美国TLC发展模式研究
第一章 色谱发展史
《色谱分离技术》教案教学重点：色谱分类及基本术语。
注意事项：第一章绪论第一节色谱发展史1.1.1色谱方法的问世俄国植物学家茨维特(Tswett)于1903年前后在波兰的华沙大学研究植物叶片的组成时，用白垩土(碳酸钙)作吸附剂，分离植物绿叶的石油醚萃取物得到黄色、绿色和灰黄色彼此分离的六个色带。
其方法是：把干燥的碳酸钙粉末装到一根细长的玻璃管中，然后把植物绿叶的石油醚萃取液倒到管中的碳酸钙上，萃取液中的色素就吸附在管内上部的碳酸钙上，再用纯净的石油醚洗脱被吸附的色素，于是在管内的碳酸钙上形成三种颜色的六个色带。
茨维特把这样形成的色带叫做“色谱”(Chromatographie)，茨维特用此名于l906年在德国植物学杂志上发表。
英译名为(Chromatography)，在这一方法中把玻璃管叫做“色谱柱”，碳酸钙叫做“固定相”，纯净的石油醚叫做“流动相”。
现在把茨维特开创的方法叫液—固色谱法(Liquid-Solid Chromatography)。
1.1.2色谱的发展简史在茨维特提出色谱概念后的二十多年无人关注这—“伟大的发明”。
直到l931年德国的Kuhn和Lederer才重复了茨维特的某些实验，用氧化铝和碳酸钙分离了α、β、γ－胡萝卜素，此后用这种方法分离了六十多种这类色素。
Martin和Synge在1940年提出液－液分配色谱法(Liquid-Solid Partion Chromatography)，即固定相是吸附在硅胶上的水，流动相为某种液体。
1941年他们发表了用气体作流动相的可能性，十一年之后James和Matin发表了从理论到实践比较完整的气－液色谱方法(Gas-Liquid Chromatography)，因此而获得了1952年诺贝尔化学奖。
在此基础上l957年Golay叫开创了开管柱气相色谱法(Open—Tubular Column Chromatography)，习惯上称为毛细管柱气相色谱法(Capillary Column Chromatography)。
LC-MS_
∗基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:82073676);北京市属医学科研院所公益发展改革试点项目(编号:京医研2021-10)作者单位:100069北京市首都医科大学附属北京佑安医院/北京肝病研究所/北京市肝炎与肝癌精准医疗及转化工程技术研究中心第一作者:蔡玉莹,女,26岁,理学硕士,技师㊂主要从事代谢小分子质谱研究㊂E-mail:caiyuying0113@通讯作者:陈德喜,E-mail:dexichen@ ㊃实验性肝炎㊃LC-MS/MS定量分析小鼠肝组织15种胆汁酸成分研究∗蔡玉莹,殷继明,宁琪琪,高玉雪,杨鹏翔,陈德喜㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀建立快速高效的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定小鼠肝组织15种胆汁酸(BAs)浓度㊂方法㊀采用活性炭制备无BAs的空白肝组织,作为制备标准样品和质量控制样品的生物基质㊂匀浆小鼠肝组织,加入碱性乙腈溶液(5%NH4OH))沉淀蛋白㊂以2H4-DCA,GUDCA-d5和LCA-d4为内标物,用Agilent Poroshell120EC C18色谱柱(100mmˑ4.6mm,2.7μm)分离,以醋酸铵水溶液和甲醇-乙腈溶液为流动相梯度洗脱,柱温30ħ,流速0.3mL/min,进样量为2μL,采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式,多反应监测(MRM)㊂结果㊀15种BAs线性关系良好,R2均大于0.993,定量检测限均小于2ng/mL,基质效应为90.76%~109.25%;日内㊁日间准确度和精密度均小于15%,4ħ24h㊁反复冻融㊁冷冻保存1个月稳定性良好,满足生物样品的分析要求;小鼠肝组织检测结果显示游离型BAs和结合型BAs(G-BAs㊁T-BAs)都以母体CA为主,TCA含量最高;游离BAs浓度为(723.89ʃ50.65)ng/mL,显著高于G-BAsʌ(56.90ʃ11.28)ng/mL,P<0.001ɔ,T-BAs浓度为(40322.90ʃ14034.80)ng/mL,显著高于游离BAs(P<0.001)或G-BAs(P<0.001)㊂结论㊀建立的LC-MS/MS方法灵敏度高,准确可靠,适用于检测小鼠肝组织BAs浓度㊂㊀㊀ʌ关键词ɔ㊀肝组织;胆汁酸;液相色谱-串联质谱;小鼠㊀㊀DOI:10.3969/j.issn.1672-5069.2023.03.005㊀㊀Quantitative profiling of15bile acids in mouse liver tissues by using liquid chromatography-tandem mass spectrometry㊀Cai Yuying,Yin Jiming,Ning Qiqi,et al.Beijing Institute of Hepatology,Beijing Precision Medicine and Transformation Engineering,Technology Research Center of Hepatitis and Liver Cancer,You an Hospital Affiliated to Capital Medical University, Beijing100069,China㊀㊀ʌAbstractɔ㊀Objective㊀The purpose of this study was to establish a rapid and efficient liquid chromatography tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)for simultaneous determination of15bile acids in mouse liver tissues.Methods㊀The activated charcoal was utilized to prepare bile acid-free liver,which served as the biological matrix for the preparation of standard and quality control samples.The mouse liver tissue was homogenized,and a basic acetonitrile solution,including5%NH4OH was added to precipitate proteins.The proteins were separated on an Agilent Poroshell120EC C18column(100mmˑ4.6mm,2.7μm)by using2H4-DCA,GUDCA-d5,and LCA-d4as internal standards.The mobile phase is ammonium acetate aqueous solution and methanol acetonitrile mixed solution for gradient elution,the column temperature was30ħ,the flow rate was0.3mL/min,and the injection volume was2μL.The electrospray ion source(ESI)was operated in negative ion mode,and in multiple reaction monitoring(MRM).Results㊀The linearity of the15bile acids was good with R2greater than0.993,the limits of determination were less than2ng/mL,and the matrix effects were90.76%-109.25%;the intra-day and inter-day accuracy and precision were less than15%,and the stability was good under4ħfor24h,repeated freeze-thaw,and freeze-storage for one month,meeting the analytical requirements of biological samples;the detection of mouse liver tissues showed that both unconjugated BAs and conjugated BAs(G-BAs,T-BAs)were dominated by maternal CA,with the highest content of TCA;the concentration of unconjugated BAs was(723.89ʃ50.65)ng/mL,significantly higher than that of G-BAs[(56.90ʃ11.28)ng/mL,P<0.001];the concentration of T-BAs was(40322.90ʃ14034.80)ng/mL,significantly higher than unconjugated BAs(P<0.001),andalso significantly higher than G-BAs(P<0.001).Conclusion㊀The LC-MS/MS method we established is sensitive,accurate,reliable,and suitable for the determination of bile acidsconcentrations in mouse liver tissues,which might help forfurther studies.