脐橙根际拮抗细菌的筛选与初步鉴定

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真菌病害拮抗菌的筛选及其对多种植物病原真菌的拮抗活性测定

真菌病害拮抗菌的筛选及其对多种植物病原真菌的拮抗活性测定汪茜;胡春锦;黄思良;柯仿钢;黎起秦【摘要】针对广西境内常见多发的12种植物真菌病害,对柑橘、香蕉、甘蔗、辣椒、药用植物等作物根际土壤进行拮抗菌筛选试验.结果从不同作物根际土壤中共分离得到386株菌株,其中有拮抗作用的34株,平皿拮抗效果较好的16株;再经复筛,得到一株对柑橘炭疽菌有较好抑制效果的拮抗菌Bs55;对峙培养试验表明,Bs55菌株对12种常见病原真菌具有较强的抗菌活性,抑菌率最高达87.7%.拮抗菌Bs55具有拮抗作用强、能大量繁殖、抑菌谱广等特点,是具有较好利用前景的生物防治材料.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2010(041)007【总页数】4页(P675-678)【关键词】Bs55菌株;枯草芽孢杆菌;病原真菌;拮抗活性【作者】汪茜;胡春锦;黄思良;柯仿钢;黎起秦【作者单位】广西大学农学院,南宁,530005;广西农业科学院微生物研究所,南宁,530007;广西农业科学院微生物研究所,南宁,530007;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007;南阳师范学院生命科学与技术学院,河南南阳,473061;广西大学农学院,南宁,530005;广西大学农学院,南宁,530005【正文语种】中文【中图分类】S476+.1真菌病害是阻碍植物生长、影响作物产量的主要病害［1］，给农业生产带来了严重危害。

土壤是各种微生物良好的栖息场所，生存着许多具有相互拮抗作用的微生物。

在生防菌株的筛选上，考虑到植物与微生物之间的相互作用关系，人们把重点放在从植物根表面或根际土壤中筛选，这样筛选出的微生物接种后在植物根表面具有很好的定殖能力［2］。

本研究针对广西境内常见多发的12种植物真菌病害，从不同作物根际土壤中筛选拮抗菌，为开发广西微生物资源，筛选与环境相容性好的微生物农药奠定基础。

供试病原菌有柑橘炭疽病菌［Colletotrichum gloeosporioides （Penz.）Sacc.］、水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solaniKühn）、玉米大斑病菌［Exserohilum turcicum （Pass.） Leonard ＆ Suggs］、玉米小斑病菌［Cochliobolus heterostrophus （Dreschl.）Dreschl.］、茉莉白绢病菌（Sclerotium rolfsiiSacc.）、辣椒炭疽病菌［Colletotrichum gloeosporioides （Penz.） Sacc.］、香蕉炭疽病菌［Colletotrichummusae（Berk.＆Curt）Arx］、冬瓜疫霉（Phytophthora drechsleriTucker）、龙眼链格孢黑斑病菌［Alternaria alternata （Fr.） Keissler］、香蕉大灰斑病菌［Curvularia lunata （Wakker）Boedijin］、香蕉叶缘枯斑病菌（Alternaria musaeBour.et Bat）、杨桃炭疽病菌［Colletotrichum gloeosporioides（Penz.） Sacc.］等12种，均由广西农业科学院微生物研究所保存、提供。

作物病原真菌的拮抗菌筛选及其活性物质初步鉴定

作物病原真菌的拮抗菌筛选及其活性物质初步鉴定作者：胡洪涛张亚妮张舒李金泉张佑宏汪本福曹春霞任淑惠朱志刚姚经武龙同黄大野杨自文来源：《绿色科技》2017年第23期摘要：从湖北、安徽等地的水稻、小麦、豇豆、西瓜等种植区采集土壤，进行了微生物分离和培养。

采用对峙培养法，筛选到20株对11种重要作物病原真菌，如水稻稻瘟菌、小麦赤霉菌、豇豆根腐菌、西瓜枯萎菌等，具有不同拮抗活性的细菌，其中2株具有广谱抗真菌活性。

利用高效液相色谱和质谱对其中一株菌株的代谢产物进行了制备和结构初步鉴定，发现其主要活性成分为多烯类物质，分子量为803.67。

继续深入研究抗菌物质结构和抑菌机理，将有助于新型生物源杀菌剂的开发。

关键词：生防菌；稻瘟菌；赤霉菌；抑菌活性；高效液相色谱；质谱中图分类号：S476文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2017）23-0164-041 引言作物真菌性病害，如水稻稻瘟病（Rice blast）、小麦赤霉病（Fusarium head blight）、西瓜枯萎病（Fusarium wilt of watermelon）、豇豆根腐病（Cowpea root rot）等，是世界性重要作物病害，全球每年仅因稻瘟病和赤霉病流行导致的经济损失就高达数十亿美元[1，3]，同时，赤霉菌所产生的真菌毒素严重威胁着食品安全[4]；西瓜枯萎病和豇豆根腐病是重要土传性病害，常导致西瓜和豇豆大面积死亡。

目前，防治真菌性病害的方法众多，但多以化学药剂防效最好，然而，化学药剂大量施用，不仅导致农药残留超标，也给环境和食品安全带来极大隐患。

生物农药环境兼容性好、对生物安全，是作物病害绿色防控技术体系的关键。

供药筛选的化合物主要由3种获取途径，购买已知化合物库、分离和提取天然产物以及化学合成，其中微生物来源的天然产物因其种类众多、易扩大和再生，而成为药物开发的最主要来源[5]。

由于前人研究多关注放线菌和真菌，因而在过去所发现的2万多种微生物来源的活性物质中，绝大部分来源于放线菌和真菌[5]，只有小部分约7%来源于细菌，说明细菌来源的活性物质亟待研究和开发。

植物病原真菌拮抗细菌的筛选鉴定及活性成分分析

ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎｏｆＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｉ８８）ａｇａｉｎｓｔＴｅｎＤｉｆｆｅｒｅｎｔＰｌａｎｔＰａｔｈｏｇｅｎｓ／Ｒｅｎ
Ｊｉａｎｊｕｎ（ＢｅｉｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３，Ｐ，Ｒ．Ｃｈｉｎａ）；ＳｈｉＧｕａｎｇｌｕ，ＧａｐＭｅｉｊｕａｎ（ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
褐腐病菌的抑制率较大，分别为８７．３１％和８０．１５％（Ｐ＜０．０５）；对棉花红腐病菌、辣椒炭疽病菌的抑制率低于４０％（Ｐ＜Ｏ．０５）。ＲＮ一６１与枯草芽孢杆菌相似度最高，为９９％，确定其为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｋＲＮ一６１），ＮＣＢＩ登录号为ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８４０６６８。菌株ＲＮ一８８与Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ，ｚ ∞ ｓｃｅ瑚Ｆ１１３等相似度为９９％，确定其为假单胞菌属的荧光假单胞杆菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｓＲＮ一８８）。对不同盐浓度提取的菌株ＲＮ一６１抗茵蛋白活性研究发现，效果最好的是饱和度为８０％的（ＮＨ），Ｓ０溶液提取的蛋白。蛋白原液对桃褐腐病菌的抑茵活性最强，９６ｈ后的病原真菌直径为２９．０ｍｍ（Ｐ＜０．０５）。关键词拮抗细菌；枯草芽孢杆菌：荧光假单胞菌杆菌；抑菌蛋白分类号￥７６３．１３

柑桔拮抗内生细菌的抑菌活性试验研究

柑桔拮抗内生细菌的抑菌活性试验研究作者：金玲莉涂娟王彦波曾明杜玉标来源：《现代园艺·下半月园林版》 2015年第5期金玲莉涂娟王彦波曾明杜玉标（江西省农业科学院园艺研究所，江西南昌 330200）摘要：从南丰蜜桔叶片和洋葱的健康植物组织提取液中筛选出3株对柑桔溃疡病(Xanthomonas campestris pv．Citri（Hasse）Dye)有拮抗作用的内生菌株Bb1、Bb2和YC1，通过拮抗菌株的抑菌活性试验，得出3株菌株对柑桔溃疡病均有较好的抑制效果。

关键词：拮抗；内生细菌；抑菌活性植物内生菌是指其生活史的某一阶段或全部阶段能在健康植物组织内栖居而对植物不造成实质性危害并与植物建立了和谐联合(compatible association)关系的微生物，主要包括真菌、细菌和放线菌，能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病性。

内生细菌是植物各种组织和器官的细胞间隙或细胞内的天然宿居者，在其部分或整个生活周期寄居在植物组织，特别是营养繁殖的组织中生存、繁衍、传播。

由于植物内生细菌与宿主协同进化，在演化过程中形成了明显的互惠共生关系。

1 材料与方法本研究采用研磨分离法从南丰蜜桔健康组织叶片和洋葱提取液中筛选出3株对柑桔溃疡病有拮抗作用的内生菌株，用抑菌圈法测定其抑菌效果。

南丰蜜桔叶片取自江西省农业科学院园艺研究所的柑桔资源圃内，洋葱来自超市购买的新鲜无病虫害洋葱。

在园艺研究所3000 m2的南丰蜜桔资源圃内，采用5点取样法，选取生长性状良好，无病害症状的健康植株20株，在每株树中采取健康叶片5片，采集后立即放入无菌样品袋中，带回实验室进行内生细菌的分离。

将初步筛选出的拮抗菌接柑桔溃疡病菌，于生化培养箱内培养，用抑菌圈法测定其抑菌效果，利用公式计算抑菌率。

NA 培养基：牛肉膏 3g，蛋白胨5g，葡萄糖 2.5g，琼脂 17g，水1000mL，pH值7.2。

2结果与分析2.1 拮抗内生菌抑菌活性从上图表看出：从南丰蜜桔叶片中提取的内生菌Bb1、Bb2和从洋葱提取液中筛选的内生菌YC1对柑桔溃疡病有明显的抑制作用。

核桃基腐病拮抗细菌的筛选与初步鉴定

核桃基腐病拮抗细菌的筛选与初步鉴定摘要：核桃基腐病已成为影响核桃生产的重要病害之一，为了得到对核桃基腐病有拮抗作用的拮抗菌株，采用组织分离法，在分离核桃基腐病过程中得到细菌，利用平板对峙法，最终筛选得到1株拮抗效果较强的菌株GY-11，对核桃基腐病的拮抗效果达到80%。

结合形态学特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定该拮抗细菌菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。

