高效液相法测定维生素B2原料药的含量

合集下载

HPLC法测定维生素B2片的含量及有关物质

用于维生素Ｂ，片的质量控制。
该方法操作方便、准确，灵敏度高，专属性强，可
关键词：维生素Ｂ片；高效液相色谱法；含量测定；有关物质
ＨＰＬＣｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｉｔａｍｉｎＢ．ｔａｂｌｅｔｓ
安徽医药ＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ２０１３Ｆｅｂ；１７（２）
ＨＰＬＣ法测定维生素Ｂ２片的含量及有关物质
谢子立
ｔｗｅｅｎｐｅａｋａｒｅａａｎｄｖｉｔａｍｉｎＢ２ｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０．１１１７～０．８９３８ｘＩｇ，ｗｉｔｈｒｏｆ１．０００．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙ（ｎ＝９）ｗａｓ
Ｃｌ８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ｍ）ｗａｓａｄｏｐｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆａｍｉｘｔｕｒｅｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ — ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一１０ｍｍｏｌ・Ｌｓｏｄｉｕｍｈｅｐｔａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎ（０．５％ｇｌａｃｉａｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）（５：１０：８５）．Ｔｈｅｌｆｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ・ａｒｉｎａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｅｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ４４４

维生素B2片分析方法验证方案

一．概述1.维生素B2片含量测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。

1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0. Olmol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇(85∶10∶5)为流动相；检测波长为444nm。

理论板数按维生素B2峰计算不低于2000。

1.2测定法避光操作。

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素B2 10mg)，置500ml量瓶中，加盐酸溶液(1→2)10ml，振摇使维生素B2 溶解，加水20ml，继续振摇数分钟，再加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品约10mg，同法测定。

按外标法以峰面积计算，即得。

1.3本品含维生素B2计算，应为标示量的90.0% ～110.0%。

2. 维生素B2片溶出度测定：照溶出度与释放度测定法（通则0931第二法）测定法避光操作。

取本品，以冰醋酸3ml与4%氢氧化钠溶液18ml用水稀释至600ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经20分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液，照紫外-可分光光度法（通则0401)，在444nm的波长处测定吸光度，按C17H20N4O6的吸收系数()为323计算每片的溶出量。

限度为标示量的75%，应符合规定。

3. 维生素B2片有关物质测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件照含量测定。

避光操作。

取本品的细粉适量（约相当于维生素B2 10mg)，置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（1→2)5ml，振摇使维生素B2溶解，加水10ml，继续振摇数分钟，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

精密量取供试品溶液与对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.75倍(1.5% ) ，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（3.0% )。

高效液相法测定维生素B2原料药的含量

高效液相法测定维生素Ｂ２原料药的含量作者：唐红梅罗文华陈华樊宇戎张金莲来源：《中国医药导报》2009年第01期[摘要] 目的：建立HPLC法测定维生素B2的含量方法。

方法：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）；流动相为甲醇-0.35%磷酸的0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液(26∶74)；检测波长267 nm；流速1.0 ml/min；柱温35℃。

结果：维生素B2在1.5～12 μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为Y=94.617 65X-0.467 68（r=0.999 95，n=6），低、中、高三种浓度的回收率分别为99.48%、99.26%、100.54%，RSD分别为0.37%、0.18%、0.18%。

结论：该法快速、准确，灵敏度高，重现性好，可用于维生素B2的质量控制。

[关键词] 维生素B2；高效液相色谱法；含量测定[中图分类号] R927.2[文献标识码]Ｂ [文章编号]1673-7210（2009）01（a）-045－０3Determination of vitamin B2 in vitamin B2 bulk drug with HPLCTANG Hong-mei1, LUO Wen-Hua1*, CHEN Hua1 , FAN Yu- rong1,ZHANG Jin -lian2（1.Jiangzhong Pharmaceutical Co.LTD.,Nanchang330004, China; 2. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang330004, China）[Abstract] Objective: To establish a HPLC method for the determination of content of vitamin B2 in vitamin B2 bulk drug. Methods: The Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）was used, mobile phase was methanol-0.35%phosphoric acid and 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate solution (26∶74) with the flow rate of 1.0 ml/min, detected wavelength was set at 267 nm, column temperature was 35℃. Results: The calibration curve was linear at the range of 1.5-12 μg/ml for vitamin B2. The linear equation was Y=94.617 65X-0.467 68(r=0.999 95, n=6), The average recovery of vitamin B2 in the low, medium and high concentrations were 99.48%, 99.26% and 100.54%, respectively; RSD were 0.37%, 0.18%, 0.18%, respectively. Conclusion: This method is rapid, accurate, high sensitivity and good reproducibility, it can be used for quality control of vitamin B2 bulk drug.[Key words] Vitamin B2; HPLC; Determination维生素B2，又名核黄素，为水溶性维生素，容易消化和吸收。

