VFA测定操作规程-比色法

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脂肪酶活测定

一．脂肪酶活测定

原理：脂肪酶在一定条件下，将甘油三酯水解。在不同水解阶段可分别产生脂肪酸、甘油二酯、甘油一酯及甘油。水解所产生的脂肪酸可以用标准的氢氧化钠滴定，用滴定值表示酶活力。

酸碱滴定法 :

酶活力以国际单位表示，即在一定条件下，脂肪酶水解脂肪每分钟产生1微克分子脂肪酸的酶量定为一个国际单位。脂肪酶活力单位＝(A-B)*nf/t*v

式中：A为样品耗碱液ml数，B为对照组耗碱液ml数，n为每毫升碱液微克分子数

(n=cM=0.05x23x1000)，f为稀释倍数，t为作用时间(分),v:反应的酶液的体积

二．挥发性脂肪酸（VFA）的测定

滴定法分析

1原理：将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH 溶液滴定馏出液。废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。

4．计算

挥发性脂肪酸含量计算如下：

VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)

式中：V(NaOH)-----滴定消耗的NaOH标准溶液的体积，ml;

c ------ 滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度，mol/L;

Vs--------被测废水水样的体积，ml.

酶活力定义：40℃,ph为5.6的条件下，每分钟酶解淀粉释放出lmg的还原糖(葡萄糖)所需酶量为一个酶活力单位。1U=1mg还原糖\min.ml酶

三．淀粉水解酶活性

原理：淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位体积样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

常规指标测试方法

COD：重铬酸钾法；波长λ=435；5ml比色皿

测量范围：1～1500mg/L

测试步骤：

于5ml比色皿中加入少量Hg2SO4（作为屏蔽剂），再加硝解液3ml（也可以分开加：先加 2.25ml Ag2SO4+ H2SO4，再加0.75mlK2CrO7）最后加入2ml水样，盖紧瓶塞，摇匀于150℃硝解2h，完全冷却后测量COD值

试剂：

①10g Ag2SO4用于1L浓H2SO4（98%），Ag2SO4：H2SO4=1：100

②49.032g K2CrO7溶于1L的水中

※硝解液即将①和②按3：1的比例混合配制而成

注意：

1.水样若浓度过高，则须先稀释，一般测量在600～800mg/L内较精

确

2.一般可先将硝解液加于试管中别用，减少润洗造成的浪费

3.空白可用一星期

4.若水样浓度高，进行稀释时一般取5ml水样，取太少误差相对较大

测试方法：

方法①：以0.45μm滤膜过滤后测试COD

方法②：离心机（转速为4500rpm）离心40min后取上清液测COD

1.取水样160ml

2.称取0.4gLiOH于黑色胶漏

3.瓶口涂加润滑剂后，将胶漏置于其中

4.于35°条件下硝解5天

NH4+–N

纳氏试剂光度法；420nm；50ml比色管

步骤：

1.取1ml水样

2.加水至50ml刻度线

3.加入1ml酒石酸钾钠

4.加入1.5ml纳氏试剂

5.摇匀静置10min

试剂：

1.酒石酸钾钠：

称取50g酒石酸钾钠（KNaC4H6·4H2O）溶于100ml水中，加热煮沸以去除氨氮，冷却，定容至100ml

2.钠氏试剂：

称取16gNaOH，溶于50ml水中，充分冷却至室温

VFA(厌氧挥发酸)的测验方法及步骤

VFA（挥发酸）的做法

试剂：0.1N NaOH溶液、10%磷酸溶液、0.5%酚酞指示剂。

做法：(1) 取500mL原液；

(2) 取50mL样品加入500mL烧瓶中，加入6mL磷酸（10%），加入300mL

蒸馏水；

(3) 连接好设备加热，直到蒸出300mL蒸馏液；

(4) 蒸馏液加入3滴酚酞，用NaOH滴定，记录数：

挥发酸(mg/L)=(V-C)*V1*60*1000/50

备注：V---滴定数；

V1—NaOH浓度；

C----空白数

配制0.1N NaOH溶液带着小烧杯、NaOH、500ml容量瓶一张滤纸

去直接用小烧杯测2.08gNaOH，用蒸馏水稀释一下倒进容量瓶，继续

稀释倒进容量瓶，直到刻度即可。

0.5%酚酞指示剂的配制方法：

①0.5g 酚酞溶于75mL体积分数为95%的乙醇中，并加人20mL水，然后

再加入约0. lmol/L的氢氧化钠溶液，直到加入一滴立即变成粉红色，

再加入水定容至l00ml （GB604 酸碱指示剂pH变色域测定通用方法时使用

的配制方法，用来测定酚酞的显色范围的）

②1g酚酞, 溶解于100mL95％的乙醇（GB603用来做酸碱滴定用）

网上其他的VFA 的测定方法

常见的VFA 测定方法有滴定法和气相色谱法。由于条件限制，本实验采用滴定法。滴定法的原理是将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH 溶液滴定馏出液。废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。