关键词：核桃基腐病；拮抗细菌；筛选；鉴定中图分类号：S436.64 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.07.021Abstract：Walnut stalk rot （Pythium oligandrum）has become one of the important diseases that affect walnut industry in Xinjiang. Antagonistic bacteria strains GY-11 was got from flat confrontation culture，while its bacteriostatic rate was 80% to Pythium oligandrum. The bacterial colony and thalli shape，physiological and biochemistry experiments and determination of the sequence of 16S rDNA of the bacteria had been done. The strain GY-11 was identified as Bacillus subtilis.Key words：walnut stalk rot；antagonistic bacteria；isolation；identification核桃（Juglans regia L.）属落叶乔木，是我国重要的经济树种，具有丰富的营养价值和保健功能，可制取食用油和制作各种食品[1]。

烟草青枯病拮抗菌的筛选、鉴定和防病潜力评价

烟草青枯病拮抗菌的筛选、鉴定和防病潜力评价何玉安;刘书凯;时宏书;王林玉;江彤;齐永霞;丁婷【摘要】为进一步丰富烟草青枯病的生防资源,通过平板稀释法,对贵州省黔南州4个烟区的健康烟株及根际土壤进行烟草内生细菌及根际细菌的分离纯化,共得到烟草内生细菌103株,根际细菌73株.利用抑菌圈法,筛选出抗青枯病菌的内生细菌LSN02和根际细菌LLGJ04,其抑菌圈直径分别为29.96和38.65 mm.进化分析结果表明,LSN02和LLGJ04均属于芽孢杆菌属且具有趋化性.盆栽试验中,LSN02和LLGJ04可有效增强烟株对青枯病的抗病能力.用中浓度(1×108 cfu/mL)和高浓度(2×108 cfu/mL)的LSN02菌株处理烟株时,烟草青枯病的病株率显著降低.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2018(051)009【总页数】6页(P1-6)【关键词】烟草;青枯病;拮抗细菌;芽孢杆菌;生防潜力【作者】何玉安;刘书凯;时宏书;王林玉;江彤;齐永霞;丁婷【作者单位】贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;安徽农业大学植物保护学院,合肥市长江西路130号 230036;安徽农业大学植物保护学院,合肥市长江西路130号 230036;安徽农业大学植物保护学院,合肥市长江西路130号 230036【正文语种】中文【中图分类】S435.72烟草青枯病作为一种重要的土传病害，随着烟草连作年限的延长以及耕作制度、烟草品种的变化，为害日益严重［1］。

目前，烟草青枯病的防治以化学药剂为主，但化学药剂的大量施用不利于生态环境的保护和农业的可持续发展［2］，生物防治则在烟草病害防治中发挥着越来越重要的作用。

植物病原菌拮抗微生物的筛选、鉴定及拮抗机理研究

植物病原菌拮抗微生物的筛选、鉴定及拮抗机理研究一、本文概述植物病原菌是威胁全球农业可持续发展的重要因素之一，它们引发的植物病害会导致作物减产、品质下降，甚至造成整个生态系统的破坏。

因此，寻找并利用拮抗微生物来防治植物病害，已成为当前植物保护领域的研究热点。

本文旨在探讨植物病原菌拮抗微生物的筛选方法、鉴定技术，以及深入研究其拮抗机理，以期为农业可持续发展提供新的生物防治策略。

本文将详细介绍拮抗微生物的筛选过程，包括采样方法、初筛和复筛步骤等。

通过从各种环境样本中分离和筛选出具有拮抗活性的微生物，为后续研究提供丰富的资源库。

本文将阐述拮抗微生物的鉴定方法，包括形态学观察、生理生化特性分析以及分子生物学鉴定等，以确保所获得的拮抗微生物种类准确可靠。

在此基础上，本文将重点研究拮抗微生物的拮抗机理。

通过比较基因组学、转录组学、蛋白质组学等多组学手段，揭示拮抗微生物与植物病原菌之间的相互作用关系，明确其拮抗作用的分子机制。

还将通过室内生物测定和田间试验，验证拮抗微生物的实际应用效果，为其在实际生产中的应用提供科学依据。

本文旨在通过系统研究植物病原菌拮抗微生物的筛选、鉴定及拮抗机理，为农业病害的生物防治提供新的思路和方法。

这不仅有助于推动植物保护领域的发展，也将为农业可持续发展和生态环境保护做出积极贡献。

二、材料与方法为了筛选拮抗微生物，我们从各种植物病害的土壤中收集了多种微生物，并选取了代表性的植物病原菌，如灰霉病菌、青枯病菌等。

这些病原菌是在植物病理实验室中通过常规方法分离和纯化的。

用于微生物培养和筛选的培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖培养基等，这些培养基均按照标准方法进行配制和灭菌。

实验过程中所使用的试剂均为分析纯，购自国内知名试剂公司。

实验仪器包括显微镜、培养箱、分光光度计、PCR仪等，这些仪器均经过定期校准和维护。

将收集到的微生物在牛肉膏蛋白胨培养基上进行初步培养，然后通过平板对峙法观察微生物对病原菌的拮抗作用。

脐橙根际解磷菌的分离鉴定及全基因组测序分析

郭小丹，唐　珊，余水静．脐橙根际解磷菌的分离鉴定及全基因组测序分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（１０）：３９－４７．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．１０．００５脐橙根际解磷菌的分离鉴定及全基因组测序分析郭小丹１，２，唐　珊１，２，余水静１，２（１．江西理工大学资源与环境工程学院，江西赣州３４１０００；２．江西省矿冶环境污染控制重点实验室，江西赣州３４１０００）摘要：高效解磷菌的分离，可促进实用型生物肥料的开发，是实现对作物的可持续性供磷以维护环境健康与土壤生产力的有力保障。

以江西省赣州市某果园脐橙根际土壤作为试验材料，用平板筛选法筛选分离１２株具有解磷能力的菌株，并结合钼锑抗比色法评估分离菌株的解磷能力，最终筛选出３株解磷菌（菌株编号为ＱＣＧＪ－Ｂ０１、ＱＣＧＪ－Ｂ０２、ＱＣＧＪ－Ｂ０４），这些菌株表现出高溶磷指数（范围为１．７１～２．５０）、强解磷能力（范围为２８０．７５～３１７．４８ｍｇ／Ｌ）、低ｐＨ值（范围为４．０８～４．７７）。

结果显示，ｐＨ值与解磷量呈负相关，表明酸化是３株解磷菌解磷的主要机制。

对解磷能力最强的ＱＣＧＪ－Ｂ０１进行全基因组测序分析，并基于管家基因鉴定得出，ＱＣＧＪ－Ｂ０１是新洋葱伯克霍尔德菌。

全基因组数据显示，ＱＣＧＪ－Ｂ０１的基因组大小为８１２７３２２ｂｐ，Ｇ＋Ｃ含量为６６．９８％，预测到７４２５个基因，所有预测和注释的基因序列都分配到ＫＥＧＧ通路中，检测了有机酸合成与磷酸盐代谢相关基因。

本研究发现，ＱＣＧＪ－Ｂ０１具有无机磷增溶基因（ｇｄｈ、ｐｑｑＢ、ｐｑｑＣ、ｐｑｑＤ、ｐｑｑＥ、ｇｌｔＡ）和磷酸盐转运系统基因（ｐｓｔＳ、ｐｓｔＣ、ｐｓｔＡ、ｐｓｔＢ、ｐｈｏＲ－ｐｈｏＢ、ｐｈｏＵ）。

此外，本研究还发现ＱＣＧＪ－Ｂ０１缺乏矿化磷酸酯的基因和编码磷酸酯转运蛋白的基因，可能使其无法利用额外的有机磷源，不利于其在不存在有效磷的环境中生存。

防治脐橙炭疽病生防菌的筛选

防治脐橙炭疽病生防菌的筛选材料与方法1.1试验材料1.1.1培养基细菌培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化钠5 g，琼脂20 g，水1000 mL，pH值7.0～7.2，121℃灭菌20 min）。

真菌培养基采用PDA培养基（马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 mL，121℃灭菌20 min）。

1.1.2供试菌株炭疽病致病菌株GXA5-1，分离自江西省赣州市赣县梅林果园脐橙炭疽病发病病叶。

按照科赫氏法则完成病原菌的分离纯化、鉴定及致病性测定，确认为胶孢炭疽菌。

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluores-cens）、木霉菌（Trichodermaspp）、瓦克青霉（Penicillium waks-manii）、白浅灰链霉菌（Streptomyces albogriseolus）购于中国农业微生物菌种保藏管理中心。

1.1.3生防菌处理液的制备枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、荧光假单胞菌于100 mL牛肉膏液体培养基37℃、150 r/min振荡活化12 h，取菌液5 mL加至95 mL牛肉膏液体培养基中，37℃、150 r/min振荡培养，浑浊后以4 000 r/min离心10 min，取上清备用。

木霉菌、瓦克青霉接种至查彼固体培养基，25℃培养3 d，再转接至液体培养基，25℃、150 r/min振荡培养，出现大量菌丝后过滤，4000 r/min离心10 min，取上清备用。

白浅灰链霉菌接种至高氏一号固体培养基，28℃活化培养2 d，再转接至液体培养基，28℃、150 r/min振荡培养，浑浊后以4 000 r/min离心10 min，取上清备用。

