淀粉酶检测试剂盒(碘-淀粉比色法)
淀粉酶含量测定
淀粉酶(AMS)测定试剂盒说明书(碘-淀粉比色法)一、 原理：淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，家人碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出AMS 的活力。
二、 试剂组成与配制：（100T ）1、0.4mg/ml 底物缓冲液：60ml ×1瓶，4℃冰箱保存6个月。
2、0.1mol/L 碘贮备液：7ml ×1瓶，4℃避光保存6个月。
0.01mol/L 碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。
三、 操作表： 测定管（u 管） 空白管（0管）底物缓冲液（ml ）37℃预温5分钟0.5 0.5 待测样本（ml ） 0.1混匀，37℃水浴，准确反应7.5分钟 碘应用液（ml ） 0.5 0.5蒸馏水（ml ）3.0 3.1 混匀，660nm 波长，1cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。
*注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度，将 （空白OD-测定OD 控制在0.05～0.150之间） 四、 计算：1、 单位定义：100ml 血清（浆）中的AMS ，在37℃与底物作用30分钟，水解10mg 淀粉为1个单位。
2、公式：样本测试前稀释倍数空白管吸光度测定管吸光度空白管吸光度样本测试前稀释倍数分钟分钟空白管吸光度测定管吸光度空白管吸光度⨯⨯-=⨯⨯⨯⨯⨯-=801.01005.730105.04.0dl AMSu（此公式适用于测定血清中淀粉酶）血清淀粉酶的含量测定一、实验准备：1、实验器材：移液枪（100~1000ul、10~100ul、1000~5000ul、2~20ul）、5mlEP管、0.5mlEP管、比色皿、100ml烧杯、漩涡仪、水浴箱，分光光度计、计时器。
2、实验药品：NaCl、蒸馏水、0.4mg/ml底物缓冲液、0.1mol/L碘贮备液。
二、实验步骤：1、0.01mol/L碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。
淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一类能够催化淀粉水解的酶，在生物体内和工业生产中都具有重要的作用。
准确测定淀粉酶的活力对于研究酶的性质、生物体的代谢过程以及相关工业应用都具有重要意义。
下面将介绍几种常见的淀粉酶活力测定方法。
一、碘淀粉比色法碘淀粉比色法是一种较为经典且常用的测定方法。
其原理是淀粉经淀粉酶水解后，剩余的淀粉与碘液反应生成蓝色复合物，颜色的深浅与剩余淀粉的量成正比。
通过比色法测定反应后溶液的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
具体操作步骤如下：首先，准备一系列含有不同浓度淀粉溶液的试管，并向其中加入适量的淀粉酶溶液，在一定的温度和 pH 条件下反应一段时间。
然后，迅速向各试管中加入碘液，使反应终止。
最后，使用分光光度计在特定波长下测定各试管溶液的吸光度。
根据事先绘制的标准曲线，将吸光度值转换为剩余淀粉的浓度，从而计算出淀粉酶水解淀粉的量，进而得出淀粉酶的活力。
这种方法的优点是操作相对简单、成本较低，但缺点是灵敏度相对较低，对于低活力的淀粉酶测定可能不够准确。
二、DNS 法（3,5-二硝基水杨酸法）DNS 法是另一种常用的测定淀粉酶活力的方法。
其原理是淀粉在淀粉酶的作用下水解为还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸在碱性条件下共热，被还原成棕红色的氨基化合物。
在一定范围内，还原糖的生成量与淀粉酶的活力成正比，通过比色测定棕红色物质的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
操作过程如下：将淀粉溶液与淀粉酶溶液在适宜条件下反应一定时间后，取出适量反应液，加入DNS 试剂，在沸水浴中加热一段时间，使反应充分进行。
冷却后，使用分光光度计测定溶液在特定波长下的吸光度。
与碘淀粉比色法相比，DNS 法的灵敏度较高，能够更准确地测定低活力的淀粉酶，但操作过程相对复杂一些。
三、斐林试剂法斐林试剂法也是基于淀粉水解产生还原糖的原理。
斐林试剂由硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液组成，还原糖能将斐林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
碘比色法测定淀粉含量
碘比色法测定淀粉含量