㊀㊀ʌKey wordsɔ㊀Liver tissues;Bile acids;Liquidchromatography-tandem mass spectrometry;Mouse㊀㊀胆汁酸(bile acids,BAs)是一类二十四碳胆烷酸羟基衍生物的总称,在胆固醇稳态㊁脂质吸收和肠道信号传导过程中发挥重要作用[1,2]㊂肝脏中合成的主要BAs是胆酸(cholic acid,CA)和鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)[3]㊂在肠肝循环过程中,一部分初级BAs被微生物菌群转化为次级BAs,如脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)㊁石胆酸(litho-cholic acid,LCA)和熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)[4-7]㊂目前,检测BAs的方法有酶法[8-11]㊁薄层色谱法(thin-layerchromatography, TLC)[12-14]㊁气相色谱-质谱联用法(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)[15]㊁高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)[16,17]和液相色谱-质谱联用法(liquid chroma-tography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)等[18]㊂本研究建立了一种快速灵敏的LC-MS/MS 法,无需衍生化,分析速度快,高通量,可以同时测定小鼠肝组织15种BAs,为科研提供了技术支持㊂1㊀材料与方法1.1仪器㊁试剂与动物㊀Agilent6495三重四极杆质谱仪系统㊁Agilent1290型超高效液相色谱仪系统(美国Agilent公司);BSA224S型微量电子天平(德国Sartorius公司);MS3Digital型涡旋混匀仪(德国IKA公司);Centrifuge5424R型高速离心机(德国Eppendorf公司);高速低温组织研磨仪(中国武汉塞维尔生物科技有限公司)㊂Milli-Q Advantage纯水仪(美国Millipore公司)制备超纯水(18.2MΩ㊃cm);CA㊁DCA㊁CDCA㊁UDCA㊁LCA㊁甘氨去氧胆酸(glycodeoxycholic Acid,GDCA)㊁甘氨鹅去氧胆酸(glycochenodeoxycholic Acid,GCDCA)㊁甘氨熊去氧胆酸(glycoursodeoxycholic Acid,GUDCA)㊁牛磺胆酸(taurocholate Acid,TCA)㊁牛磺去氧胆酸(taurodeoxy-cholic Acid,TDCA)㊁牛磺鹅去氧胆酸(taurochenode-oxycholic Acid,TCDCA)㊁牛磺熊去氧胆酸(taurour-sodeoxycholic Acid,TUDCA)㊁牛磺石胆酸(taurolitho-cholic Acid,TLCA)标准品及三个稳定同位素标记的内标物质(internal standard,IS)石胆酸-d4 (lithocholic acid-d4,LCA-d4)㊁甘氨熊脱氧胆酸-d5 (glycoursodeoxycholic Acid-d5,GUDCA-d5)㊁2H4-脱氧胆酸(2H4-deoxycholic acid,2H4-DCA)(中国上海安谱实验科技有限公司);甘氨胆酸(glycocholic Acid,GCA)㊁甘氨石胆酸(glycolithocholic acid, GLCA)购自加拿大TRC公司㊂甲醇㊁乙腈(色谱纯, Thermo Fisher公司),醋酸盐(美国Sigma-Aldrich公司),活性炭(美国Sigma-Aldrich公司)㊂雄性SPF 级C57BL/6小鼠,5~9周龄,体质量为24~32g,由北京维通达生物技术有限公司提供㊂严格遵守首都医科大学动物伦理和福利相关规定(伦理批件号: AEEI-2021-257)进行动物实验㊂1.2标准溶液的配制㊀称取标准品,用甲醇溶解配制成质量浓度均为1mg/mL单标储备液㊂以不同比例准确移取各标准品溶液,制成混合标准溶液㊂用甲醇稀释配制成11个浓度梯度标准溶液以及低㊁中㊁高三个浓度质控溶液,其中CA㊁DCA㊁CDCA㊁UDCA㊁TCA㊁TDCA㊁TCDCA㊁TUDCA浓度为3.9ng/mL~ 4μg/mL,质控浓度分别为40ng/mL㊁400ng/mL㊁3μg/mL;GCA㊁GDCA㊁GCDCA㊁GUDCA浓度为1.95 ng/mL~2μg/mL,质控浓度分别为20ng/mL㊁200 ng/mL㊁1.5μg/mL;LCA㊁GLCA㊁TLCA浓度为0.98 ng/mL~1μg/mL,质控浓度分别为10ng/mL㊁100 ng/mL和1μg/mL㊂IS浓度为1μg/mL㊂1.3色谱条件㊀色谱柱:Agilent Poroshell120EC C18色谱柱(100mmˑ4.6mm,2.7μm),流动A相为5 mmol/L醋酸铵水溶液,B相为乙腈/甲醇比例为3比2的混合溶液;梯度洗脱程序:起始40%B,0~2 min40%B;2~8min60%B;8~10min95%B;10~ 13min95%B维持;13~15min40%B㊂流速为0.3 mL/min,柱温30ħ,自动进样器温度4ħ,进样器体积为2μL㊂1.4质谱条件㊀采用Agilent6495三重四极杆质谱系统和电喷雾电离(electron spray ionization,ESI)负离子模式,多重反应监测(multiple reaction monitoring, MRM),Nebuilzer20psi,Gas Flow14L/min,Sheath Gas Temp250ħ,sheath gas flow11L/min,capillary 3000V,nozzle voltage1500V㊂1.5肝组织BAs检测㊀精密称取肝组织90mg,加去离子水500μL,加研磨珠匀浆㊂将肝组织以60HZ 匀浆10min,取50μL匀浆液加入-20ħ预冷的碱性乙腈(5%NH4OH)250μL,加入IS(1μg/mL2H4-DCA,1μg/mLGUDCA-d5,1μg/mL LCA-d4)10μL,涡旋30min,15000r/m离心10min㊂吸取上清液100μL,加入内插管中,注入LC-MS/MS系统进行分析㊂1.6空白基质处理㊀称取3只普通小鼠肝组织90mg,加去离子水500μL匀浆㊂加入活性炭(100mg/mL)500μL孵育30min,去除基质中的内源性BAs㊂将混合物在16000g下离心10min,取出上清液600μL,过滤,在16000g离心1min㊂去除基质滤液,以构建肝脏生物基质的标准曲线㊂2㊀结果2.1质谱条件的优化情况㊀采用1μg/mL的单标准品溶液,流速为0.30mL/min,对15种BAs质谱参数进行优化㊂应用ESI源,在MRM模式下对标准品及其IS的母离子㊁子离子和碰撞能量进行逐一优化㊂结果表明,在ESI 负离子模式下,15种BAs 和3种IS 都可以获得强度较高的[M -H]-准分子离子峰,在二级质谱高碰撞能量下获得丰度较高的子离子㊂对于游离BAs,使用母离子定量,对甘氨结合型胆汁酸(glycine -conjugated bile acids,G -BAs)以73.9m /z (NHCH 2COOH -)为子离子,对牛磺结合型胆汁酸(taurine -conjugated bile acids,T -BAs)以79.8m /z (SO 3-)为子离子㊂继续优化碰撞能量,使目标化合物具有最高的灵敏度㊂2.2色谱条件的优化情况㊀本实验结果发现,流动A 相为5mmol /L 醋酸铵水溶液,B 相为乙腈甲醇(3ʒ2)的混合溶液,采用梯度洗脱时,能够很好地分离各类BAs,且各物质峰形良好,具有较高的灵敏度(图1)㊂醋酸铵的加入极大地提高了离子响应,将分析时间缩短到15min,能够快速高效地分析15种BAs,确保母离子和子离子都相同的BAs 能实现基线分离,达到很好的定量分析效果㊂图1㊀15种BAs 的色谱图横坐标为采集时间,纵坐标为counts (%),15种BAs 的峰型良好游离BAs (以红色显示),其中1:CA;2:DCA;3:CDCA;4:UDCA;5:LCAG -BAs(以蓝色显示),其中6:GCA;7:GDCA;8:GCDCA;9:GUDCA;10:GLCAT -BAs (以黑色显示),其中11:TCA;12:TDCA;13:TCDCA;14:UDCA;15:TLCA2.3样本前处理的优化㊀BAs 属于内源性物质,无法直接从小鼠肝组织提取以作为空白基质㊂采用模拟空白基质与实际背景相差较大,造成检测误差㊂因此,在本研究,采用活性炭吸附法去除小鼠肝组织内源性BAs 的干扰,以获得较为准确的空白基质㊂预实验结果表明吸附后的肝组织匀浆溶液均无各类BAs 检出㊂在已发表的研究,对肝组织前处理一般使用SPE 固相萃取等方法,但这种方法耗时长㊁成本高,不适用于大批量样本检测㊂本实验采用蛋白沉淀法,样本经碱性乙腈处理后离心沉淀,简化了前处理过程,提高了检测效率㊂2.4标准曲线和检出限的确定㊀以活性炭处理后的空白基质为背景,加入15个BAs 和3个IS,在适当范围构建11个校准点的标准曲线㊂以分析物与IS的峰面积比为纵坐标,各标准品浓度为横坐标作标准曲线,通过调整最佳加权因子1/X 或1/X 2(X 是每种分析物的浓度)分析校准㊂结果表明,15种BAs 