1.1.4菌株处理液对脐橙炭疽病病原菌菌丝生长的影响采用杯碟法，配制含有生防菌处理液的PDA平板，稀释度为10、100、200倍。

猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选

猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选杨睿，汪琳罗沙，姚迪，唐蕴哲，张婧一，彭清忠∗㊀（吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南吉首４１６０００）摘要㊀［目的］了解湘西地区猕猴桃根际土壤可培养细菌多样性，并分离溃疡病菌的拮抗菌株㊂［方法］通过纯培养法分离根际土壤样品中的细菌（含放线菌），基于１６ＳｒＲＮＡ基因序列的系统发育分析鉴定分离菌株㊂采用牛津杯法筛选拮抗溃疡病菌的菌株㊂［结果］从猕猴桃根际土壤中分离获得了１４２株细菌，通过１６ＳｒＲＮＡ基因序列分析，１４２株细菌分别归属４个门㊁６个纲㊁１１个目㊁１８个科㊁２８个属，其中Ｂａｃｉｌｌｕｓ为优势属㊂从分离菌株中筛选出４株对猕猴桃溃疡病菌有拮抗效果的细菌（Ａ１１㊁Ｄ１ｈ㊁Ａ４㊁Ｂ１５），经过系统发育分析初步鉴定Ａ１１和Ｄ１ｈ属于红球菌属（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ），Ａ４属于芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ），Ｂ１５属于链霉菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）㊂［结论］猕猴桃根际土壤可培养细菌具有丰富的类群㊁物种和遗传多样性，并存在拮抗溃疡病菌的微生物类群㊂关键词㊀猕猴桃根际土壤；可培养细菌；分离鉴定；多样性；拮抗菌筛选中图分类号㊀Ｓ４３６．６３４㊀㊀文献标识码㊀Ａ㊀㊀文章编号㊀０５１７－６６１１（２０２３）２２－００９８－０６ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５１７－６６１１．２０２３．２２．０２５㊀㊀㊀㊀㊀开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＣｕｌｔｕｒａｂｌｅＢａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍＫｉｗｉｆｒｕｉｔＲｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅＳｏｉｌａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃＢａｃｔｅｒｉａＡｇａｉｎｓｔＣａｎｋｅｒＰａｔｈｏｇｅｎＹＡＮＧＲｕｉ，ＷＡＮＧＬｉｎｌｕｏ⁃ｓｈａ，ＹＡＯＤｉｅｔａｌ㊀（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＪｉｓｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｓｈｏｕ，Ｈｕｎａｎ４１６０００）Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｂａｃｔｅｒｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｋｉｗｉｆｒｕｉｔｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｓｉｎｗｅｓｔｅｒｎＨｕｎａｎａｎｄｔｏｉ⁃ｓｏｌａｔｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｓｔｒａｉｎｓｏｆＫｉｗｉｆｒｕｉｔｃａｎｋｅｒｄｉｓｅａｓｅｂａｃｔｅｒｉａ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｂａｃｔｅｒｉａ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｕ⁃ｓｉｎｇｔｈｅｐｕｒｅｃｕｌｔｕｒｅｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｔｈｅｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｔｈｅｓｅｉｓｏｌａｔｅｓｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．ＴｈｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｔｈｅｎｓｃｒｅｅｎｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅＯｘｆｏｒｄｃｕｐｍｅｔｈｏｄ．［Ｒｅｓｕｌｔ］１４２ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｏｆｋｉ⁃ｗｉｆｒｕｉｔ，ａｎｄｂｙ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅ１４２ｓｔｒａｉｎｓｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏ４ｐｈｙｌａ，６ｃｌａｓｓ，１１ｏｒｄｅｒｓ，１８ｆａｍｉｌｉｅｓ，ａｎｄ２８ｇｅｎｅｒａ．Ｂａｃｉｌｌｕｓｉｓｔｈｅｄｏｍｉｎａｎｔｇｅｎｕｓ．Ａｎｄ４ｓｔｒａｉｎｓ（Ａ１１，Ｄ１ｈ，Ａ４，Ｂ１５）ｗｉｔｈａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｋｉｗｉｆｒｕｉｔｃａｎｋｅｒｄｉｓｅａｓｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｆｒｏｍｔｈｅｍ．Ａｆｔｅｒｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ，ｉｔｗａｓｔｅｎｔａｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈａｔＡ１１ａｎｄＤ１ｈｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ，Ａ４ｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏＢａｃｉｌｌｕｓ，ａｎｄＢ１５ｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｋｉｗｉｆｒｕｉｔｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｓａｒｅｒｉｃｈｉｎｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｔｈｅｐｒｅｓ⁃ｅｎｃｅｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｔａｘａａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｔｏｋｉｗｉｆｒｕｉｔｃａｎｋｅｒｄｉｓｅａｓｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀Ｋｉｗｉｆｒｕｉｔｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌ；Ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｂａｃｔｅｒｉａ；Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ基金项目㊀国家自然科学基金项目（３１２６０００９）；湖南省重点研发计划项目（２０２２ＮＫ２０５５）㊂作者简介㊀杨睿（１９９５），男，湖南怀化人，硕士，从事微生物生态学研究㊂∗通信作者，教授，硕士生导师，从事分子生物学研究㊂㊀㊀猕猴桃溃疡病是由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ，Ｐｓａ）引起的细菌病害，具有发生范围广㊁传播速度快㊁致病性强㊁防治难度大等特点，短期内极易造成大面积树体死亡［１］㊂目前，采用抗生素（如链霉素㊁春日霉素）和铜制剂（如铜氧化物㊁铜氢氧化物）的化学防治是主要防控措施，但该方法极易引起Ｐｓａ的耐药性，并且使用后抗生素和重金属残留污染环境［２－５］㊂生物防治是环境友好型植物健康管理新方式，具有无污染，无残留，不杀伤天敌，不易产生抗药性，利于人畜安全及环境保护，兼防兼治，增产增收等优点，符合人们对绿色食品的需求［６］㊂因此，利用生物防治法控制猕猴桃溃疡病更具应用前景㊂根际土壤微生物是土壤的重要组分，对于植物健康的意义可以类比为肠道微生物对于人类健康的作用，在肥力演变㊁物质循环及促进植物生长发育中发挥着重要作用，可直接影响作物产量和质量［７］㊂在根际土壤微生物中包含许多对植物有益的微生物群落，它们通过相互作用构建植物特殊免疫屏障，能够抑制病原菌，一定程度防止植物发病［８－１０］㊂从根际土壤中筛选得到的病虫害拮抗菌，由于直接来源于土壤，作为生物防治剂具有快速适应环境的优势㊂基于此，笔者采用拟纯培养法从湘西地区猕猴桃植株根际土壤样品中分离细菌，进行鉴定和微生物多样性分析，然后利用牛津杯法筛选拮抗Ｐｓａ的菌株，以期为猕猴桃溃疡病生物防治剂的研制积累种质资源㊂１㊀材料与方法１．１㊀样品采集㊀以湘西地区３个猕猴桃主要种植区作为采样点，即保靖县迁陵镇（２８ʎ０７ᶄＮ，１０９ʎ５７ᶄＥ），永顺县松柏镇（２８ʎ５４ᶄＮ，１１０ʎ４ᶄＥ），凤凰县阿拉营镇（２７ʎ５４ᶄＮ，１０９ʎ２２ᶄＥ）的米粮１号和红阳猕猴桃果园，随机采集２种猕猴桃根际土壤样品，放入冰盒中带回实验室备用㊂１．２㊀培养基配置㊀ＬＢ培养基：蛋白胨１０ｇ，ＮａＣｌ１０ｇ，酵母膏５ｇ，水１０００ｍＬ，ｐＨ７．０；高氏一号培养基：可溶性淀粉２０．００ｇ，ＮａＣｌ０．５０ｇ，ＫＮＯ３１．００ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４０．５０ｇ，ＭｇＳＯ４㊃７Ｈ２Ｏ０．５０ｇ，ＦｅＳＯ４㊃７Ｈ２Ｏ０．０１ｇ，水１０００ｍＬ，ｐＨ７．０㊂固体培养基均加入２．０％琼脂㊂１．３㊀可培养细菌分离㊀将采集的猕猴桃植株根际土壤样品各称取５ｇ，加入至装有５０ｍＬ无菌水的三角瓶中，２５ħ，１５０ｒ／ｍｉｎ振荡０．５ｈ，使土样充分分散㊂然后将土样稀释１００倍，吸取上清液各２００μＬ涂布于不同培养基上㊂放入培养箱２８ħ恒温培养２４ｄ，待培养基上长出单菌落后，记录细菌数量，挑取形态不同的单菌落，通过四分体划线纯化菌株，利用ＬＢ培养基转接３次，保存菌种㊂１．４㊀基于１６ＳｒＲＮＡ基因序列的系统发育分析㊀采用细菌基因组ＤＮＡ提取试剂盒提取分离菌株总ＤＮＡ，利用细菌通用引物ＰＡ／ＰＢ（ＰＡ：５ᶄ－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３ᶄ；ＰＢ：５ᶄ－ＴＴＡＡＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＣＣＧＣＡ－３ᶄ）对分离菌株分别进行１６ＳｒＤＮＡ序列ＰＣＲ扩增，反应体系为：ＴａｑＰＣＲＭｉｘ（２Ｘ）㊀㊀㊀安徽农业科学，Ｊ．ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０２３，５１（２２）：９８－１０３２５μＬ；正反引物各１μＬ；模板２μＬ；无菌水补齐至５０μＬ㊂ＰＣＲ程序为：９５ħ预变性２．５ｍｉｎ；９５ħ变性１５ｓ，５５ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸１ｍｉｎ，３５个循环；７２ħ后延伸１０ｍｉｎ㊂ＰＣＲ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检验后，送至生工生物工程（上海）有限公司进行序列测定㊂将测得的序列送至ＧｅｎＢａｎｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）数据库，采用Ｂｌａｓｔ工具软件搜索同源序列并进行比较分析，运用Ｍｅｇａ７．０软件中的邻位加入法（ｎｅｉｇｈｂｏｒｊｏｉｎｉｎｇ，ＮＪ）构建系统发育树，根据同源性和系统发育关系，确定菌株的种类归属㊂１．５㊀猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选㊀供试菌株为从猕猴桃根际土壤中分离得到的细菌，供试靶标菌丁香假单胞菌猕猴桃致病变种（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄａｅ，Ｐｓａ）为实验室前期分离鉴定的菌株Ｌ２１１㊂首先将供试菌株种子液按１％接种量加入液体ＬＢ培养基２５ħ，１５０ｒ／ｍｉｎ培养４８ｈ制成发酵液，接着分别利用离心机和冷冻真空干燥仪对上清液进行提取和浓缩备用；取２００μＬ靶标菌Ｌ２１１发酵液涂布于ＬＢ培养基上，在每个平板上放置１个牛津杯，加入２００μＬ供试菌株浓缩后的发酵上清液，于２５ħ恒温培养４８ｈ，观察是否有抑菌圈产生㊂２㊀结果与分析２．１㊀可培养细菌的分离㊀采用纯培养法从２种猕猴桃根际土壤样品中分离获得１６４株细菌（含放线菌）㊂从２种培养基的分离情况看，ＬＢ培养基分离效果较好，菌落数量和菌落形态较为丰富；高氏一号培养基分离效果相关较差，菌落形成单位低，且菌落颜色单一㊂综合分析菌落形态特征，去除部分冗余，最终从１６４株根际土壤细菌中选取１４２株代表菌株开展后续试验㊂２．２㊀根际土壤细菌类群多样性㊀提取分离菌株基因组ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增获得序列长度约１．５ｋｂ的１６ＳｒＲＮＡ基因片段，经测序和系统进化分析，初步鉴定１４２株细菌分别属于４门（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ，Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ，Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ，Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ），６纲（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｉａ，Ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ，Ｂｅｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ，Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ，Ｂａｃｉｌｌｉ，Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｉａ），１１目（Ｂａｃｉｌｌａｌｅｓ，Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｌｅｓ，Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ，Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ，Ｈｙｐｈｏｍｉ⁃ｃｒｏｂｉａｌｅｓ，Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ，Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌａｌｅｓ，Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｄａｌｅｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ，Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｌｅｓ），１８科（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌａｃｅａｅ，Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ，Ｂｏｓｅａｃｅａｅ，Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅａｅ，Ｃｏ⁃ｍａｍｏｎａｄａｃｅａｅ，Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ，Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ，Ｍｉｃｒｏｃｏｃ⁃ｃａｃｅａｅ，Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ，Ｎｏｃａｒｄｉａｃｅａｅ，Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ，Ｐｓｅｕｄｏ⁃ｍｏｎａｄａｃｅａｅ，Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ，Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ，Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌ⁃ｌａｃｅａｅ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ，Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｃｅ⁃ａｅ），２８属（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ，Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｆａｌｓｉｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｍｅｔａｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｒｉｅｓｔｉａ，Ｂｏｓｅａ，Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ，Ｃａｂａｌｌｅｒｏｎｉａ，Ｃｕｐｒｉａｖ⁃ｉｄｕｓ，Ｐａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ，Ｒａｌｓｔｏｎｉａ，Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ，Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ，Ｓｉｎｏｍｏｎａｓ，Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ，Ｐａｅｎｉｂａ⁃ｃｉｌｌｕｓ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ，Ｅｎｓｉｆｅｒ，Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ，Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ，Ｓｃｏｐｕ⁃ｌｉｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ，Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒａ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ，Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈ⁃ｏｍｏｎａｓ）㊂其中，Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ门菌株为优势菌群（７０株，４９．３％），其余依次为Ｂｅｔａ⁃ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ亚门（４２株，２９．６％）㊁Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ门（１９株，１３．４％）㊁Ａｌｐｈａ⁃ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ亚门（６株，４．２％）㊁Ｇａｍｍａ⁃ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ亚门（４株，２．８％）和Ｂａｃｔｅ⁃ｒｏｉｄｅｔｅｓ门（１株，０．７％）㊂在属水平上优势属为Ｂａｃｉｌｌｕｓ（６２株，４３．７％）（表１）㊂结果表明，猕猴桃根际土壤细菌具有丰富的类群多样性㊂２．３㊀根际土壤细菌物种和遗传多样性㊀根据系统发育分析结果，采用１６ＳｒＲＮＡ基因序列同源性ȡ９７％可归为同一种的原则，１４２株细菌可归为７６个物种㊂其中，有１０４株分离菌株与典型菌株１６ＳｒＲＮＡ基因序列相似性在９７．０３％１００％，可基本确定其分类地位；有３８株细菌与典型菌株１６ＳｒＲＮＡ基因同源性在９２．０３％９６．８７％，可能为潜在的新种或新属，分类地位有待进一步确定（表１）㊂这表明分离菌株与系统发育关系最密切的典型菌株之间存在较大的遗传差异，具有遗传多样性㊂表１㊀猕猴桃根际细菌与其关系最密切典型菌株的系统发育关系Ｔａｂｌｅ１㊀Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｃｌｏｓｅｓｔｎｅｉｇｈｂｏｒｓｏｆｋｉｗｉｆｒｕｉｔｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｂａｃｔｅｒｉａｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ科水平Ｆａｍｉｌｙ编号Ｎｏ．最近的模式菌株（登录号）Ｒｅｃｅｎｔｍｏｄｅｓｔｒａｉｎ（ｌｏｇｉｎｎｕｍｂｅｒ）相似度Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙʊ％Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌａｃｅａｅ（１）Ｄ３ｆＡｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍｌｉｐｏｆｅｒｕｍＢ２Ｔ（ＤＱ７８７３３０）９９．１５Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（６２）Ｄ１ｆＢａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｉｃｅｌｅｒＢ６３ＴＫ１８Ｔ（ＭＮ４８５９５１）９９．８６４ｃＢａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｉｃｅｌｅｒＮＢ－８Ｔ（ＫＵ２５４６６４）９９．９３Ｂ１１Ｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｉｃｅｌｅｒｖ３１１Ｔ（ＭＫ９３４３８５）９７．１３Ｄ３ｄＢａｃｉｌｌｕｓａｌｔｉｔｕｄｉｎｉｓＣＡＳ－ＷＺＳ－０８Ｔ（ＯＭ４６２３７３）９４．５９Ｄ３ｅＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＣＮ１３－５Ｔ（ＭＨ７６２８７８）９９．８０Ｄ２ｆＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＦＯＲＣＮ２４３Ｔ（ＭＷ４０２８８５）９６．２０Ｄ２ｅＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＬ４２Ｔ（ＫＵ１７９３４５）９５．９５ＧＤ３ａＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＬＳＲ３．１Ｔ（ＫＴ７１８０４７）９９．１７Ａ６ＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＭＢＮ３Ｔ（ＭＦ６９３１１９）９６．７５３ａＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＮＢＲＩＹＥ２．２Ｔ（ＭＫ１６８６３４）９９．３９Ｄ１ｂＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＮＢＲＩＹＮ２．５Ｔ（ＭＫ１６８６２４）９６．４０ＧＤ１ｃＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＮＢＲＩＹＮ４．４Ｔ（ＭＫ１６８６３５）９４．６７Ｂ８ＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＰｇＢＥ２Ｔ（ＭＨ１４４２２５）９９．７２９９５１卷２２期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀杨睿等㊀猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选００１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年续表１科水平Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙʊ％Ｒｅｃｅｎｔｍｏｄｅｓｔｒａｉｎ（ｌｏｇｉｎｎｕｍｂｅｒ）相似度Ｆａｍｉｌｙ编号Ｎｏ．最近的模式菌株（登录号）ＧＤ３ｃＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＲＳ１Ｔ（ＫＪ８７９９５１）９８．２０ＧＤ２ｈＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＺＬｙｎｎ１０００－１８Ｔ（ＫＹ３１６４４９）９６．５７Ｄ２ｂＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＺＬｙｎｎ１０００－１８Ｔ（ＫＹ３１６４４９）９３．８１Ｄ２ｈＢａｃｉｌｌｕｓａｒｙａｂｈａｔｔａｉＺＬｙｎｎ１０００－１８Ｔ（ＫＹ３１６４４９）９５．９５ＨＢ１ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＡＬ４ＲＴ（ＯＫ３９１２１４）１００Ｄ１ｃＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＢＦ１５Ｔ（ＫＪ５２４５１３）９６．４６Ａ４ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＧＴ３０Ｔ（ＫＹ３１２７７２）９８．６７Ｈ１２ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＩＡＭ１２６０５Ｔ（ＮＲ１１５５２６）９９．５２Ｂ３ＤＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＭＭＬ２６６６Ｔ（ＫＴ３２４６２０）９９．７５Ｈ３７ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＲＪ２３Ｔ（ＫＭ１１６０１０）９５．２９Ａ５ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＳＭ－３Ｔ（ＭＧ７０８１７８）９７．４２Ｂ３ＸＢａｃｉｌｌｕｓｍａｒｉｓｆｌａｖｉＫＲ３Ｍ－２５Ｔ（ＭＮ７５２６４４）９５．０９Ｈ３４ＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＡＨ－６７Ｔ（ＭＴ１０２９６０）９９．６４Ｄ１ｅＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＨＢＵＭ０６９４７Ｔ（ＭＦ６６２２１９）９７．１６Ｈ１１ＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＮＢＲＣ１５３０８Ｔ（ＮＲ１１２６３６）９７．７４Ｈ３１ＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＮＥＰＺ－２２Ｔ（ＭＴ１８４８３４）９９．７９ＨＡ５ＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＰＲ１０Ｔ（ＫＪ８７００２２）９９．２２ＧＤ２ｅＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＱＡＨ６Ｔ（ＫＦ４１９１２５）９４．６２ＨＢ２ＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＳ１Ｔ（ＭＴ４５３９９４）９９．８５Ｈ３５ＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＳＤ８Ｔ（ＭＨ２４４３３７）９９．３６ＨＡ１ＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＳＭＰＧ１３Ｔ（ＪＸ４１５５４９）９９．１５ＧＤ２ｂＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍＷＳＨ－００２Ｔ（ＣＰ００３０１８）９５．３１Ｈ３２ＢａｃｉｌｌｕｓｍｙｃｏｉｄｅｓＧＴ１３Ｔ（ＫＹ３１２７５５）９６．８７Ｈ２１ＢａｃｉｌｌｕｓｍｙｃｏｉｄｅｓＩＨＢＢ７１０６Ｔ（ＫＪ７６７３１９）９９．３５Ｈ２２ＢａｃｉｌｌｕｓｍｙｃｏｉｄｅｓＩＨＢＢ７１０６Ｔ（ＫＪ７６７３１９）９８．１１Ｄ２ｃＢａｃｉｌｌｕｓｍｙｃｏｉｄｅｓＸ８Ｔ（ＪＸ１２２６１３）９７．２８ＨＢ３ＢａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓＡＢ３３０Ｔ（ＭＴ４３６１０５）９９．６１ＨＡ２ＢａｃｉｌｌｕｓｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｕｓＧＡＵ２５Ｔ（ＯＭ２３２４７７）９９．３９Ｄ２ａＢａｃｉｌｌｕｓｐｓｅｕｄｏｍｙｃｏｉｄｅｓＫＵＢＯＴＡＢ２Ｔ（ＭＫ８５５４０２）９６．０６Ａ１２ＢａｃｉｌｌｕｓｓｉａｍｅｎｓｉｓＣＬ－２Ｔ（ＭＮ８７７６２７）９８．９８Ｈ２ａＢａｃｉｌｌｕｓｓｐＰＮ１Ｆ１５Ｔ（ＭＮ９２５８７２）９８．０５Ｄ２ｄＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡＵ３０Ｔ（ＥＦ０３２６７８）９８．８６Ｈ１３ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＣＩＦＴＭＦＢ４１５８ＡＴ（ＫＭ９８３３９１）９９．４９Ｄ２ｇＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＤＹＵ１Ｔ（ＥＦ４４２６７０）９７．０５Ｄ３ｈＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＷＲ１２Ｐ－ｑｍＴ（ＯＭ３２０１９９）９８．６３Ｈ３３ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＢＴ６２Ｔ（ＣＰ０４４９７８）９９．７８Ｄ３ｂＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＥＡＰＬ０５Ｔ（ＪＸ５００１７７）９８．１６ＨＢ４ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＨ３Ｔ（ＣＰ０５２０６１）９７．５２Ｄ１ｄＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＺＬｙｎｎ５００－２２Ｔ（ＫＹ３１６４１４）９９．１８Ｈ３６ＢａｃｉｌｌｕｓｔｏｙｏｎｅｎｓｉｓＪＹＷ５２Ｔ（ＭＮ１７３４９０）９９．２８Ｈ２３ＢａｃｉｌｌｕｓｔｏｙｏｎｅｎｓｉｓＴ７Ｔ（ＭＷ７８６７２６）９９．７１Ｄ３ａＢａｃｉｌｌｕｓｚａｎｔｈｏｘｙｌｉ１４３３Ｔ（ＭＷ５７８３９４）９４．４４Ｄ１ａＢａｃｉｌｌｕｓｚａｎｔｈｏｘｙｌｉ１９１０ＩＣＵ２４１Ｔ（ＭＴ２２５７７０）９６．９４Ｂ２ＢａｃｉｌｌｕｓｚａｎｔｈｏｘｙｌｉＭＡＩＤＯ－Ｒ６ｂ－８Ｔ（ＭＷ７１１４００）９７．６８Ｂ１２ＢａｃｉｌｌｕｓｚａｎｔｈｏｘｙｌｉＮＥＣＣ１０２２０Ｔ（ＯＬ６９０５８５）９７．１２Ｂ１ＦａｌｓｉｂａｃｉｌｌｕｓｐａｌｌｉｄｕｓＣＷ７Ｔ（ＮＲ１１６２８７）９９．７１Ｈ４４ＬｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｍａｃｒｏｉｄｅｓＪ２０Ｍ２ＬＡＲＳＴ（ＭＴ３７８５００）９９．７８Ｈ４１ＭｅｔａｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｒｂｅｒｓｔｅｉｎｅｎｓｉｓＮｏ９Ｔ（ＭＺ４２４６３３）９４．１７Ａ９ＰｒｉｅｓｔｉａａｒｙａｂｈａｔｔａｉＡＫ１Ｔ（ＯＬ７５７８５４）９９．