血红蛋白分析、流产物染色体非整倍体病检测

地贫基因检测技术与Hb分析的关系

Hb分析是基因检测前的初筛，初筛阳性仍需要基 因检测进行确诊。 Hb分析可发现基因分析的错误结果，包括人为错 误及罕见或未知突变类型的漏检等。 因此Hb分析不能代替基因分析，反之亦然。


举例

李某， HbA2 为5.1% 常规地贫基因检测（含17种基因突变）正常。 HbA2结果提示有罕见或未知突变类型。
地中海贫血基因（常规）检测的局限性

地中海贫血基因（gap-PCR/PCR-RDB法） 检测β珠蛋白基因突变类型有限： 包括3种α
地贫基因缺失型及3种α地贫基因点突变型；但目 前已发现十多种以上α地贫基因缺失型突变，在中 国人中至少发现十种以上； α地贫基因点突变有 约70种 ，中国南方发现12种。



在<15孕周的自然流产中，染色体异常发生率约 为50%～80%。 在15～24孕周期间自然流产中，染色体异常发生 率约占20%。 在>24孕周的死胎中，染色体异常发生率约占 10%。

规律二： 在由于染色体异常导致流产的病例中，90%以上 为染色体数目异常

规律三： 具有胚胎染色体异常流产史或活产史者，再次发 生几率增高




遗传及遗传突变发生的两个途径： 50%是由于亲代携带异常基因而遗传给子代 如地中海贫血、遗传性耳聋和大部分遗传代谢性 疾病等 约占5% 50%是由于生殖细胞突变导致的 如95%以上唐氏综合症等染色体非整倍体异常， 一般无家族史 约占95%
人类染色体：男性46,XY
;女性46,XX
检查。


所以，流产胚胎遗传检测的意义在于 排除染色体突变导致的流产： ⒈自然淘汰：60%以上由于染色体突变引起，属于自然淘 汰 其中约90%以上为生殖细胞减数分裂或早期卵裂错误导致 染色体突变，属于自发突变（一般为染色体数目异常）。
不足10%是由于父母双方之一为染色体平衡易位携带者而 引起，属于遗传（一般为结构畸变）。需进一步检查父母 染色体以确认。 ⒉母体因素
方法：杂交、观察 优点：无需培养、标本要求低、较直观 缺点：成本高、费时、需要荧光显微镜，一般 只能查出常见染色体数目异常等。
染色体片段分析 多重连接探针扩增multiplex ligation dependent probe amplification，MLPA)
方法：DNA提取，PCR扩增，测序 优点：无需培养、标本要求低、较直观、快速、 试剂成本低廉等。 缺点：需要测序仪等特殊仪器、不能查出探针以 外的染色体片段等
胚胎非整倍体突变的发生机制

分离定律、自由组合定律和连锁互换三大 定律是生物延续的保证，并以二倍体规律 遗传。 非整倍体是因生殖细胞减数分裂错误所导 致。

21-三体综合症的发生机理
生殖细胞减数分裂
精 原 细 胞 卵 原 细 胞
21-三体综合症的发生机理


已证实，染色体异常是自然流产的主要原因 ，而且具有一定规律。 规律一： 流产时间越早，染色体畸变的可能性越大
微阵列比较基因组杂交技术（array-CGH）
原理：将待测样本DNA杂交 到覆盖有标准人类全基因组 核苷酸序列的微阵列上，经
配套扫描仪扫描，计算机软
件及生物信息学数据库分析 样本全基因组DNA拷贝数改变。 优点：克服了传统方法的局 限性，直接定位在基因水平 上。 缺点：设备昂贵，收费高。


标本要求

HbF值升高，达40%以上，提示重型或中间型β地贫

胎儿血红蛋白持续存在综合症（HPFH)： 不在常规基因检测范围，Hb分析可提示

(δβ)0-地贫： 不在常规基因检测范围，Hb分析可提示
地中海贫血基因（常规）检测范围

目前全世界至少发现200种β地贫基因突变类 型，在中国 人中至少发现30种突变。 目前已发现十多种以上α地贫基因缺失型突变，在中国人 中至少发现十种以上； α地贫基因点突变有约70种 ，中国 南方发现12种。 地中海贫血基因（常规）检测β地贫基因点突变17种， 3 种α地贫基因缺失型及3种α地贫基因点突变型；涵盖中国 南方人群中95%以上的α-和β-地中海贫血致病基因缺陷。

染色体片段分析技术的流产标本采集
无菌杯
采血试管
洁净的尿液管


流产绒毛染色体检查可采用细胞培养+G带 显示核型分析 但由于流产绒毛采集过程中容易污染，如 遇标本污染中心将采用多重连接探针扩增 技术（MLPA）方法对染色体进行分子检测 ，并出具报告，但不另外增加费用。
谢 谢
一、 血红蛋白分析应用意 义
血红蛋白病

血红蛋白病（Hemoglobinopathy）为世界上最常 见的一类单基因遗传病由于血红蛋白分子结构异 常（异常血红蛋白病），或珠蛋白肽链合成速率 异常（珠蛋白生成障碍性贫血，又称海洋性贫血 ）所引起的一组遗传性血液病。 临床可表现溶血性贫血、高铁血红蛋白血症或因 血红蛋白氧亲和力增高或减低而引起组织缺氧或 代偿性红细胞增多所致紫绀。

