凝胶色谱柱操作
凝胶色谱柱
装柱
由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、柱均匀性检查
凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有“纹路”或气泡。也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
4、上样
凝胶柱装好后，一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理，才能上样。凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素，总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱，一般在上柱前将样品过滤或离心。样品溶液的浓度应该尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。当一切都准备好后，这时可打开色谱柱的活塞，让流动相与凝胶床刚好平行，关闭出口。用滴管吸取样品溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中，打开流出口，使样品液渗入凝胶床内。当样品液面恰与凝胶床表面平时，再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁。重复上述操作及此，每一次的关键是既要使样品恰好全部渗入凝胶床，又不致使凝胶床面干燥而发生裂缝。随后可慢慢地逐步加大洗脱剂的量进行洗脱。整个过程一定要仔细，避免破坏凝胶柱的床层。
凝胶色谱柱长期放置须注意的细节有 色谱柱操作规程
凝胶色谱柱长期放置须注意的细节有色谱柱
操作规程
凝胶色谱柱的应用也越来越广泛，使用过后也要对色谱柱进行保养，这样才能使它的使用寿命更长期，在碰到什么问题时需实行相应的措施。凝胶色谱柱是以刚性的球型
凝胶色谱柱的应用也越来越广泛，使用过后也要对色谱柱进行保养，这样才能使它的使用寿命更长期，在碰到什么问题时需实行相应的措施。
凝胶色谱柱是以刚性的球型硅胶为基质，在其表面通过共价键化学键合亲水基团而成。凝胶色谱柱的填料具有高性能尺寸排阻色谱所必需的性能，即低吸附性和良好的孔径分布；其pH适用范围为2.5—7.5，可以使用与水完全互溶的有机溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。凝胶色谱柱适合用于分析分别蛋白质和多肽类样品。
凝胶色谱柱专为合成高分子的在高温下GPC分析而设计。尽管高度交联的PS/DVB 粒子广泛应用于合成高分子的分析，但是这种粒子会在有机溶剂中产生膨胀，尤其在高温下膨胀更为明显。凝胶色谱柱很好的解决了这个问题。填料以刚性硅胶为基质，经过独特的表面化学修饰，在高不冷不热有机溶剂中可以保持极高的稳定性。此外相对于有机聚合物填料，HTP SEC填料的刚性结构减小了分别过程中的传质，从而取得更高的辨别率和分别效率。
凝胶色谱柱特点：
高柱容量、高辨别率
宽的pH范围（pH范围2—8.5）
使用寿命长
低盐浓度洗脱，适合LC—MS分析
对于生物样品无强吸附
极低的非特异性吸附, 高的蛋白回收率及活性回收率
解决多维色谱分析应用
凝胶色谱柱的存放。假如色谱柱短时间不用，存放时要注意以下几点：
a.几天之内的短期放置，凝胶柱则用蒸馏水来冲洗，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。
GPC凝胶色谱实验步骤
一、实验目的：
1. 掌握PL—120型号凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography，GPC）的工作原理。
2. 掌握凝胶渗透色谱仪的基本操作及数据处理方法。
3. 利用凝胶渗透色谱仪测定聚合物的分子量及其分布。
二、基本原理：
分子量的多分散性是高聚物的基本特征之一。聚合物的性能与其分子量和分子量分布密切相关。凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography，GPC）是液相色谱的一个分支，已成为测定聚合物分子量分布和结构的最有效手段。其还可测定聚合物的支化度，共聚物及共混物的组成。采用制备型的色谱仪，可将聚合物按分子量的大小分级，制备窄分布试样，供进一步分析和测定其结构。该方法的优点是：快捷、简便、重视性好、进样量少、自动化程度高。
凝胶色谱的分离机理众说不一，有体积排除、限制扩散、与流动分离等各种解释。实验证明，体积排除的分离机理起主要作用。因此，这一技术又被赋予另一个名称：体积排除色谱（size exclusion chromatography，SEC）
、
图1. GPC分离过程示意图
圆球表示颗粒；黑点表示溶质分子
在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子较小的可进入
凝胶色谱操作步骤
凝胶色谱操作步骤
凝胶色谱是一种常见的生物化学分离技术，用于分离和纯化生物大分子，如蛋白质、核酸等。以下是凝胶色谱的一般操作步骤：
样品制备：将待分离的生物大分子样品溶解在适当的缓冲液中，通常要加入一些生物样品的裂解缓冲液以打破细胞结构。
样品加载：将样品加载到凝胶中，通常是通过在凝胶柱或凝胶板上形成样品孔道或者直接混合凝胶。
运行凝胶色谱：加入适当的运行缓冲液，施加电场或者离心力，让样品在凝胶中进行分离，根据分子大小、电荷、亲疏水性等特性进行分离。
收集分离物：根据需要，可以收集不同部位的凝胶，收集后的物质可以进行后续的分析或者纯化。
分析和评估：对分离得到的物质进行分析和评估，可以通过染色、质谱等方法进行鉴定和定量分析。
需要根据具体的实验要求和分离物质的特性来选择合适的凝胶材料、缓冲液和分离条件。在操作凝胶色谱时，要注意严格控制操作条件，以确保分离的准确性和重复性。
PLgel凝胶色谱柱使用指南.