１０Ｂｏｓｅａｃｅａｅ（１）ＨＡ３ＢｏｓｅａｔｈｉｏｏｘｉｄａｎｓＮＫ３Ｔ（ＭＫ５１９１３８）９５．７０Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅａｅ（３９）５ｂＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅｐａｃｉａＡＴＣＣ３９２７７Ｔ（ＡＹ７４１３４７）９９．４５５ａＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅｐａｃｉａＮＢＲＣ１５１２４Ｔ（ＡＢ６８０７７１）９９．４２４ｅＣａｂａｌｌｅｒｏｎｉａｇｒｉｍｍｉａｅＧＪ５Ｔ（ＭＧ２７０１７８）９９．０５１ｄＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｌａｃｕｎａｅＳ２３Ｔ（ＮＲ１６４９３４）９９．９３ＨＧ２ｃＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐＤｍｍ５Ｔ－５－１Ｔ（ＭＧ５６１８５１）９４．２７续表１科水平Ｆａｍｉｌｙ编号Ｎｏ．最近的模式菌株（登录号）Ｒｅｃｅｎｔｍｏｄｅｓｔｒａｉｎ（ｌｏｇｉｎｎｕｍｂｅｒ）相似度Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙʊ％ＨＧ２ｂＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９７．８０Ｈ２ｃＸＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９５．８０Ｈ３ａＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９７．５４ＨＧ３ｂＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９８．９９ＨＧＡａＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９８．１９ＨＢａＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９９．２７ＨＢｂＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９８．５７ＨＢｃＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｓｐｒ５０３Ｔ（ＭＫ９３４３７１）９８．５７Ｈ３ｂＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｔａｉｗａｎｅｎｓｉｓＡＵＸ０１０６Ｔ（ＡＹ８６０２５１）９７．５４Ｈ１ａＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｔａｉｗａｎｅｎｓｉｓＮＦＳ－ＳＴＲ－８Ｔ（ＭＦ０７９３５６）９７．１７ＨＧ１ａＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９６．２４Ｈ１ｄＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９７．７７Ｈ２ｂＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９９．２７ＨＡａＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９９．４２ＨＡｂＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９７．１３ＨＧＡｂＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９８．７６ＨＧＢａＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９８．１３ＨＧＢｃＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９８．４２Ａ７ＣｕｐｒｉａｖｉｄｕｓｙｅｏｎｃｈｅｏｎｅｎｓｉｓＤＣＹ８６Ｔ（ＮＲ１４５５４１）９６．４２３ｂＣｕｒｖｉｂａｃｔｅｒｇｒａｃｉｌｉｓ７－１Ｔ（ＮＲ０２８６５５）９９．６５５ｃＣｕｒｖｉｂａｃｔｅｒｇｒａｃｉｌｉｓ７－１Ｔ（ＮＲ０２８６５５）９８．７４４ｉＣｕｒｖｉｂａｃｔｅｒｇｒａｃｉｌｉｓＬＤＯＲ２０－９１（ＭＮ００４８４３）９９．７９２ｃＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓＢＮ５Ｔ（ＣＰ０２２９８９）９９．２４４ｇＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｄｏｋｄｏｎｅｌｌａＤＣＲ－１３Ｔ（ＮＲ１６５７０６）９３．５０ＧＤ１ａＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｇｉｎｓｅｎｇｉｔｅｒｒａｅＤＣＹ８５Ｔ（ＮＲ１４５５３７）９５．８７ＨＧＢｂＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｐｈｅｎｏｌｉｒｕｐｔｒｉｘＢＴＭ５５９Ｔ（ＭＴ２３３２３５）９８．４８ＨＧ２ｄＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｐｈｙｔｏｆｉｒｍａｎｓ０１ｈｖＴ（ＫＣ５３７７４１）９８．４７ＨＧ３ａＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｐｈｙｔｏｆｉｒｍａｎｓＪＢＲＩＭＯ００３１Ｔ（ＭＫ３０２２４６）９２．５７ＨＧＡｃＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｐｈｙｔｏｆｉｒｍａｎｓＪＢＲＩＭＯ００３１Ｔ（ＭＫ３０２２４６）９７．７２４ｄＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｓａｂｉａｅＰＳＢ１９７Ｔ（ＭＧ５７２５７１）９９．４８ＨＧ１ｃＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｓｐＰＧＵ１６Ｔ（ＡＰ０２３１７５）９８．５６ＧＤ３ｂＰａｒａｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｔｅｒｒａｅＤＳＭ１７８０４Ｔ（ＣＰ０２６１１１）９４．９０Ｈ４３Ｒａｌｓｔｏｎｉａｐｉｃｋｅｔｔｉｉｒ５０４Ｔ（ＭＫ９３４３７２）９８．９２Ｈ４２ＲａｌｓｔｏｎｉａｐｓｅｕｄｏｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＳＣ１５７Ｔ（ＭＨ２５６５４２）９８．７７Ｃｏｍａｍｏｎａｄａｃｅａｅ（３）ＧＤ２ｇＶａｒｉｏｖｏｒａｘｐａｒａｄｏｘｕｓＣＳＵＳＢＴ（ＣＰ０４６６２２）９９．４４ＧＤ２ｆＶａｒｉｏｖｏｒａｘｐａｒａｄｏｘｕｓＳＣＺ２４Ｔ（ＭＷ４３３６３８）９９．３７Ａ１３ＶａｒｉｏｖｏｒａｘｓｐＰＢＬ－Ｅ５Ｔ（ＬＲ５９４６７１）９７．１７Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（１）ＧＤ２ａＦｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｏｍｐｏｓｔａｒｂｏｒｉｓ１５Ｃ３Ｔ（ＮＲ１０８５７６）９６．２０Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（１）Ｈ２ｃＭｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｙａｎｎｉｃｉｉＱＴ１８９－７Ｔ（ＭＴ０８９９１４）９９．１２Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ（３）Ｄ１ｇＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒａｕｒｅｓｃｅｎｓＪＳ１４－０３Ｔ（ＧＵ１７１３８０）９８．５１Ａ３Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ２Ｔ（ＭＷ１６５５２１）９４．４２Ｄ３ｇＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｉｌｖｉｔｅｒｒａｅＫＩＳ１４－１６Ｔ（ＮＲ１５９１０９）９４．８６Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ（２）３ｈＳｉｎｏｍｏｎａｓａｔｒｏｃｙａｎｅａＨＭＧ２３５２Ｔ（ＯＬ３４７５６２）９９．３１３ｅＳｉｎｏｍｏｎａｓａｔｒｏｃｙａｎｅａＮＢ６１ＴＫ１７Ｔ（ＭＮ４８５９４９）９９．２１Ｎｏｃａｒｄｉａｃｅａｅ（４）Ｂ１４ＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｂａｉｋｏｎｕｒｅｎｓｉｓＢＡＰ－１Ｔ（ＪＸ６８３６８２）９５．６４Ｄ１ｈＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｇｌｏｂｅｒｕｌｕｓＩＣＭＰ１３９６Ｔ（ＭＫ３５６４５６）９８．３９Ａ１１ＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｇｌｏｂｅｒｕｌｕｓＰＡＭＣ２７３２１Ｔ（ＭＴ５５５３４２）９９．００Ｂ５ＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｈｏａｇｉｉＣＳ４０２Ｔ（ＬＣ５５２０７２）９９．７８Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（１）ＧＤ１ｂＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｓｉｌｖｅｓｔｒｉｓ５Ｊ－６Ｔ（ＭＮ３８１９５２）９２．０３Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ（３）４ｂＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｒｓｅｎｉｃｏｘｙｄａｎｓＣＥＣＴ７５４３Ｔ（ＬＴ６２９７０５）９９．７２３ｃＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｕｔｚｅｒｉＫＧＳ－８Ｔ（ＣＰ０１８０４６）９９．５２１ａＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｖａｎｃｏｕｖｅｒｅｎｓｉｓＪＢＲＩＭＯ００４４Ｔ（ＭＫ３０２２５９）９８．７２Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ（３）ＨＧ２ａＥｎｓｉｆｅｒａｄｈａｅｒｅｎｓＷ２－Ｂ９Ｔ（ＣＰ０８３３５０）９９．９２ＧＤ２ｃＲｈｉｚｏｂｉｕｍｇｒａｈａｍｉｉＢＧ７Ｔ（ＣＰ０４３４９８）９９．２９Ｂ１０ＲｈｉｚｏｂｉｕｍｖｉｓｃｏｓｕｍＡＰＰ１１１Ｔ（ＭＴ５３４１１９）９７．０３１０１５１卷２２期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀杨睿等㊀猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选续表１科水平Ｆａｍｉｌｙ编号Ｎｏ．最近的模式菌株（登录号）Ｒｅｃｅｎｔｍｏｄｅｓｔｒａｉｎ（ｌｏｇｉｎｎｕｍｂｅｒ）相似度Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙʊ％Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ（１）ＧＤ２ｉＮｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍｂａｒｃｈａｉｍｉｉＬＬ０２Ｔ（ＮＲ１１８３１４）９８．４８Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（１）Ｄ３ｃＳｃｏｐｕｌｉｂａｃｉｌｌｕｓｄａｒａｎｇｓｈｉｅｎｓｉｓＤＬＳ－０８Ｔ（ＦＮ６４６６３０）９４．５２Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ（６）ＨＡｃＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ１４５０７Ｔ（ＣＰ０５３３５６）９８．３７１ｂＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｐｔ２１８Ｔ（ＣＰ０４９５０８）９４．６９Ａ２ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｃａｐｉｔｉｓＬＡ１１０Ｔ（ＫＹ６２２２２６）９６．８０Ｂ７ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓＳＥＳＵＲＶｐ１０５６３Ｔ（ＣＰ０４３７８１）９９．７５２ａＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｏｒｕｍＰＬ４５３Ｔ（ＭＫ０１５７９１）９９．２６２ｂＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｗａｒｎｅｒｉＨＢＵ７２５２Ｔ（ＭＷ３５５８７９）９９．６６Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ（９）ＧＤ１ｄＫｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒａｐｕｒｐｅｏｆｕｓｃａＢＴＭ４４７Ｔ（ＭＴ２３３１３９）９７．２２Ｂ９Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ１７３２１３Ｔ（ＥＵ５７０６６７）９７．５７Ａ８ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｃａｏｉＶＮ１２－Ｂ０４０８Ｔ（ＭＺ１６５３３３）９９．５８Ｂ１６ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｌａｕｃｉｎｉｇｅｒＺＹ２１５Ｔ（ＫＴ９５２３０３）９７．０６ＨＧ１ｄＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｏｋｕｔｏｎｅｎｓｉｓＥＡ１４８Ｔ（ＭＷ６４２１２１）９５．２２ＨＡ４ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＭＡ３０ＳＮＨＴ（ＯＫ４８３１０９）９９．０９Ｂ１５ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｔｒｉｔｉｃｉｒａｄｉｃｉｓＴ（ＭＮ５１２４５０）９９．２３ＧＤ２ｄＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｘａｎｔｈｏｐｈａｅｕｓＸＳＤ１２９Ｔ（ＥＵ２８５４７４）９４．８４Ｂ４ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｘａｎｔｈｏｐｈａｅｕｓＸＳＤ－１２９Ｔ（ＥＵ２８５４７４）９９．７２Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ（１）Ｄ２ｉＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓｒｈｉｚｏｐｈｉｌａＥｖＮ－６Ｔ（ＭＫ３７１０７５）９９．６６２．４㊀猕猴桃溃疡病拮抗菌筛选与鉴定㊀以分离的１４２株细菌为供试菌株，通过牛津杯试验初筛，发现４株细菌（菌株编号Ａ１１㊁Ｄ１ｈ㊁Ａ４和Ｂ１５）的发酵液在牛津杯周围出现抑菌圈（图１），说明这４株菌能够抑制溃疡病菌Ｐｓａ的生长，其发酵液中可能存在拮抗Ｐｓａ生长的代谢产物或降解Ｐｓａ菌体成分的蛋白酶类㊂对４株拮抗菌进行系统发育分析，发现菌株Ａ１１和Ｄ１ｈ与红球菌属的Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｇｌｏｂｅｒｕｌｕｓ（ＭＧ５７５９４９㊁ＥＵ００４４１６㊁ＭＫ３５６４５６㊁ＭＴ５５５３４２）聚为一支，其与关系密切典型菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列同源性在９７．