药品:

a.10%NaOH 溶液;

b.NaOH 标准溶液，O.1000mo1/L;

VFA测定操作规程-比色法

VFA分析操作规程

------比色法

VFA是厌氧发酵中微生物代谢的重要中间产物，甲烷菌利用VFA形成甲烷，属于产甲烷的原料，但厌氧反应器中过多积累VFA抑制甲烷菌的活性，测定VFA 含量作为分析厌氧发酵好坏的重要指标

一.实验原理

含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物——挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。

二.试验药品

1. 1：1硫酸

浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配制。

2. 4.5mol/L的氢氧化钠

称取180g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水稀释至1L

3. 10%硫酸羟胺溶液

称取硫酸羟胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸馏水中。

4. 酸性氯化铁试剂

将20.0g分析纯FeCl3 ·6H2O溶于500mL水中，准确加入20.0 mL浓硫酸并以蒸馏水稀释至1L。

5. 乙二醇

分析纯乙二醇

三. 试验仪器及设备

800B型离心机

25ml比色管

电炉

752紫外分光光度计

PH计

容量瓶、移液管、烧杯

四、测定步骤

1、采样

测定脂肪酸的样品应特别注意样品的代表性，采集的样品应尽快分析测定，如需放置，应密闭储存在4℃冷藏冰箱中，保存时间不能超过24h。

2、步骤

2.1 乙酸标准液的配制及标准曲线的绘制

2.1.1 精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.0%）1.010g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。

VFA分析

（NH4）2Fe（SO4）2=0.2500×10.00/V（mol/L）
4、硫酸—硫酸银
于2500ml浓H2SO4+25gAg2SO4（或500ml浓H2SO4+5gAg2SO4）
放1—2天，
5、硫酸汞结晶或粉末
步骤：
1取20.00水样（或适量稀释至20.00ml）+10.00mlK2Cr2O7+数粒小玻璃珠+30ml（硫酸+硫酸银）→回流装置→加热2h
100ml浓硫酸，冷却后移入1000ml容量瓶，稀释至标线，用K2Cr2O7
标定。
标定方法：
吸取10.00ml K2Cr2O7溶液于500ml锥形瓶中，加水稀释至110ml
左右缓慢加入100ml浓硫酸，混匀、冷却后加入3滴试亚铁灵指
示剂约（0.15ml），用硫酸亚铁铵标液滴定。颜色由黄色—蓝绿色
—红褐色。
方法原理
以硫酸酸化样品，用石油醚从样品中提取油类，蒸发去除石油醚，再称其重量，此方法测定是水中被石油醚提取物质总量。
试剂和测量内容
均用分析纯试剂。
1、石油醚，沸程30~60oC；
2、无水乙醇；
3、无水硫酸钠；
4、50%（V/V）硫酸溶液；
5、仪器：分析天平、干燥箱、电热恒温水浴锅
6、样品
定量采集100~500ml样品于清洁干燥的玻璃瓶内，此瓶用洗涤剂清洗，勿用肥皂水洗，为了保存样品，采集前，可向瓶内加入硫酸（每1000ml样品中加入2.5ml硫酸），使PH值小于2，低于4oC保存，常温下，样品可保存24小时。

VFA的测定

vfa的测定一、滴定法测vfa：

1、原理

将废水酸化后，从中酿造出来挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用氢氧化钠电解馏出液。废水中的氨态氮先在碱性条件下酿造出来。2、仪器

