分离纯化(1)
生物分离纯化习题 (1)
第一章绪论一、名词解释生物物质生化分离技术二、填空题1.生物物质的来源、、、、。
2.生物分离纯化工作按照生产规模可分为、、三个层次。
3.蛋白质保存方法、、。
三、选择题1.选择生物物质分离纯化技术和工艺的依据（）A、物理性质B、化学性质C、生物学性质D、生理性质2、生物活性越高的成分，一般它在物质中的含量越（）。
A、高B、低C、一般D、无法提取3分离纯化过程需要加入（）保持生物大分子的活性。
A、糖类B、缓冲溶液C、中性盐D、半胱氨酸四、简答题1.生物分离纯化的特点？2.生物分离纯化原材料的选择要注意哪些问题？3.影响生物产品保存的主要因素？第二章预处理技术一、名词解释凝聚作用絮凝作用凝聚值二、填空题1．组织与细胞的破碎方法有、、、。
2.降低发酵液黏度的方法、。
3.加入助滤剂的方法、。
4.除去杂蛋白的常用方法、、。
5.凝聚值越小，则凝聚剂的凝聚能力越。
6.检查细胞破碎效果的方法有、、。
三、选择题1.大多数蛋白质的等电点在（）范围。
A、酸性B、碱性C、中性D、不固定2.加入助滤剂可使滤液（）A、滤速增大B、滤速减小C、增加成本 D 、保持渗透性3.除去钙离子的试剂（）A、草酸B、草酸钙C、草酸钠D、铁离子4．分离DNA、RNA混合物（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法5．分离大小不同、密度不同的物质（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法6．分离大小相近、密度不同的物质（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法7．分离大小不同、密度相近的物质（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法四、简答题1.改变发酵液过滤特性的方法有哪些？2.影响絮凝效果的因素有哪些？3.超声波破碎法的特点？4.进行细胞破碎所使用的表面活性剂有哪些？5.影响离心效果的因素有那些？6.常用的离心设备有哪些？第三章固相析出分离法一、名词解释（每题2分）1．结晶2．盐析法二、填空（每空1分）1．常用的盐析用盐有、、2．盐析方法有两种类型，分别为、，其中用于提取的前期，用于提取的后期3．盐析用中性盐的浓度多用来表示，也就是把饱和时的浓度看作1或100%。
蛋白质的分离纯化方法一
楚雄师范学院化学与生命科学系
范树国
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
3.毛细管电泳
楚雄师范学院化学与生命科学系
范树国
4.等电聚焦电泳
等电聚焦电泳法测定蛋白质pI
5.SDS-PAGE
6.离子交换层析
离子交换纤维素： 离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应 离子交换交联琼脂糖：
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范树国
普通电泳、等电聚焦、 双向电泳、脉冲电泳、 毛细管电泳 从电泳结果分：自由界 面电泳、区带电泳、盘 状电泳 从装置上分： 圆盘电 泳（柱状）、水平板电 泳、垂直板电泳。 从支持物分： 自由界 面电泳、纸电泳（或薄 膜电泳）、凝胶电 泳（ PAGE ，琼脂糖胶， 淀粉胶等）
沉降的速度与颗粒的重量、密度和形状有关。离心后按其沉降 的速度不同，彼此分开形成区带。再进行光学定位，针刺或冰 冻切片采样分析。
蔗糖密度梯度
聚蔗糖密度梯度
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范树国
3.凝胶过滤
交联葡聚糖（Sephadex）;聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P ）；琼脂糖凝胶（Sepharose，Bio-Gel A）
稳定蛋白质胶体溶液的主要因素 ①蛋白质表面极性基团形成的水化膜将蛋白质颗粒彼此隔开， 不会互相碰撞凝聚而沉淀。 ②两性电解质非等电状态时，带同种电荷，互相排斥不致聚集 而沉淀。
一旦电荷被中和或水化膜被破坏，蛋白质颗粒聚集，便从溶液 中析出沉淀。
楚雄师范学院化学与生命科学系
范树国
（二）蛋白质的沉淀
①盐析法 向蛋白质溶液中加入大量的中性盐[（NH4）2SO4、 Na2SO4、NaCl]，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。 ②有机溶剂沉淀法 破坏水化膜，降低介电常数。 ③重金属盐沉淀 pH大于等电点时，蛋白质带负电荷，可与 重金属离子（Hg2+. Pb2+. Cu2+ 等）结成不溶性沉淀 ④生物碱试剂和某些酸类沉淀法 pH小于等电点时，蛋白质 带正电荷，易与生物碱试剂和酸类的负离子生成不溶性沉淀。 生物碱试剂：是指能引起生物碱沉淀的一类试剂，单宁酸、 苦味酸、钨酸。酸 类：三氯乙酸、磺基水杨酸。 ⑤加热变性沉淀 往往是不可逆的。
蛋白质的分离纯化(1)
白质的净电荷为零时的pH称等电点（pI）。
蛋白质等离子点： 没有其他盐类干扰时, 蛋白质质子供体基团解离出来
的质子数与质子受体基团结合的质子数相等时的pH称为等 离子点。
二、蛋白质的紫外吸收性质
蛋白质溶液能吸收一定波长的紫外光，主要是由带 芳香环的氨基酸决定的。其在280nm处对紫外吸收能力 的强弱顺序为：
电
电
泳
泳
方
方
向
向
等电聚焦电泳
SDS-PAGE
双向电泳后的凝胶经染色蛋白呈现二维分布图，水平方向反映 出蛋白在pI上的差异，而垂直方向反映出它们在分子量上的差别。
所以双向电泳可以将分子量相同而等电点不同的蛋白质以及等 电点相同而分子量不同的蛋白质分开。
5.层析聚焦(P310)
是根据蛋白质的等电点差异分离蛋白质混合物的柱层析方法。
(polyacrylaminde gel electrophoresis) 电泳
PAGE
样品浓缩成很薄的起始区带（0.1mm）
它以聚丙烯酰胺 凝胶为支持物，一般 制成凝胶柱或凝胶板 （不连续体系）。