HPLC法测定维生素B2片的含量

54• 实验研究 •下午4时最高，入睡后由于血液流动相对缓慢，血液黏稠度增加，若于此时加服降高血压药物，就会使血压进一步下降，易引起有脑动脉硬化的高血压患者形成脑血栓，故不宜在睡前服用。

建议降高血压药根据药物半衰期在早晨7时一次给药，或上午、下午两次给药。

2.5 糖皮质激素类肾上腺皮质激素在体内有昼夜节律，长期应用突然停药可能发生肾上腺功能不全，引起严重后果，导致肾上腺皮质功能和其他功能的昼夜节律紊乱，如果在体内血液中皮质激素的自然峰值时（早晨7~8时）一次性给药，则对脑下垂体促皮质激素释放的抑制程度要比通常平均分为3~4次的给药方法轻得多，因此，应将皮质激素的药物给药每日总量在每日或隔日的早晨一次性给药，达到更合理的用药目的，如用泼尼松、地塞米松等在肿瘤化疗前和控制某些慢性疾病时，采用隔日给药法，即把48h用药量在早饭后8时左右1次服用，其疗效较每日用药好，而且不良反应小。

2.6 强心苷类心力衰竭患者对西地兰、地高辛等药物的敏感性以凌晨4时最高，比其他时间给药的效应高达40倍。

因此，如果需要早晨注射强心苷药物时应减少剂量，否则易出现毒性反应。

2.7 抗癌类根据有关资料和临床实践表明，上午10时是抗癌药物使用的最佳时间，因为癌细胞的DNA在每天上午10繁殖复制速度最快，晚上10时最慢，如：用抗癌药（阿糖胞苷）治疗白血病时最好是上午8~11时给药，而此时用药的毒性也最小。

2.8 胰岛素降血糖药糖尿病患者有“拂晓现象”的特点，对胰岛素的敏感时间大约在早晨，若此时给予最低剂量，便可获得最满意的疗效，故胰岛素降血糖药的使用，在上午给药要比下午给药好。

2.9 解热镇痛抗风湿阿司匹林在早晨服药的生物利用度较晚间服药者大，其体内消除速率慢，半衰期长，血药浓度高，建议早晨一次性服用。

吲哚美辛上午7时口服可达最高血浓度，不达到峰值也较其他时间服药时快；如在19时服药，血药浓度峰值则较24平均值低20%。

风湿、类风湿病患者常服吲哚美辛，不良反应较大，因此，为提高疗效减少不良反应，早晨剂量宜小，晚间剂量宜大。

2013HPLC法测定维生素B_2片的含量及有关物质_谢子立

HPLC法测定维生素B2片的含量及有关物质谢子立(安徽省食品药品检验所，安徽合肥230051)摘要：目的建立高效液相色谱法测定维生素B2片的含量和有关物质。

方法采用C18色谱柱（250mmˑ4．6mm，5μm）；以甲醇—乙腈—10mmol·L－1庚烷磺酸钠溶液（含冰醋酸为0．5%）（5ʒ10ʒ85）为流动相；检测波长：444nm；流速：1．0mL·min－1。

结果在建立的色谱条件下，维生素B2能与杂质完全分离；维生素B2在0．1117 0．8938μg范围内线性关系良好，r=1．000；平均回收率为100．5%（n=9）；测定维生素B2的最小检出量为2．2ng。

结论该方法操作方便、准确，灵敏度高，专属性强，可用于维生素B2片的质量控制。

关键词：维生素B2片；高效液相色谱法；含量测定；有关物质HPLC determination of vitamin B2tabletsXIE Zi-li（Anhui Institute for Food and Drug Control，Hefei230051，China）Abstract：Objective To establish a method for the determination of content and related substances for vitamin B2tablets．MethodsC18column（250mmˑ4．6mm，5μm）was adopted with the mobile phase of a mixture of methanol-acetonitrile-10mmol·L－1sodium heptanesulfonate solution（0．5%glacial acetic acid）（5ʒ10ʒ85）．The flow rate was1．0mL·min－1and the detection wavelength was444nm．Results Under the described chromatographic condition，vitamin B2was completely separated from its impurities．A linearity be-tween peak area and vitamin B2was achieved in the range of0．1117 0．8938μg，with r of1．000．The average recovery（n=9）was 100．5%．The lowest detectable amount was2．2ng．Conclusion The method is convenient，accurate，specific and sensitive and can beused for quality control of vitamin B2tablets．Key words：vitamin B2tablets；HPLC；content；related substances维生素B2别名维他命B2、核黄素等，它是人体多种辅酶的重要组成部分，临床用于治疗口角炎、眼结膜炎、脂溢性皮炎以及阴囊炎等。