血红蛋白分析技术

血红蛋白分析技术：采用HPLC等相应技术 ，分析受检个体的血红蛋白组份，如HbA2 、HbF、 HbA及异常Hb等。
血红蛋白分析技术是进行地贫基因分析的 基本前提。

血红蛋白分析的临床应用

HbA2、HbF及异常Hb等血液学表型指标是 地中海贫血初步筛查指标，单独通过这些 指标和/或结合全血细胞分析技术可以查出 地贫初筛阳性个体。


地中海贫血基因（常规）检测的局限性

地中海贫血基因（PCR/RDB法）检测β珠蛋白基 因突变类型有限： 目前全世界至少发现200种β珠蛋白基因突变类 型 ，在中国人中至少发现30种突变。国内临床应用 的PCR/RDB检测试剂盒仅检测17种常见及少见突 变。因PCR/RDB法不能检出所有已知突变和新突 变，故有漏检风险。
流产胚胎（绒毛）：请在吸、刮绒毛后从吸管的无 菌端取出并臵于无菌纱布上，与蜕膜进行鉴别（无 法确定绒毛组织的，12周内送检整个胚胎；12周以 上的送检心脏血或肝脏），待确定为绒毛组织或胎 芽后将标本浸泡于无菌生理盐水中。尽量新鲜， 2~8℃保存，当天送检。 引产的异常胎儿：建议优先送检引产胎儿的心脏血 （EDTA抗凝血3-4ml）。如无法获得胎儿血样本可 切取黄豆大小的内脏组织（肝脏最佳），浸泡于无 菌生理盐水中，2~8℃保存，当天送检。


指导妊娠 1.自然淘汰的流产处理方式 流产胚胎若为非整倍体，再次妊娠前无需 特殊准备，但要做产前诊断。 流产胚胎若为结构畸变，一定要查父母， 可通过PGD技术选择正常胚胎，或自然妊娠 后做产前诊断。

2.对于母体因素引起的流产： 黄体功能不全：补黄体 多囊卵巢等：治疗后再妊娠 生殖道异常：注意保胎 生殖道感染：治疗后再次 妊娠，注意孕早期检测； 改变不良的生活习惯等。 免疫治疗
血红蛋白分析的临床应用

HbA2升高（＞3.5%）：可疑的β-地贫 除极少数的临床表型为静止型的突变位点外，几 乎所有的β-地贫携带者HbA2值均升高。部分疾病 如疟疾、甲状腺功能亢进等也可引起HbA2值升高 。 因此绝大多数β-地贫携带者HbA2值升高，HbA2 值升高不全是β-地贫携带者。


流产组织染色体检测方法
核型分析
荧光原位杂交（FISH）
Array-CGH技术
MLPA技术
基因测序技术
流产组织培养+核型分析
方法：接种、培养、制片和观察 要求：流产组织要求无菌、新鲜 优点：直观、金标准，可查出染色体结构和 数目异常 缺点：标本要求高，培养失败率高、繁琐、 费时
荧光原位杂交技术分析


进一步作β全基因测序后发现其为β-地贫基因携带 者（基因型为罕见的CD37突变杂合子）
二、流产物染色体非整倍体病检测
导致流产的常见因素 遗传及遗传突变因素：自然流产胚胎50%以上由 染色体异常所致 内分泌因素：黄体功能不全、多囊卵巢、高催乳 素血症、糖尿病、甲状腺功能异常等 女性解剖因素：子宫畸形、宫颈机能不全、肌瘤 等 自身免疫疾病：抗心磷脂抗体综合症、系统性红 斑狼疮、干燥综合症 血液高凝状态（APTT、PT、FB、FDP、DD二聚 体） 男方因素：弱精、畸精、感染、遗传等 感染因素: 精神因素：
血红蛋白分析的临床应用

HbA2降低（＜2.5%）：可疑的α-地贫 此外，缺铁性贫血、铅中毒、骨髓增生性疾 病、铁幼粒细胞性贫血也可引起HbA2降低 HbA2正常（2.5%～ 3.5% ），同时MCV和/ 或MCH低：可疑α-地贫 静止型α-地贫：包括Hb组份等所有血液学 指标可全部正常


血红蛋白分析的临床应用
如果首次流产的胎儿为非整倍体，再次流产的胎
儿也可能为非整倍体，但这种异常可以不在同一 染色体上发生。 三体症（如16三体）胎儿一般是致死性（流产）， 但再次妊娠可能会出现表型异常和其他三体型 （如18三体）的活婴。
若为染色体结构异常导致流产者，夫妻应做染色
体核型分析检查，但不能替代流产胚胎的染色体

血红蛋白病
根据合成受阻的珠蛋白类型，可分为α-、β、δ-、和δβ-地贫等。α-和β-地贫是最重要 、最常见的地贫类型，少见的地中海贫血 （γ-地贫、δ-地贫、(δβ)0-地贫） 异常血红蛋白病(可与地中海贫血相互作用) （HbQ、HbG、HbS、HbC、HbE） 胎儿血红蛋白持续存在综合症（HPFH)
地中海贫血基因（常规）检测的局限性

由于试剂盒的检测范围和实验室检测条件 的局限性，罕见或未知突变的漏检率约为 2%～5%。
为什么地贫基因检测同时要做Hb分析
பைடு நூலகம்
血红蛋白分析技术是进行地贫基因分析的 基本前提，是不可少的重要参考指标。
地贫基因罕见或未知突变类型， Hb分析往往提示 异常 ，因此通过Hb分析，指导进一步采取针对性 的技术进行检测，从而避免漏检。