浓缩胶 分离胶
凝胶的浓度（孔径大小）、 缓冲液组分和离子强度、 pH以及电场强度都是不同的
分离成单区带
依次洗脱收集后， 通过紫外吸收法测定吸 收峰。
这样大小不同的蛋白 质就被分离开来了。
（二）根据蛋白质溶解度不同的纯化方法
（蛋白质的胶体和沉淀性质）
主要方法： 1：等电点沉淀和PH值控制 2：蛋白质的盐溶和盐析 3：有机溶剂分级分离法 4：改变温度
1.等电点沉淀和PH值控制
即在不改变其它条件的情况下，PH处于等电点时的蛋白质 溶解度达到最低点。而位于等电点两侧的PH条件下蛋白质的溶
生物分离纯化
生物分离纯化
1生物分离纯化
生物分离纯化是一项广泛应用的技术实践，它可以提取出特定组分并去除杂质，从而得到纯细胞，分子或有机液体。
生物分离纯化为研究者提供了一种简便的方法，可以在极短的时间内提取蛋白质，碳水化合物，脂肪，酶及其他细胞内成分。
该技术的使用大大提高了实验效率，为从生物样本中提取高纯度物质提供了便利和灵活性。
生物分离纯化的基本原则是使用一系列的步骤和技术来提取、分离和纯化指定的物质。
这些步骤可以包括分子生物学，物理，化学和生物技术，以及计算机和机器人技术。
在细胞分离技术中，可以针对指定的细胞进行分类，以便某些细胞能够从其他不同细胞中获得。
还有生物抽取技术，可以从细胞株或特定分子中提取所需的物质。
随着科学技术的发展，生物分离纯化技术也在不断成熟和发展。
作为新兴的生物技术，生物分离纯化技术可以在各种研究领域中发挥重要作用，用于疾病诊断、药物研发、细胞和基因工程等研究领域。
同时，它还可以改善食品和饮料产品的品质和安全，更有效地提取重要的细胞分子，缩短研究实验时间，更加有效地操作，更具成本效益性。
总而言之，生物分离纯化技术的应用以及它的丰硕的回报，是必将不断扩展的趋势。
无论是临床研究、化学研究、供应链管理或其他研究领域，生物分离纯化技术的应用都将推动生物技术的发展，推动
与该领域有关的各项技术进步和发展，实现未来科学研究的突破和创新。
分离纯化的方法
分离纯化的方法分离纯化是化学、生物学和生物化学领域中一个非常重要的步骤，它用于从混合物中分离出所需的化合物或生物分子，并去除杂质。
在实验室中，科研人员经常需要使用各种方法对混合物进行分离纯化，以便进行后续的实验或应用。
本文将介绍几种常见的分离纯化方法，包括过滤、结晶、色谱和电泳等。
首先，过滤是一种常见的分离纯化方法，它利用不同大小的孔径来分离固体颗粒和溶液。
通过选择合适的滤膜或过滤纸，可以将溶液中的固体颗粒或大分子物质过滤掉，从而得到较为纯净的溶液。
过滤是一种简单易行的方法，广泛应用于实验室中。
其次，结晶是一种常用的固体分离纯化方法。
当溶液中的溶质浓度超过其溶解度时，溶质会结晶沉淀出来，从而实现分离纯化的目的。
通过适当的溶剂选择和控制结晶条件，可以得到纯度较高的晶体产物。
另外，色谱技术是一种高效的分离纯化方法，它根据化合物在固定相和流动相之间的分配系数来实现分离。
常见的色谱方法包括薄层色谱、柱层析色谱和高效液相色谱等，它们可以根据化合物的性质和分子大小选择合适的分离方法，从而得到高纯度的化合物。
最后，电泳是一种常用的生物分子分离纯化方法，它根据生物分子在电场中的迁移速度差异来实现分离。
电泳可以根据分子的电荷、大小和形状进行选择性分离，常用于蛋白质、核酸和多肽等生物分子的分离纯化。
综上所述，分离纯化是化学、生物学和生物化学领域中非常重要的实验步骤，它涉及到多种方法和技术。
通过选择合适的分离纯化方法，可以有效地从混合物中分离出所需的化合物或生物分子，并得到高纯度的产物，为后续的实验和应用奠定基础。
在实际操作中，科研人员应根据实验要求和样品特性选择合适的分离纯化方法，以确保实验顺利进行并取得理想的结果。
简述核酸分离纯化的主要步骤
简述核酸分离纯化的主要步骤核酸分离纯化的主要步骤其实就是一场与基因的“亲密接触”。
我们就像是在进行一场精密的科学“约会”，只不过对象是DNA或RNA，而不是人。
好啦，咱们来看看这个过程如何进行的吧。
1. 材料准备
1.1 样品收集
首先，你得找点样品，可能是植物、动物，甚至是细菌。
想象一下，就像挑选食材一样，你需要挑选新鲜的“原料”。
1.2 细胞裂解
接下来，咱们要“破壳”了！通过加入一些裂解缓冲液，把细胞膜弄开，释放出里面的核酸。
这个过程就像是打开一个“宝箱”，哇，里面可真丰富！
2. 去除杂质
2.1 去除蛋白质
这一步，你得用一些蛋白酶，把细胞里的蛋白质都搞定。
想象一下，就像是把不需要的东西清理出去，只留下最闪亮的宝物。
2.2 沉淀核酸
然后，咱们需要加入酒精，通常是乙醇。
核酸会跟酒精“亲密接触”，沉淀下来。
这个时候你会发现，核酸就像是被请出舞池的主角，闪闪发光！
3. 洗涤与重溶
3.1 洗涤
在沉淀后的核酸上，加点洗涤液，就像给它洗个澡，把残留的杂质都冲走。
你得小心翼翼，别让它“滑了”！。
3.2 重溶
最后一步，是把洗净的核酸重新溶解在缓冲液中。
这个过程就像是给核酸穿上新衣服，焕然一新，准备出门见客！
完成这些步骤后，你的核酸就“出炉”啦！感觉就像是一场成功的约会，满载而归。
希望这个过程能让你对核酸分离纯化有个更轻松的了解。
就这样，你成功地和基因建立了“深厚的友谊”，为后续的实验打下了良好的基础！。
dna分离纯化方法及原理
dna分离纯化方法及原理
1. 酚-氯仿抽提法：这是一种传统的 DNA 提取方法。
原理是利用酚和氯仿的混合物来溶解细胞膜和蛋白质，使 DNA 与其他细胞成分分离开来。
然后通过离心和有机溶剂的萃取，将 DNA 从混合物中提取出来。
2. 硅胶柱层析法：该方法基于 DNA 与硅胶柱子之间的吸附和解吸作用。
将待提取的样本加载到硅胶柱上，通过柱子的吸附作用，使 DNA 与其他杂质分离开来。
然后用适当的洗脱缓冲液将 DNA 从柱子上洗脱下来。
3. 磁珠法：这是一种利用磁性颗粒结合 DNA 的方法。
将磁珠与样本混合，使 DNA 与磁珠结合。
通过外部磁场的作用，可以将磁珠与结合的 DNA 分离开来，从而实现 DNA 的纯化。
4. 质粒抽提法：这种方法适用于提取质粒 DNA。
通过碱处理破坏细菌细胞壁和细胞膜，使质粒 DNA 从细菌细胞中释放出来。