线性良好,R 2均大于0.993㊂以信噪比S /N =3ʒ1时对应的浓度确定本方法的检出限(limit of detection,LOD),LOD 均小于2ng /mL㊂2.5精密度㊁准确度和基质效应情况㊀取空白肝组织匀浆液和各BAs 标准品溶液,制备15种BAs 低㊁中㊁高浓度质控样本,每一浓度平行操作6份,1天内进样6次,以获得日内检测结果,3日重复进样,获得日间检测结果,并代入线性回归方程,计算浓度㊂准确度计算方法为:准确度(RE)=测算值-真实值/真实值ˑ100%;精密度计算方法为:相对标准偏差(RSD)=标准偏差(SD)/计算结果的算术平均值(X)ˑ100%㊂在本方法中,15种BAs 在低㊁中㊁高QC 样本浓度下日内RE 为-13.18%~10.95%,日内RSD 为0.92%~11.74%;日间RE 为-11.27%~8.58%,日间RSD 为2.07%~11.33%㊂通过比较在甲醇标准溶液和空白基质溶液中,以15种BAs 低㊁中㊁高QC 样本的比值来确定基质效应㊂在本方法中,基质效应值为90.76%~109.25%㊂测定结果表明,小鼠肝组织BAs 分析的准确度㊁精密度和基质效应良好㊂2.6稳定性㊀取空白肝组织匀浆液和各BAs 标准品溶液,制备15种BAs 低㊁中㊁高浓度各6份标本,分别置于自动进样器4ħ24h,反复冻融3次,-80ħ冷冻保存1个月,测定结果显示在自动进样器4ħ存放24h 时,RE 为-12.67%~7.74%,RSD 为0.71%~13.28%;反复冻融3次,RE 为-13.98%~10.75%,RSD 为0.67%~15.53%;-80ħ冷冻保存1个月,RE 为-13.89%~12.89%,RSD 为0.62%~15.32%㊂在以上三种测定条件下,样品较稳定,未见明显降解,表明在这些条件下样本均能保持稳定㊂2.7肝组织BAs 测定㊀应用上述所建立的方法测定6例小鼠肝组织15种BAs 含量,游离BAs 主要以初级BAs 的CA 和CDCA 为主,次级BAs 的DCA 和LCA 含量较低(图2A);G -BAs 以GCA 为主,甘氨酸结合型浓度较低,在线性范围内检测不到GCDCA 和GUDCA(图2B);小鼠肝组织T -BAs 主要以TCA 和TDCA 为主(图2C );游离BAs 浓度[(723.89ʃ50.65)ng /mL],显著高于G -BAs[(56.90ʃ11.28)ng /mL,P <0.001];T -BAs 浓度[(40322.90ʃ14034.80)ng /mL]显著高于游离BAs[(723.89ʃ50.65)ng /mL,P <0.001],也显著高于G -BAs [(56.90ʃ11.28)ng /mL,P <0.001,图2D],提示小鼠肝组织BAs 代谢水平的差异性和复杂性,值得深入研究㊂3 讨论本研究基于靶向LC -MS /MS 技术建立了检测小图2㊀LC-MS/MS检测6例小鼠肝组织BAs浓度A:各游离BAs浓度;B:各G-BAs浓度;C:各T-BAs 浓度;D:游离BAs㊁G-BAs和T-BAs浓度游离BAs与G-BAs相比,∗∗∗P<0.001;游离BAs 与T-BAs相比,∗∗∗P<0.001;G-BAs与T-BAs相比,∗∗∗P<0.001鼠肝组织15种BAs含量的检测方法,并进行了方法学验证㊂使用Agilent Poroshell120EC C18色谱柱, ESI离子源,流动相中醋酸铵的加入,在负离子MRM 模式下提高了离子化效率,改善了峰形㊂而过高的醋酸铵则会抑制BAs的离子化,前期实验表明5 mmol/L醋酸铵离子化效果最佳㊂BAs属于小鼠肝脏的内源性物质,无法直接获取空白基质㊂本实验中通过活性炭吸附,有效去除内源性BAs,最大程度降低对检测结果的影响,使准确性显著提高㊂采用乙腈蛋白沉淀的前处理方法,仅需50μL样本,操作简单快速,背景干净,基质效应良好㊂实验结果表明,15种BAs在其线性浓度范围内线性相关系数R2均大于0.993,LOD均小于2 ng/mL,基质效应范围为90.76%~109.25%㊂准确度㊁精密度和稳定性均满足生物样本分析要求㊂检测小鼠肝组织BAs,结果TCA和TDCA浓度较高㊂准确定量BAs亚型浓度对进一步研究肝脏疾病具有重要意义㊂本研究采用LC-MS/MS检测了小鼠肝组织15种BAs含量,结果显示游离BAs中的初级BAs CA和CDCA浓度分别是对应次级BAs DCA和LCA的22倍和31倍,且初级BAs中CA是CDCA的1.25倍,符合BAs的合成过程㊂游离型BAs和结合型BAs(G-BAs㊁T-BAs)都以母体CA为主,其中TCA浓度最高,是CA的115倍或GCA的683倍㊂6例样本的BAs含量存在一定的差异,尤其是T-BAs,除小鼠个体差异外,还可能是采集时胆汁的污染造成的㊂T-BAs是小鼠的主要BAs,符合已有研究结果,与人类或大鼠不同㊂在小鼠,负责BAs与氨基酸结合的酶对牛磺酸具有更强的亲和力㊂ʌ参考文献ɔ[1]Chiang J Y.Bile acid regulation of hepatic physiology:III.Bileacids and nuclear receptors.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2003,284(3):G349-G356.[2]Hofmann,Alan F.Thecontinuing importance of bile acids in liver andintestinal disease.Arch Intern Med,1999,159(22):2647-2658. [3]Pellicoro A,Faber K N.The function and regulation of proteins in-volved in bile salt biosynthesis and transport.Aliment Pharmacol T-her,2007,26(Suppl2):149-160.[4]Lin J A,Watanabe J,Rozengurt N,et al.Atherogenic diet causeslethal ileo-ceco-colitis in cyclooxygenase-2deficient mice.Prosta-glandins Other Lipid Mediat,2007,84(3-4):98-107. [5]Falany C N,Barnes S L,Johnson M,et al.Glycine and taurineconjugation of bile acids by a single enzyme.Molecular cloning and expression of human liver bile acid CoA:amino acid N-acyltrans-ferase.J Biol Chem,1994,269(30):19375-19379. [6]de Aguiar Vallim TQ,Tarling EJ,Edwards PA.Pleiotropic roles ofbile acids in metabolism.Cell Metab,2013,17(5):657-669.[7]Duboc H,Rajca S,Rainteau D,et al.Connecting dysbiosis,bile-acid dysmetabolism and gut inflammation in inflammatory bowel dis-eases.Gut,2013,62(4):531-539.[8]Jones M L,Martoni C J,Ganopolsky J G,et al.The human microbi-ome and bile acid metabolism:dysbiosis,dysmetabolism,disease and intervention.Expert Opin Biol Ther,2014,14(4):467-482. [9]曾议,李国,李红翠,等.熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性胆管炎患者疗效及对血清Nrf2和HO-1水平的影响.实用肝脏病杂志,2022,25(2):211-214.[10]Xie G,Wang Y,Wang X,et al.Profiling of serum bile acids in ahealthy Chinese population using UPLC-MS/MS.J Proteome Res, 2015,14(2):850-859.[11]DosedělováV,ItterheimováP,KubáňP.Analysis of bile acids inhuman biological samples by microcolumn separation techniques:A review.Electrophoresis,2021,42(1-2):68-85. [12]Marksteiner J,Blasko I,Kemmler G,et al.Bile acid quantificationof20plasma metabolites identifies lithocholic acid as a putative bio-marker in Alzheimer's disease.Metabolomics,2018,14(1):1.