００％以上；Ａ４与芽孢杆菌属的Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇ（ＦＪ６０１９０２．１）㊁Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ（ＨＧ８０００１２．１）㊁Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｏｙｏｎｅｎｓｉｓ（ＭＧ５６１３６３．１）㊁Ｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉ⁃ｄｉｐｒｏｄｕｃｅｎｓ（ＭＦ４４６８８６．１）㊁Ｂａｃｉｌｌｕｓｗｉｅｄｍａｎｎｉｉ（ＭＷ４３５４８１．１）聚为一支，其１６ＳｒＲＮＡ基因序列同源性在９７．００％以上；Ｂ１５与链霉菌属的Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｔｒｉｔｉｃｉｒａｄｉｃｉｓ（ＭＮ５１２４５０）聚为一支，其１６ＳｒＲＮＡ基因序列同源性在９７．００％以上（图２）㊂初步确定，菌株Ａ１１和Ｄ１ｈ属于红球菌属（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ），菌株Ａ４属于芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ），Ｂ１５属于链霉菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ⁃ｃｅｓ）㊂图１㊀猕猴桃溃疡病菌的拮抗试验Ｆｉｇ．１㊀ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａａｇａｉｎｓｔＰｓａ３㊀讨论该试验从猕猴桃根际土壤中分离获得了１４２株细菌，分别归属于细菌域六大系统发育类群（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ，ｂａｃｔｅ⁃ｒｏｉｄｅｔｅｓ，Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ，Ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ，Ｂｅｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ，Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）㊁１１个目㊁１８个科㊁２８个属㊁７６个物种，其１６ＳｒＲＮＡ基因序列与关系密切典型菌株相似度在９２．０３％１００％㊂可以看出，猕猴桃根际土壤细菌具有丰富的类群㊁物种和遗传多样性，并存在潜在的新种或者新属类群㊂其中，细菌优势类群为Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ门（７０株，４９．３％），有研究病原菌侵染中具有重要作用［１１］㊂推测Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ门是猕猴桃预防溃疡病的主要类群之一㊂通过牛津杯试验，从１４２株细菌中筛选出４株有拮抗效果的细菌（Ａ１１㊁Ｄ１ｈ㊁Ａ４㊁Ｂ１５），经过系统发育分析，确定菌株Ａ１１和Ｄ１ｈ属于红球菌属，菌株Ａ４属于芽孢杆菌属，Ｂ１５属于链霉菌属㊂结果表明，猕猴桃根际土壤中存在拮抗溃疡病菌的微生物类群㊂红球菌是一种具有良好抗菌效果的革兰氏阳性菌，有研究报道，该类细菌能产生新抗生素［１２］，如Ｋｕ⁃ｒｏｓａｗａ等［１３］从红球菌中分离出红链霉素Ａ和红链霉素Ｂ（Ｒｈｏｄｏｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）对革兰氏阴性和阳性菌有良好的抑制活２０１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年图２㊀基于１６ＳｒＤＮＡ序列的系统进化树Ｆｉｇ．２㊀Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ性；Ｋｉｔａｇａｗａ等［１４－１５］从红球菌中发现了一种新型喹啉类抗生素（ａｕｒａｃｈｉｎ）对表皮葡萄球菌㊁枯草芽孢杆菌和痤疮丙酸杆菌有良好的拮抗效果㊂芽孢杆菌是一类具有生防潜力的微生物，其可以通过分泌抗生素㊁细胞壁水解酶以及铁载体等胞外代谢产物表现出拮抗活性［１６－１７］，杜贞娜等［１８－１９］报道了拮抗Ｐｓａ的芽孢杆菌类群㊂链霉菌能够分泌多种抗生素，是目前抗生素生产应用较广的一类细菌［２０－２１］，其分泌的链霉素是防治Ｐｓａ的主要杀菌剂［２２］，朱云海等［２３］在猕猴桃组织中发现能拮抗Ｐｓａ的肉桂地链霉菌㊂由此可见，笔者筛选的红球菌（２株）㊁芽孢杆菌及链霉菌可能是生物防治猕猴桃溃疡病的优良菌株，其拮抗机理有待进一步发掘㊂综上所述，猕猴桃根际土壤中可培养细菌具有丰富的类群㊁物种和遗传多样性，并存在拮抗溃疡病菌的微生物类群㊂该研究发现了拮抗Ｐｓａ的红球菌属细菌，为猕猴桃溃疡病生物防治剂的研制积累了种质资源㊂参考文献［１］ＧＡＯＸＮ，ＨＵＡＮＧＱＬ，ＺＨＡＯＺＢ，ｅｔａｌ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ｃｏｌｏｎｉ⁃ｚａｔｉｏｎ，ａｎｄｍｏｖｅｍｅｎｔｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅｉｎｋｉｗｉｆｒｕｉｔｔｉｓｓｕｅｓｕｓｉｎｇａＧＦＰｕｖ⁃ｌａｂｅｌｅｄｓｔｒａｉｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１６，１１（３）：１－１４．［２］ＤＥＪＯＮＧＨ，ＲＥＧＬＩＮＳＫＩＴ，ＥＬＭＥＲＰＡＧ，ｅｔａｌ．ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄｕｓｅｏｆＡｕｒｅｏ⁃ｂａｓｉｄｉｕｍｐｕｌｌｕｌａｎｓｓｔｒａｉｎＣＧ１６３ａｎｄａｃｉｂｅｎｚｏｌａｒ⁃Ｓ⁃ｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｃａｎｋｅｒｉｎｋｉｗｉｆｒｕｉｔ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｓ，２０１９，８（８）：１－１９．［３］ＮＡＫＡＪＩＭＡＭ，ＧＯＴＯＭ，ＨＩＢＩＴ．ＳｉｍｉｌａｒｉｔｙｂｅｔｗｅｅｎｃｏｐｐｅｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｆｒｏｍＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅａｎｄＰ．ｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．ＪＧｅｎＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌ，２００２，６８（１）：６８－７４．［４］ＣＯＬＯＭＢＩＥ，ＳＴＲＡＵＢＣ，ＫÜＮＺＥＬＳ，ｅｔａｌ．ＥｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｃｏｐｐｅｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｈｅｋｉｗｉｆｒｕｉｔｐａｔｈｏｇｅｎＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅｔｈｒｏｕｇｈａｃ⁃ｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅｃｏｎｊｕｇａｔｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｓａｎｄｐｌａｓｍｉｄｓ［Ｊ］．ＥｎｖｉｒｏｎＭｉ⁃ｃｒｏｂｉｏｌ，２０１７，１９（２）：８１９－８３２．［５］ＨＡＮＨＳ，ＫＯＨＹＪ，ＨＵＲＪＳ，ｅｔａｌ．ＯｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｓｔｒＡ⁃ｓｔｒＢｓｔｒｅｐｔｏｍｙ⁃ｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐｅｃｉｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｋｉｗｉｆｒｕｉｔｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４，４２（４）：３６５－３６８．［６］王超，郭坚华，席运官，等．拮抗细菌在植物病害生物防治中应用的研究进展［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１８）：１－６．［７］ＢＥＲＧＧ．Ｐｌａｎｔ⁃ｍｉｃｒｏｂｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｐｒｏｍｏｔｉｎｇｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈａｎｄｈｅａｌｔｈ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｕｓｅｏｆｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓｉｎａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００９，８４（１）：１１－１８．群落结构的差异［Ｊ］．应用生态学报，２０１９，３０（７）：２３４５－２３５１．［９］葛艺，徐绍辉，徐艳．根际微生物组构建的影响因素研究进展［Ｊ］．浙江农业学报，２０１９，３１（１２）：２１２０－２１３０．［１０］陆涛，李燕，傅正伟，等．农药对根际微生物群落的影响及潜在风险［Ｊ］．农药学学报，２０１９，２１（Ｚ１）：８６５－８７０．［１１］ＭＥＮＤＥＳＲ，ＫＲＵＩＪＴＭ，ＢＲＵＩＪＮＩＤ，ｅｔａｌ．Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇｔｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅｆｏｒｄｉｓｅａｓｅ⁃ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，３３２（６０３３）：１０９７－１１００．［１２］ＣＡＰＰＥＬＬＥＴＴＩＭ，ＰＲＥＳＥＮＴＡＴＯＡ，ＰＩＡＣＥＮＺＡＥ，ｅｔａｌ．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖａｌｕａｂｌｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌＭｉｃｒｏ⁃ｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０２０，１０４（２０）：８５６７－８５９４．［１３］ＫＵＲＯＳＡＷＡＫ，ＧＨＩＶＩＲＩＧＡＩ，ＳＡＭＢＡＮＤＡＮＴＧ，ｅｔａｌ．Ｒｈｏｄｏｓｔｒｅｐｔｏ⁃ｍｙｃｉｎｓ，ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｆｏｌｌｏｗｉｎｇｈｏｒｉｚｏｎｔａｌｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｆｒｏｍＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐａｄａｎｕｓｔｏＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｆａｓｃｉａｎｓ［Ｊ］．ＡｍＣｈｅｍＳｏｃ，２００８，１３０（４）：１１２６－１１２７．［１４］ＫＩＴＡＧＡＷＡＷ，ＭＩＴＳＵＨＡＳＨＩＳ，ＨＡＴＡＭ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ⁃ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｇｅｎｅｆｒｏｍＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓＪＣＭ２８９５，ｕｓｉｎｇｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ⁃ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＡｎｔｉｂｉｏｔ，２０１８，７１（１０）：８７２－８７９．［１５］ＮＡＣＨＴＩＧＡＬＬＪ，ＳＣＨＮＥＩＤＥＲＫ，ＮＩＣＨＯＬＳＯＮＧ，ｅｔａｌ．Ｔｗｏｎｅｗａｕｒａ⁃ｃｈｉｎｓｆｒｏｍＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ａｃｔａ２２５９［Ｊ］．ＪＡｎｔｉｂｉｏｔ，２０１０，６３（９）：５６７－５６９．［１６］ＭＩＬＪＡＫＯＶＩＣᶄＤ，ＭＡＲＩＮＫＯＶＩＣᶄＪ，ＢＡＬＥŠＥＶＩＣᶄ⁃ＴＵＢＩＣᶄＳ．ＴｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ．ｉｎｄｉｓｅａｓｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆｆｉｅｌｄａｎｄｖｅｇｅｔａｂｌｅｃｒｏｐｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，２０２０，８（７）：１－１９．［１７］ＡＢＲＩＯＵＥＬＨ，ＦＲＡＮＺＣＭ，ＢＥＮＯＭＡＲＮ，ｅｔａｌ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄａｐｐｌｉｃａ⁃ｔｉｏｎｓｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌＲｅｖ，２０１１，３５（１）：２０１－２３２．［１８］杜贞娜，晏子英，候忠余，等．猕猴桃溃疡病病原菌的鉴定及生防菌的筛选［Ｊ］．西南农业学报，２０２１，３４（４）：７５５－７６１．［１９］邵宝林，王成华，刘露希，等．猕猴桃溃疡病生防芽孢杆菌Ｂ２的鉴定及应用［Ｊ］．中国农学通报，２０１５，３１（２６）：１０３－１０８．［２０］ＷＡＴＶＥＭＧ，ＴＩＣＫＯＯＲ，ＪＯＧＭＭ，ｅｔａｌ．Ｈｏｗｍａｎｙａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓａｒｅｐｒｏ⁃ｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｇｅｎｕｓＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ？［Ｊ］．ＡｒｃｈＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，１７６（５）：３８６－３９０．［２１］ＮＥＰＡＬＫＫ，ＷＡＮＧＧＪ．Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅｓ：Ｓｕｒｒｏｇａｔｅｈｏｓｔｓｆｏｒｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｎｅｃｌｕｓｔｅｒｓａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄ⁃ｕｃｔｓ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＡｄｖ，２０１９，３７（１）：１－２０．［２２］ＹＡＮＧＸ，ＹＩＸＫ，ＣＨＥＮＹ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅｓｔｒａｉｎｓｃａｕｓｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｌｃａｎｋｅｒｏｆｋｉｗｉｆｒｕｉｔｉｎｔｈｅＡｎｈｕｉＰｒｏｖｉｎｃｅｏｆＣｈｉｎａ，ａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．ＧｅｎｅｔＭｏｌＲｅｓ，２０１５，１４（３）：８２０１－８２１０．［２３］朱海云，马瑜，柯杨，等．猕猴桃细菌性溃疡病生防菌的筛选㊁鉴定及其防效初探［Ｊ］．微生物学杂志，２０１６，３６（５）：９０－９６．３０１５１卷２２期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀杨睿等㊀猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选。

