聚型表达法E 整合型表达法整合型表达法013一般而言，蛋白质分泌所需的基本条件是【一般而言，蛋白质分泌所需的基本条件是【 D 】A SD序列序列B 操作子序列操作子序列C 启动子序列启动子序列D 信号肽序列信号肽序列E 限制性核酸内切酶识别序列限制性核酸内切酶识别序列014以融合形式表达外源蛋白的主要优点包括【以融合形式表达外源蛋白的主要优点包括【 E 】无突变 Ⅰ纯化方便溶解性好 Ⅳ无突变纯化方便 Ⅱ稳定性好稳定性好 Ⅲ溶解性好A Ⅰ+ ⅡB Ⅱ+ ⅣC Ⅰ+ Ⅱ+ ⅢD Ⅱ ++ ⅢⅢ+ ⅣE Ⅰ+ Ⅱ +Ⅲ+ Ⅳ+ Ⅲ015 CNBr化学裂解多肽链的断裂位点是【化学裂解多肽链的断裂位点是【 C 】A Arg B Lys C Met D Pro E Ser 016利用寡聚型表达法表达小分子肽段的主要优势在于【E】A 重组操作简便重组操作简便B 表达产物易于纯化表达产物易于纯化C 表达产物不易对受体细胞产生毒性表达产物不易对受体细胞产生毒性D 表达产物无需重折叠表达产物无需重折叠E 表达产物相对稳定表达产物相对稳定017外源基因整合型表达的主要重组操作环节是【D】A 将目的基因与一已知基因进行有效拼接将目的基因与一已知基因进行有效拼接B 将目的基因与一信号肽编码序列进行拼接将目的基因与一信号肽编码序列进行拼接C 将目的基因与一启动子序列进行拼接将目的基因与一启动子序列进行拼接D 将目的基因插在载体标记基因的下游将目的基因插在载体标记基因的下游E 将目的基因插在受体染色体DNA的合适区域的合适区域018美国Ely LiLI公司目前用于大规模生产人胰岛素的重组表达技术是【公司目前用于大规模生产人胰岛素的重组表达技术是【 B 】A AB链分别融合表达链分别融合表达B ACB链融合表达链融合表达C AB链分别分泌表达链分别分泌表达D ACB链分泌表达链分泌表达E AB链串联表达链串联表达019 提高重组率的方法包括【提高重组率的方法包括【E E】载体分子除磷与载体的分子之比 Ⅱ载体分子除磷Ⅰ加大外源DNA与载体的分子之比连接酶过量 Ⅳ延长连接反应时间延长连接反应时间 Ⅲ连接酶过量A Ⅰ+ ⅡB Ⅰ+ Ⅱ+ ⅢC Ⅰ+Ⅲ+ Ⅳ+ ⅢD Ⅱ +Ⅲ+ Ⅳ+ ⅢE Ⅰ+ Ⅱ ++ ⅢⅢ+ Ⅳ020 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是【下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是【 C 】A 大肠杆菌－繁殖迅速大肠杆菌－繁殖迅速B 枯草杆菌－分泌机制健全枯草杆菌－分泌机制健全C 链霉菌－遗传稳定链霉菌－遗传稳定D 酵母菌－表达产物具有真核性酵母菌－表达产物具有真核性E 动物细胞－具有完善的蛋白质糖基化功能动物细胞－具有完善的蛋白质糖基化功能021 若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入【D 】A 半乳糖半乳糖半乳糖B 葡萄糖葡萄糖葡萄糖C蔗糖蔗糖D5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）E异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）022 从dam型大肠杆菌受体细胞中分离出的质粒DNA能被BamHI、BglII、Sau3AI降解（如果上述酶切位点存在），但对BclI和MboI不敏感（尽管上述酶切位点存在），其原因是【B 】A Dam甲基化酶使BclI和MboI识别序列甲基化，但对BamHI、BglII、Sau3AI 不起作用不起作用B Dam甲基化酶既可使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，也可使胞嘧啶甲基化，这两种甲基化作用对限制性内切酶活性的影响不同C5甲基化，这两种甲基化作用对限制性内切酶活性的影响不同C Dam甲基化酶能使所有5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，但不同的限制性内切酶对这种甲基化作用的敏感性不同性内切酶对这种甲基化作用的敏感性不同D Dam甲基化酶的作用位点在5'-GATC-3'序列内部，但该酶与DNA靶序列的结序列左右两端的其它碱基组成合还依赖于5'-GATC-3'序列左右两端的其它碱基组成E Dam甲基化酶既能使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6单甲基化，也能使其双甲基化，只有后者才能抵御相应限制性内切酶的切割作用基化，只有后者才能抵御相应限制性内切酶的切割作用023 带有多个不同种复制起始区的质粒是【带有多个不同种复制起始区的质粒是【B B】A 穿梭质粒穿梭质粒穿梭质粒B 表达质粒表达质粒C 探针质粒探针质粒D 整合质粒整合质粒E 多拷贝质粒多拷贝质粒024 某一重组转化系统的重组率为10%，转化率为10 7 / m g DNA，经切接单元操作后的载个重组克隆，需在重组实验中投入载体【】体转化率为原来的1%。