[13]Baldofski S,Hoffmann H,Lehmann A,et al.Enzyme-linked im-munosorbent assay(ELISA)for the anthropogenic marker isolitho-cholic acid in water.Environ Manage,2016,182:612-619. [14]Zheng TJ,Cheng X,Wan L,et al.Differentiation ofvarious snakebile derived from different genus by high-performance thin-layer chromatography coupled with Qquadrupole time-of-flight mass spectrometry.J AOAC Int,2019,102(3):708-713. [15]Zhao X,Liu Z,Sun F,et al.Bileacid detection techniques andbile acid-related diseases.Front Physiol,2022,13:826740. [16]Douša M,SlavíkováM,Kubelka T,et al.HPLC/UV/MS methodapplication for the separation of obeticholic acid and its related com-pounds in development process and quality control.J Pharm Biomed Anal,2018,149:214-224.[17]Khairy MA,Mansour FR.Simultaneousdetermination of ursodeoxy-cholic acid and chenodeoxycholic acid in pharmaceutical dosage form by HPLC-UV detection.J AOAC Int,2017,100(1):59-64.[18]Horvath T D,Haidacher S J,Hoch K M,et al.A high-throughputLC-MS/MS method for the measurement of the bile acid/salt content in microbiome-derived sample sets.MethodsX,2020, 7:100951.(收稿:2022-11-10)(本文编辑:陈从新)。
希尔顿酒店的发展历程及成功因
希尔顿酒店的发展历程及成功因旅游管理104班潘诗娟10341106一、发展历史1907年20岁的康拉德-希尔顿在堆满杂货的土坯房里开办了家庭式旅馆以应付生计1928年也是圣诞节，希尔顿在达拉斯阿比林、韦科、马林、普莱恩维尤、圣安吉诺和拉伯克都相继建起了以他的名字命名饭店——希尔顿饭店。
1949年希尔顿国际公司从希尔顿饭店公司中拆分出来，成为一家独立的子公司。
1964年希尔顿国际公司在纽约上市。
1967年到1987年的20年中，希尔顿国际三次被收购，最后由前身为莱德布鲁克集团的希尔顿集团买下。
1988年进入中国市场。
2004年希尔顿开休闲之先风，创新了希尔顿休息间。
这种新型房间营造了独特的环境，顾客可以在其中恢复体力和精神，可调光的照明设备或明或暗，空气中散发着新鲜的水果味道和花香，有助于顾客的放松和休息。
现在，连饭店工作人员的服装要求也大为放松，员工甚至可以穿着自己喜欢的衣服为客人服务。
2005年希尔顿将进入上海的康拉德品牌是拥有舞台剧场娱乐功能的酒店。
6月7日，希尔顿国际酒店集团(HI)与中房集团在北京签署协议，宣布“康拉德”酒店落户北京；该集团旗下经济型酒店品牌“斯堪的克”同时签约，两项工程均由中房集团海外发展有限公司负责开发，计划于2008年北京奥运会前营业。
北京康拉德酒店有200间客房、100套服务式公寓；斯堪的克酒店有400间客房和100套服务式公寓。
7月，美国《HOTELS》杂志公布2004年的统计，希尔顿集团（美国）2004年有酒店2259座，房间358408间，列第11位；2003年列10位，酒店2173座，房间348483间。
希尔顿国际酒店集团是总部设于英国的希尔顿集团公司旗下分支，拥有除北美洲外全球范围内希尔顿商标使用权，管理405家酒店，包括263家希尔顿酒店、142家斯堪的克酒店，在全球的78个国家拥有超过7万名雇员，有10多个不同层次的酒店品牌。
希尔顿国际集团在全球的发展以谨慎著称。
00第零篇：ATLC基本思想
服务于设计公司和地产的经历，使其在设计中更为关注设计与开发实施的内在 联系。坚持产品服务于市场和产品领先市场的设计理念，对于设计与工程、成本、 市场的关联有着较深的认知。
• 4、日照遮挡
• 5、城市标志性 • 6、管理简洁 • 7、高差合理：“三维设计”
• 8、屋顶的利用（设备、花园）
• •选择对策 • • • 1、研究政策“点”：地方报批难度，地域性松弛部位。 2、抓住产品“线”：配比合理，推出顺序合理。 3、控制要全“面”：水电性质（差价），物管简洁合理，管理多种。
•
7、规划管理特殊
1.当地特殊退让 2.计容 3.日照
4.绿化率
5.覆盖率 6.停车率 7.人防 8.教育 9.物管用房 10.优惠奖励 • 8、规划要点特殊
• • • • • • • •
ATLC 的观点三、典型价值挖掘 1、挖掘住宅附加值 2、挖掘商业附加值 3、挖掘写字楼附加值 4、挖掘地形高差 5、挖掘地下空间 6、挖掘城市环境 7、挖掘规划要点特殊点
•2、体验型
•3、直接消费型 •设计标准基本要点： •1、单体配置评价（类似住宅：厨、卫、储、招） •2、规划上聚集效应、规模效应、互相借势、复合效应。讲“聚”字。 •3、交通组织上，均好型与旗舰店结合，讲究一个“留”字。
• 区别其他“学院派”设计策划单位，本司切入高度和角度不同： 1、设计美学是最低要求，60分及格线，必须做到。 2、性价比高、操作性强是本公司优势，30分，加强分，拉开差距。 3、政策性强，具有全程全局观，产品突破，10分，关键分，获得行业优异水平。
希尔顿酒店案例分析
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希尔顿酒店案例分析
Waldorf-Astoria（华尔道夫饭店 ）
Waldorf Astoria Hotel属于希尔顿国际酒店集团 旗下高端品牌，分布在美国纽约、加利福尼亚、夏威 夷以及罗马、沙特阿拉伯等地。其中位于纽约曼哈顿 第五大道49-50街的Waldorf Astoria Hotel，堪称是 世界上最豪华、最著名的饭店之一。各国政要和元首， 时逢联合国大会期间或来纽约访问，所下榻的地方都 是鼎鼎有名的Waldorf Astoria Hotel。
希尔顿酒店案例分析
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2020/11/12
希尔顿酒店案例分析
目录
1、发展历史 2、经营管理 3、全球扩张 4. 进军中国
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希尔顿酒店案例分析
有关历史
创始人简介
发展起源
企业现状
一
二
三
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希尔顿酒店案例分析
1907年
1928年
1949-1988
2004-2008
发展历程
现在
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希尔顿酒店案例分析
起航之初： 1907年
美国经济大恐慌的圣诞节，康拉德-希尔顿、 年龄20岁，在美国新墨西哥州圣-安东尼奥镇 堆满杂货的土坯房里开办了家庭式旅馆以应付 生计并庆祝自己的生日，他对母亲说：“我要 集资100万美元，盖一座以我命名的新旅馆。” 又指着报纸上一大堆地名说：“我要在这些地 方都建起旅馆，一年开一家。”
希尔顿酒店案例分析
• 希尔顿的发展模式经历了自建模式、管理合同、特许经 营等几个阶段。20世纪50年代以前，希尔顿一直延续 自建模式，集团发展速度较慢，丧失了发展的机遇。
认知心理学问答题
认知心理学问答题1、认知心理学的传统研究方法（反应时等）和认知神经科学研究方法（动作相关电位、脑成像等）简述。
答：反应时测量法：反应时测量法是指刺激作用于有机体后到其作出明显反应所需要的时间，即刺激与反应之间的时间间隔。
又称为有机体反应潜伏期。
观察法：指在自然情境中对人的心理现象与行为表现有系统、有计划的观察记录，经过分析以获得其心理活动发生和发展规律的方法。
内省法：指被训练过的观察者仔细的、小心地注意他们自己的感觉，精确的辨别这些感觉，并尽可能客观地报告这些感觉。
口语报告法P21：指被试在从事某项活动的同时或之后，将头脑中进行的心理活动操作过程用口语表达出来，主试记录下来，并根据有关结果对被试心理活动规律进行研究。
计算机模拟法：是指利用计算机来模拟、检验、发现人的认知活动及其行为表现的规律的研究方法。
事件相关电位：（P24）当呈现某项刺激时，大脑某些区域便会对这种刺激产生特定反应，此时的脑电波被称为时间相关电位或诱发电位。
脑成像：（P28）脑成像法主要有两种：及功能性磁共振成像和正电子发射扫描术。
功能性磁共振成像的物理学基础是核磁共振现象；正电子发射成像系统利用正电子同位素衰变产生出的正电子与人体内负电子发生湮灭效应这一事实。
2、注意的各种理论模型的优势和不足（P38-47）1、注意的瓶颈理论模型：过滤器模型、衰减模型及后期选择理论，即反应选择模型。
过滤器模型：Broadbent在1958年提出，他认为同一时间可以被注意到的信息量是有限的，如果信息量超过限度，注意过滤器就将选择让一些信息通过，并将另一些信息排斥在注意之外。
优点：Broadbent的过滤器模型很好地解释了当时的双耳分听实验，因此受到了Colin Cherry的支持，他也认为感觉信息可以北非注意耳加以注意，但如果需要根高层次的知觉加工，则不会被非注意耳所注意。
缺点：实验所用的材料都是听觉材料，信息的选择与过滤只发生在同类性质的材料间。
TLC_软件构架(上)
15
软件构架的定义(1/4)
