血液基因组 DNA 提取方法的改良
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品 随机 分 为 ２组 ： Ａ￣ １ ｔ （ ９ ０份 ） 和 Ｂ组 （ ２ ２ ２ 份） 。Ａ 组 采 用 常 规 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 提 取 方 法 。Ｂ组 采 用 改 良 的基 因 组 Ｄ Ｎ Ａ
提取方法 ， 其基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提 取 方 法改 良之 处 ： １ ） 在 血 液样 品 中加 入 细胞 裂 解 液 Ｃ Ｌ后 采 用 手 工 震 荡 ， 并离心 ２ ｍｉ ｎ ４ ０ ｓ ； ２ ） 震 荡 混 匀 后 将样 品分 装 成 ３ 管， 然 后 将 缓 冲 液 Ｇｓ 加入第 １ 管 吹打 溶 解 后 吸取 上 清 ， 并 加 入第 ２管 ， 再 吹 打溶 解 后 吸 取 上 清加 入 第 ３管 ， 继 续 吹 打溶 解 ； ３ ） ￣ Ｉ Ｘ 缓 冲 液 ＧＢ后 再 ５ ８℃水 浴 过 夜 １ ６ ｈ 。结 果 改 良的血 液 样 品 Ｄ ＮＡ提 取 改
方 法 能够 提 高 产 率 ， 提高纯度 ， 获 取 更 多高 分 子 量 的 Ｄ Ｎ Ａ， 相对于常规基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提 取 方 法 有 显 著 提 高 。结 论
良的 血 液基 因组 Ｄ ＮＡ提 取 方 法 操作 简便 ， 能有 效 地 避 免 操 作 导致 Ｄ ＮＡ链 断 裂 ， 提高 Ｄ Ｎ Ａ 的完 整性 及 纯 度 。
台式低速 离心机 （ 德国 Ｓ ｉ ｇ ｍａ离心 机有 限公 司 ） ； Ｔ Ｕ．
基 因进 行重组 、 改造 、 进化分 析 、 疾病 诊断 和基 因治 疗
等都 必须进行 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 的提取 和纯化ｌ ＿ 】 ］ 。制备 纯
１ ８ １ ０紫外 可见 分光 光 度计 （ 北 京 普 析通 用 仪 器有 限
２ ０ 检者 的血 液样 品 ３ １ ２份 作为 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ
提 取 的材 料 。
１ ． ２ 主要试剂 与仪器
ＴＩ ＡＮａ ｍｐ Ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ＤＮＡ Ｋｉ ｔ基 因 组 ＤＮＡ 提 取 试
冲液 Ｇ Ｓ ， 充分 吹打 混匀 。然后 ， 吸取全部 溶液 加入 到
含有 细胞核 沉 淀 的第 ２支 Ｅ Ｐ管 内， 充 分 吹打 混匀 。
剂 盒［ 天根 生 化科 技 （ 北京 ） 有 限公 司］ ， 其 产 品组 成 ：
２ ５ ０ ｍＬ细 胞 裂 解 液 Ｃ Ｌ， ５ ０ ｍＬ 缓 冲 液 Ｇ Ｓ ， ５ ０ ｍＬ 缓
９
血 液 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ提 取 方 法 的 改 良
余凯琳 ， 邓正栋 ， 严 济。 （ １ ． 南昌大学第一 Ｉ 临床 医学院 ２ ０ １ １级 ， 南昌 ３ ３ ０ ０ ３ ８ ； ２ ． 南昌大 学第一 附属 医院烧 伤科 ， 南昌 ３ ３ ０ ０ ０ ６ ）
摘 要 ：目的 探讨改 良 血液样品基因组 Ｄ Ｎ Ａ的提取方法 ， 制备纯化的高分子量 Ｄ Ｎ Ａ 。方法 将 ３ １ ２ 份新 鲜血液样