PLgel凝胶色谱柱使用指南
为了尽可能延长一根凝胶色谱柱的寿命，请在使用前仔细阅读本说明。本说明仅针对PL公司的PLGel凝胶色谱柱，如果您使用的是其它类型或其它公司的凝胶色谱柱，请注意并不是所有内容均适用。
柱子安装
一般使用1/16”不锈钢管来连接柱子，0.010”内径适用于分析柱，0.020”内径适用于制备，连接管线应该尽量短来避免死体积，会造成系统性能下降。柱连接接头应使用与Parker 兼容的1/16”锥箍和螺母，详见图1，请按照GPC柱的使用方向来连接，螺母应当在手拧紧后用扳手再拧1/4圈就足够了，过分拧紧并不会改善密封，反而会损坏螺纹造成泄漏。
图 1
Compatible Connectors
在图1中的X＝0.090”，约等于2.28毫米，螺母的最小长度应为0.210”，约为5.33毫米，请不要
使用Waters和Rheodyne公司的产品，他们与PL的柱子并不兼容。
图 2
在安装柱子时，请不要将扳手放在图2所示X处，应当放在柱未端六角处。在与其它的柱子相连之前，建议将柱子与泵相连，用少量流动相清洗一下连接管内部和接头。
流速
对于传统的7.5毫米内径的GPC柱子，1.0ml/min是一个最优化的流速，当柱子的内径增加或减少时，应当适当调整体积流速来保证等效的线速度。 表1给了大家一个推荐的流速，然而对于一些高粘度的流动相，应当适当减小或升高温度，如果要更换溶剂，流速要逐渐升高，无论如何，都不要在超过柱子的最大压力下使用柱子（详见表3）。
表 1
柱型 适用流速 (ml/min) 建议流速 (ml/min)
凝胶色谱柱的使用
凝胶色谱柱的使用
凝胶色谱柱（Gel chromatography column），又称为凝胶过滤色谱柱，是一种常用于蛋白质和多肽分离纯化的柱层析技术。它是根据溶质在凝胶颗粒孔隙和凝胶颗粒表面之间的扩散速率不同来实现分离的。
凝胶色谱柱由内核和包覆层构成。内核是由纤维素、琼脂糖、琼脂和聚丙烯酰胺等材料制成的颗粒，颗粒大小一般在10-300微米之间。内核是柱层析的主要分离介质，具有一定的孔隙结构，可以根据溶质的分子量来选择孔径大小。包覆层是一层较细的凝胶层，在内核表面涂覆各种高分子材料，通过改变包覆层的化学性质，可以调控分离过程中的选择性和分离效果。
1.样品制备：准备待分离的样品溶液，通常需要用缓冲液进行稀释和调整pH值。如果样品中含有高浓度的盐类或有机溶剂等，需要进行脱盐或柱外固相萃取处理。
2.样品加载：将样品溶液加载到凝胶色谱柱上，可以通过重力流动或使用泵进行加样。
3.柱洗脱：用缓冲液进行柱洗脱，一般要满足样品的最佳分离条件。可以使用单一缓冲液或梯度洗脱，根据需要选择合适的洗脱方式。
4.收集分离物：根据需要，收集分离物进行后续分析或纯化。
1.蛋白质纯化：凝胶色谱柱可以根据蛋白质的分子量进行分离，常用于蛋白质的粗提和富集。
2.多肽纯化：凝胶色谱柱可以根据多肽的大小和亲水性进行分离，常用于多肽的富集和纯化。
3.药物研发：凝胶色谱柱可以用于药物分子的纯化和分析，有助于药
物研发过程中的药物筛选和性质表征。
4.生物分析：凝胶色谱柱可以用于生物样品中复杂成分的富集和纯化，有助于生物样品的分析和研究。
Waters-1515-2414-凝胶渗透色谱(GPC)操作规程
Waters 1515-2414 凝胶渗透色谱（GPC）操作规程
一、溶剂和样品准备
1. 选择溶剂：尝试和选择对聚合物具有良好溶解性的THF或者DMF 作为溶剂；
2. 溶剂处理：采用溶剂过滤系统（真空抽滤）对色谱纯溶剂进行过滤和脱气处理；