• Bass, Celments, and Kazman Addison-Wesley 2003
– “一个程序或计算系统的软件构架是指该系统的一个或多个结构， 它由软件组件，这些组件的外部可见特性以及这些元素之间的关系 组成。” – 外部可见特性指其他元素对该元素所做的各种假设 – 构架定义了软件元素 – 系统可能而且确实由多个结构组成
• •
2
目录
第一部分：概述
•
• • • • • • •
背景 软件构架的定义
第二部分: 创建软件构架（续）
•
设计软件构架
软件构架的起源和发展 软件构架的结构和视图
第三部分：软件构架评估
软件构架的作用
• 软件构架评估原因
第二部分：创建软件构架
影响软件构架的因素 理解质量属性 实现质量属性
• • • •
• 配置(configurations)
• 软件构架是关于系统的一个或多个结构 • 对软件构架的描述应采用多个视图
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构件
• 构件是系统中负责计算和数据存储的单元 • 常见的构件类型包括
– 客户端 – 服务器 – 数据库
• 构件可以简单的或复合的
– 逐层分解的方式来对系统结构进行细化
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连接件
• 连接件是对构件之间连接和交互关系的抽象 • 常见的连接件类型
• 软件构架形式化理论和描述语言 • 软件构架风格/模式 • 软件构架文档化 • 软件构架评审 • 软件构架设计支持工具 • 基于软件构架的开发方法 • 软件构架细化 • 软件构架逆向构造等
14
第一部分：概述
• 背景：软件构架为什么越来越引起人们关注？ • 软件构架的起源和发展 • 软件构架的定义 • 软件构架的结构和视图 • 软件构架的作用
物流成本与控制
物流成本与控制摘要：物流总成本包括，运输成本存货成本，仓储成本，定单处理与信息成本，批量成本。
在所有物流成本中所占比率最高的是运输费。
物流成本还要靠减少仓储费用。
我国物流的发展存在巨大的空间。
正文：物流成本是指从原材料供应开始一直到将商品送达到消费者手上的全部费用。
即产品空间位移（包括静止）过程中所耗费的各种资源的货币表现，是物品在实物运动过程中，如包装，装卸搬运，储存，流通加工，物流信息等各个环节所支出的人力，物力，财力的总合。
物流成本分析：一般来说，物流总成本（TLC）包括运输成本存货成本，仓储成本，定单处理与信息成本，批量成本。
即TLC=运输成本+存货成本+仓储成本+订单处理与信息成本+批量成本。
物流成本存在相互作用，相互制约的关系。
物流供应链成本管理不是降低某一环节的局部成本费用，而是应当在满足一定顾客服务水平的基础上追求物流总成本最低，实现利润最大化。
这就需要用系统综合的观点分析与控制物流成本。
总成本分析是进行一体化物流管理的关键。
单项物流活动成本降低必定导致其他成本的增加，处理不当可导致总成本上升。
如：减少配送中心的数目，只在少数中心集结货物当然会减少存货存储成本，但却可以使运输成本显著增加。
或是由于服务水平下降使销量下滑。
势必会影响到最终利润。
在所有物流成本中所占比率最高的是运输费。
据资料显示，美国与加拿大公司成本构成情况如表所示:美国，加拿大公司物流成本构成情况总体上说，美国的物流发展无论在规模总量，企业实力与先进技术应用上都代表了世界最高水平。
1998年，整个欧洲物流总支出为1460亿美元，而美国物流支出高达8860亿美元，其中美国物流支出1006亿，占全球总量的1/4。
美国物流的发达，相当程度上要归功于其密集而先进的综合交通网络。
美国航空运输几乎占全球“半壁江山”。
2001年，全球前十大货运机场中，美国占5个：孟菲斯（1）、洛杉矶（2）、字克雷奇（4）、迈阿密（6）、纽约（9）：前20名中，美国占9个：前述5个加上路维尔（11）、芝加哥（12）、印第安纳波利斯（17）、纽瓦克（20）。
希尔顿酒店的现状与问题
希尔顿酒店的现状与问题希尔顿公司简介：希尔顿国际酒店集团(HI),为总部设于英国的希尔顿集团公司旗下分支，拥有除美国外全球范围内“希尔顿”商标的使用权。
美国境内的希尔顿酒店则由希尔顿酒店管理公司(HHC)拥有并管理。
希尔顿国际酒店集团经营管理着403间酒店，包括261间希尔顿酒店，142间面向中端市场的“斯堪的克”酒店，以及与总部设在北美的希尔顿酒店管理公司合资经营的、分布在12个国家中的18间“康拉德”(亦称“港丽)酒店。
希尔顿酒店集团公司(Hiton Hotels Corporation)希尔顿国际酒店集团是总部设于英国的希尔顿集团公司旗下分支，拥有除北美洲外全球范围内希尔顿商标使用权，管理405家酒店，包括263家希尔顿酒店、142家斯堪的克酒店，在全球的78个国家拥有超过7万名雇员，有10多个不同层次的酒店品牌。
希尔顿国际集团在全球的发展以谨慎著称。
希尔顿酒店简介：希尔顿国际酒店集团(HI)，为总部设于英国的希尔顿集团公司旗下分支，拥有除美国外全球范围内“希尔顿”商标的使用权。
美国境内的希尔顿酒店则由希尔顿酒店管理公司(HHC)拥有并管理。
希尔顿国际酒店集团经营管理着403间酒店，包括261间希尔顿酒店，142间面向中端市场的“斯堪的克"酒店，以及与总部设在北美的希尔顿酒店管理公司合资经营的、分布在12个国家中的18间“康拉德”(亦称“港丽”)酒店。
它与希尔顿酒店管理公司组合的全球营销联盟，令世界范围内双方旗下酒店总数超过了2700间，其中500多间酒店共同使用希尔顿的品牌。
希尔顿酒店的经营管理模式：(一)特许经营扩张市场希尔顿的发展模式经历了自建模式、管理合同、特许经营等几个阶段。
20世纪50年代以前，希尔顿一直延续自建模式，集团发展速度较慢，丧失了发展的机遇。
60年代希尔顿创立的管理合同方式，通过管理输出迅速拓展了集团的市场网络，品牌国际影响力迅速提高。
90年代年希尔顿开始实施“特许经营”方式进行拓展，逐步将出售自有的饭店，只保留管理权和特许品牌权利。
综述东亚太旅游业的发展
综述东亚太旅游业的发展随着社会的发展，人们的生活得到了很大的改善，旅游也逐渐成为全世界人们生活中的一部分，旅游日益成为一个重要的话题。
而旅游本身也有了很大的突破，不再像以前只是在小范围里进行近距离旅游活动，而是发展到跨国、跨区域的远距离旅游活动。
然而不同类型的人有着不同的旅游需求，所选的旅游地也不同。
东亚太地区各国旅游业近年来发展迅猛，中国、泰国、马来西亚、韩国、日本等国的入境旅游都得到了快速发展，其规模无论是从收入上还是人数上都在不断增长，东亚太地区越来越受到世界各地旅游者的热爱，并成为世界旅游都重要组成部分。
国际旅游市场是由世界旅游组织根据旅游客源特征来划分的，总共有六大旅游市场，欧洲旅游市场、美洲旅游市场、东亚太平洋旅游市场、中东旅游市场、南亚旅游市场。
在这六大旅游区域里，欧洲由于旅游业发展较早，旅游的各方面都已成熟，所以是世界上最大的旅游接待市场。
欧美地区旅游业发展早，多年来得到了长足的发展，吸引力也在减弱，目前趋向于饱和。
但是近几年由于东亚太地区旅游业的不断发展，正值于发展的高峰期，基础设施不断完善，吸引力也不断增强，将逐步超过美洲旅游区，进而成为很大的旅游接待市场。
东亚太地区包括东北亚、东南亚和太洋洲，本地区包括中国、朝鲜、韩国、日本、泰国、蒙古、马来西亚、新加坡、印度尼西亚、菲律宾、文莱、东帝汶、越南、老挝、柬埔寨、缅甸以及澳大利亚、新西兰和其他南太平洋岛国和地区。
除了经济实力较强的日本是重要的客源地之外，韩国、新加坡、秦国、马来西亚、中国的台湾和香港地区、澳大利亚等也都开始大力发展出境旅游。
东亚太地区国家大多属于发展中国家，在20世纪50-60年代，东南亚地区的旅游经济在世界旅游业中所占份额极小。
经过50余年的发展，世界经济格局发生了巨大的变化，东亚太地区已成为世界经济中的一个新的增长点，正在发展成为继北美、欧洲后的又一经济重心。
于此相适应的，东亚太地区旅游业在世界旅游经济中所占的份额不断增大，由20世纪60年代的1%左右提升到90年代的10%以上。
电力集中抄控系统
投资金额
80,000.00 20,000.00 40,000.00
3,000.00 20,000.00 13,000.00 60,000.00 160,000.00 120,000.00
6,000.00 10,000.00
5,000.00 60,000.00 400,000.00 100,000.00 25,000.00
1-4 电力集中抄控系统图示
供电网管中心
银行收费系统
小区网管中心
抄表 终端
变压器
高压线路
抄表 终端
集 中 器
抄表 终端
电信网 / 通信专用网
380/220V 民用电网
载波电表
1
2
3
4 ………… N
1-5 电力集中抄控系统构成
构件
名称
功能及安装位置
数据采集模块
安装于每个电子或机械电表中，作用于 脉冲信息的采集和断电控制；
30,000.00 8,000.00
20,000.00 3,000.00
10,000.00 5,000.00
60,000.00 200,000.00 100,000.00
25,000.00 5,000.00 5,000.00 5,000.00 2,000.00
50,000.00 600,000.00
数据采集模块
安装于每个机械水表中，作用于水流量脉冲信息的 采集；
智能抄表集中器 安装于变压器后端，作用于所有采集信号的集中处
理，每台可满足一千个用户使用；
水流电磁阀
安装于水表前端，作用于对拖欠水费的用户实施断 水控制。
电话交换机
安装于系统管理电脑前端，作用于数据调制解调， 每部管理电脑配置一台；
什么是TLC闪存
什么是TLC闪存今后SSD市场的发展趋势也将会出现TLC闪存渐渐侵占MLC闪存份额的情形，特别是在那些可以MLC/TLC相互切换的3D NAND普及之后，SSD容量会持续上升，价格则会不断下降。
无论大家现在接受与否，TLC闪存早晚会完全占领低端市场，而MLC依然会凭借性能上的优势不可动摇地屹立在高端市场。