碘比色法是一种常用的测定淀粉含量的方法。
淀粉与碘形成复合物时，会呈现深蓝色的颜色，根据颜色的深浅可以推测淀粉的含量。
测定步骤如下：
1. 准备样品：将待测的样品（如食物、植物组织等）制成适当的浓度，使其能够被较为准确地测定。
2. 提取淀粉：采用热酸提取法或酶解法将样品中的淀粉提取出来。
其中热酸提取法是将样品加入盐酸或硫酸中，加热至淀粉糊状后进行提取。
酶解法则是使用淀粉酶将样品中的淀粉分解为葡萄糖后进行提取。
3. 碘溶液制备：制备适量的碘溶液，一般是用碘酸钾和碘化钾制备。
4. 反应：将提取的淀粉溶液与碘溶液混合，等反应一段时间后，观察溶液的颜色变化。
颜色越深，说明淀粉含量越高。
5. 分光光度计测定：使用分光光度计，将混合溶液置于光管中，通过比较混合溶液的吸光度与已知浓度淀粉溶液的吸光度，可以得出待测样品中淀粉的含量。
需要注意的是，测定淀粉含量时需保证操作准确，并根据测定
的样品选择适当的提取方法。
此外，测定时要排除其他物质对测定结果的干扰，如物质的颜色、光散射等。
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)简介：淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。
淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。
Leagene 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合物，其蓝色深浅与未经酶促反应的空白管比较，可计算出淀粉酶的活力单位。
该试剂盒通过分光光度计检测吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。
如果采用酶标仪检测，则检测的样本数较多，100T 的比色法检测试剂盒可以检测。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 比色杯或96孔板2、 生理盐水3、 蒸馏水4、 分光光度计或酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、 KI 工作液：取出KI Solution 恢复至室温，KI Solution ：蒸馏水混匀，即为KI 工作液。
4℃避光可保存一个月。
2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于AMS 的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消编号 名称TE0203 100T TE0203 200T Storage试剂(A): AMS Assay buffer 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): KI Solution 5ml10ml 4℃ 避光使用说明书1份除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS，可以使用生理盐水或PBS等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer稀释。
碘-淀粉比色法测定血清淀粉酶 医学课件
空白管
缓冲淀粉溶液 1.0 （37℃预温5min）
测定管1（重复两次） 测定管2
1.0
血清或稀释唾液 -
0.02
立即混匀，置37℃水浴保温7.5min（准确）
碘应用液
1.0
1.0
去离子水
6.0
6.0
充分混匀，以波长660nm，去离子水调吸光度零点，读取各管吸光度值。 测定管2：在试管里留取一份唾液（口水），首先稀释100-500倍。
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试剂与器材
1、0.4g/L缓冲淀粉溶液 成分及作用：可溶性淀粉 （底物）；磷酸氢二钠和磷酸二氢钾（缓冲液），氯 化钠（淀粉酶的激活剂）；甲醛（防腐剂）。 2、0.1mol/L碘储存液 碘酸钾和碘化钾（提供显色反 应的碘）；浓盐酸（稳定剂） 3、0.01mol/L碘应用液
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操作步骤
加入物(ml)
这类底物的结构和分子量确定，溶解度好可以配制 较高浓度，使酶反应初速度达到最大速度，满足零级反应 的要求。这类方法均适合自动化分析，分析速度快，精密 度高，酶的活性可以国际单位表达，目前几乎已完全取代 了天然淀粉为底物的方法。
IFCC推荐方法是对硝基麦芽庚糖苷法（4NP-G7法）
了解
对-硝基苯麦芽庚糖苷法 对-硝基苯麦芽庚糖苷(4-nitrophenyl-α-maltoheptaoside，4NP-G7)为底物，经α-淀粉酶催化，水 解为游离的寡糖(G5，G4，G3)及葡萄糖残基减少的 对-硝基苯寡糖苷(4NP-G2，4NP-G3，4NP-G4)。 4NP-G2、4NP-G3及部分4NP-G4，在α-葡萄糖苷酶