3. 样品配制：选用处理后的溶剂配置待测样品溶液，样品体积≥4mL；样品浓度根据估算的分子量确定（Mw＝103～104，浓度为1.5～2mg/mL；Mw＝104～105，浓度为1～1.5mg/mL；Mw＝105～5 x 105，浓度为0.5～1mg/mL；Mw ＝5 x 105～106，浓度为0.1～0.5mg/mL；Mw＞106，浓度为0.05～
0.1mg/mL）；
4. 样品溶解：提供足够时间使聚合物完全溶解（一般在室温下静止过夜）；注：可轻微摇动样品以促进溶解但不可剧烈摇动；
5. 样品过滤：样品溶解后，采用一次性微孔滤膜（孔径0.22μm）对样品溶液进行过滤，保存滤液待用；
注意：每个样品需要准备两个样品瓶（分别用于溶解样品和放置过滤后的溶液）和两个注射器（分别用于过滤和进样）
二、仪器启动
1. 将经过真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中；
2. 依次打开稳压电源－计算机－泵－柱温箱－示差折光检测器开关；
3. 启动Breeze软件，输入用户名Breeze；选择1515-2414系统，确定；
4. 在Breeze软件系统中点击运行样品－点击流量图标设置泵流速0.2mL/min，注意：设置变化时间为2min，即以0.1mL/min缓慢增加流速，使色谱柱所受压力缓慢变化；
凝胶渗透色谱(GPC)、凝胶色谱操作保养规程
凝胶渗透色谱(GPC)
凝胶渗透色谱(GPC)是一种高效液相色谱法，广泛应用于聚合物、
复合材料、生物大分子等高分子化合物的分析和分离。凝胶渗透色谱
法主要利用高分子溶液在凝胶固相中的渗透性差异来实现分离和分析
的目的，能够测定分子量、分子量分布、聚集度、分子间交联数等多
种参数。
仪器设备
凝胶渗透色谱法的通用仪器设备包括高压液相色谱系统、检测器、
分离柱等。
常见的高压液相色谱系统包括光学检测系统、荧光检测系统等，用
于检测高分子材料在凝胶固相中的渗透性变化并测定相应的分子量和
分子量分布等物理性质。
分离柱是凝胶渗透色谱法的核心组成部分，其材料和结构对分离效
果和分辨能力具有很大的影响。聚合物样品通过某种特定的凝胶材料
分离柱经过一定的时间，根据分子量的不同，所渗透的凝胶固相大小
不等，从而实现分离和分析。
操作方法
1.准备溶液：通常情况下，GPC的流动相溶液只需用纯化水
或其他合适的溶剂（如THF或DMF等）稀释或调节pH值即可。
但是，对于需要进行聚合反应的样品，则需要加入相应催化剂等
反应剂进行调制。
2.校正仪器：先放出空气，制备高质量系统凡是都有很多门
道。最重要的环节是确保准确的样品体积可以被注入到必要的系统中，而不影响正常运行。人们了解到，凝胶色谱仪在每个运行周期之前都需要进行一次校准，以确保该系统可以精确地量测介质的浓度。
3.样品预处理：准备悬浮在液相中的聚合物溶液，然后将其
过滤以去除异物。对于有机可溶性聚合物，最好使用1.0微米的滤膜。而对于水溶性聚合物，则采用更小的孔径（如0.2微米）以去除微生物。
凝胶色谱净化系统安全操作及保养规程
凝胶色谱净化系统安全操作及保养规程
前言
凝胶色谱净化系统是目前分离、富集、纯化大分子生物化学和分子
生物学等领域中广泛使用的方法之一。净化系统的使用频率越来越高，因此，操作净化系统的工作者必须遵守全部的安全操作规程以及仪器
保养规程。这份文档旨在提供使用凝胶色谱净化系统的工作者必须遵
守的操作和保养规程。
安全操作规程
使用凝胶色谱净化系统时，请务必按照下面的安全操作规程操作。
操作前的准备
在使用凝胶色谱净化系统之前，务必进行以下准备操作：
•确认你已经戴着安全眼镜和实验室外套
•检查净化系统及所有部件是否干燥、完好无损
•检查净化系统、连接管路及电缆是否牢固
•根据净化样品的pH值准备好所需的缓冲液、洗脱溶液等操作过程
1.打开电源开关并将系统开关设置为“OFF”。
2.将前置柱网络装置设置成按步骤操作，注意打开和关闭气