第八章基因工程电子教案

的遗传信息转移过程 • 转染(transfection): 真核细胞主动摄取或被动
导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。
目的基因的筛选和鉴定
(screening/selection)
• 遗传学方法
– 插入灭活法(insertion inactivation):抗药性标志选择 – 标志补救表达产物与营养缺陷互补
• 3′→5′外切酶活性 • 5′→3′外切酶活性
3′→5′外切酶活性
5′
3′
3′
5′
5′→3′外切酶活性
末端脱氧核苷酰转移酶 (TDT)
载体 vector
• DNA ，能在宿主细胞中进行自我复制和表达
• 克隆载体、表达载体 • 原核载体: 质粒(pBR322,pUC…）
Eco RⅠ Hind Ⅲ
氨苄青霉素抗性基因
(ampr)
Pst Ⅰ
pBR322
Bam HⅠ
Sal Ⅰ
四环素抗性基因
(terr)
Ava Ⅰ
O ri
Pvu Ⅱ
常用的克隆载体
• λ噬菌体(λphage) • 基因组分三个区域: 左侧区、中间区（非必需
区）、右侧区 • DNA，替换型载体，外源DNA: 9~23kb • 常用: EMBL 系列、 λgt 系列、charon系列 • 粘性质粒(cosmid): λDNA的 cos区+质粒，双链
环状DNA，克隆容量: 40~50kb • M13噬菌体 • 最大优点: 产生单链DNA
特点:
cos:cohesiveend site
RF DNA: replicational form DNA
优点:
表达载体(expressing vector)

（完整版）基因工程思考题答案--删减后学习

（完整版）基因工程思考题答案--删减后学习第二章1. 名词解释（1）顺反子(cistron)：基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子（cistron），一个顺反子编码一种完整的多肽链。

它是遗传的功能单位。

（3）转位因子（transposable elements）：是指可以从染色体基因组上的位置转移到另一个位置，甚至在不同的染色体之间跃迁的基因成分。

（4）基因组（genome）：细胞中，一套完整单倍体的遗传物质的总合。

（5）启动子（promoter）：是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始转录的序列，其大小不等，具有转录目标基因的mRNA 的功能。

启动子是基因表达不可缺少的重要元件。

（6）基因（gene），基因是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。

（7）顺反子(cistron)：基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子（cistron），一个顺反子编码一种完整的多肽链。

它是遗传的功能单位。

（8）终止子（terminator），在基因3 端下游外侧与终止密码子相邻的一段非编码的核苷酸短序列，具有终止转录的功能，叫做终止子（terminator）。

（9）断裂基因（split gene），真核生物的结构基因是不连续的，编码氨基酸的序列被非编码序列所打断，因而被称为断裂基因（split gene）。

在编码序列之间的序列称为内含子（intron），被分隔开的编码序列称为外显子（exon）。

（10）顺式作用元件（cis-acting elements），指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的DNA序列。

包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。

（11）反式作用因子（trans-acting elements），可结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子称为反式作用因子（trans-acting elements）。

分子生物学常见名词解释

分子生物学常见名词解释1、分子生物学：是一门从分子水平研究生命现象、生命本质、生命活动及其规律的科学。

2、医学分子生物学：是分子生物学的一个重要分支，又是一门新兴交叉学科。

它是从分子水平上研究人体在正常和疾病状态下的生命活动及其规律，从分子水平开展人类疾病的预防、诊断和治疗研究的一门科学。

3、酶工程：过去主要是通过生物化学方法从各种材料中提取、制备酶制剂。

现在主要应用基因工程技术制取酶制剂。

4、蛋白质工程：过去主要是采用化学方法对纯化的蛋白质进行结构改造，制备出有特定功能的蛋白质。

现在主要应用基因工程技术，从改造目的基因的结构入手，在受体细胞中表达不同结构的蛋白质。

5、微生物工程：又称发酵工程是利用微生物特定性状，使微生物产生有用物质或直接用于工业化生产的技术。

6、DNA的甲基化：DNA的一级结构中，有一些碱基可以通过加上一个甲基而被修饰，称为DNA的甲基化。

7、CG岛：在整个基因组中存在一些成簇、稳定的非甲基化CG，这类CG称为CG岛。

8 、信使RNA：从DNA分子转录的RNA分子中，有一类可作为蛋白质生物合成的模板，称为信使RNA。

9、顺反子：由结构基因转录生成的RNA序列亦称为顺反子。

10、帽子结构：5端第1个核苷酸是甲基化鸟嘌呤核苷酸，它以5端三磷酸酯键与第2个核苷酸的5端相连，而不是通常的3、5磷酸二酯键。

11 、核酶：在没有任何蛋白质（酶）存在的条件下，某些RNA分子也能催化其自身或其它RNA分子进行化学反应，即某些RNA具有酶样的催化活性，这类具有催化活力的RNA被命名为核酶。