然后通过离心和沉淀等步骤，将质粒 DNA 与其他杂质分离开来。
5. 超声波法：利用超声波的能量，将细胞破碎，使 DNA 释放到溶液中。
然后通过离心和沉淀等步骤，将 DNA 与其他杂质分离开来。
这些方法的原理基于不同的物理、化学或生物学原理，旨在从复杂的生物样本中选择性地分离和纯化 DNA。
选择合适的方法取决于样本类型、纯度要求和实验目的等因素。
在 DNA 分离纯化过程中，还需要注意操作规范、防止污染，并进行质量控制和检测，以确保获得高质量的 DNA 用于后续的分析和实验。
重组蛋白质的分离纯化 (1)
重组蛋白质的分离纯化摘要：90年代以来基因重组技术得到很大的发展，基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的60%～80%，因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。
本文主要介绍了沉淀、液液萃取、层析等常用分离重组蛋白方法的原理及应用，旨在为开展蛋白质的制备及其应用研究提供理论依据。
关键词：重组蛋白质；分离；纯化；沉淀；液液萃取；层析；包涵体随着基因重组技术的发展，出现了很多基因工程产品，而作为基因工程技术的下游工程中的基因重组蛋白的分离纯化技术越来越显示其重要性。
据有人统计,基因工程产品的分离纯化成本约占到其全部成本的60%～80%[1]。
由此可见产品的分离纯化是获得目的产物的关键一步，也是比较困难的一步，它标志着生物产业的高低。
纯化重组蛋白质和普通蛋白质的不同就在于要选择合适的表达系统，因为表达系统决定了细胞培养过程中产物的性质以及可能产生的杂蛋白，而纯化重组蛋白质的主要目的是去除杂蛋白质，通常对一种重组蛋白质的纯化会采用多个系统[2]。
但是重组蛋白有几种不同的表达形式，如细胞外的分泌表达；细胞内可溶性表达以及包涵体形式的存在，因此对于重组蛋白的纯化要依据其表达形式的不同，采取不同的纯化工艺。
与传统方式相似，重组蛋白的分离纯化也是利用其物理和化学性质的差异，即以分子的大小、形状、溶解度、等电点、亲疏水性以及与其它分子的亲和性等性质建立起来的。
目前主要的纯化方法有浓缩沉淀法，层析和电泳技术。
重组蛋白质在分离纯化的过程中，必须维持一定的浓度和生物活性形式，以及防止被降解。
因此从生物体中有效分离纯化重组蛋白质一直是个难题。
90 年代以来,国内外许多科学工作者在蛋白质分离纯化技术和工艺上进行了大量的研制和开发,将原有的纯化技术水平提高到一个新的高度。
本文将简单介绍一些传统的分离纯化方法，并介绍近10 年来重组蛋白分离纯化中的新进展和一些新出现的技术。
1 沉淀分离技术1.1 盐析法其原理是蛋白质在高浓度盐溶液中，随着盐浓度的逐渐增加，由于蛋白质水化膜被破坏、溶解度下降而从溶液中沉淀出来。
常用的微生物分离纯化方法
常用的微生物分离纯化方法(总7页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除(一) 常用的微生物分离纯化方法菌种分离纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。
其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备, 分离纯化效果好, 现分别简述如下1. 稀释混合倒平板法平板是指经熔化的固体培养基倒入无菌培养皿中, 冷却凝固而成的盛有固体培养基的平皿。
该法是先将待分离的含菌样品, 用无菌生理盐水作一系列的稀释(常用十倍稀释法, 稀释倍数要适当), 然后分别取不同稀释液少许 (0.5-1.0ml)于无菌培养皿中, 倾入已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基, 迅速旋摇, 充分混匀。
待琼脂凝固后, 即成为可能含菌的琼脂平板。
于恒温箱中倒置培养一定时间后, 在琼脂平板表面或培养基中即可出现分散的单个菌落。
每个菌落可能是由一个细胞繁殖形成的。
挑取单一个菌落, 一般再重复该法1-2次,结合显微镜检测个体形态特征,便可得到真正的纯培养物。
若样品稀释时能充分混匀,取样量和稀释倍数准确,则该法还可用于活菌数测定。
图4 混合倒平板操作法示意图图5 涂布平板操作法示意图2. 稀释涂布平板法采用上述稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间,缺乏溶氧而生长受影响,形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高,易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固, 不能充分混匀。
在微生物学研究中, 更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。
该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基, 先倒入无菌培养皿中,制成无菌平板。
待充分冷却凝固后,将一定量(约0.1 ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面, 再用三角形无菌玻璃涂棒涂布,使菌液均匀分散在整个平板表面, 倒置温箱培养后挑取单个菌落。
分离纯化的方法
分离纯化的方法在化学实验中，分离纯化是非常重要的步骤。
通过分离纯化，可以将混合物中的目标化合物分离出来，并去除其他杂质，从而得到纯净的化合物。
本文将介绍几种常见的分离纯化方法。
一、结晶法结晶法是一种常见的分离纯化方法。
它适用于固体化合物的分离纯化。
该方法的原理是利用化合物在溶剂中的溶解度差异，将目标化合物从混合物中分离出来。
具体步骤为：将混合物加入适量的溶剂中，加热溶解，然后缓慢冷却，使化合物结晶沉淀。
最后用过滤等方法将结晶物体分离出来。
二、蒸馏法蒸馏法是一种常用的液体分离纯化方法。
它利用液体在不同温度下的沸点差异，将混合物中的目标液体分离出来。