果蔬拮抗内生菌的筛选鉴定及拮抗能力的研究

收稿日期：2019-09-01 基金项目：2015 年度湖北省教育厅优秀青年科技创新团队项目基金
(T201534)。作者简介：石慧，女，硕士，教授，研究方向为应用微生物的研究与教学。
1.2 实验 1.2.1 果蔬内生菌的分离
从购买回的蔬菜、水果中选取健壮的、无损伤的完整植株或个体备用。将不同蔬菜茎、叶，水果分别用自来水冲洗晾干，各称取 10g 置于超净工作台中，以 70% 酒精浸泡清洗 5min，而后用 0.1% 升汞浸泡 3min，再将植物组织置于磁力搅拌器中，用无菌水搅拌冲洗 3 次，每次 5min。清洗完后分别将植物组织置于牛肉膏蛋白胨固体培养基培养，37℃培养 48h，观察有无菌落产生，以此检验表面消毒是否彻底。样品晾干后转入无菌研钵中研磨匀浆，加 10mL 无菌水碾碎，转移至 50mL 离心管中，静置 15min 后，各取 100μL 涂平板，28℃培养 48～72h。根据菌落形态、颜色等挑取单菌落，划线分离纯化后保存。 1.2.2 拮抗性果蔬内生菌的筛选
VOL.44,No.11 November.2019
Grain science and technology and economy 粮食科技与经济
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5-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3 为引物，扩增得到各菌株的 16 SrDNA，测序、并在 NCBI 中做序列比对，鉴定各菌株的种属关系。 1.2.4 拮抗性果蔬内生菌对食源性致病菌的拮抗特性
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技术与装备 Technology and Equipment
VOL.44,No.11 November.20赛格，林幸明
（武汉设计工程学院食品与生物科技学院，湖北武汉 430205）
[ 摘要 ] 本文从果蔬中分离到 18 株植物内生细菌。通过拮抗试验，得到 3 株具有明显抑菌性能的植物内生菌 S6， W3，W6。经形态学、重要生理生化特征及分子生物学鉴定，初步判断 S6 和 W3 可能为枯草芽孢杆菌或其亚种， W6 可能为蜡样芽孢杆菌或其亚种。选用 6 种致病菌为敏感菌测试这 3 株拮抗菌株发酵液的抑菌能力，实验结果显示：这 3 株菌对大肠杆菌 O157：H7、金黄色葡萄球菌、雷根斯堡约克菌、沙门氏菌、阴沟肠杆菌和嗜水气单胞菌等病原菌均具有拮抗作用，具有一定的研究及应用价值。 [ 关键词 ] 内生菌；筛选鉴定；拮抗中图分类号：S436.418 文献标识码：A DOI：10.16465/431252ts.20191124

人参根际拮抗细菌RS—3的鉴定及其对人参常见病原菌的抑制作用

人参根际拮抗细菌RS—3的鉴定及其对人参常见病原菌的抑制作用从吉林健康人参根中筛选到一株广谱根际菌RS-3。

经形态学特征及16SrDNA 序列同源性分析，鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。

平板对峙实验及带毒平板法鉴定，该菌株对常见的5种人参病原菌有一定的拮抗作用，对灰霉病菌的抑菌率达54.4%。

说明根际细菌RS-3可作为人参常见病害的潜在广谱生防菌进一步开发利用。

标签：人参；根际细菌；抑菌活性[Abstract] A rhizobacteria strain named RS-3 exhibited inhibitory activity against all five Panax ginseng pathogens was isolated from the root of P. ginseng. This strain was identified as Bacillus amyloliquefaciens based on its morphological character and 16S rDNA sequence. Antagonistic activity experiments indicated that the strain could strongly suppress Botrytis cinerea Pers with an inhibitory rate of 54.4%，suggesting the potentialities of biocontrol agent against diseases that frequently happen on ginseng.[Key words] Panax ginseng；rhizobacteria；antibacterial activitydoi：10.4268/cjcmm20162413人参Panax ginseng C. A. Mey为五加科人参属多年生草本植物，主要分布于东北吉林、辽宁、黑龙江等地区。

赣南脐橙致腐菌的分离鉴定及其对2-苯乙醇敏感性分析

赣南脐橙致腐菌的分离鉴定及其对2-苯乙醇敏感性分析【摘要】本研究对赣南脐橙致腐菌进行了分离鉴定及2-苯乙醇敏感性分析。

通过实验结果显示，成功分离和鉴定了赣南脐橙致腐菌，并发现其对2-苯乙醇具有一定的敏感性。

这一研究为进一步探索赣南脐橙病害防控提供了重要数据支持。

本研究也指出了使用2-苯乙醇来控制赣南脐橙致腐菌的潜在前景，为防治相关病害提供了新的思路。

本研究对于帮助生产者提高赣南脐橙产量和质量具有积极的意义。

【关键词】赣南脐橙, 致腐菌, 分离鉴定, 2-苯乙醇, 敏感性分析, 应用前景,研究背景, 研究目的, 研究意义, 结论1. 引言1.1 研究背景赣南脐橙是中国瓯江流域一个重要的柑橘栽培品种，具有浓郁的香味和甜美的口感，深受消费者喜爱。