50ml碱式滴定管、锥形瓶、带磨口的具支蒸馏烧瓶（500ml）、与烧瓶配套的蛇形冷

凝管、橡胶导管、电炉3、试剂：

3.1、10%氢氧化钠：10g氢氧化钠溶水,叶唇柱至100ml。3.2、10%磷酸溶液：挑70ml 浓磷酸吸收至1l。

3.3、酚酞指示剂：称取0.5g酚酞溶于50ml95%的乙醇中,用水稀释至100ml。

3.4、氢氧化钠标准溶液(0.1000mol/l)酿制步骤：

称取110g氢氧化钠，溶于100ml无二氧化碳的水中，注入聚乙烯容器中，摇匀，清亮。用塑料管量取上层清液5.4ml，用无二氧化碳的水稀释至1000ml，摇匀。标定操作步骤：

称取105―110℃烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，每份约0.75g（称准至0.0001g），分别放在250ml锥形瓶中，重新加入50ml无二氧化碳的

水中溶解,加2滴酚酞指示液(10g/l)，用配好的0.1mol/l氢氧化钠溶液滴定至溶液

呈粉红色为终点。平行滴定三次，同时做空白试验。结果计算氢氧化钠标准溶液的浓度按

下式计算：c=m(v1-v2)?0.2042式中：c―氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/l；m―邻苯二甲酸氢钾的质量，g；v1―氢氧化钠溶液的用量，ml；v2―空白试验氢氧化钠的用量，ml。

0.2042―与1.00ml氢氧化钠标准溶液[c（naoh）=1.000mol/l]相当的以g表示的邻苯二

VFA的测定方法及标准曲线

VFA测定的方法

指标挥发性脂肪酸VFA，包含乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸

检测方法液相色谱法

分析仪器高效液相色谱仪，HPLC （Agilent 1200, 安捷伦科技有限公司，美国）

检测条件流动相：%稀磷酸，流速mL min-1；

检测器：紫外检测器，波长=210 nm；

分析柱：Shodex RSpak KC-811 有机酸专用分析柱（6 μm, 8× 300 mm）+ KC-G 保护住（10 μm, 6× 50 mm），柱温箱恒定55℃；

进样：自动进样器进样，进样量20 μL；

定量：基于峰面积的外标法。

样品处理：过μm水相滤膜后转移至棕色自动进样瓶。

注：乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸出峰时间分别为、、、、、。

实验仪器

高效液相色谱仪（Agilent 1200,）

VFAs标准系列配置

选取分析纯或色谱纯的乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸六种标准品。首先配置5g/L的标准储备液

然后再配制VFAs标准系列

VFAs标线

通过对标准样品的VFAs测定，做出VFAs的标准曲线。

整理后的数据

做出标准曲线

注：纵坐标为浓度（mg/L），横坐标为峰面积。

VFA测定

VFA含量测定采用比色测定法[124]。

测定原理：含挥发性脂肪酸的样液，在加热条件下，与酸性乙二醇作用生成脂，此脂再与羧胺反应，形成氧肟酸。在高铁试剂存在下，氧肟酸可以转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物—挥发性脂肪酸的含量成正比。故可以用比色法测定。

测定方法

Ⅰ、试剂

1:1硫酸：浓硫酸加至同体积的蒸馏水中稀释配置；

酸性乙二醇试剂：取30.0 ml乙二醇与4.0 ml配置的稀硫酸混合；

4.5 mol·L-1NaOH：称量180 g NaOH溶于蒸馏水中，冷却后用蒸馏水定容至1 L；10%的硫酸羟胺溶液：称取硫酸羟胺10.0 g溶于100 ml蒸馏水中；

羟胺试剂：量取20.0 ml 4.5 mol·L-1NaOH溶液与5.0 ml 10%的硫酸羟胺溶液相混合；

酸性氯化铁试剂：将20.0 g FeCl3·6H2O溶于500 ml蒸馏水中，准确加入20.0 ml 浓硫酸，以蒸馏水稀释至1 L。

Ⅱ、定程序

①乙酸标准液的配置：准确称取乙酸（分析纯，比重1.045，含量99.0%）1.010 g，以蒸馏水稀释至100 ml，此溶液含乙酸10 mg／ml；准确吸取乙酸标准溶液5.0，10.0，15.0，20.0，25.0 ml，分别置于100 ml容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀，即得500，1000，1500，2000，2500（ppm）的标准系列液；