密夹、手柄及法兰蝶阀等部件时的位置。
3.检查前置柱网络装置内部是否无异物后，将样品架和冷却
器固定在前置柱网络装置上，并将整个前置柱网络装置固定在样品栏中。
4.注入样品并排除空气，使用气密夹将样品进口夹紧，并从
样品进口处轻轻注入样品。
5.将开始开关切换到“ON”位置，膜泵开始工作并运行到流
量调控峰值。
6.打开毒气保护装置，确保实验室的空气清晰并且仪器正常
运行时启动，否则会触发毒气报警并停止运行。
7.监测电位的变化，确保实验室时身处在标准环境下。如果
出现异常，请断电并联系负责人处理。
8.等待凝胶色谱净化系统运行完毕后，关闭所有的阀门并切
断电源。
安全操作小贴士
•操作凝胶色谱净化系统时，应该遵守实验室的最大操作时间，并将样品外围的环境气温控制在实验室规定的室温范围之内。
凝胶色谱柱操作
凝胶色谱柱操作
1、溶胀
商品凝胶是干燥的颗粒，通常以40~63um的使用最多。凝胶使用前需要在洗脱液中充分溶涨一至数天，如在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温到近沸，则溶涨时间可以缩短到1~2小时。凝胶的溶涨一定要完全，否则会导致色谱柱的不均匀。热溶涨法还可以杀死凝胶中产生的细菌、脱掉凝胶中的气泡。
2、装柱
由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、柱均匀性检查
凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查
方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有纹路”或气泡。也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
凝胶色谱gpc
凝胶色谱gpc
凝胶色谱（GPC）是一种分离技术，其特点是使用凝胶作为分离介质，因此得名。GPC是一种广泛应用于聚合物分子量分析的方法。它具有许多优点，如高分辨率、简单易行、准确性高等特点。本文将从定义、原理、应用等方面详细介绍GPC技术。
一、定义凝胶色谱（GPC），又称凝胶过滤色谱（GFC），是一种以聚合物溶液中分子量大小分离为目的的色谱技术，通过使用一种凝胶化合物作为固定相来实现。异构体、聚合物和其他高分子物质可以被凝胶过滤器赶出溶液，从而有效进行分析。
二、原理 GPC的原理是将待测样品注入溶剂中，并通过进样系统将样品引入色谱柱中。色谱柱由一束微粒、凝胶或涂层柱组成，包括高分子树脂、泡沫塑料或其他亲水性材料。样品通过色谱柱流动时，大分子会因分子量大而与凝胶颗粒反复碰撞，并逐渐逐出柱外。相反，小分子则更容易穿过凝胶颗粒，达到提取分子的目的。
由于某些原因，大分子的分离能力非常重要。其中最重要的条件是使用疏水性溶液，这有助于分子与凝胶颗粒产生亲水作用，并排出大分子分子，以谷物的形式进行检测和分离。其次，为了获得最好的分离效果，GPC操作需要
优化。包括确定外径，内径，粒径，压强，长度和运行时间等参数。
三、应用 GPC技术广泛应用于聚合物分子量分析、生物大分子的纯化和组分分离，其中聚合物分子量分析是GPC 的主要应用之一，把聚合物以及其他宏大分子按照其不同的分子量分离出来，并对其分子量进行测定。
GPC广泛用于各种行业，尤其是化学、医药、材料科学等领域。GPC技术因其简单易实施，又不需高百科技含量，被广泛用于聚合物领域中分子量的分析。聚合物的分子量和分子分布是对其性质、应用和储存特性影响较大的一个参数，因此GPC技术已经成为聚合物科研和实际应用领域的日常工具。
凝胶过滤层析的基本操作
凝胶过滤层析的基本操作
①凝胶介质的选择