流行性腮腺炎AMY也会大量升高。
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注意事项
1、AMY活性在400U以下时，与底物的水解成良好的线性。如 果结果超过400U，或测定管吸光度小于空白管吸光度一半 时，应加大标本稀释倍数或减少稀释血清加入量，结果乘
淀粉酶的测定方法
淀粉酶的测定方法
淀粉酶的测定方法主要有以下几种：
1. 碘遇法：将待测样品与含有淀粉的试液反应，然后加入碘溶液，观察颜色变化。
淀粉酶能催化淀粉水解产生葡萄糖，当样品中有淀粉酶存在时，反应液中淀粉的含量减少，碘反应呈现淡黄色。
通过比较反应前后颜色的变化程度，可以间接测定淀粉酶的活性。
2. 滴定法：采用淀粉为底物，测定反应液中葡萄糖的含量。
首先将待测样品加入含有淀粉的试液中，然后根据反应的程度，利用滴定法以还原糖作为指示剂测定反应液中葡萄糖的含量，从而计算淀粉酶的活性。
3. 导电度法：利用淀粉酶对淀粉的水解反应产生的葡萄糖使反应液的导电度发生变化来测定淀粉酶的活性。
测定时先将反应液的导电度测定为A，然后加入淀粉酶，反应一段时间后导电度测定为B，根据B-A的差值可以计算淀粉酶的活性。
4. 比色法：利用淀粉酶对淀粉的水解反应产生的葡萄糖与某种试剂发生比色反应，通过测定反应液的吸光度来间接测定淀粉酶的活性。
常用的比色试剂包括间苯三酚、邻苯二酚等。
需要注意的是，不同测定方法的适用范围和操作步骤可能会有所不同，具体选择
哪种方法取决于实验目的和样品特点。
检测淀粉酶活性的方法
检测淀粉酶活性的方法
淀粉酶活性可以使用多种方法来检测，常用的有以下几种：
1.比色法：使用酶活性与颜色变化有关的试剂，如
比色剂，来检测淀粉酶活性。
2.电位检测法：使用电位计来直接测量酶酶解淀粉
过程中产生的电流。
3.磷酸酶试剂盒法：使用含有磷酸的试剂盒，在酶
解淀粉过程中产生的磷酸可以通过酶解磷酸酶来酶消耗，由此反映淀粉酶活性。
4.放射性检测法: 淀粉酶将淀粉分解成葡萄糖，葡
萄糖可以通过磷酸甘油酶合成磷酸甘油，这种合成过程中产生的14C碳可以通过放射性计数来检测淀粉酶活性。
这些方法都有其特点和适用范围，需要根据实验需求来选择最合适的方法。
1.比色法是最常见的检测淀粉酶活性的方法之一，
它通过酶解淀粉产生的葡萄糖或其他物质的颜色变化来检测淀粉酶活性。
常用的比色剂有银离子试剂、染料试剂等。
2.电位检测法是一种直接测量淀粉酶活性的方法，
它通过测量酶解淀粉产生的电流来检测淀粉酶活性。
3.磷酸酶试剂盒法是通过检测淀粉酶酶解淀粉产生
磷酸，再由磷酸酶进行消耗来反映淀粉酶活性。
4.放射性检测法是一种特殊的检测方法，它使用含
有放射性碳的淀粉或磷酸甘油试剂，通过检测放射性碳的计数变化来检测淀粉酶活性。
这些方法都有其优缺点，选择其中一种方法需要根据实验需求和条件来确定，如实验灵敏度、试剂成本、操作难度等因素。
碘-淀粉比色法测定淀粉酶
(七)注意事项
• 底物溶液中不应有游离酚，如有酚则 空白管显红色，说明磷酸苯二钠开始 分解，应弃去不用。
• 铁氰化钾溶液应避光保存，出现蓝绿 色应废弃。 • 加入铁氰化钾溶液后必须立即混匀， 否则显色不完全。
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碘液
(二)试剂
• 淀粉溶液（0.4g/L） • 碘应用液
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(三)操作
加入物
缓冲淀粉溶液(37℃预温) 空白管 0.5 — 0.5 3.1 测定管 0.5 0.1 0.5 3.0
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稀释血清
混匀，置37℃水浴准确15min
碘应用液
蒸馏水
混匀，蒸馏水调零，波长660nm，比色。
(四)单位定义
100ml血清中的淀粉酶，在37℃, 15min水解淀粉5mg为1个单位。
• 检测量
900个检验结果/小时
• 检测项目及种类（共33项）
电解质、急诊项目、普通生化、特殊生化、免 疫、蛋白、药物检测、毒品检测
• 检测样品种类
血清、血浆、尿液、脑脊液
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(四)单位定义
100ml血清在37℃与底物作用15min, 产生1mg酚为1个金氏单位。
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(五)参考值
• 成人 3-13金氏单位
(七)临床意义
• 升高
——急性胰腺炎、流行性腮腺炎； ——急性胆囊炎、肠梗阻、胰腺癌、胆石 症、溃疡病穿孔及吗啡注射后。