再 吸取 全部溶液加 入到含有 细胞核 沉淀 的第 ３ 支Ｅ Ｐ
管内， 即实验 处理 样 品 。吹 打后 震 荡 ， 观 察 是否 仍 有
冲液 Ｇ Ｂ， ５ ２ ｍＬ缓 冲 液 Ｇ Ｄ， ５ ０ ｍＬ漂 洗 液 Ｐ ｗ， ６ ０ ｍＬ洗脱 缓冲液 Ｔ Ｂ， ４ ｍＬ ￣１ ｍＬ蛋 白酶 Ｋ， ４ ０ ０ 个 吸 附柱 Ｃ Ｂ ３ ， ２ ０ ０个 ２ ｍＬ收 集 管 ， ２ ０ ０个 １ ． ５ ｍＬ离 心 管； 缓 冲液 Ｔ Ｅ（ ｐ Ｈ一８ ． ０ ， 北 京 九州 天 瑞 科技 有 限 公
１ ５ ｍｉ ｎ ， 分装 到 ３支 １ ． ５ ｍＬ尖底 Ｅ Ｐ管 中， １ １ ０ ０ ０ ｒ ・ ｍｉ ｎ 离心 ２ ｍｉ ｎ ４ ０ Ｓ 。吸去 上 清 ， 留下细 胞核 沉淀 。 在含有 细胞核沉 淀 的第 １支 Ｅ Ｐ管 中加 入 ２ ０ ０ ｇ ． Ｌ缓
南 昌 大学 学 报 （ 医学 版 ）２ ０ １ ４ 年第 ５ ４卷第 １ ０期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｎａ ｎ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ （ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ １ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ）２ ０ １ ４ ， Ｖｏ ！ ． ５ ４ Ｎ ｏ ． １ ０
责任公 司） 。
１ ． ３ 实 验 分 组
化 的高分子量 Ｄ ＮＡ、 保证 Ｄ ＮＡ一 级结构 的完 整性 及 排 除蛋 白质 、 脂 类 和 糖 类 等 其 他 分 子 的 污 染 等 是
Ｄ ＮＡ提取 的要 求［ ２ ］ 。然 而 ， 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 的提 取和 纯
将３ １ ２份血液样 品随机分 为 ２ 组： Ａ组 （ ９ ０份 ） 和
Ｂ组 （ ２ ２ ２ 份） 。 １ ． ４ 实 验 方 法
化一 直是耗 时 、 繁琐 的过 程 。本文 改 良了血液 样 品基 因组 Ｄ ＮＡ提 取 的方法 ， 有效提高 Ｄ ＮＡ 的提 取 率 及 纯度， 为分子 生物学实验 及其 临床 检测 提供 了更简 便
的手段 。
１ ． ４ ． １ 基 因组 Ｄ ＮＡ提取 的方 法 Ａ组采 用常规基 因组 Ｄ ＮＡ提取方 法ｌ ２ ］ 。Ｂ组采
关 键 词 ：血液 ； 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ； 提取方法；改 良
中图分类号 ： Ｑ ３ ４ ３ ． １ ； Ｏ ７ ８
文 献 标 志码 ： Ａ
文章编号 ： ２ ０ ９ ５ －４ ７ ２ ７ （ ２ ０ １ ４ ） １ ０ －０ ０ ０ ９ －０ ３
Ｄ ＮＡ（ ｄ ｅ ｏ ｘ ｙ ｒ ｉ ｂ ｏ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ） 是 遗传 物 质 ， 人 们对
用改 良 的基 因组 Ｄ ＮＡ 提 取 方 法 ， 采用 Ｔ Ｉ ＡＮ ａ ｍｐ
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 实 验 材 料
Ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ Ｄ ＮＡ Ｋ ｉ ｔ 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 提取 试剂 盒 ， 其 方法是 ：