具体步骤为：将混合物加热至目标液体的沸点，分离出目标液体蒸汽，然后通过冷凝器将蒸汽冷却成液体，最后收集分离出的目标液体。
三、萃取法萃取法是一种常用的液液分离纯化方法。
它利用化合物在不同溶剂中的溶解度差异，将目标化合物从混合物中分离出来。
具体步骤为：将混合物加入适量的溶剂中，搅拌均匀，然后分层。
将溶液中的目标化合物萃取到另一种溶剂中，最后用分离漏斗等方法将两种溶液分离开来，得到目标化合物。
四、色谱法色谱法是一种分离纯化化合物的重要方法。
它利用化合物在固定相和流动相之间的分配系数差异，将混合物中的目标化合物分离出来。
具体步骤为：将混合物加入色谱柱中，通过流动相的流动，将化合物逐一分离出来。
常见的色谱方法有薄层色谱、气相色谱和液相色谱等。
五、电泳法电泳法是一种利用电场作用下分离化合物的方法。
它适用于分子量较小的化合物的分离纯化。
具体步骤为：将混合物中的化合物加入电泳胶中，施加电场，然后化合物在电场作用下移动，根据化合物的电荷大小和分子量大小，将化合物进行分离纯化。
总之，分离纯化是化学实验中非常重要的步骤。
通过结晶法、蒸馏法、萃取法、色谱法和电泳法等方法，可以将混合物中的目标化合物分离出来，并得到纯净的化合物。
对于化学实验人员来说，熟练掌握这些分离纯化方法，是非常必要的。
酶工程 第四章酶的分离纯化 第一节细胞破碎
第一节 细胞破碎
2．表面活性剂处理 表面活性剂可以和细胞膜中的磷脂及脂蛋白相互作用， 使细胞膜结构破坏，增加膜的透过性。
表面活性剂有离于型和非离子型之分，对细胞破碎效 果而言，离子型表面活性剂较有效，但由于离子型表面活 性剂会使酶的结构破坏，引起酶变性失活。所以，在酶的 提取方面一般不采用离子型表面活性剂。而采用非离子型 的特里顿(Triton)、吐温(Tween)等表面活性剂。例如，用 特里顿X—100处理诺卡氏菌细胞，从而提取胆甾醇氧化 酶，用胆酸盐处理细胞，提取一种膜结合的葡聚糖酶等。 处理完后，可采用凝胶层析等方法，将表面活性剂除去， 以免影响酶的进一步分离纯化。
•
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
由于溶菌酶等上述列举的酶价格较高，而且外加酶本身混入细胞
破碎液中成为杂质，故此，外加溶菌酶的方法难以用于大规模工业生
产。
第一节 细胞破碎
2.自溶法
将细胞在一定的pH值和适宜的温度条件下保温一段时 间，通过细胞本身存在的酶系将细胞破坏，使胞内物质释 出的方法称为自溶法。
自溶法效果的好环取决于自溶条件。主要有温度、pH 值、离子强度等。自溶时间一般较长，不易控制，为防止 其他微生物在自溶液中滋长，必要时可加入甲苯、氯仿、 叠氮钠等杀菌剂。
第一节 细胞破碎
三、渗透压法
渗透破碎是破碎细胞最温和的方法之一。细胞在低渗 溶液中由于渗透压的作用，溶胀破碎。如红血球在纯水中 会发生破壁溶血现象。但这种方法对具有坚韧的多糖细胞 壁的细胞，如植物、细菌和霉菌不太适用，除非用其他方 法先除去这些细胞外层坚韧的细胞壁。
四、化学破碎法
化学破碎法是应用各种化学试剂与细胞膜作用，使细 胞膜的结构改变或破坏的方法。
表面活性剂处理法对膜结合酶的提取特别有效，在实 验室和生产中均已成功使用。
分离纯化的基本步骤
蛋白质分离纯化的基本步骤蛋白质分离纯化分为四个步骤：（一）材料的预处理及细胞破碎(二)蛋白质的抽提（三）蛋白质粗制品的获得（四）样品的进一步分离纯化。
蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。
（一）材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。
所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。
常用的破碎组织细胞的方法有：1.机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。
常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
2.渗透破碎法这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
3.反复冻融法生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。
这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4.超声波法使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
5.酶法如用溶菌酶破坏微生物细胞等。
(二)蛋白质的抽提通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。
抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。
如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。
在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
（三）蛋白质粗制品的获得选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。
比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。
常用的有下列几种方法：1.等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2.盐析法不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。
被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
3.有机溶剂沉淀法中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。