• 降低
——肝炎、肝硬化、肝癌； ——肾功能障碍。
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急性胰腺炎时血、尿淀粉酶升高的不同表现
开始升高时间 高峰时间 恢复时间 血清 尿液 8-12h 12-24h 12-24h 5-7d 2-5d 1-2w
• 儿童
5-28金氏单位
直链 支链 总淀粉含量（酶法）试剂盒说明书
直链/支链/总淀粉含量（酶法）试剂盒说明书（货号：G0548F分光法48样）一、产品简介：常用直链淀粉测定方法有电位测定法、旋光分析法或碘与直链淀粉结合力的比色法，然而这些方法存在不确定性。
因为支链淀粉-碘复合物在此过程中同样会形成，导致直链淀粉含量的高估，因此需要修正。
本试剂盒利用伴刀豆球蛋白A只与支链淀粉结合而不与直链淀粉结合的特性，使其分离，再用仅水解淀粉的酶复合物使淀粉水解为葡萄糖，通过检测葡萄糖含量得到直链、支链和总淀粉的含量。
二、试剂盒的组成和配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一粉体g×1瓶4℃保存用前加100mL蒸馏水溶解，并用50%的乙酸（1mL 蒸馏水+1mL冰乙酸）逐滴加入约40μL，务必核定PH为6.4,（不能低于6.4，否则重新配置）试剂一稀释液：30mL试剂一+70mL蒸馏水混匀试剂二粉剂mg×1瓶-20℃保存用前甩几下使试剂落入底部，再加5.5mL的试剂一稀释液溶解备用。
试剂三液体50mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂mg×1瓶-20℃保存用前甩几下使试剂落入底部，再加5.5mL的试剂三溶解备用。
试剂五粉剂mg×瓶-20℃保存用前甩几下使试剂落入底部，再加8.2mL的蒸馏水溶解备用。
试剂六液体56mL×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存用前甩几下使试剂落入底部，再加2mL的试剂三溶解，即为1mg/mL葡萄糖。
三、所需的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰、二甲基亚砜（DMSO）、乙醇、乙酸和蒸馏水。
四、淀粉含量测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①取1-5g样本烘干（50℃）至恒重，磨碎并过筛（如0.5mm筛）得到待检均匀粉末样本；取10mg粉末样本至2mL的EP管中，加入0.5mL的DMSO并涡旋振荡使样本分散悬浮于液体中（勿沉积于管底或块状悬浮）。
测定淀粉酶活性的两种方法的比较研究
测定淀粉酶活性的两种方法的比较研究一、简述淀粉酶是一种能够催化淀粉分解为糖类物质的生物催化剂，其在食品工业、生物塑料生产以及医药等领域具有广泛的应用价值。
为了更好地了解和评估淀粉酶的活性，本研究将比较分析两种常用的测定淀粉酶活性的方法：碘量法和比浊法。
该方法系通过加入碘与淀粉样液来测量淀粉的水解程度，但是它无法避免一些还原性物质的干扰。
比浊法是基于酶反应产生胶体体系的形成，据此原理可测定淀粉酶活力。
本实验旨在比较这两种方法在测定淀粉酶活性时的优缺点，并分析其可能的原因，以期找到一种更为理想和高效的测定手段。
1. 淀粉酶的简介及重要性淀粉酶是一种能够催化淀粉分解为糖类物质的生物催化剂，它在食品工业、发酵工业以及生物塑料工业等领域具有广泛的应用。
淀粉酶的活性是衡量其性能的重要指标，催化效率越好。
研究淀粉酶活性的方法对于这些行业的发展具有重要意义。
淀粉酶在食品工业中扮演着关键角色。
在制作面条、饼干等食品时，需要确保食品中的淀粉得到充分分解，从而提高食品的口感和品质。
淀粉酶能够有效分解淀粉，使其转化为糖类物质，为食品提供甜味和黏性，因此它是食品工业中不可或缺的酶制剂。
淀粉酶在发酵工业中也有重要应用。
发酵工程中常用的糖化酶就是一种淀粉酶，它能够将淀粉转化为葡萄糖，为微生物提供能量和生长所需的碳源。
通过使用不同类型的淀粉酶，可以对不同种类的微生物进行定向发酵，生产出各种有用的产品，如抗生素、酶制剂等。
淀粉酶在生物塑料工业中也有潜在的应用前景。
生物可降解塑料是一种环保型的生物塑料，其降解过程需要淀粉酶的参与。
通过利用淀粉酶降解塑料中的淀粉成分，可以降低塑料对环境的污染，为实现可持续发展提供新的途径。
淀粉酶在各个领域都具有重要的应用价值。
研究淀粉酶活性的方法，对于推动相关领域的技术进步和产业发展具有重要意义。
2. 淀粉酶活性测定的方法和目的在淀粉酶活性的研究中，有多种方法可用于测定酶活力。
本部分将详细介绍两种常见的淀粉酶活性测定方法：碘量法和比色法，并阐述它们的目的。
淀粉含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