HPLC法测定复合维生素B片中四种成分的含量

ＨＰＬＣ法测定复合维生素Ｂ片中四种成分的含量目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定复合维生素B片中烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2 四种成分的含量。

方法：采用C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.005 mol/L己烷磺酸钠-甲醇-冰醋酸（70∶30∶0.5）；流速为1.0 ml/min；检测波长：278 nm；柱温30℃。

结果：烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2分别在100.92~605.52、21.24~127.44、97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

结论：本方法简便、快速，可用于复合维生素B片的质量控制。

[Abstract]Objective:To establish a HPLC method for contents determination of the four components in Compound Vitamin B Tablets. Methods: The HPLC system consisted of C18 column(150 mm×4.6 mm,5 μm), 0.005 mol/L sodium hexane sulfonate-methanol-glacial acetic acid(70∶30∶0.5) as the mobile phase with the flow rate of 1.0ml/min ,and 278 nm as the detective length.Results:The linear ranges of nicotinamide,vitamin B6,vitamin B1 and vitamin B2 were 100.92~605.52,21.24~127.44,97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml respectively.Conclusion:This method is simple,rapid and it can be used for the qulity control of Compound Vitamin B Tablets.[Key words]HPLC; Compound Vitamin B Tablets; Nicotinamide;Vitamin B6;Vitamin B1; Vitamin B2;Contents复合维生素B片是由烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2四种成分组成的复方制剂。

高效液相法测定维生素B2原料药的含量

高效液相法测定维生素Ｂ2原料药的含量目的：建立HPLC法测定维生素B2的含量方法。

结论：该法快速、准确，灵敏度高，重现性好，可用于维生素B2的质量控制。

[Abstract] Objective: To establish a HPLC method for the determination of content of vitamin B2 in vitamin B2 bulk drug. Methods: The Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）was used, mobile phase was methanol-0.35%phosphoric acid and 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate solution (26∶74) with the flow rate of 1.0 ml/min, detected wavelength was set at 267 nm, column temperature was 35℃. Results: The calibration curve was linear at the range of 1.5-12 μg/ml for vitamin B2. The linear equation was Y=94.617 65X-0.467 68(r=0.999 95, n=6), The average recovery of vitamin B2 in the low, medium and high concentrations were 99.48%, 99.26% and 100.54%, respectively; RSD were 0.37%, 0.18%, 0.18%, respectively. Conclusion: This method is rapid, accurate, high sensitivity and good reproducibility, it can be used for quality control of vitamin B2 bulk drug.[Key words] Vitamin B2; HPLC; Determination维生素B2，又名核黄素，为水溶性维生素，容易消化和吸收。

紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法测定维生素B2片含量的实验设计

紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法测定维生素B2片含量的实验设计紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法测定维生素B2片含量的实验设计摘要：本实验旨在通过紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法（UV-FLD/HPLC）来测定维生素B2片的含量。

实验中使用的设备包括：紫外-荧光检测器、高效液相色谱仪、分析天平以及所需的试剂和溶剂。

实验采用标准曲线法定量分析维生素B2片含量，首先，制备维生素B2片样品；其次，选择合适的色谱条件，包括流动相的成分和流动相梯度条件；然后，利用紫外-荧光检测器进行测定并建立标准曲线；最后，通过对样品的分析，计算维生素B2片含量。

实验结果表明，所建立的紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法能够准确、快速地分析维生素B2片的含量。

关键词：维生素B2片；紫外-荧光检测器；高效液相色谱法；标准曲线法1. 引言维生素B2（Riboflavin）是一种重要的水溶性维生素，对机体的正常运作具有重要作用。

因此，准确测定维生素B2的含量对于保证食品、药品的质量具有重要意义。

传统的测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和荧光光谱法等。

本实验选用紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法（UV-FLD/HPLC）进行维生素B2片的含量测定。

2. 实验原理紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法的基本原理是基于样品分子在光激发下发生吸收、荧光现象。

首先，样品经过高效液相色谱柱分离；然后，样品在紫外-可见光区（200-400 nm）吸收紫外光，进而被激发发出荧光；最后，通过紫外-荧光检测器检测到的荧光信号进行定量分析。