能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。
核酸分离纯化的主要步骤
核酸分离纯化的主要步骤1. 什么是核酸分离纯化？嘿，大家好！今天我们来聊聊核酸分离纯化这回事。
说白了，它就是从细胞里提取出DNA或RNA的过程。
就像是把美味的汤从锅里倒到碗里，确保里面没有杂质。
咱们的细胞里有很多东西，像是蛋白质、脂类和水分，真是五花八门。
但我们只想要那个最重要的核酸，嘿，这可是一项技术活哦！2. 核酸分离纯化的主要步骤2.1 细胞裂解第一步，就是把细胞搞破。
这听起来有点狠，但其实这是必须的，像个忍者一样，咱们得悄悄潜入细胞的世界。
我们用一种叫做裂解缓冲液的东西，里面有各种化学物质，可以把细胞膜弄得稀巴烂。
想象一下，把一个坚硬的蛋壳敲开，里面的蛋黄蛋白就可以流出来啦！这时候，细胞里的东西就会全部跑出来，嘿嘿，包括咱们要找的核酸。
2.2 细胞碎片去除接下来，咱们要把那些不需要的“杂物”清理掉。
细胞里面可不是清汤挂面，咱们得把破碎的细胞膜和其它大块的东西滤掉。
这个过程可以用离心来搞定，像旋转木马一样，把重的东西甩到边上，让核酸跟着跑到上面。
然后小心翼翼地把上面的液体吸出来，这可得细心，别把宝贝也给弄丢了！2.3 核酸沉淀好啦，经过一番折腾，咱们终于把核酸从那些杂七杂八的东西里解救出来了。
可是，这时候核酸还没完美地展现出来，咱们还需要进一步把它沉淀下来。
这里就要用到乙醇或异丙醇，咱们把它们加入到提取液中，就像给核酸穿上一件漂亮的外衣。
等一会儿，核酸就会像小颗粒一样沉到瓶底，真是美得不要不要的！3. 清洗和重悬核酸3.1 清洗核酸在沉淀出核酸后，我们还得给它洗个澡，别让它沾上那些脏东西。
再加点冷的乙醇，把沉淀的核酸轻轻洗一遍，像给小狗洗澡一样，既要温柔又要彻底。
洗完后，再把它离心一遍，剩下的就会是干净的核酸，闪闪发光，简直美丽动人！3.2 重悬核酸最后一步，就是把干净的核酸放到一个适合它的环境中，让它重新“生活”起来。
咱们用合适的缓冲液把它溶解开，确保它能够活跃地工作。
就像小鸟飞回温暖的家，核酸终于回到了它该待的地方。
分离纯化的原理及方法
1、分离纯化的原理及方法：1、根据分子大小和形状不同（凝胶过滤法。
透析和超滤法、密度和梯度离心法）2、根据分子的带电性质分离（离子交换法、电泳法）3、根据分子极性大小及溶解不同进行分离（等电沉淀法、盐析法）4、根据配体特异性进行分离（亲和层析法）5、根据物质的吸附性进行分离（吸附层析法）2、盐析用盐及条件选择：1、硫酸铵、氯化钠、硫酸钠2、盐析条件控制：ph值常被控制在被沉淀物等电点附近、温度一般控制在室温，特殊酶类在4摄氏度下、盐浓度常根据被分离物选择饱和度不同的盐。
盐析法的优点：对设备要求低安全应用范围广、不会发生变性3、在萃取中常用（分配系数表示平衡的两个共存相溶质浓度的关系。
对互不混溶的两液相系统分配系数常为k=c1|c24、胃蛋白酶和胃膜素的制备：性质：淡黄色粉末、肉类特殊气味，易溶于水吸湿性强、呈酸性、难溶于有机溶剂。
用途：临床上用于消化不良、食欲不振的治疗（自溶、过滤）（脱脂、去杂质）（浓缩、干燥）猪胃黏膜-h2o、hcl---自溶液--三氯甲烷或乙醚------上清液---------成品45·c--48·c 24-28h 40·c工艺过程：a 自溶、过滤：在夹锅内预先加水100l及盐酸，加热至50·c，在搅拌加入200kg 猪胃黏膜，快速搅拌使酸度均匀、保持45-48·c，消化3-4h用纱布过滤除去未消化的组织蛋白，收集滤液b 脱脂、去杂质：将滤液降温至30·c以下，静置24-28h使杂质沉淀，分出弃去，得脱脂酶液c 浓缩、干燥：取脱脂酶液，在40·c以下浓缩至原体积1/4左右，真空干燥，球磨，即得胃蛋白酶。
D-甘露醇：性质：白色针状结晶、无臭、略有甜味、不潮解、易溶于水、溶于热乙醇不溶于有机溶剂。
生化药物：是运用生理学的理论、方法。
直接从生物体分离或用微生物合成或用现代生物技术制备的一类用于预防治疗、诊断疾病的药物。
微生物的分离纯化实验报告
一、实验目的1. 理解微生物分离纯化的基本原理和方法。
2. 掌握倒平板、涂布平板等微生物接种技术。
3. 学习观察微生物的菌落形态特征，进行初步鉴定。
4. 培养无菌操作意识和实验室基本操作技能。
二、实验原理微生物的分离纯化是指从混杂的微生物群体中，分离出只含有一种或某一株微生物的过程。
实验中常用的分离纯化方法有稀释平板法、涂布平板法、划线分离法等。
通过在固体培养基上形成单菌落，可以实现对微生物的纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、酒精灯、酒精棉球、显微镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、电子天平、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 土壤样品的处理- 称取适量土壤样品，加入10倍体积的无菌水，充分振荡混匀。
- 以无菌操作，取1ml土壤悬液，加入9ml无菌水中，制成10^-1稀释液。
- 重复上述步骤，制成10^-2、10^-3等不同稀释度的土壤悬液。
2. 倒平板- 将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，倒入无菌培养皿中，使培养基厚度约为2-3mm。
- 待培养基凝固后，用无菌镊子取适量不同稀释度的土壤悬液，分别滴加到培养皿中。
- 将培养皿倒置，放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 涂布平板- 将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，倒入无菌培养皿中，使培养基厚度约为2-3mm。
- 待培养基凝固后，用无菌棉签蘸取适量土壤悬液，均匀涂布在培养皿表面。
- 将培养皿倒置，放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