根据待分离蛋白质的分子量，选择具有相应分离范围的凝胶。对于未知蛋白质，应选
择更宽的凝胶，如sephacryls-300。对于分子量为3~5kda的蛋白质，应选择Sephadex
G50或G25进行脱盐；对于低分子量多肽物质（1~5kda），应选择Sephadex G10或Sephadex G15进行脱盐。
②凝胶介质的处理和装柱
商业明胶通常是干粉，在使用前用水膨胀。一般来说，1份明胶加10份水会自然膨胀至少24小时。膨胀后，从上清液中取出小凝胶，丢弃并再次搅拌。凝胶沉淀后，再次丢
弃凝胶碎片，重复几次，直到液相被清除。为了加速膨胀，可以将凝胶煮沸一小时，这种
方法同时具有杀菌效果。
凝胶过滤层析柱的长与直径的比例应为50~100:1。装柱时柱体要垂直，先在柱内加入约1/3柱床体积的水或缓冲液，然后沿柱一侧将缓冲液中的凝胶（凝胶：缓冲液=3：1）
搅拌均匀，缓慢并连续地一次性注入柱内。装柱过程中，要避免柱内缓冲液流干，注意保
持柱体凝胶均匀无气泡和裂缝。装完后，可用2ml蓝色葡聚糖溶液检查柱体的均匀性。如
柱体均匀，可见蓝色区带均匀平稳地通过凝胶，不留任何条纹。要保持凝胶和缓冲液温度
一致，以减少气泡的产生。③上样
凝胶过滤柱色谱法对样品的体积有严格的要求。样品体积不得超过柱床体积的1~5%。如果超过5%，分离效率将降低。如果低于1%，则分离效率不会提高。因此，蛋白质样品
应尽可能浓缩至10~20mg/ml。样品本身与洗脱液的相对粘度不得超过2。如果样品粘度过高，色谱区会不稳定，或流速不规则，色谱区会变宽或扭曲。加载前样品应通过0.2μm？用孔径滤膜过滤或用10000g离心机离心5min，以去除残留物。添加样品时，避免损坏色
gpc凝胶渗透色谱仪操作指南
gpc凝胶渗透色谱仪操作指南
读者如何操作GPC凝胶渗透色谱仪。
[仪器准备工作]
首先，对于任何仪器操作，安全是第一要务。在操作GPC凝胶渗透色谱仪之前，确保你已经熟悉了所有的安全操作程序和紧急情况的处理方法。接下来，确保所有的仪器部件都处于良好状态。检查管路和接头，确保它们没有损坏或者堵塞。检查流动相和溶剂的储存罐，确保它们有足够的溶剂供应。最后，打开色谱仪的电源，进行必要的预热和平衡。
[样品准备]
在操作GPC凝胶渗透色谱仪之前，确保你已经准备好了样品。首先，将样品溶解在适当的溶剂中。然后，使用过滤器过滤样品以去除任何悬浮物。最后，记得将样品放入样品瓶中，并且贴上标签，包括样品的名称和相关信息。
[仪器设置]
在GPC凝胶渗透色谱仪操作中，正确的仪器设置是至关重要的。首先，根据你的样品类型和需要，选择合适的柱子和流动相。然后，设置色谱仪的流速和温度。流速的选择应该能够保证样品在适当的时间内通过柱子，而温度的选择应该能够
保证分离效果。最后，确保检测器和数据采集系统都已经设置好，并且校准正确。
[运行样品]
当一切都准备好后，就可以开始运行样品了。首先，用流动相平衡柱子一段时间，以确保它的状态稳定。然后，将样品注入色谱仪，并开始运行。在运行过程中，注意观察数据采集系统，确保记录到合适的数据。最后，当运行完成时，停止色谱仪并处理收集到的数据。
[数据分析]
最后，当得到了样品的数据后，需要进行数据分析。首先，将数据导入数据处理软件中，并进行平滑和去噪。然后，根据峰的形状和峰面积，对样品的组分进行分析和定量。最后，根据分析结果，得出相关的结论和建议，并将结果整理成报告。
凝胶渗透色谱(GPC)、凝胶色谱设备安全操作规定
凝胶渗透色谱(GPC)
凝胶渗透色谱（GPC）又称凝胶色谱，是高分子化合物的分子量测
定和分布分析的重要方法之一。GPC是一种以凝胶过滤为基础的分离
技术，通过溶液中高分子量化合物在凝胶柱的过滤作用下发生分离和
分子量分布测定。
GPC是一种广泛使用的技术，涉及到工业、生产等多个领域，因此