淀粉含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0700规格：50T/48S产品内容：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水使其溶解，制备10mg/mL葡萄糖标准液。
产品说明：淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。
利用80％乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）、蒸馏水。
操作步骤：一、淀粉提取：1、称取约0.1g样品于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，常温离心5min，弃上清，留沉淀。
2、沉淀中加入0.5mL双蒸水，放入沸水浴中糊化15min（盖紧，以防止水分散失）。
3、冷却后，加入0.35mL试剂二，常温提取15min，振荡3-5次。
4、加入0.85mL双蒸水，混匀，3000g，常温离心10min，取上清液。
5、取上清液100μL加入700μL蒸馏水后即进行了八倍稀释测定。
注：若稀释八倍后样品吸光度大于1.5或小于0.1，建议将样品再进行适当稀释或浓缩后测量。
标准溶液准备：将10mg/mL葡萄糖标准液进行二倍稀释得到0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156mg/mL标准溶液备用。
二、测定操作表：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95℃。
3、工作液的配制：临用前在试剂三中加入13.5mL蒸馏水后，缓慢加入76.5mL浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。
实验九碘-淀粉比色法测定血清淀粉酶-副本
注意事项
缓冲淀粉溶液若出现混浊或絮状物，表示 缓冲淀粉溶液受污染或变质，不能再用， 应重新配制。
本法适用于其他体液淀粉酶的测定。尿液 先作20倍稀释后测定。
评价
本法线形范围<400U，批内CV 3.1%~9.0%， 批间CV 12.4%~15.1%，与对-硝基苯麦芽庚糖 苷法相比较，在酶活性低时相关性好，但酶活 性较高时相关性差，因此，该法不能认为是淀 粉酶测定的理想方法。但由于该法简单、易行， 不需特殊设备、试剂低廉，仍然是我国目前应 用较为广泛的方法。
碘-淀粉比色法测定血清淀粉酶
原理
血清（或血浆）中α-淀粉酶催化淀粉分子 中α-1，4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽 糖及含有α-1，6糖苷键支链的糊精。在底 物过量的条件下，反应后加入碘液与未被 水解的淀粉结合成蓝色复合物，其蓝色的 深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而 推算出淀粉酶的活力单位。
试剂 操作步骤 计算 参考值
注意事项
酶活性在400U以下时，与底物的水解量成 线性。如测定管吸光度小于空白管吸光度 一半时，应加大血清稀释倍数或减少稀释 血清加入量，测定结果再乘以稀释倍数。
草 AM酸Y盐活、性拘有橼抑酸制盐作、用E，D肝TA素-N无a抑2及制氟作化用钠。对 唾液含高浓度淀粉酶应防止带入。 淀粉产品不同，其空白吸光度可有明显差
计算
1、单位定义： 100ml血清（浆）中的 AMS，在37℃与底物作用15分钟，水解 5mg淀粉为1个单位。
2、公式：
样本最佳取样浓度摸索
根据不同动物血清及组织之间的差异，最好 是在批量实验之前做个预试以确定最佳取样 浓度。 例1：取大鼠血清用生理盐水稀释成不同浓 度（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、 128倍、256倍），取样0.1m底物缓冲液：4℃冰箱保存6 个月。
血清淀粉酶检测(碘淀粉比色法)
卫生行业职业技能鉴定操作技能考核（卫生检验员三级）
血清淀粉酶检测（碘淀粉比色法）
考点：_______________ 姓名：_________ 准考证号：____________________
（一）准备要求
1.考核机构准备：实验室
2.考生准备：白大衣，笔
（二）考核要求
1.本题分值：100分
2.考核时间：30—45分钟
3.具体考核要求：
（1）掌握分光光度计的使用
（2）知道血清淀粉酶检测（碘淀粉比色法）的步骤
（3）计算结果准确
4.出现下列情况之一者，本试题按零分计：
（1）不会使用分光光度计按零分处理
（2）操作程序错误，实验无法继续进行按零分处理
（三）配分与评分标准
实际操作时间：考评员签字：操作日期：。
碘淀粉比色法测定唾液淀粉酶实验报告误差分析
碘淀粉比色法测定唾液淀粉酶实验报告误差分析引言：唾液淀粉酶是一种消化酶，它在人体的消化过程中发挥着重要的作用。