4. 划线分离- 将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，倒入无菌培养皿中，使培养基厚度约为2-3mm。
- 待培养基凝固后，用无菌接种针取适量土壤悬液，在培养皿表面进行划线分离。
- 将培养皿倒置，放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
5. 菌落观察与鉴定- 观察不同平板上的菌落形态，记录菌落的颜色、大小、形状、边缘等特征。
分离纯化定义
分离纯化定义
分离纯化定义是一个用于描述在化学和生物化学实验中常用的技术过程。
分离纯化定义是指将混合物中的特定组分分离出来，并获得其中高度纯净的物
质的过程。
在化学和生物化学实验中，往往需要将原始物质中的目标物质与其他杂质分开，以便进一步研究和应用。
在分离纯化过程中，常用的方法包括但不限于：过滤、沉淀、析出、结晶、萃取、蒸馏、柱层析、电泳等。
具体使用哪种方法取决于目标物质的特性和实验需求。
过滤是一种常见的物质分离方法，通过使用过滤纸或其他滤网将混合物中的固
体颗粒或浮游物分离出来。
这种方法适用于固体与液体的分离。
沉淀和析出则是通过在混合物中添加化学试剂，从而使目标物质沉淀或析出出来。
结晶是通过溶液中溶质的结晶过程将目标物质从溶液中分离出来。
萃取是利用
溶剂的选择性溶解性将目标物质从混合物中提取出来。
蒸馏是通过利用各组分的不同沸点来将液体混合物进行分离。
柱层析是一种根据物质的亲和性和吸附性进行分离的方法。
柱层析通常利用填
充在柱子中的吸附剂将混合物中的组分分离。
电泳则是利用不同组分在电场中的迁移速率不同来实现分离。
总之，分离纯化定义描述了在化学和生物化学实验中常用的物质分离方法的过程。
这些方法的选择取决于实验的具体需求和目标物质的性质，能够帮助科学家们获得纯净的目标物质以进行更深入的研究。
分离纯化原理
分离纯化原理分离纯化是化学分离技术中的重要环节，它通过一系列的物理或化学方法，将混合物中的目标物质与杂质分离开来，达到纯化的目的。
在化工生产、制药工业、生物技术等领域，分离纯化技术被广泛应用。
本文将介绍几种常见的分离纯化原理及其应用。
首先，我们来介绍一种常见的分离纯化原理——溶剂萃取。
溶剂萃取是利用两种或两种以上的互不相溶的溶剂，通过它们对目标物质和杂质的不同溶解度，将目标物质从混合物中分离出来的方法。
这种方法广泛应用于化工生产中，例如从石油中提取石蜡、从植物中提取精油等。
其次，离子交换是另一种常见的分离纯化原理。
离子交换是利用具有固定电荷的树脂或其他材料，通过阳离子和阴离子之间的吸附和释放，将混合物中的离子分离开来的方法。
这种方法在水处理、制药工业中得到广泛应用，例如用于软化水、制备生物制剂等。
此外，凝胶过滤是生物技术领域常用的分离纯化原理之一。
凝胶过滤是利用孔径大小不同的凝胶材料，通过分子在凝胶中的大小排列，将混合物中的大分子和小分子分离开来的方法。
这种方法常用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离纯化，例如制备生物药物、分析蛋白质结构等。
最后，我们介绍一种常见的分离纯化原理——蒸馏。
蒸馏是利用混合物中各组分的沸点差异，通过升华和冷凝，将混合物中的各组分分离开来的方法。
这种方法在化工生产中得到广泛应用，例如提纯酒精、分离石油中的各种馏分等。
总的来说，分离纯化原理涉及到多种物理和化学方法，通过不同的原理和手段，可以实现对混合物中目标物质的有效分离和纯化。
在实际应用中，需要根据具体的情况选择合适的分离纯化方法，并结合工艺条件和经济成本进行综合考虑，以达到高效、经济、环保的生产目的。
核酸的分离纯化(1)
Kanamycin resistance gene
Stanley Cohen & Annie Chan
Plasmi d
pSC10 1
Tetracycline resistance gene
E. coli transformed with recombinant plasmid
Transformed cells plated onto medium with kanamycin and tetracycline
（五）核酸的保存
完整版课件ppt
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前言
核酸（nucleic acid）是遗传信息的携带者， 是基因表达的物质基础。
无论是进行核酸结构还是功能研究，首先 需要对核酸进行分离和纯化。
核酸样品质量将直接关系到实验的成败。
Home
完整版课件ppt
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一、核酸分离、纯化原整版课件ppt
10
一把特殊的剪刀 —限制性内切酶的发现
阿尔伯(Arber)、史密斯(Smith)和内森斯(Nathans)， 获1978年诺贝尔生理学和医学奖
完整版课件ppt
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Herbert Boyer, Stanley Cohen 1972年获得第一 个重组DNA分子 (实现不同来源 DNA的重组)
1 意义
遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸 的—级结构还决定其高级结构的形式以及和其 他生物大分子结合的方式。
2 分离核酸原则：
1）温度不要过高；
2）控制一定的pH值范围(pH值5-9);
3）保持一定的离子强度;
4）减少物理因素对核酸降解的机械剪切力.
完整版课件ppt
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Home
（二）防止核酸的生物降解
实验一 土壤中微生物的分离纯化(1)
4)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关 键?为什么?
5)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而 是集中在一起时，你认为问题出在哪里?