②标准曲线的绘制：分别吸取上述标准系列液0.5 ml分置于试管中（12.5×1.5 cm），每瓶中加入1.7 ml酸性乙二醇试剂，充分混匀，于沸水中加热3 mins，后立即以冷水冷却，再加入2.5 ml羟胺试剂，充分摇匀，然后全部加入装有10 ml酸性氯化铁试剂的25 ml容量瓶中，充分振荡摇匀，以蒸馏水定容。用72型分光光度计以500 nm波长测定其OD值。绘制标准曲线，乙酸的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。

VFA 测定方法

挥发性脂肪酸（VFA）分析化验方法

目的：提供有关有机物厌氧降解过程中最适于甲烷菌的最佳环境条件的资料，动态调节厌氧处理系统以确保厌氧生化降解过程的顺利进行。

原理：挥发性脂肪酸和醇类可在酸性介质中水蒸汽蒸馏法蒸馏分离，用煮沸法驱除滤液中的二氧化碳，再用氢氧化钠滴定，以酚酞作指示剂。

化学试剂的配制和标定：

1.酚酞指示剂：将0.5g酚酞溶入50ml95％的乙醇中，再加蒸馏水稀释至100毫升。

2.氢氧化钠溶液：浓度大约为0.1mol/l

a).称取4克分析纯的氢氧化钠固体于100ml的烧杯中，加入约50ml蒸馏水溶解，溶

解完全后转移至100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000ml,摇晃均匀，浓度标记为：N mol/l。

b).准确称取0.2g于105℃电烘箱中预先烘干至恒重的工作基准试剂邻苯二甲酸氢钾，

精确至小数点后四位，即天平的精确度，记为X

，加50ml无二氧化碳的蒸馏水（普通蒸馏水加热至沸腾5分钟冷却后备用）溶解，加5滴酚酞指示剂，用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，并保持30秒，记录所用的氢氧化钠溶液的毫升数，精确

至小数点后两位。记为：L

，以50ml无二氧化碳的蒸馏水做空白，记录氢氧化钠的毫

升数，精确至小数点后两位，记为：L

。等当量关系为：

（L

1-L

）*N/1000=X

/204.223

其中：204.233为邻苯二甲酸氢钾（ KHP）的分子量（可参照所购化学药品标签上所标注的分子量值）

计算出氢氧化钠的浓度为：

N = X

1*1000÷204.223*(L

-L

)(mol/l)

VFA的测定方法及标准曲线 (2)

VFA的测定方法及标准曲线

VFA测定的方法

指标挥发性脂肪酸VFA，包含乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸

检测方法液相色谱法

分析仪器高效液相色谱仪，HPLC （Agilent 1200, 安捷伦科技有限公司，美国）

检测条件流动相：0.05%稀磷酸，流速0.7 mL min-1；

检测器：紫外检测器，波长=210 nm；

分析柱：Shodex RSpak KC-811 有机酸专用分析柱（6 μm, 8× 300 mm）+ KC-G 保护住（10 μm, 6× 50 mm），柱温箱恒定55℃；

进样：自动进样器进样，进样量20 μL；

定量：基于峰面积的外标法。

样品处理：过0.45 μm水相滤膜后转移至棕色自动进样瓶。

注：乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸出峰时间分别为15.15、17.30、19.18、20.64、23.43、28.00min。

实验仪器

高效液相色谱仪（Agilent 1200,）

VFAs标准系列配置

选取分析纯或色谱纯的乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸六种标准品。

首先配置5g/L的标准储备液

VFAs标线

通过对标准样品的VFAs测定，做出VFAs的标准曲线。

VFAs标线VST1 VST2 VST3 VST4 VST5 VST6 VST7

做出标准曲线

注：纵坐标为浓度（mg/L），横坐标为峰面积。

VFA测定方法

挥发酸测定方法

1．原理：

将废水以磷酸酸化后；从中蒸发出挥发性脂肪酸；再以酚酞为指示剂用NaOH溶液滴定馏出液。废水中的氨态氮可能对测定形成干扰；因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。

2．药品：

1) 10% NaOH 溶液；

2) NAOH标准溶液；0.1000mol/L; 称取60克氢氧化钠溶于50ml水中，转入150ml的聚乙烯瓶中，冷却后，用装有碱石灰管的橡皮塞塞紧，静置24小时以上。吸取上层清液约7.5ml置于1000ml容量瓶中，用无二氧化碳水稀释至标线，摇匀。