设备的安全操作至关重要。下面介绍凝胶色谱设备的操作规定。
设备安全操作规定
一、设备安装
1.在设备安装前，应仔细阅读设备的说明书，并根据说明进
行安装。
2.安装地点应选择平稳、通风、无尘、无环境振动和电磁干
扰的地方。
3.在安装凝胶色谱柱时，切勿使柱子接触到有机溶剂，以免
磨损和污染。
4.在连接系统管路时，要求密封性好，避免泄漏和外界污染。
二、操作前准备
1.确认设备电源、水源和气源等是否正常，并根据实际需要
进行调整和适当调节。
2.准备好实验所需试剂、溶剂、标准品等，并按要求进行标
记和分类。
3.检查柱子封头是否紧固，柱温控制是否正常，出样口和检
测器设备是否连接正常。
三、样品准备
1.样品需先过滤，去掉杂质和颗粒，然后进行适当的稀释处
理，以避免过高的浓度造成的毛刺。
2.样品的溶剂应与流动相相同，以避免对流动相造成干扰和
影响。
3.在进行样品预处理和进样前，必须先清洗进样器和采样针，
以避免样品交叉污染和干扰。
四、操作过程中的注意事项
1.注意保持操作环境干净，避免灰尘、污染物等杂质进入柱
子和系统中。
2.切勿突然关闭机器或脱离电源，应按照说明书要求进行操
作，避免对设备和数据造成损伤和误差。
3.在操作过程中，随时监测输出信号，注意记录相关的参数
Waters 1515-2414 凝胶渗透色谱(GPC)操作规程
Waters 1515-2414 凝胶渗透色谱（GPC）操作规程<br>一、溶剂和样品准备<br>1. 选择溶剂： 尝试和选择对聚合物具有良好溶解性的 THF 或者 DMF 作为 溶剂； 2. 溶剂处理：采用溶剂过滤系统（真空抽滤）对色谱纯溶剂进行过滤和脱 气处理； 3. 样品配制：选用处理后的溶剂配置待测样品溶液，样品体积≥4mL；样 品浓度根据估算的分子量确定 （Mw＝103～104， 浓度为 1.5～2mg/mL； Mw＝104～ 105，浓度为 1～1.5mg/mL；Mw＝105～5 x 105，浓度为 0.5～1mg/mL；Mw＝5 x 105～106，浓度为 0.1～0.5mg/mL；Mw＞106，浓度为 0.05～0.1mg/mL）； 4. 样品溶解： 提供足够时间使聚合物完全溶解 （一般在室温下静止过夜） ； 注：可轻微摇动样品以促进溶解但不可剧烈摇动； 5. 样品过滤：样品溶解后，采用一次性微孔滤膜（孔径 0.22μm）对样品溶 液进行过滤，保存滤液待用； 注意： 每个样品需要准备两个样品瓶 （分别用于溶解样品和放置过滤后的溶液） 和两个注射器（分别用于过滤和进样）<br>二、仪器启动<br>1. 将经过真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中； 2. 依次打开稳压电源－计算机－泵－柱温箱－示差折光检测器开关； 3. 启动 Breeze 软件，输入用户名 Breeze；选择 1515-2414 系统，确定；<br>4. 在 Breeze 软件系统中点击运行样品－点击<br>流量图标设置泵流速<br>0.2mL/min，注意：设置变化时间为 2min，即以 0.1mL/min 缓慢增加流速，使色 谱柱所受压力缓慢变化； 5. 在示差折光检测器面板上，点击 Temp º C 设置温度 40 º C（set/control）；<br><br>
凝胶色谱柱知识点总结
凝胶色谱柱知识点总结
凝胶色谱柱的分类
凝胶色谱柱主要有两种类型，即大小分离色谱和亲和色谱。
1. 大小分离色谱
大小分离色谱是根据生物大分子在凝胶中的大小差异进行分离的，通常用来分离蛋白质、核酸和多肽等大分子生物大分子。根据凝胶的孔径大小，可以将大分子生物大分子从小分子生物大分子中分离出来。
2. 亲和色谱