时至年关，现在又到了闪存类型交替的时候，今年大量的TLC SSD涌向消费级市场，三星这个已经玩了几年TLC的就先不说了，SanDisk拿出了Ultra II，东芝旗下的OCZ放出了Trion 100，东芝自己也有Q300，镁光在11月也推出了BX200参战，海力士虽然没做自己的TLC SSD，但是卖了不少TLC闪存给下游厂家，至于Intel，它会等到明年3D闪存大批量产时才推出弄自己的TLC SSD。
今后SSD市场的发展趋势也将会出现TLC闪存渐渐侵占MLC闪存份额的情形，特别是在那些可以MLC/TLC相互切换的3D NAND普及之后，SSD容量会持续上升，价格则会不断下降。
无论大家现在接受与否，TLC闪存早晚会完全占领低端市场，而MLC依然会凭借性能上的优势不可动摇地屹立在高端市场。
说了这么多可能有的读者还不清楚TLC到底是什么，今天我们就来简单的介绍一下。
一块SSD由主控、DRAM缓存和NAND闪存三种芯片所组成，主控是SSD的大脑，SSD所做的读写动作全部都是它所控制；DRAM缓存则是高速缓冲区，具体作用要看主控的算法而定，有些是用来放LBA表的，有些则是拿来做数据缓存的，更有些方案是没有外置DRAM缓存，只在主控内置了小量缓存，这样做的目的有些是为了数据的安全性（如SandForce），有些则是为了降低成本（大多数入门级主控）；NAND闪存则是数据存储的地方，你的数据全部都存放在里面。
SLC、MLC、TLC到底是什么NAND闪存的类型有SLC、MLC和TLC这三种，SLC不论性能还是可靠性都是目前最好的，但其成本也是最高的；MLC 闪存的性能、可靠性次之。
希尔顿酒店介绍
希尔顿酒店集团公司（Hilton Hotels Corporation） 旗下主要品牌： 希尔顿（HILTON HOTEL），港丽（CONRAD HOTELS）, 斯堪的克（SCANDIC ），双树（DOUBLE TREE）, 大使套房酒店（EMBASSY SUITE），家木套房酒店（ HOMEWOOD SUITE），哈里逊会议中心（HARRISON CONFERENCE CENTER），庭 园旅馆（GARDEN INN），汉普顿旅馆（HAMPTON INN AND SUITES），希尔顿度 假俱乐部（HILTON GRAND VACATIONS CLUB）等。
花 院 客 栈
HAMPTON INN AND SUITES
汉
普
顿
旅
馆
汉普顿旅馆是希尔顿品牌家族中 的中档饭店品牌，为追求价值的旅游 者提供舒适、设备完善的房间，友善 的服务和其它额外的努力会使旅游者 每一次在这里逗留都更加快乐。创新 服务是其服务宗旨，它保证100%满意 ，如果在这里不完全满意，就不用付 款。它主要位于乡间、郊区和城市中 。
发展历史
四万美金 收购 莫布 利旅馆 成立希尔 顿饭店公 司 1929年建造百 万希尔顿酒店 1945年，买下 世界上最大 的饭店—— 芝加哥的史 蒂文斯大饭 店
买下“世界旅店 皇后”华尔道夫 大饭店“，世界 旅馆皇帝”“斯 塔特拉旅馆系列”
1949年，希尔顿国际公司从希尔顿饭店公 司中拆分出来，成为一家独立的子公司
希尔顿酒店集团
希尔顿国际酒店集团(HI)，为总部设于英国的希尔顿集团公司旗下分支，拥有除美 国外全球范围内“希尔顿”商标的使用权。美国境内的希尔顿酒店则由希尔顿酒店管 理公司(HHC)拥有并管理。希尔顿国际酒店集团经营管理着403间酒店，包括261间希尔 顿酒店，142间面向中端市场的“斯堪的克”酒店，以及与总部设在北美的希尔顿酒店 管理公司合资经营的、分布在12个国家中的18间“康拉德”(亦称“港丽”)酒店。 希尔顿酒店集团公司（Hilton Hotels Corporation）希尔顿国际酒店集团是总部设于英 国的希尔顿集团公司旗下分支，拥有除北美洲外全球范围内希尔顿商标使用权，管理 405家酒店，包括263家希尔顿酒店、142家斯堪的克酒店，在全球的78个国家拥有超过7 万名雇员，有10多个不同层次的酒店品牌。希尔顿国际集团在全球的发展以谨慎著称。
哈佛大学未来学习中心实践探索与启示
50实、人机共享智慧、数据与智慧结合赋能未来的数智时代成为可能。
未来学习中心正是数智时代迎合教育4.0理念的一场教育变革，其建设方向是依托图书馆等机构提供智慧化学习场景，通过新技术与数字工具融合现有资源，转变教学方式和服务模式，以培养自主学习、终身学习的复合型现代化人才。
本文以哈佛大学为例，介绍国外未来学习中心的战略构想与实践探索，以期对我国相关领域建设与发展有所启迪。
未来教育的战略构想哈佛大学未来教学中心（T e a c h i n g a n d L e a r n i n g C e n t e r ，简称T L C ）由学习发展副文 张爽未来学习中心将利用现代化科技手段，应对数智时代未来教育发展趋势，为教育范式的改革提供新的思路和路径。
哈佛大学面向“教”与“学”需求，构建未来学习中心的实践经验，或可为我国高校提升教学服务、建设智慧化校园提供参考借鉴。
of Vice Provost for in Learning，简称VPAL）统领，未来教学工作组（Future of Teaching & Learning，简称FTL），教与学创新组（Harvard Innovation for Learning & Teaching，简称HILT）等组织与各学院协同建设，信息技术学院、图书馆和博物馆等机构提供支持。
从所属与命名来看，哈佛大学关于未来学习中心的实践基于教与学两大群体，既关注面向学生的基础传统教学、特定学科教学、复合人才培养，也聚焦教师团队教育方式的创新和改革。
随着教学实践的展开，为顺应未来教育个性化、精准化、多元化趋势，未来教学工作组总结经验，开拓了未来教育建设战略。
重构学习场景教育个性化强调以学习者为中心，关注学生需求和偏好。
研究生院教与学实验室（Teaching and Learning Lab，简称TLL）通过焦点小组访谈、用户测试了解学生需求，快速成型技术（R a p i d Prototyping）打造增强学生体验感的混合教室等多模式课堂，优先考虑互动教学法和点对点教学，达成交互式、协作式及个性化学习模式，创丰富学习内容景广泛的学习方式。
tlc标准品
tlc标准品TLC标准品。
TLC（Tender Loving Care）是一种以关爱和呵护为核心理念的标准品管理模式，它旨在通过提供高品质的产品和服务，满足消费者的需求，并建立品牌的忠诚度。
在当今竞争激烈的市场环境中，企业需要不断提升自身的竞争力，而TLC标准品正是一个有效的管理工具，可以帮助企业实现这一目标。
首先，TLC标准品要求企业在产品设计和生产过程中注重关爱和呵护消费者的需求。
这意味着企业需要深入了解消费者的喜好和习惯，从而设计出更加符合消费者需求的产品。
此外，在生产过程中，企业需要严格控制产品质量，确保产品符合相关的标准和规定，以提供给消费者高品质的产品。
其次，TLC标准品要求企业在服务环节同样注重关爱和呵护消费者。
良好的售后服务可以增强消费者对品牌的信任和忠诚度。
因此，企业需要建立完善的售后服务体系，及时解决消费者的问题和投诉，让消费者感受到企业的关心和关爱。
此外，TLC标准品还要求企业在营销和品牌建设过程中贯彻关爱和呵护的理念。
企业需要通过精准的市场定位和差异化的营销策略，吸引消费者的注意，并建立起品牌的形象和口碑。
同时，企业还需要不断创新，提升产品和服务的品质，以保持竞争优势。
总的来说，TLC标准品是一种以关爱和呵护为核心理念的管理模式，它要求企业在产品设计、生产、服务、营销和品牌建设的各个环节都贯彻这一理念。
通过实施TLC标准品管理模式，企业可以提升产品和服务的品质，满足消费者的需求，建立起品牌的忠诚度，从而在激烈的市场竞争中脱颖而出。
在实施TLC标准品管理模式的过程中，企业需要注重团队的建设和培训，确保员工都能够理解和贯彻TLC的核心理念。
同时，企业还需要不断改进和完善自身的管理体系，以适应市场的变化和消费者的需求。
总之，TLC标准品是一种有效的管理模式，可以帮助企业提升竞争力，满足消费者的需求，建立品牌的忠诚度。
通过贯彻关爱和呵护的理念，企业可以赢得消费者的信任和支持，实现可持续发展。
高中英语读后续写TLC情节构建模型的教学实践
ENGLISH ON CAMPUS2023年33期总第681期高中英语读后续写TLC情节构建模型的教学实践摘 要：经过近几年的高中英语读后续写探索与实践，师生已有相对丰富的语料积累，但学生在构建情节的时候学生依然存在情节离奇偏离主题、内容冗长无法收尾等问题。
本文依托读后续写实例，提出TLC情节构建模型，即读取Theme 确定结局，找出人物Location的变化确定主情节，根据人物情绪、态度或认知的Change丰富情节，引导学生提高情节构建的合理性与丰富性。
关键词：读后续写；TLC；情节构建作者简介：蔡玲玲，江苏省梁丰高级中学。
一、读后续写的题型解读江苏高考的英语科目自2021年起使用新高考Ⅰ卷，其作文形式为读后续写。
该题型为学生提供一篇350词左右的文本，以及要续写两段的段首句，要求学生结合文本与所给的段首句，完成150词左右的续写文章。
面对这一高考新题型, 传统的“重字词轻篇章”“重语言轻思维”的“蜻蜓点水式”的教学模式显然已经不适用。
读后续写的最大优势在于将语言的模仿与内容的创新有机结合，在于释放考生想象力的同时提高其准确运用外语的能力。
《普通高中英语课程标准（2017 年版）》（以下简称“新课标”）提出的英语学科核心素养包括语言能力、文化意识、思维品质和学习能力。
读后续写对于学生的培养完全符合新课标要求，它要求考生有较强的阅读理解能力来分析文本，有严密的逻辑推理能力来衔接原文情节，有突出的模仿能力延续原文的写作风格，同时有丰富的想象力进行符合原文甚至超越原文的创作。
二、读后续写情节构建存在的问题下面以一篇读后续写为例，阐述学生构建续写情节时存在的问题。
原文讲述的是兄弟三人在万圣节那天路过据传是女巫的老太太家门前，哥哥们极力阻止，弟弟却坚持按门铃讨要糖果的故事。