3)苯二甲酸氢钾；称取在105-110度干燥过的基准试剂级苯二甲酸氢钾约0.5克（称至0.0001g），置于250ml锥形瓶中，加无二氧化碳水100ml使之溶解，加入4滴酚酞指示剂，用待标定的氢氧化钠标准溶液滴定至浅红色为终点。同时用无二氧化碳水做空白滴定，按下式计算。

4) 10%磷酸溶液；取70ml密度1.7g/cm3的磷酸用水稀释至1L;

5)酚酞指示剂；称取0.5克酚酞，溶于50ml 95%乙醇中，用水稀释至100ml。

3．测定步骤

蒸馏瓶中放入100ml待测废水（其VFA含量不超过30mmol，如

超过此值则对水样进行稀释），放入几滴酚酞指示剂。加入10% NaOH 溶液；使溶解呈碱性；并使NaOH略过量。蒸馏至蒸馏瓶中剩余液体为50~60ml为止。用蒸馏水将蒸馏瓶中的剩余液体稀释至原来体积；用10ml 10%的磷酸酸化；在接收瓶中放入10ml蒸馏水并使接收瓶与蒸馏瓶上的冷凝管连接；导入管应浸入接收瓶的液面以下。蒸馏至瓶中液体为15~20ml为止。待蒸馏瓶冷却以后；加入50ml蒸馏水再次蒸馏；至10~20ml液体为止。加入10滴酚酞；用NaOH标准溶液滴定至淡粉色不消失为止。

vfa测定标准

VFA的测定标准包括以下步骤：

1. 准备必要的设备和试剂，包括NaOH标准溶液、被测废水水样、滴定管、容量瓶等。

2. 取一定体积的被测废水水样，用NaOH标准溶液进行滴定。

3. 记录滴定消耗的NaOH标准溶液的体积。

4. 根据滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度和体积，计算出被测废水水样中挥发酸的浓度。

需要注意的是，在VFA的测定过程中，要严格控制实验条件和操作步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。同时，也要注意安全操作，避免对人体和环境造成危害。

以上信息仅供参考，具体测定标准可以参考相关文献或咨询专业人士。

VFA的测定方法及标准曲线

VFA测定的方法

指标挥发性脂肪酸VFA，包含乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸

检测方法液相色谱法

分析仪器高效液相色谱仪，HPLC （Agilent 1200, 安捷伦科技有限公司，美国）

检测条件流动相：0.05%稀磷酸，流速0.7 mL min-1；

检测器：紫外检测器，波长=210 nm；

分析柱：Shodex RSpak KC-811 有机酸专用分析柱（6 μm, 8× 300 mm）+ KC-G 保护住（10 μm, 6× 50 mm），柱温箱恒定55℃；

进样：自动进样器进样，进样量20 μL；

定量：基于峰面积的外标法。

样品处理：过0.45 μm水相滤膜后转移至棕色自动进样瓶。

注：乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸出峰时间分别为15.15、17.30、19.18、20.64、23.43、28.00min。

实验仪器

高效液相色谱仪（Agilent 1200,）

VFAs标准系列配置

选取分析纯或色谱纯的乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸六种标准品。首先配置5g/L的标准储备液

然后再配制VFAs标准系列

VFAs标线

通过对标准样品的VFAs测定，做出VFAs的标准曲线。

整理后的数据

做出标准曲线

注：纵坐标为浓度（mg/L），横坐标为峰面积。

VFA测定步骤与方法

VFA测定步骤与⽅法

挥发性脂肪酸的测定

⼀、GC（Gas chromatograph）⼯作条件

仪器： GC-14B型⽓相⾊谱仪（⽇本岛津公司）

⽑细柱：NUKOLTM Capillary Column ( Supelco )；Column No.34292-07B

30m×0.32mm×0.25µm film thickness

⽓相⾊谱仪参数：⾊谱柱采⽤⽑细吸管柱，柱温，汽化温度180℃，采⽤氢离⼦⽕焰检测器，检测温度180℃，载⽓为氮⽓，压⼒为60 KPa，氢⽓压⼒为50 KPa，氧⽓压⼒50 KPa，灵敏度（档）为101，衰减 3.0