12、蛋白质的变性：蛋白质分子爱到物理化学因素（如加热、紫外线、高压、有机溶剂、酸、碱等）的影响时，可使维持空间结构的次级键断裂，性质改变，生物活性丧失，称为蛋白质的变性。

13、蛋白质的复性：导致蛋白质变性的因素除去后，某些蛋白质又可重新回复天然构象，表现出天然蛋白质的生物活性，称为蛋白质的复性。

14、基因：是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位，是指贮存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。

生物工程概论复习题

第二章《基因工程》复习题一、选择题1. 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（D）A 修复自身的遗传缺陷B 促进自身的基因重组C 强化自身的核酸代谢D 提高自身的防御能力2.生物工程的上游技术是（D）A 基因工程及分离工程B 基因工程及发酵工程C 基因工程及细胞工程D 基因工程及蛋白质工程3. 基因工程操作的三大基本元件是:(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体) （A）A. I + II + IIIB. I + III + IVC. II + III + IVD. II + IV + V4. 多聚接头（ Polylinker ）指的是（A）A. 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段B. 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段C. 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段D. 含有多种启动基因的人工 DNA 片段5.下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是（D）A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6. 若将含有 5' 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3' 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是（D）I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶A. IIIB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III7.下列有关连接反应的叙述，错误的是（A）A. 连接反应的最佳温度为 37 ℃B. 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C. 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD. 连接酶通常应过量 2-5 倍8. T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（D）A. 2' -OH 和 5' –PB. 2' -OH 和 3' -PC. 3' -OH 和 5' –PD. 5' -OH 和 3' -P9. 载体的功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力) （D）A. IB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III10.克隆菌扩增的目的是 (I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因 III 表达外源基因) （D）A. I + IIB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III11. 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（C）A. 大肠杆菌－繁殖迅速B. 枯草杆菌－分泌机制健全C. 链霉菌－遗传稳定D. 酵母菌－表达产物具有真核性12.考斯质粒（cosmid）是一种（B）A. 天然质粒载体B. 由λ -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体C. 具有溶原性质的载体D. 能在受体细胞内复制并包装的载体13. 某一重组 DNA （ 6.2 kb ）的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。

第四章 DNA的复制

第四章DNA的复制第一节DNA复制的特点一、DNA的半保留复制DNA复制的可能机制：全保留复制散布式复制半保留复制二、复制的起点（Orient）复制起点或复制原点，常用Ori或O表示。

复制起点的结构（以E.coli为例）1、框架结构(Frame structure)间隔序列变化大，识别序列较保守2、有一系列的反向重复序列（回文结构），故易形成高级结构3、有4个9bp的重复序列—“dna盒”较保守，TTATNCANA，是OriC复制起始时dnaA蛋白的特异结合位点。

4、有3个13bp的重复序列GATCTNTTNTTTT，dnaA蛋白结合位点，DNA融化解链。

5、有11个GA*TC序列A的甲基化是必须的，若缺失，则复制功能受影响复制起点的功能复制的起动（主要功能）控制复制（有些参与）A、控制拷贝数B、控制复制周期C、控制复制方向三、复制的方向双向等速复制：E.coli、酵母、果蝇、哺乳动物单向复制：动物线粒体不对称复制：枯草杆菌DNA复制子：生物体的单个复制单位，包含一个复制原点，也可能包括一个复制终点。

通常，细菌、病毒和线粒体DNA都只含有一个复制子，而真核基因组含有多个复制子。

四、DNA复制的方式1、复制叉式、“复制叉”、“复制眼”2、θ型复制(Cairns复制)1963年Cairns提出。

E.coli DNA的复制为θ型复制。

3、滚环型复制λ噬菌体：产生多联体尾巴ΦX174：成环滚环型复制4、D环型复制线粒体和叶绿体的环状DNA第二节DNA复制有关的酶和蛋白质一、原核DNA聚合酶的种类DNA聚合酶I（DNA pol I）DNA聚合酶II（DNA pol II）二、DNA pol I的性质DNA pol I分子量为109kd，约1000个残基，由polA基因编码。

用枯草杆菌蛋白酶处理DNA pol I，可获得两个片段。

大片段分子量为76kd，具有5'-3'聚合酶活性和3' -5'外切酶活性，被称为Klenow片段。