亲和色谱是利用生物大分子与特定配体之间的亲和作用来进行分离和纯化的方法。通常在凝胶上固定一定的亲和剂，通过生物分子与亲和剂之间的特定相互作用来实现生物分子的选择性吸附和洗脱。
凝胶色谱柱的原理
凝胶色谱柱的分离原理是利用凝胶材料固定在色谱柱中，通过色谱柱中的孔隙结构来实现生物大分子的分离。凝胶色谱柱根据其孔隙大小可分为两种类型，包括凝胶过滤柱和凝胶渗透柱。
1. 凝胶过滤柱
凝胶过滤柱利用凝胶中的孔隙大小来分离生物大分子。当生物大分子通过色谱柱时，较大的生物大分子会被凝胶阻挡，而较小的生物大分子可以通过凝胶的孔隙，从而实现生物大分子的分离。
2. 凝胶渗透柱
凝胶渗透柱通过凝胶中的孔隙大小来实现生物分子的分离。通常，生物大分子会根据其大小在凝胶柱中进行渗透，从而实现生物大分子的分离和纯化。
凝胶色谱柱的应用
凝胶色谱柱在生物分离和纯化中有广泛的应用，主要包括以下几个方面：
1. 蛋白质分离与纯化
凝胶色谱柱可用于蛋白质的分离与纯化，对于分离蛋白质复合物、纯化功能蛋白等方面具有重要作用。
2. 核酸分离与纯化
凝胶色谱柱可以用于核酸的分离与纯化，对于分离DNA、RNA等核酸样品具有重要作用。
3. 多肽分离与纯化
凝胶色谱柱也可用于多肽的分离与纯化，对于分离多肽混合物、纯化特定多肽等方面具有
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凝胶色谱柱操作
1、溶胀
商品凝胶是干燥的颗粒，通常以40~63um的使用最多。凝胶使用前需要在洗脱液中充分溶涨一至数天，如在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温到近沸，则溶涨时间可以缩短到1~2小时。凝胶的溶涨一定要完全，否则会导致色谱柱的不均匀。热溶涨法还可以杀死凝胶中产生的细菌、脱掉凝胶中的气泡。
2、装柱
由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、柱均匀性检查
凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有“纹路”或气泡。也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
4、上样
凝胶柱装好后，一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理，才能上样。凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素，总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱，一般在上柱前将样品过滤或离心。样品溶液的浓度应该尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品
适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。当一切都准备好后，这时可打开色谱柱的活塞，让流动相与凝胶床刚好平行，关闭出口。用滴管吸取样品溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中，打开流出口，使样品液渗入凝胶床内。当样品液面恰与凝胶床表面平时，再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁。重复上述操作及此，每一次的关键是既要使样品恰好全部渗入凝胶床，又不致使凝胶床面干燥而发生裂缝。随后可慢慢地逐步加大洗脱剂的量进行洗脱。整个过程一定要仔细，避免破坏凝胶柱的床层。
5、冲洗