本实验以测定唾液淀粉酶活性为目标，采用碘淀粉比色法来测定淀粉酶对淀粉的降解能力。
实验中，我们以淀粉溶液作为底物，唾液作为酶，通过比色法来测定唾液淀粉酶的活性。
实验步骤：1.准备0.1%的淀粉溶液。
2.取适量的淀粉溶液分别放在4个试管中。
3.将每个试管中的淀粉溶液加热，使其变稀。
4.将加热后的淀粉溶液分别加入4个试管中。
5.取适量的唾液加入每个试管中，使试管内的淀粉溶液和唾液混合。
6.在每个试管中滴加一滴稀盐酸，停止淀粉的降解反应。
7.用滴管向淀粉溶液滴加少量的碘液，形成蓝色沉淀。
8.稀释各自制的超标和亚标溶液，并进行分别测定吸光度及活性。
误差分析:1.温度误差：实验中，加热淀粉溶液的温度可能会对唾液淀粉酶活性产生影响。
不同温度下，淀粉酶的活性可能不同，导致实验结果的误差。
为减小该误差，可以使用恒温水浴进行加热，保持相同的温度条件。
3.时间误差：实验中，淀粉酶对淀粉的降解速度可能受到时间的影响。
在不同的反应时间内，淀粉的降解程度可能不同，导致实验结果的误差。
为减小时间误差，可以设置相同的反应时间，并进行多次实验取平均结果。
4.容器误差：实验中，试管的直径和透明度可能会对光的透射率产生影响。
试管直径不同会导致吸光度的差异，透明度不同可能会影响碘液的进入情况。
为减小容器误差，可以使用相同类型和品牌的试管进行实验。
措施与建议：1.严格控制温度：使用恒温水浴控制实验过程中的温度，确保每个试管中的淀粉溶液温度相同。
2.多次实验取平均：进行多次实验，取各次实验的平均结果，以减小个体偶然误差的影响。
3.量取唾液：在加入唾液的过程中，尽量使用分量器等精确量取唾液，以尽量减小不同试管中唾液质量的差异。
4.控制反应时间：在实验过程中，控制相同的反应时间，确保淀粉酶对淀粉的降解在相同时间内完成。
5.使用相同类型的试管：使用相同类型和品牌的试管，以减小容器误差对实验结果的影响。
α-淀粉酶(α-AL活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)说明书__可见分光光度法UPLC-MS-6003
α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书可见分光光度法UPLC-MS-600350T/24S试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1支2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入12.5mL试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存8周；2、标准品：10mg淀粉标准品。
临用前加10mL试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成1mg/mL淀粉标准液，2-8℃保存四周。
淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。
α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。
因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。
Unhydrolyzed Starch+Iodine Blue Complex（570nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.1g样本，加1mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，室温离心10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。
2、液体：直接检测。
（若有浑浊则离心后进行测定）二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。
淀粉总量检测试剂盒
Megazyme淀粉总量检测试剂盒产品编号：K-TSTA（100次）(淀粉葡糖苷酶/α-淀粉酶方法)AOAC法996.11 /AACC法76.13改进版1.简介淀粉测定方法分为酸水解法和酶分析法。
酸水解只能应用于纯淀粉样品。
酶分析方法在前处理步骤，淀粉凝胶化、液化和糊化，糊精水解成葡萄糖、葡萄糖测定步骤等方面存在不同。
AACC 76-11法采用淀粉在高压蒸汽灭菌锅中及含水的条件下凝胶化，并用淀粉葡糖苷酶将淀粉转化为葡萄糖，再测定葡萄糖含量。
采用AACC 76-11法会导致许多样品和材料中（包括高直链淀粉玉米淀粉和谷物制品）淀粉含量检测结果偏低。
目前，许多方法采用在淀粉凝胶化结束后立即加入耐热α-淀粉酶处理。
对于难以凝胶化的样品如高直链淀粉玉米淀粉，用氢氧化钠或DMSO处理。