１ ） 处理血 液 样 品。在抗 凝 管 中加入 １ ｍＩ 血液（ ４℃ 保存 ） ， 再 加入 ３ ｍ Ｌ细胞 裂解 液 Ｃ Ｌ 。手 工震 荡 １ ０ ～
提取方法 ， 其基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提 取 方 法改 良之 处 ： １ ） 在 血 液样 品 中加 入 细胞 裂 解 液 Ｃ Ｌ后 采 用 手 工 震 荡 ， 并离心 ２ ｍｉ ｎ ４ ０ ｓ ； ２ ） 震 荡 混 匀 后 将样 品分 装 成 ３ 管， 然 后 将 缓 冲 液 Ｇｓ 加入第 １ 管 吹打 溶 解 后 吸取 上 清 ， 并 加 入第 ２管 ， 再 吹 打溶 解 后 吸 取 上 清加 入 第 ３管 ， 继 续 吹 打溶 解 ； ３ ） ￣ Ｉ Ｘ 缓 冲 液 ＧＢ后 再 ５ ８℃水 浴 过 夜 １ ６ ｈ 。结 果 改 良的血 液 样 品 Ｄ ＮＡ提 取 改
方 法 能够 提 高 产 率 ， 提高纯度 ， 获 取 更 多高 分 子 量 的 Ｄ Ｎ Ａ， 相对于常规基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提 取 方 法 有 显 著 提 高 。结 论
良的 血 液基 因组 Ｄ ＮＡ提 取 方 法 操作 简便 ， 能有 效 地 避 免 操 作 导致 Ｄ ＮＡ链 断 裂 ， 提高 Ｄ Ｎ Ａ 的完 整性 及 纯 度 。
台式低速 离心机 （ 德国 Ｓ ｉ ｇ ｍａ离心 机有 限公 司 ） ； Ｔ Ｕ．
基 因进 行重组 、 改造 、 进化分 析 、 疾病 诊断 和基 因治 疗
等都 必须进行 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 的提取 和纯化ｌ ＿ 】 ］ 。制备 纯
１ ８ １ ０紫外 可见 分光 光 度计 （ 北 京 普 析通 用 仪 器有 限
２ ０ 检者 的血 液样 品 ３ １ ２份 作为 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ
提 取 的材 料 。
１ ． ２ 主要试剂 与仪器
ＴＩ ＡＮａ ｍｐ Ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ＤＮＡ Ｋｉ ｔ基 因 组 ＤＮＡ 提 取 试
冲液 Ｇ Ｓ ， 充分 吹打 混匀 。然后 ， 吸取全部 溶液 加入 到
含有 细胞核 沉 淀 的第 ２支 Ｅ Ｐ管 内， 充 分 吹打 混匀 。
剂 盒［ 天根 生 化科 技 （ 北京 ） 有 限公 司］ ， 其 产 品组 成 ：
２ ５ ０ ｍＬ细 胞 裂 解 液 Ｃ Ｌ， ５ ０ ｍＬ 缓 冲 液 Ｇ Ｓ ， ５ ０ ｍＬ 缓
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血 液 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ提 取 方 法 的 改 良
余凯琳 ， 邓正栋 ， 严 济。 （ １ ． 南昌大学第一 Ｉ 临床 医学院 ２ ０ １ １级 ， 南昌 ３ ３ ０ ０ ３ ８ ； ２ ． 南昌大 学第一 附属 医院烧 伤科 ， 南昌 ３ ３ ０ ０ ０ ６ ）
摘 要 ：目的 探讨改 良 血液样品基因组 Ｄ Ｎ Ａ的提取方法 ， 制备纯化的高分子量 Ｄ Ｎ Ａ 。方法 将 ３ １ ２ 份新 鲜血液样
再 吸取 全部溶液加 入到含有 细胞核 沉淀 的第 ３ 支Ｅ Ｐ
管内， 即实验 处理 样 品 。吹 打后 震 荡 ， 观 察 是否 仍 有