3. 实验步骤3.1 制备维生素B2片样品依据维生素B2片含量分别称取不同质量的维生素B2片，粉碎并均匀混合，以蒸馏水溶解并定容至适量。

然后，进行过滤以获得清澈的维生素B2片样品。

3.2 色谱条件的选择选择合适的流动相，并利用梯度洗脱条件进行实验。

以甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液（pH=7）（75:25:10, v/v/v）为流动相，在色谱柱中进行分离。

食品中维生素B2的测定

食品安全国家标准食品中维生素B2的测定1范围本标准规定了食品中维生素B2的测定方法㊂本标准第一法为高效液相色谱法,第二法为荧光分光光度法,适用于各类食品中维生素B2的测定㊂第一法高效液相色谱法2原理试样在稀盐酸环境中恒温水解,调p H至6.0~6.5,用木瓜蛋白酶和高峰淀粉酶酶解,定容过滤后,滤液经反相色谱柱分离,高效液相色谱荧光检测器检测,外标法定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1盐酸(H C l)㊂3.1.2冰乙酸(C H3C O OH)㊂3.1.3氢氧化钠(N a O H)㊂3.1.4三水乙酸钠(C H3C O O N a㊃3H2O)㊂3.1.5甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.6木瓜蛋白酶:活力单位ȡ10U/m g㊂3.1.7高峰淀粉酶:活力单位ȡ100U/m g,或性能相当者㊂3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液(0.1m o l/L):吸取9m L盐酸,用水稀释并定容至1000m L㊂3.2.2盐酸溶液(1+1):量取100m L盐酸,缓慢倒入100m L水中,混匀㊂3.2.3氢氧化钠溶液(1m o l/L):准确称取4g氢氧化钠,加90m L水溶解,冷却后定容至100m L㊂3.2.4乙酸钠溶液(0.1m o l/L):准确称取13.60g三水乙酸钠,加900m L水溶解,用水定容至1000m L㊂3.2.5乙酸钠溶液(0.05m o l/L):准确称取6.80g三水乙酸钠,加900m L水溶解,用冰乙酸调p H至4.0~5.0,用水定容至1000m L㊂3.2.6混合酶溶液:准确称取2.345g木瓜蛋白酶和1.175g高峰淀粉酶,加水溶解后定容至50m L㊂临用前配制㊂3.2.7盐酸溶液(0.012m o l/L):吸取1m L盐酸,用水稀释并定容至1000m L㊂3.3标准品维生素B2(C17H20N4O6,C A S号:83-88-5):纯度ȡ98%㊂3.4标准溶液配制3.4.1维生素B2标准储备液(100μg/m L):将维生素B2标准品置于真空干燥器或装有五氧化二磷的干燥器中干燥处理24h后,准确称取10m g(精确至0.1m g)维生素B2标准品,加入2m L盐酸溶液(1+1)超声溶解后,立即用水转移并定容至100m L㊂混匀后转移入棕色玻璃容器中,在4ħ冰箱中贮存,保存期2个月㊂标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参见附录A㊂3.4.2维生素B2标准中间液(2.00μg/m L):准确吸取2.00m L维生素B2标准储备液,用水稀释并定容至100m L㊂临用前配制㊂3.4.3维生素B2标准系列工作液:分别吸取维生素B2标准中间液0.25m L㊁0.50m L㊁1.00m L㊁2.50m L㊁5.00m L,用水定容至10m L,该标准系列浓度分别为0.05μg/m L㊁0.10μg/m L㊁0.20μg/m L㊁0.50μg/m L㊁1.00μg/m L㊂临用前配制㊂4仪器和设备4.1高效液相色谱仪:带荧光检测器㊂4.2天平:感量为1m g和0.01m g㊂4.3高压灭菌锅㊂4.4p H计:精度0.01㊂4.5涡旋振荡器㊂4.6组织捣碎机㊂4.7恒温水浴锅㊂4.8干燥器㊂4.9分光光度计㊂5分析步骤5.1试样制备取样品约500g,用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用㊂称取2g~10g(精确至0.01g)均质后的试样(试样中维生素B2的含量大于5μg)于100m L具塞锥形瓶中,加入60m L的0.1m o l/L盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞㊂将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在121ħ下保持30m i n,冷却至室温后取出㊂用1m o l/L氢氧化钠溶液调p H至6.0~6.5,加入2m L混合酶溶液,摇匀后,置于37ħ培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解㊂将酶解液转移至100m L容量瓶中,加水定容至刻度,用滤纸过滤或离心,取滤液或上清液,过0.45μm水相滤膜作为待测液㊂注:操作过程应避免强光照射㊂不加试样,按同一操作方法做空白试验㊂5.2仪器参考条件a)色谱柱:C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,填料粒径5μm,或相当者;b)流动相:乙酸钠溶液(0.05m