在膳食纤维的测定方法中为确保淀粉完全溶解，Englyst和Cumming（1988）加入了淀粉脱支化酶，普鲁兰酶。
为了满足极端样品中总淀粉含量定量测定的需要，Megazyme公司研发出一种使用耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶的淀粉总量检测试剂盒。
该方法已被AOAC和AACC采用。
近来，我们将检测方法进行了改进，使耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶可以在相同的pH(pH 5.0)下进行孵育，这样简化了测定步骤，并将麦芽酮糖生成的可能性降到最低。
Megazyme淀粉总量试剂盒可测定大部分食品、饲料、植物和谷物制品（天然或加工过的）。
对于大部分样品（如小麦粉），样品中的淀粉在孵育中（大约100℃，并加入耐热α-淀粉酶）会完全溶解。
含有大量抗性淀粉的样品（如高直链玉米淀粉），需用2M KOH或热DMSO进行预溶解。
含有可溶性淀粉或麦芽糊精的样品，不需要用耐热α-淀粉酶处理。
2.产品性能●特异性：可用于测定α-葡聚糖（包括淀粉、糖原、植物糖原和非抗性麦芽糊精）。
●灵敏度：最小吸光度差异为0.10吸光度单位。
这相当于当样品体积为1.00 mL时，D-葡萄糖的浓度为1.0mg/L或淀粉浓度为0.9 mg/L。
淀粉酶(AMY)测定试剂盒(EPS底物法)产品技术要求lideman
淀粉酶(AMY)测定试剂盒(EPS底物法)适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中淀粉酶的含量。
1.1规格试剂1(R1)：2×80mL，试剂2(R2)：2×16mL；试剂1(R1)：2×400mL，试剂2(R2)：2×80mL；试剂1(R1)：2×60mL，试剂2(R2)：2×12mL；试剂1(R1)：2×40mL，试剂2(R2)：2×8mL；试剂1(R1)：2×50mL，试剂2(R2)：2×10mL；试剂1(R1)：1×20mL，试剂2(R2)：1×6mL。
1.2产品组成表1 试剂组成双试剂：2.1 外观R1为无色澄清液体，R2为无色澄清液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白2.3.1空白吸光度在37℃、（405 nm±10%范围内的）波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应≤0.35 ABS。
2.3.2空白吸光度变化率在37℃、（405 nm±10%范围内的）波长、1cm光径条件下，用去离子水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤0.002 ABS/min。
2.4 分析灵敏度浓度为100U/L时，吸光度变化率≥0.006。
2.5 线性范围在[5–1000]U/L线性范围内，线性相关系数r2≥0.996。
在(50–1000]U/L,范围内的相对偏差≤10%；测定结果[5–50]U/L时，绝对偏差≤5U/L。
2.6 精密度试剂盒测试项目精密度CV≤ 5 %。
2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对偏差应≤10 %。
2.8 准确度相对偏差：用参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应不超过±10%。
2.9稳定性原包装试剂在（2-8）℃条件下保存有效期为18个月，取失效期的试剂盒检测其试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度、准确度应分别符合2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。
碘-淀粉比色法测定淀粉酶活力(“酶制剂”相关文档)共5张
情境七：蛋白质和酶
任务九：碘-淀粉比色法测定淀粉酶活力
课程：化学及生物物料的识用
知识点:碘-淀粉比色法测定淀粉酶活力 课程：化学及生物物料的识用 任由知课由由知由课任任任课知课任课任课 课由务于识程于于识于程务务务程识程务程务程程于九 酶 点 ： 酶 酶 点 酶 ： 九 九 九 ： 点 ： 九 ： 九 ：： 酶：制:化制制:制化：：：化:化：化：化 化制碘碘碘碘剂学剂剂剂学碘碘碘学学碘学碘学 学剂---淀 淀 淀-的及的的的及---及及-及-及 及的淀淀淀淀淀淀粉粉粉活生活活活生生生生生 生活粉粉粉粉粉粉比比比力物力力力物物物物物 物力比比比比比比色色色变物变变变物物物物物 物变色色色色色色法法法化料化化化料料料料料 料化法法法法法法测测测较的较较较的的的的的的较测测测测测测定定定大识大大大识识识识识 识大定定定定定定淀淀淀，用，，，用用用用用 