⼆、样品制备

1．试剂制备

（1）配制25%w/v 的偏磷酸溶液，将25克偏磷酸溶在100mL双蒸⽔中

（2）巴⾖酸的配制，在100ml的偏磷酸溶液中加⼊0.6464g的巴⾖

酸，定容到100mL。

（3）标准样品，准确称取⾊谱标准级⼄酸0.9100 g、丙酸0.3700 g、

丁酸异丁酸0.1765g、戊酸和异戊酸分别为0.1985g，

分别溶于双蒸⽔中，再各⾃定容⾄100 mL

2．样品制备

(1) 发酵液取（或过滤瘤胃液）VFA测定 1ml样品到离⼼管中，再加⼊0.2 ml的偏磷酸巴⾖酸混合溶液，－20℃冰箱保存过夜，解冻后12000rpm离⼼10min，取上清液保存，测定前再12000rpm 离⼼10min(或少许通过0.22µm针式滤器，滤液直接进样⽤ 1.0微升微量进样器瞬时注⼊⾊谱仪，进样量为0.2－1.0µL。

(2) ⾷糜及粪样VFA测定取1克置于离⼼管中，加⼊5－10倍的双蒸⽔，混合均匀。取1mL上清夜，加偏磷酸巴⾖酸0.2mL/mL。其它步骤同上。3．保留时间的确定

(整理)VFA的测定方法

VFA的测定方法

一、药品：

1、10%NaOH溶液

2、NaOH标准溶液，0.1000mol/l

3、10%磷酸溶液（或15%硫酸）

4、酚酞指示剂

二、步骤：

1、于蒸馏瓶中放入100ml废水水样（其VFA不超过1800mg/l），加入几滴酚酞。

2、加入10%NaOH溶液使水样呈碱性，并使NaOH微过量。

开始蒸馏至蒸馏瓶中剩余液体为50-60ml为止。

3、冷却，加蒸馏水至蒸馏瓶中液体100ml左右。用10ml10%磷酸溶液酸化，在接收瓶中（或烧杯）放入10-20ml蒸馏水，并使接收瓶与蒸馏瓶上的冷凝管连接，导入管应浸入接收瓶液面以下，蒸馏至瓶中液体为15-20ml为止，待蒸馏瓶冷却后加入50ml蒸馏水再次蒸馏至15-20ml为止（这次蒸馏结果差别不大时可以不做）。

4、用NaOH标准溶液滴定馏出液至淡粉色不消失为止。

三、计算：

VFA（mg/l）=

式中：VNaOH—滴定时消耗的NaOH标准溶液（ml）

C¬—NaOH标准溶液的浓度（mol/l）

Vs—废水水样的体积（ml）

挥发性脂肪酸（VFA）的测定

挥发性脂肪酸（VFA）是厌氧消化过程的重要中间产物，甲烷菌主要利用VFA形成甲烷，只有少部分甲烷由CO2和H2生成。但CO2和H2的生成也经过高分子有机物形成VFA的中间过程。由此看来，形成甲烷的过程离不开VFA 的形成，但是VFA在厌氧反应器中的积累能反映出甲烷菌的不活跃状态或反应器操作条件的恶化，较高的VFA（例如乙酸）浓度对甲烷菌有抑制作用。因此在反应器运行中，出水VFA用作重要的控制指标。

在VFA测定中，常进行VFA总量测定，其单位以mmol/l或换算为按乙酸计，以单位mg/l表示，对VFA中各种低级脂肪酸（乙酸、丙酸等）的分别定量分析也是重要的，有时常需要知道以COD表示的VFA的量（即VFA以单位

挥发性脂肪酸(VFA)的测定操作规程

挥发性脂肪酸(VFA)的测定

VFA的组成:：乙酸、丙酸、丁酸和戊酸等组成，本方法测定此四种脂肪酸。

测定原理

本方法采用直接进样-气相色谱质谱法，根据不同组分在气相色谱柱中保留时间不同而分离，用质谱定性并定量，从而测定待测物中各组分的含量。

三、标准曲线的配制

1、配制10g∕1的标准溶液

2、配制Iooomg/1的中间液。用20%HC1配制。

3、配制20、50、80、100、200mg∕1的标准曲线溶液。

四、气相色谱质谱条件设置

水样50m1加入0.5m1的30%磷酸，浑浊水样需要提前过滤或者昌心O

五、气相色谱质谱条件设置

进样口温度：220℃柱流量：2.09m1∕min

进样模式：分流(20：1)

升温程序：40℃(2min)-20°C∕min-240°C(2min)

离子源温度：200℃接口温度：240℃

六、实际操作

首先使用SCAN定性，再生成SIM方法定量，升温程序等条件相同。