6)用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的
菌落有何不同?为什么要培养较长时间(48h)
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菌落记数仪
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一般选择每个平板上长有30~300个菌落的 稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。同一
稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很
大，否则表示试验不精确。实际工作中同一
稀释度重复对照平板不能少于三个，这样便 于数据统计，减少误差。由10-4、10-5、 10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌 落形成单位数也不应相差太大。
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常用的划线方法有下列二种：
1）用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在 平板培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再 转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉 ，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线 ，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行 划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线 划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温室培养。
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（4）培养 将高氏1号培养基平板和马丁氏培养 基平板倒置于28℃温室中培养3—5日，肉膏 蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2—3日。
（5）挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取 接种到上述三种培养基的斜面上，分别置 28℃和37℃温室中培养，待菌苔长出后，检 查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查 是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就 要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。
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1.生物药物:是利用生物体、生物组织或其成分，综合应用生物化学、微生物免疫学、和药学等的原理与方法制造的一大类用于预防、治疗、诊断的制品。
2.生物制品：主要指菌苗、毒素、应变原与血液制品等。
3.合成与部分合成生物药物：以天然药物为分子母体，经化学或生物学方法修饰改造合成的生物药物。
4.基因药物：以基因物质（RNA或DNA及其衍生物）作为治疗的药物基础，包括基因治疗用的重组目的DNA片段、重组疫苗、反义药物和核酶等。
5.反义药物：以人工合成的十至几十个反义寡核苷酸序列与模板DNA或mRNA互补形成稳定的双键结构，抑制靶基因的转录和mRNA的翻译，从而起到抗肿瘤和抗病毒的作用。
6.疫苗：使用病毒或立克次氏体，接种于动物、鸡胚或组织培养后，加以处理制成，可分为弱毒疫苗和死毒疫苗。
7.类毒素：使用细菌产生的外毒素加入甲醛处理后，使之变为无毒性但仍旧有免疫原性的制剂。
8.细胞破碎：采用一定的方法，在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜，设法使胞内产物最大程度的释放到液相当中，破碎后的细胞浆液经固液分离除去细胞碎片后，再采用不同的分离手段进一步纯化。
9.过滤：在外力的作用下，悬浮液中的液体通过多孔介质的孔道而固体颗粒被截留下来，从而实现固液分离的操作。
10.料液：在溶剂萃取中，被提取的溶液被称为料液。
溶质：在溶剂萃取中，欲提取的物质被称为溶质。
萃取剂：用以进行萃取的溶剂。
11.反萃取：将萃取液与反萃取剂（一般为水溶液）相接触，使某种被萃取的有机相溶质转入水相的过程。
12.萃取液：含溶质的萃取剂溶液。
萃余液：被萃取出溶质以后的溶液。
13.双水相萃取：又称水溶液两相分配技术，它利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。
14.临界胶束浓度（CMC）：是胶束形成时所需表现活性剂的最低浓度。
15.正常胶束：将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶束浓度时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体，通常情况下，这种聚集体是水溶液中的胶束，被称为正常胶束。
16.反胶束：将表面活性剂溶于非极性的有机溶剂中，并使其浓度超过临界胶束浓度，便会在有机溶剂内形成聚集体，这种聚集体被称为反胶束。
17.超临界流体：在临界温度和临界压力以上的流体，高于临界温度和临界压力而接近临界点的状态。
18.超临界流体萃取技术：是利用处于临界压力和临界温度以上的一些溶剂流体所具有（特异增加物质溶解能力）来进行分离纯化的技术。
19.固相析出技术：通过加入某种试剂或改变溶液条件，使生化产物以固体形式（沉淀和结晶）从溶液中沉降析出的分离纯化技术称为固相析出技术。
20.盐析法;是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。
21.有机溶剂沉淀：向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法。
22.凝胶层析：又称分子筛层析，是将样品混合物通过一定孔径的凝胶固定相，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的祖坟的一份力的层析方法。
23.类分离（组分离）：将分子量极为悬殊的两类物质分开的方法。
24.分级分离：将分子量相差不大的大分子物质加一分离的方法。
25.离子交换法：利用溶液中带电粒子与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离的操作方法。
26.有效粒径：指筛分树脂时，10%体积的树脂颗粒通过，而90%体积的树脂颗粒保留的筛孔直径。
27.均一系数：指能通过60%体积（筛上体积40%）树脂的筛孔直径与能通过10%体积（筛上体积90%）的树脂的筛孔直径之比。