凝胶色谱的流动相一半多采用水或缓冲溶液，少数采用水与一些极性有机溶剂的混合溶液，除此之外，还有个别比较特殊的流动相系统，这要根据溶液分子的性质来决定。加完样品后，可将色谱床与洗脱液贮瓶及收集器相连，设置好一个适宜的流速，就可以定量地分布收集洗脱液。然后根据溶质分子的性质选择光学、化学或生物学的方法进行定性和定量测定。
6、再生
因为在凝胶色谱中凝胶与溶质分子之间原则上不会发生任何作用，因此在一次分离后用流动相稍加平衡就可以进行下一次的色谱操作。但在实际应用中常有一定的污染物污染凝胶。对已沉积于凝胶床表面的不溶物可把表层凝胶曲调，在适当增补一些新的溶涨胶，并进行重新平衡处理；如果整个柱有微量污染，
0.5mo/LlNaCl溶液洗脱。在通常情况下，一根凝胶柱可使用半年之久。
凝胶柱若经多次使用后，其色泽改变，流速降低，表面有污渍等就要对凝胶进行再生处理。凝胶的再生是指用恰当的方法除去凝胶中的污染物，使其恢复其原来的性质。交联葡萄糖凝胶厂用温热的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液浸泡，用水冲洗到中性；而对于聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶由于遇酸碱不稳定，则常用盐溶液浸泡，然后用水冲到中性。
7、保存
经常使用的凝胶以湿态保存为主，为了避免凝胶床染菌，可加少许氯仿、苯酚或硝基苯等化学物质，它可以使色谱柱放置几个月至一年。凝胶的干燥应先对凝胶进行浮选，除去细小的颗粒，并用大量水洗，除去盐和污染物，然后逐步增加一春浓度使凝胶收缩，在60~80度干燥，在整个操作过程中的蒸馏水、器皿和房
间必须干净。琼脂糖凝胶的干燥操作比较麻烦，并且干燥后还不容易溶张，所以一般仍以湿态保存为主。
凝胶色谱柱的使用方法
看到很多虫友问葡聚糖凝胶的使用方法，所以将自己的一点经验写下来，以作参考。葡聚糖凝胶柱的使用方法大体有一下步骤：
(1) 预处理称取葡聚糖凝胶（有不同型号）若干克，加入洗脱剂（通常为甲醇或者水，这里以甲醇为例）约20倍凝胶量，置室温下3h进行溶胀，溶胀必须彻底，否则会使上柱后流速变慢，凝胶断裂等。
(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。然后将柱垂直安装好，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边缓缓连续装入，色谱柱的出口流速m维持在5~10ml/min。(1d为0.05ml，所以要1S两滴）
胶颗粒沉积到柱底后关紧色谱柱，等沉降到1-2cm时再2打开色谱柱。直至降到满意高度为止，等凝胶柱内的液体留的与凝胶高度差不多时，用较小的滤纸盖住凝胶床表面，再用洗脱剂洗脱过夜。装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。否则，必须到出重装。
(3) 加样装好的色谱柱至少要用相当于3倍保留体积的洗脱剂平衡，待洗脱剂流至与凝胶柱液面相平时（不能流干，否则会带入气泡），用滴管吸取样品溶液，在高于凝胶表面约1cm处，沿管壁四周缓缓滴加样品液，加完后打开下面的出口，使样品渗入凝胶内。再关闭出口，用少量洗脱液将管壁残留的样品洗下，再打开出口，至溶液渗入柱内，再关闭出口。可以考虑再加一层薄薄的脱脂棉以保护柱表面（我一般不加），然后即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用甲醇作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。一般酸性洗脱剂中碱性物质容易洗脱，碱性洗脱剂中酸性物质容易洗脱。多糖类物质等极性大的物质考虑用水