用，淀淀淀淀淀淀粉粉粉如如如如如粉粉粉粉粉粉酶酶酶完完完完完酶酶酶酶酶酶活活活全全全全全活活活活活活力力力按按按按按力力力力力力上上上上上述述述述述操操操操操作作作作作，，，，，所所所所所加加加加加酶酶酶酶酶制制制制制剂剂剂剂剂溶溶溶溶溶夜夜夜夜夜体体体体体积积积积积可可可可可能能能能能不不不不不一一一一一定定定定定在在在在在测测测测测试试试试试范范范范范围围围围围中中中中中， ， ， ， ，因因因因因此此此此此可可可可可以以以以以先先先先先加加加加加大大大大大酶酶酶酶酶制制制制制剂剂剂剂剂溶溶溶溶溶液液液液液体体体体体积积积积积的的的的的间间间间间隔隔隔隔隔，，，，，找找找找找到到到到到一一一一一个个个个个大大大大大致致致致致用用用用用量量量量量，，，，，再再再再再在在在在在其其其其其左左左左左右右右右右用用用用用00000..... 任务九：碘-淀粉比色法测定淀粉酶活力 课程：化学及生物物料的识用
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淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)
简介：
淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。
淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。
Leagene 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合。
该试剂盒通过分光光度计检测660nm 处吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 KI 工作液： 4℃避光可保存一个月。
2、 准备样品：
① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离
心取上清，-80℃冻存，用于AMS 的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，
可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS ，可以使用生理盐水或PBS 等进行
稀释，也可以采用ALP Assay buffer 稀释。
④ 样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算
单位蛋白重量组织或细胞内的AMS 含量。
3、 AMS 检测：按照下表设置空白管、测定管、待测样本，溶液应按照顺序依次加入，并
注意避免产生气泡。
如果样品中的淀粉酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置平行孔。
如果使用分光光度计，反应体系设置如下：
编号 名称
TE0203 100T TE0203 200T Storage
试剂(A): AMS Assay buffer 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): KI Solution 5ml
10ml 4℃ 避光
使用说明书
1份
测定管空白管AMS Assay buffer 0.5ml 0.5ml
孵育5min。
待测样本0.1ml —
混匀，置于水浴，准确孵育7.5min。
KI工作液0.5ml 0.5ml
蒸馏水 3.0ml 3.1ml
如果使用酶标仪，反应体系设置如下：
测定管空白管AMS Assay buffer 37.5μl 37.5μl
孵育5min。
待测样本3μl —
混匀，置于水浴，准确孵育7.5min。
KI工作液37.5μl 37.5μl
蒸馏水225μl 228μl
4、轻轻混匀，分光光度计或酶标仪检测660nm处吸光度，分光光度计比色杯光径1.0cm，
蒸馏水调零，读取各管吸光度值(即A测定和A空白)。
一般应数小时内检测完毕。
计算结果：
液体样本AMS活力(U/dl)=(A空白-A测定)/A空白×80×稀释倍数
组织AMS活力(U/mg)=(A空白-A测定)/A空白×80/{取样量(0.1ml)×待测样本蛋白浓度mg/ml}
参考区间(37℃，健康人)：
血清淀粉酶活性：80～180U/dl
尿液淀粉酶活性：100～1200U/dl
注意事项：
1、本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增多。
2、待测样品中不能含有AMS抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、本试剂盒亦适用于其他样品的AMS测定，尿液检测应先作20倍稀释后测定。
4、AMS Assay buffer如果出现浑浊或絮状物，应弃用。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。