“Howie! You can't go in! Mom told us to avoid Mrs. Carrigan's house at all costs! We can't go in there,” Howie's big brother, Archie, yelled at the boy who had entered the older woman's yard upon seeing her Halloween decorations.The little kid turned and looked at his two big brothersangrily. “But she put up decorations. She wants us to come in.”Howie said, pointing at the pumpkins in the yard and the trick-or-treat sign on her doorway.“Come out, Howie! Let's go! I think Mom thinks she's a...a witch.” his other big brother, Bobby, whispered the last part. “What? Are you afraid of her?” Howie laughed, knowing that his brothers would not like that. He saw their frowns, but his words were true.They were afraid. No one in the neighborhood went into Mrs. Carrigan's house or even stayed close.The old woman was strange. She only dressed in black and never brushed her hair. She couldn't walk straight and never smiled at anyone, so people avoided her the few times she was seen outside. But Howie was not afraid. He was going to knock. The worst that could happen was being ignored or told to go away. Despite his big brothers' words, he went up the tiny steps and rang the doorbell.“Howie! Howie! No!” his big brothers whisper-yelled at him from the sidewalk, and Howie turned and put his finger to his mouth, signaling for them to shut up. But he saw their eyes widen and their faces pale even beneath the Halloween makeup they were all wearing. Howie felt something behind him and turned slowly, not knowing what to expect. He felt the cold air; he felt like ringing the bell was not a good idea.The old woman was there, staring at him surprisedly. He saw her black clothes, and he knew precisely why everyone thought蔡玲玲72ENGLISH ON CAMPUS 2023年33期总第681期she was a witch. She looked like the ones in cartoons. But Howie squared his shoulders, raised his plastic pumpkin bucket and said.“Trick or Treat!’Mrs. Carrigan stared at him for a few seconds.“Guys! Come here! There are lots of candies!”原文故事简单易懂，哥哥们听信谣言，甚至妈妈也耳提面命过，但是弟弟却坚持自己的想法，按响了门铃。
TLC产品认证质量保证体系要求理解及现场检查要点培训
➢ 证后抽检
验证量产产品实物质量的稳定性
➢ 证后质量体系复查
验证质量控制、一致性控制措施的 持续符合性、有效性
TLC产品认证质量保证体系要求理解及现场检查要点培训
第5页
TLC产品认证各环节关注重点
初次/复评型式试验、监督检测
➢ 一致性检查依据 产品型式试验报告； 产品描述； 认证标准。
TLC产品认证质量保证体系要求理解及现场检查要点培训
第1性检查
➢ 产品一致性检查项目
产品名称、规格、型号； 关键元器件和材料； 指定试验； 检查产品描述报告中的其它项目。 ➢ 产品一致性检查的对象
检验
复查
1●
2●
●
3●
●
4●
●
●
5●
●
●
●
●
6
●
●
7
批量检验
8
100%检验
➢ ISO/IEC《认证的原则与实践》归纳的八种质量认
证制度模式
TLC产品认证质量保证体系要求理解及现场检查要点培训
第4页
“第5种”认证模式各环节关注的重点
➢ 型式试验
验证是否具备生产符合标准要求产 品的能力
➢ 质量体系评定
关于不合格项纠正措施的要求
➢ 务必举一反三认真分析原因、针对原因提出 相应的纠正措施、提交纠正措施实施的证据 ，必要时还要提交问题已纠正的证据
➢ 不符合事实若涉及影响产品质量判定时（如 检验缺项、仪表未检定/运行检查等），必 须进行纠正，除增补检验项目、仪表计量/ 运行检查外，还应包括对库存品重新检验， 并基于检验结果及以往检验结论可靠性评估 的结果，决定是否对需已售产品提出处理方 案
TLC_软件构架(下)
• 在表中建立需求与战术的交叉引用关系，并表明其间的相互影响 • 例如，为了实现可修改性，采用MVC模式和命令处理器模式来
解耦用户界面操作和业务逻辑，将对系统性能略有影响（-0.2)
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ADD的实施步骤
• 2.1.2 对选取的战术进行权衡和取舍
– 挑选一个大粒度的构架模式确定系统的基本结构
• 2.1.3 应用所选取的策略来创建软件构架
• 在比较自信地知道了构架驱动因素之后，ADD就可以开始了
• ADD的结果是构架模块分解视图和其它视图的最初几个层次， 并不是视图的所有细节都是通过ADD得到的
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ADD的实施步骤
• 输入：ADD的输入是一组需求
– 功能需求：一般用用例来表示 – 质量需求和各种约束
• 1. 选择要分解的模块
– 确定要设计的系统 – 系统的需求（功能需求、质量属性和约束条件）是可获得的
屏蔽数据生产者和消费者彼此的细节。加入代理后，HMI通 过ServerProxy实现对WS的服务请求。
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应用各种模式/战术 后得到的初始结构
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行为描述对初始结构进行验证
:HMIController :HMIDispatcher
:GUIView
:HMIProcessor
:ServerProxy
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ADD的实施步骤－－设计片断集成过程
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ADD的实施步骤
• 2.1.4 定义子模块之间的接口
– 对子模块之间的交互关系形成约束
• 2.1.5 验证用例和质量场景并对其进行求精
– 主要是通过对系统的行为进行描述来验证结构元素之间是否能 够按照期望的方式进行交互来满足系统的需求 – 对系统行为的描述可以采用顺行图、协作图、状态图等手段 – 描述可以由粗到细的进行
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美国TLC视光公司业务模式研究战略管理部一、背景介绍：美国的医疗制度体系为深入了解TLC视光公司（TLC Vision Corporation）的业务运作模式，有必要先了解美国的医疗制度体系。
只有这样，才能明确哪些经验可以借鉴，为我所用，哪些做法的背景或条件不同，不能照搬。
1、美国卫生服务的筹资模式按来源分为三大类型：a、由联邦政府和州政府通过工资税和普通税支持的全美最大的公办医疗保险计划——老年医疗保险和穷人医疗保险，两项计划覆盖7327万人口，占美国人口的27.2%；b、由雇主和雇员共同分担保费的私人医疗保险计划，覆盖职工及家属1.55亿，占美国人口的57.6%。
此外，尚有3450万老年人参加了私人医疗保险举办的补充医疗保险；c、个人自付医疗费用。
4100万人没有参加任何医疗保险，占美国人口的15.2%。
因此，与中国类似，在美国进行激光屈光矫正手术主要为个人自费，不在政府保险或其它第三方支付的范围内，较高的手术费用是这项业务面临的主要障碍之一。