冲液 Ｇ Ｂ， ５ ２ ｍＬ缓 冲 液 Ｇ Ｄ， ５ ０ ｍＬ漂 洗 液 Ｐ ｗ， ６ ０ ｍＬ洗脱 缓冲液 Ｔ Ｂ， ４ ｍＬ ￣１ ｍＬ蛋 白酶 Ｋ， ４ ０ ０ 个 吸 附柱 Ｃ Ｂ ３ ， ２ ０ ０个 ２ ｍＬ收 集 管 ， ２ ０ ０个 １ ． ５ ｍＬ离 心 管； 缓 冲液 Ｔ Ｅ（ ｐ Ｈ一８ ． ０ ， 北 京 九州 天 瑞 科技 有 限 公
１ ５ ｍｉ ｎ ， 分装 到 ３支 １ ． ５ ｍＬ尖底 Ｅ Ｐ管 中， １ １ ０ ０ ０ ｒ ・ ｍｉ ｎ 离心 ２ ｍｉ ｎ ４ ０ Ｓ 。吸去 上 清 ， 留下细 胞核 沉淀 。 在含有 细胞核沉 淀 的第 １支 Ｅ Ｐ管 中加 入 ２ ０ ０ ｇ ． Ｌ缓
南 昌 大学 学 报 （ 医学 版 ）２ ０ １ ４ 年第 ５ ４卷第 １ ０期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｎａ ｎ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ （ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ １ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ）２ ０ １ ４ ， Ｖｏ ！ ． ５ ４ Ｎ ｏ ． １ ０
责任公 司） 。
１ ． ３ 实 验 分 组
化 的高分子量 Ｄ ＮＡ、 保证 Ｄ ＮＡ一 级结构 的完 整性 及 排 除蛋 白质 、 脂 类 和 糖 类 等 其 他 分 子 的 污 染 等 是
Ｄ ＮＡ提取 的要 求［ ２ ］ 。然 而 ， 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 的提 取和 纯
将３ １ ２份血液样 品随机分 为 ２ 组： Ａ组 （ ９ ０份 ） 和
Ｂ组 （ ２ ２ ２ 份） 。 １ ． ４ 实 验 方 法
化一 直是耗 时 、 繁琐 的过 程 。本文 改 良了血液 样 品基 因组 Ｄ ＮＡ提 取 的方法 ， 有效提高 Ｄ ＮＡ 的提 取 率 及 纯度， 为分子 生物学实验 及其 临床 检测 提供 了更简 便
的手段 。
１ ． ４ ． １ 基 因组 Ｄ ＮＡ提取 的方 法 Ａ组采 用常规基 因组 Ｄ ＮＡ提取方 法ｌ ２ ］ 。Ｂ组采
关 键 词 ：血液 ； 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ； 提取方法；改 良
中图分类号 ： Ｑ ３ ４ ３ ． １ ； Ｏ ７ ８
文 献 标 志码 ： Ａ
文章编号 ： ２ ０ ９ ５ －４ ７ ２ ７ （ ２ ０ １ ４ ） １ ０ －０ ０ ０ ９ －０ ３
Ｄ ＮＡ（ ｄ ｅ ｏ ｘ ｙ ｒ ｉ ｂ ｏ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ） 是 遗传 物 质 ， 人 们对
用改 良 的基 因组 Ｄ ＮＡ 提 取 方 法 ， 采用 Ｔ Ｉ ＡＮ ａ ｍｐ
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 实 验 材 料
Ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ Ｄ ＮＡ Ｋ ｉ ｔ 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 提取 试剂 盒 ， 其 方法是 ：
１ ） 处理血 液 样 品。在抗 凝 管 中加入 １ ｍＩ 血液（ ４℃ 保存 ） ， 再 加入 ３ ｍ Ｌ细胞 裂解 液 Ｃ Ｌ 。手 工震 荡 １ ０ ～