均一系数越接近1，表明树脂颗粒越均匀，在文献上常常见到用筛目数表示树脂粒度。
28.树脂再生：使用过的树脂重新获得使用性能的处理过程。
29.转型：树脂去除后，为了发挥其交换能力，按照使用要求人为地赋予平衡离子的过程。
30.毒化：指树脂失去交换性能后，不能用一般的再生手段重获交换能力的现象。
31.洗脱：离子交换完成后，将树脂所吸附的物质释放出来重新转入溶液的过程。
32.亲和纯化技术：利用生物分子间的特异性结合作用的原理，进行生物物质分离纯化的技术。
33.亲和层析：利用生物体中多数大分子物质具有于某些相应的分子专一性可逆结合的特性而建立的分离纯化技术。
（利用生物大分子特异亲和力而设计的层析技术）34.沉降作用：悬浮液静置时，在重力作用下，密度大于周围液体的固体颗粒逐渐下沉。
35.离心技术：利用旋转产生的离心力代替重力，加速固体沉降速度的一中分离法方式。
36.离心力：在一定角度速度下，做圆周运动的任何物体都受到的向外的力。
37.相对离心力：实际离心场转化为重力加速度的倍数。
38.沉降速度：在离心作用下，物质粒子于单位时间内沿离心力方向移动的距离。
39.沉降系数：在单位离心力场中，颗粒的沉降速度称为沉降系数，即通过单位离心力场所需的时间。
40.角度转子：又名角度头或定角转子，离心管中心线与转轴呈14-40度角。
常见角度：20、28、34、40.41.差分离心法（差速离心法）：是依据不同大小和密度的颗粒在离心力场中沉降速度的不同进行离心分离的一项技术。
42.速度区带离心法：离心操作时，将样品液置于连续或不连续的密度梯度液上，控制离心时间，是具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带，从而达到彼此分离的目的。
43.等密度离心法：离心作用下，不同密度的多组分颗粒在梯度介质中向上或向下移动，当移动至其密度与介质密度相等时的位置便不再移动，形成静止区带，即达到离心平衡，各组分按照密度不同处于区带的不同位置。
44.膜分离：借助于膜而实现各种分离过程。
45.透析：在常压下依靠小分子物质的扩散运动来完成。
46.超过滤：分子级膜分离手段，以压力差为推动力将不同分子量的物质进行选择性分离。
47.浓差极化现象：外源压力迫使分子量较小的溶质通过薄膜，大分子被截留于膜表面，并逐渐形成浓度梯度。
48.吸附法：利用吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于适当的吸附剂上，利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，使目的物和其他杂质分离，达到浓缩和提纯目的的方法。
简24.影响内扩散速度的因素（1）离子浓度：离子浓度越高，内扩散速度越大（2）温度升高一度，内扩散速度增加4--8%（3）离子半径与电荷：阳离子每增加一个电荷，内扩散速度降低10倍，阴离子每增加一个电荷，内扩散速度降低7--8倍（4）树脂颗粒越小，速度越快（5）交联度：交联度增加，速度降低，交联度降低，内扩散速度增加（6）交换容量：内扩散速度随其增加而降低25. 影响外散速度的因素（1）离子浓度：离子浓度越高，外扩散速度越大（2）温度升高一度，外扩散速度增加3--5% （3）搅拌速度越快，外扩散速度越快（4）树脂颗粒越小，外扩散速度越快26.离子交换对树脂的基本要求：（1）有尽可能大的交换容量（2）有良好的交换选择性（3）化学性质稳定（4）化学动力学性能好（如反应速率问题）（5）物理性能好27.载体活化方法：①溴化氰活化法②高碘酸氧化法③环氧化法④甲苯磺酰氯法⑤双功能试剂法28.离心机分类：·普通离心机------小于6000r/min·高速离心机------8000-25000rpm具有水冻和冷冻装置·超速离心机------25000-80000rpm具有冷冻装置1.生物药物和药理理化特征（1）药理学特征：a.药理活性高；b.治疗针对性强，合理，疗效可靠；c.毒副作用较小，营养价值高；d.生理副作用作用常有发生。
（2）理化特征：a.原料中有效物质含量低；b.稳定性差；c.易腐败；d.注射用药有特殊要求。
（3）检验上的特殊性：由于生物药物具有特殊的生理功能，因此生物药物不仅要有理化检验指标，还有生物活性检验指标。
2.生物药物的分类：（1）基因工程药物（2）基因药物（3）天然生物药物（4）医学生物制品3．死菌苗与活菌苗的区别死菌苗：是使用具有良好免疫原性的强度菌种在适宜的培养基上生长，繁殖后，利用化学和其他方法，在不破坏其抗原的原则下，将其杀死制成的。
活菌苗：是选用无毒或弱毒但免疫原性高的菌种，经培养繁殖后制成的活菌苗株进入机体后，能继续生长繁殖，对机体呈长时间刺激，持续产生抗体。
4.影响絮凝效果的因素：①絮凝剂的分子量②絮凝剂的用量③溶液pH值④搅拌速度和时间5.细胞破碎的种类及原理：（1）机械法：①匀浆法：基于液相的剪切力②珠磨法：利用研磨作用破碎③超声波：利用超声波的空穴作用（2）物理法：①干燥法：干燥后的菌体细胞膜渗透性变化，自溶②冻融法：胞内冰晶引起细胞膨胀破裂③渗透压冲击：渗透压突然变化，使细胞快速膨胀破裂（3）化学法：①化学试剂处理：应用化学试剂溶解细胞或抽提某些细胞组分②制成丙酮粉：丙酮迅速脱水，破坏蛋白质与脂质结合的键（4）生物法：①酶解法：用酶反应分解破坏细胞壁上特殊的化学键②组织自溶法6.过滤介质应具备的条件：（1）多孔性：孔道适当的小，对流体的阻力小，又能截住要分离的颗粒。
（2）物理化学性质稳定，耐热，耐化学腐蚀。
（3）足够的机械强度，使用寿命长。
（4）价格便宜。
7.乳状液的鉴别方法：（1）稀释法：水加入到O/W乳状液，乳状液被稀释。
水加入到W/O乳状液，乳状液变黏稠甚至被破坏。
（2）染色法：滴加数滴水溶性染料于乳状液中，若染成均匀的颜色，为O/W型加入油溶性染料，如内相被染色，则为W/O型。
（3）电导法：将电流计的两极插入到乳状液中，构成回路，若有电流显示，则为O/W型，反之，则为W/O型。
（4）试纸润湿性：将O/W型乳状液滴在滤纸上后会立即铺展开来，则为W/O型，而在中心留下一滴油，如果不能铺展开来，则为O/W型。
注：容易在滤纸上铺开的油，如苯，环己烷等，不宜采用此方法。
8.双水相萃取的优点：（1）使固液分离和分离纯化两个步骤同时进行，一步完成。
（2）适合热敏物质的提取，主要是胞内酶。
（3）亲水性聚合物加入水中，形成两相，水分都占较大比例（85%-95%），这样的生物活性蛋白质在两相中不会失活，且以一定比例分配于两相中9.两种高聚物的水溶液相互混合，他们之间相互作用可分为三类：（1）互不相溶：形成两个水相，两种高聚物分别富集于上下两相（作用力为斥力）。
（2）复合凝聚：形成两个水相，量中高聚物都分配于一相，另一相几乎全部为溶剂水（作用力为引力）。
（3）完全互溶：形成均相的高聚物水溶液（作用力无强烈的斥力或引力）。
10.反胶束溶解蛋白质的四个模型：(1)为水壳模型，蛋白质位于水池中心，周围存在的水层将其与反胶束团壁隔开，(2)蛋白质分子表面存在强烈疏水区域，该疏水区域直接与有机相接触（3）蛋白质吸附于反胶团内壁。
团所溶解。
（4）蛋白质的疏水区域与几个反胶团的表面活性剂疏水尾部发生相互作用，被几个小反胶11.影响超临界流体萃取的因素：（1）压力的影响：压力增加，绝大多数化合物溶解度都急剧上升。