赣南脐橙在采摘、贮藏和运输的过程中容易受到真菌的污染和感染，导致果实腐烂变质。

赣南脐橙致腐菌是引起果实腐烂的主要病原真菌之一。

随着对赣南脐橙致腐菌的关注不断增加，研究人员越来越关注如何有效地进行赣南脐橙致腐菌的分离鉴定，以及探究相应的防控方法。

通过对赣南脐橙致腐菌的研究，可以为果农提供有效的防治方案，延长赣南脐橙的保鲜期，保障果实的质量和市场竞争力。

本研究旨在对赣南脐橙致腐菌进行分离鉴定，并对其对2-苯乙醇的敏感性进行分析，从而为控制赣南脐橙致腐菌的研究提供理论依据和实验数据支持。

这对于提高赣南脐橙产地的果实质量，促进果农经济效益和保障消费者健康具有重要意义。

1.2 研究目的研究目的是为了深入了解赣南脐橙致腐菌的特性及其对2-苯乙醇的敏感性，为控制脐橙病害提供科学依据。

通过对赣南脐橙致腐菌的分离和鉴定，可以更准确地了解该致病菌的种属和特性，为后续的防治工作提供可靠的数据支持。

通过对赣南脐橙致腐菌对2-苯乙醇的敏感性分析，可以评估该化合物在控制脐橙病害中的潜力和有效性，为制定防治策略提供科学依据。

本研究旨在揭示赣南脐橙致腐菌的特性和对2-苯乙醇的反应，为提高赣南脐橙产量和品质，保护果园生态环境做出贡献。

一株辣椒内生拮抗细菌的筛选及初步鉴定

一株辣椒内生拮抗细菌的筛选及初步鉴定蔡长平;黄军;曾艳;毕世宇;黄彬彬;郭照辉;刘清术【摘要】从多年连作重茬的辣椒地采集健康植株,表面消毒后从根系中分离到1株内生拮抗细菌PEB-99,该菌株抗菌谱较广,对辣椒青枯雷尔氏菌、辣椒疫霉菌、辣椒炭疽病菌、辣椒镰刀枯萎病菌都有显著抑制效果,无菌发酵液亦具有抑制细菌和真菌的活性,通过16S rDNA测序对该菌株进行了鉴定,初步认为PEB-99菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),该菌能产生铁载体、吲哚-3-乙酸(IAA),还具有溶解有机磷的能力,显示了很好的抗病促生长潜力.【期刊名称】《湖南农业科学》【年(卷),期】2018(000)007【总页数】4页(P1-4)【关键词】辣椒;土传病害;内生拮抗细菌;菌种鉴定;促生长【作者】蔡长平;黄军;曾艳;毕世宇;黄彬彬;郭照辉;刘清术【作者单位】湖南省微生物研究院,湖南长沙 410009;湖南省微生物研究院,湖南长沙 410009;湖南省微生物研究院,湖南长沙 410009;湖南省微生物研究院,湖南长沙410009;湖南省微生物研究院,湖南长沙 410009;湖南省微生物研究院,湖南长沙410009;湖南省微生物研究院,湖南长沙 410009【正文语种】中文【中图分类】S476辣椒是我国种植面积最大的蔬菜作物之一，辣椒产业是湖南省的优势与特色产业之一，年种植面积约13万hm2[1]。

但是，随着大棚蔬菜等设施农业的推广及连作重茬，导致湖南省辣椒土传病害发生逐年严重，其中青枯病和疫病是发生最严重的两种毁灭性土传病害。

青枯病和疫病的病原菌可以在病区土壤中长期存活、难以根治，而且可以危害辣椒的整个生育期，导致严重的经济损失[2]。

采用化学农药对土壤进行熏蒸是目前较为有效的土传病害防治方法[3-4]，但是成本高、操作难，对土壤微生态破坏严重，且污染环境。

应用拮抗微生物菌剂对土传病害进行生物防治被认为是绿色环保的防治措施，近年来成为研究的热点[5-10]。

草莓根腐病拮抗细菌的分离筛选与鉴定

草莓根腐病拮抗细菌的分离筛选与鉴定高菲;卜春亚;靳永胜;师光禄【摘要】为筛选和鉴定草莓根际土壤中对草莓根腐病菌(Colletotrichum gloeosporioides)有拮抗作用的细菌,采用平板对峙培养法,对从北京市昌平区小汤山草莓种植基地土样中分离到的306株菌株进行初筛,复筛后获得了1株拮抗效果好且具有较好稳定性的菌株GF-98,其抑菌带宽度为9.3 mm.此外,菌株GF-98的抑菌谱较广,对草莓根腐尖孢镰刀病菌、草莓灰霉病菌、草莓根腐石楠拟盘多毛孢病菌等9种植物病原真菌均有较好的抑菌效果.在显微镜下观察发现,菌株GF-98的代谢产物对草莓根腐病菌有致畸作用,包括菌丝缩短、粗细不均、分枝增多扭曲、细胞原生质浓缩等现象.16S rDNA基因分析以及生理生化鉴定等方法表明,菌株GF-98为多粘类芽孢杆菌(Peanibacillus ploymyxa).【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2012(039)003【总页数】5页(P4-8)【关键词】拮抗细菌;草莓根腐病菌;分离筛选;16S rDNA;生理生化反应【作者】高菲;卜春亚;靳永胜;师光禄【作者单位】北京农学院生物技术学院/农业部都市农业(北方)重点开放实验室,北京102206;北京农学院生物技术学院/农业部都市农业(北方)重点开放实验室,北京102206;北京农学院生物技术学院/农业部都市农业(北方)重点开放实验室,北京102206;北京农学院生物技术学院/农业部都市农业(北方)重点开放实验室,北京102206【正文语种】中文【中图分类】S432.9;S663.9草莓又称洋莓、红莓，属蔷薇科草莓属，多年生草本植物。

草莓营养价值高，含丰富的维生素C，有帮助消化的功效，在园艺上属浆果类果实，具有易栽培、当年结果、产量高、经济效益好等特点[1-2]。

近年来，由于连作重茬地增多，致使草莓根部病害逐年加重，其中草莓根腐病(Strawberry root rot)是草莓根部重要病害之一，已报道的根腐病病原物已达20多种，在一种病害中存在如此多的病原物比较少见，给该病防治造成较大困难，目前还未有能防治此病的特效药物，给农民造成巨大的经济损失[3-4]。

草莓根腐病菌拮抗细菌的分离与筛选

草莓根腐病菌拮抗细菌的分离与筛选陈瑶;王树雪;魏艳敏;尚巧霞;赵晓燕;刘正坪【摘要】In order to screen antagonistic bacteria for strawberry root rot bio-control, soil dilution separation and confrontation culture method were used in this study. 16 soil samples were collected from the strawberry base in Xingshou town, Changping District, Beijing. 106 strains of bacteria were isolated, and 7 of which have been detected to have inhibition action to pathogenic fungi of strawberry root rot. The strains 1-9 and 8-3 have a wide range of inhibition against 3 kinds of strawberry root rot pathogenic fungi, while strain 2-4 has a narrow range of inhibition against 1 of that. The strains 1-9,12-4 and 16-1 have a wide an-tifugal range on 7 fungi. Some bacteria related substances of the 7 strains of antagonistic bacteria were detected in this study. The results showed that all of the 7 strains could form biofilm and produce indole acetic acid, which indicated that they were well colonized on the plant.%为了筛选对草莓根腐病具有拮抗作用的细菌,本试验采用土壤稀释分离法、对峙培养法等方法.从昌平区兴寿镇草莓基地采集的16份土样中分离得到106株细菌.以草莓根腐病菌为靶标,筛选出7株具有明显拮抗作用的菌株,其中1-9和8-3菌株抑菌范围较广,对3种草莓根腐病菌具有抑制作用；2-4菌株对草莓根腐病菌的抑菌范围最窄,仅对1种草莓根腐病菌有抑制作用.对其他供试植物病原真菌抑菌谱测定得知,1-9,12-4,16-1等菌株抑菌范围较广,对供试的7种以上的植物病原真菌均有抑制作用.拮抗细菌生物膜和代谢产物检测结果表明,7株拮抗细菌都能产生生物膜和吲哚乙酸,推测这些菌株具有较强的定植能力和促生效果.【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2011(026)004【总页数】4页(P14-17)【关键词】拮抗细菌;草莓根腐病;分离筛选;抑菌谱【作者】陈瑶;王树雪;魏艳敏;尚巧霞;赵晓燕;刘正坪【作者单位】农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206;农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206;农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206;农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206;农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206;农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院,北京102206【正文语种】中文【中图分类】S432.1草莓（Fragaria ananassa Duchesne）属蔷薇科，草莓属，具有易于栽培、当年结果、产量高、经济效益好等优点［1］。

一种生物防腐剂拮抗菌株的筛选

一种生物防腐剂拮抗菌株的筛选发布时间：2021-09-06T15:30:36.090Z 来源：《科学与技术》2021年第12期4月作者：王茜[导读] 食物中含有丰盛的营养成分，这些成份易导致微生物大批的生长与王茜辽宁省鞍山市检验检测认证中心，鞍山 114000摘要：食物中含有丰盛的营养成分，这些成份易导致微生物大批的生长与滋生，从而致使食品的营养成分降低或者质量下降，最终致使食品的腐败和变质[1]。

防止腐烂变质，保留食物本身的品质与营养价值可使用食品防腐剂，它是通过抑制食物中微生物滋生与繁殖的方法来延长食品的储存时间[2]。

目前在我国防腐剂市场上，化学防腐剂占有很大比重，但目前不能确保化学防腐剂不会对人体产生一些毒副作用，因此天然、绿色、安全的生物防腐剂将是未来人们食品中主要的趋势，并将逐步取代传统的化学防腐剂[3]。

因此，本试验是通过从土壤中提取分离出对农业病菌有拮抗作用的菌株，进而寻求天然的食品防腐剂，为食品防腐剂在食品工业上的发展奠定一定的基础。

关键词：食品防腐剂；抗菌物质；筛选1试验材料1.1供试病原菌株供试病原菌：香蕉灰纹病菌(Cordana musae）、苹果轮纹病菌（Botryosphaeria dothidea）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f．sp．cucumerinum）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）1.2实验材料（1）供试土壤样品土壤样品从长白山中取得。

（2）供试培养基PDA培养基：蔗糖 20g、琼脂 20g、马铃薯 200g、蒸馏水 1000mL。

高氏一号琼脂培养基：K2HPO4 0.5g、可溶性淀粉 20g、KNO3 1g、FeSO4 0.01g、NaCl 0.5g、MgSO4 0.5g、琼脂 20g、蒸馏水1000mL。

1.3主要仪器表1.1 仪器设备主要仪器与设备型号生产厂商电子天平 T-203 上海仪器有限公司超净工作台 MX-CJ-4 苏州施威克环保科技有限公司恒温振荡器 HZQ-211 上海一恒科学仪器有限公司移液枪 100μL-1000μL 上海佳安分析仪器厂灭菌器 LDZX-75KBS 上海申安医疗器械厂生化培养箱 MJ-250-II 上海一恒科学仪器有限公司2试验方法2.1土壤样品及水样品的预处理配制土样悬浮液：先将采集到的土样进行过筛、研细等预处理。