2、美国的卫生服务机构美国卫生服务机构按所有制和经营目的可以分为：公立机构和私立机构，营利性机构和非营利性机构，由此派生出许多不同的组合。
（1）公立医疗机构：由联邦、州及地方政府举办的非营利性医院，约占美国医疗机构总数的10%。
如荣军医院、军队医院、印第安人医院、监狱医院和某些精神病院、结核病院。
（2）私立非营利性医疗机构：主要是由宗教团体和慈善机构开办，约占美国医疗机构总数的70—80%，以综合性医院、教学医院、社区医院和非营利性公司医院的形式存在，这些医院的筹资渠道是多元化的。
（3）私立营利性医疗机构：约占美国医疗机构总数的10—20%，包括个体开业医院、合伙开业医院和营利性公司医院，有的为上市公司。
TLC视光公司即属于私立营利性医疗机构，并为上市公司。
3、美国医生与医院的关系与中国医院和医生不同，美国的医生与医院多是一种经济合同契约关系，类似歌手与剧院的关系。
大多数医院是一种开放性、社会化的机构，是医疗技术中心，并不强调组织中心的作用。
医生在医院工作虽是固定的，但很少有医生全日制为医院工作，医生一般都有自己的诊所或联合诊所，或是有自己的家庭病人，医院外服务不受医院的限制，但以医院服务为主。
也有的医生以诊所工作为主，把医院作为一种依托。
如果诊所需要使用医院仪器设备，医生即预约病人去医院。
需要住院的病人，也由这些诊所开业医生去医院值班处理。
这种方式不仅有利于提高诊所的医疗质量，而且也使医院的病房、设备得到充分利用。
医院外医生只要服从医院规章制度，信守经济合同，即可使用医院设备。
美国法律规定医院和医生从病人身上各有不同的收费，这样医生不会太多顾及医院的利益，以减轻病人和国家的负担。
二、TLC视光公司简介TLC视光是北美地区首屈一指的眼科保健公司，具有12500多名验光师（占美国的25%）和1200多名眼科手术医生的网络，市场覆盖了加拿大的三个省和美国的48个州。
TLC视光公司的前身为TLC激光眼科中心（TLC Laser Eye Centers）。
该公司成立于1994年，1997年在那斯达克上市，2004年举行了10周年庆典。
该公司下属第一家中心在安大略的温沙（Windsor）开业，目前在美国和加拿大拥有、运营并管理着近60家激光视光矫正中心，加上与外科医生联合成立的中心，共约80家（见表1）。
中心的主营业务为屈光激光手术（包括波前激光技术），如近视、远视、散光等。
成立十年来，TLC激光眼科中心进行了超过50万台LASIK 手术。
基于对TLC的信任，4000多名医生（包括2000多名眼科医生）选择在TLC进行了他们自身的视觉矫正。
表1：TLC激光眼科中心分布（带*者为联合中心）AZTucson*CABakersfieldBreaCampbell/San Jose* Encino*Fresno*La JollaNewport Beach OntarioPalm Desert Redding*Santa Maria* TorranceCODenverCTConnecticutFLFt. LauderdaleMiamiTampaGAAtlantaIACedar Rapids / Robins* ILChicagolandINIndianaMishawaka*/Warsaw* MA MassachusettsMDAnnapolisFrederick*RockvilleMIAnn ArborDetroitKalamazooLansing MNEdina*MOSt. LouisMTBillingsNCCharlotteRaleighNJMt. LaurelNorth JerseyNYAlbanyGarden CityManhattanWhite PlainsOHClevelandColumbusToledo*OKArdmoreOklahoma CityTulsaPAPittsburghPlymouth MeetingState College*RIProvidenceSCCharlestonEastside Eye Center*Piedmont (Greenville)TNChattanooga*Knoxville*Memphis*TriCitiesTXAustinLewisvilleSan AntonioUTSalt Lake CityVACharlottesville*FairfaxRestonRichmond*WASpokane*WIMadisonCANADANBMonctonNSHalifaxONLondonTorontoWaterloo2002年5月15日，TLC激光眼科中心公司与激光视觉中心公司（Laser Vision Centers®，简称为LaserVision）合并成立了TLC视光公司（TLCVision，网址），从而实现了整体上市。
LaserVision是市场领先的通路（Access）服务提供商，主要业务是为眼科外科医生提供准分子激光器、角膜微切器以及其它支持服务，目前在全球范围内318个网点。
此次合并使双方起到了优势互补的作用，使TLC视光形成了“自有＋外服”的发展模式。
TLC视光实际上是一个控股型公司，合并之前的TLC激光眼科中心公司与LaserVision在合并后仍然保持各自的独立法人地位。
合并之后，TLC视光又连续进行了一系列投资，进入眼科保健的其它领域，成为一家全眼科的公司。
公司国际办公地址在加拿大多伦多，美国公司地址在密苏里州圣路易斯。
TLC视光分别在那斯达克（代码为“TLCV”）和多伦多证券交易所上市（代码为“TLC”）。
目前，TLC视光的业务已经覆盖了三大眼科保健市场：屈光手术（眼表）、白内障（眼前节）和干性黄斑变性治疗（眼后节）。
这些业务都是通过专门的下属子公司实现的，业务分布如下表：表2 TLC视光下属机构的业务分工由上表可见，TLC视光各个下属机构的业务都是单一的、专业分工的，但在总体上是多元化的全眼科保健公司。
三、TLC视光的营收分析2004年，公司营业收入达到2.42亿美元，增长了24%；净利润达到创记录的4370万美元；每股收益为0.61美元，见表3。
表3 TLC视光合并损益报表（未经审计）(千美元，每股数量除外；全年和4季度数据均截至12月31日)04年4季度 03年4季度 04全年 03全年---------------------------------------------------------------------收入屈光中心$30,563 $ 27,960 136,730$ 110,052通路收入8,676 6,703 40,65936,140其他保健服务16,476 13,881 64,806 49,488---------------------------------------------------------------------总收入55,715 48,544 242,195 195,680---------------------------------------------------------------------直接成本屈光中心23,438 22,627 96,38886,045通路收入6,646 5,223 28,86325,424其他保健服务10,751 8,654 40,435 31,836---------------------------------------------------------------------直接成本总额40,835 36,504 165,686143,305---------------------------------------------------------------------毛利14,880 12,040 76,50952,375---------------------------------------------------------------------费用管理费用9,675 7,333 33,12831,688营销费用3,706 3,819 13,38514,094无形资产摊销1,013 1,670 4,0986,685研发费用-- 623 8491,598投资跌价和应收账款坏帐准备-- 11 (1,206)(206)重置成本和其他费用-- 320 2,7552,040---------------------------------------------------------------------费用总额14,394 13,776 53,009 55,899---------------------------------------------------------------------主营业务利润(亏损)486 (1,736) 23,500(3,524)其他业务利润26,078 29 26,367669利息净支出198 (278) (663)(1,364)少数股东权益(951) (1,060) (6,953)(4,672)股权投资收益490 -- 2,057 -----------------------------------------------------------------------税前利润26,301 (3,045) 44,308(8,891)税收支出(206) 119 (600)(508)---------------------------------------------------------------------净利润$26,095 $ (2,926) $ 43,708 $ (9,399)---------------------------------------------------------------------摊薄每股收益$ 0.36 $ 0.04 $ 0.61$(0.15)发行在外的普通股数量（加权）71,846 66,046 71,08864,4132004年，公司现金头寸增长了179%，达到8450万美元，由于公司参股的主要从事黄斑变性业务的OccuLogix IPO成功，合并报表后的现金头寸达到1.44亿美元。