o l/L)-甲醇(65ʒ35);c)流速:1m L/m i n;d)柱温:30ħ;e)检测波长:激发波长462n m,发射波长522n m;f)进样体积:20μL㊂5.3标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线㊂5.4试样溶液的测定将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到相应的峰面积,根据标准曲线得到待测液中维生素B2的浓度㊂5.5空白试验要求空白试验溶液色谱图中应不含待测组分峰或其他干扰峰㊂6分析结果的表述试样中维生素B2的含量按式(1)计算:X=ρˑVmˑ1001000 (1)式中:X 试样中维生素B2(以核黄素计)的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 根据标准曲线计算得到的试样中维生素B2的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液的最终定容体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);100 换算为100克样品中含量的换算系数;1000 将浓度单位μg/m L换算为m g/m L的换算系数㊂结果保留三位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他当取样量为10.00g时,方法检出限为0.02m g/100g,定量限为0.05m g/100g㊂第二法荧光分光光度法9原理维生素B2在440n m~500n m波长光照射下发生黄绿色荧光㊂在稀溶液中其荧光强度与维生素B2的浓度成正比㊂在波长525n m下测定其荧光强度㊂试液再加入连二亚硫酸钠,将维生素B2还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为试样中维生素B2所产生的荧光强度㊂10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂10.1试剂10.1.1盐酸(H C l)㊂10.1.2冰乙酸(C H3C O O H)㊂10.1.3氢氧化钠(N a O H)㊂10.1.4三水乙酸钠(C H3C O O N a㊃3H2O)㊂10.1.5木瓜蛋白酶:活力单位ȡ10U/m g㊂10.1.6高峰淀粉酶:活力单位ȡ100U/m g,或性能相当者㊂10.1.7硅镁吸附剂:50μm~150μm㊂10.1.8丙酮(C H3C O C H3)㊂10.1.9高锰酸钾(KM n O4)㊂10.1.10过氧化氢(H2O2):30%㊂10.1.11连二亚硫酸钠(N a2S2O4)㊂10.2试剂配制10.2.1盐酸溶液(0.1m o l/L):吸取9m L盐酸,用水稀释并定容至1000m L㊂10.2.2盐酸溶液(1+1):量取100m L盐酸,缓慢倒入100m L水中,混匀㊂10.2.3乙酸钠溶液(0.1m o l/L):准确称取13.60g三水乙酸钠,加900m L水溶解,用水定容至1000m L㊂10.2.4氢氧化钠溶液(1m o l/L):准确称取4g氢氧化钠,加90m L水溶解,冷却后定容至100m L㊂10.2.5混合酶溶液:准确称取2.345g木瓜蛋白酶和1.175g高峰淀粉酶,加水溶解后定容至50m L㊂临用前配制㊂10.2.6洗脱液:丙酮-冰乙酸-水(5+2+9,体积比)㊂10.2.7高锰酸钾溶液(30g/L):准确称取3g高锰酸钾,用水溶解后定容至100m L㊂10.2.8过氧化氢溶液(3%):吸取10m L30%过氧化氢,用水稀释并定容至100m L㊂10.2.9连二亚硫酸钠溶液(200g/L):准确称取20g连二亚硫酸钠,用水溶解后定容至100m L㊂此溶液用前配制,保存在冰水浴中,4h内有效㊂10.3标准品维生素B2(C17H20N4O6,C A S号:83-88-5):纯度ȡ98%㊂10.4标准溶液配制10.4.1维生素B2标准储备液(100μg/m L):将维生素B2标准品置于真空干燥器或装有五氧化二磷的干燥器中干燥处理24h后,准确称取10m g(精确至0.1m g)维生素B2标准品,加入2m L盐酸溶液(1+1)超声溶解后,立即用水转移并定容至100m L㊂混匀后转移入棕色玻璃容器中,在4ħ冰箱中贮存,保存期2个月㊂标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参见附录A㊂10.4.2维生素B2标准中间液(10μg/m L):准确吸取10m L维生素B2标准储备液,用水稀释并定容至100m L㊂在4ħ冰箱中避光贮存,保存期1个月㊂10.4.3维生素B2标准使用溶液(1μg/m L):准确吸取10m L维生素B2标准中间液,用水定容至100m L㊂此溶液每毫升相当于1.00μg维生素B2㊂在4ħ冰箱中避光贮存,保存期1周㊂11仪器和设备11.1荧光分光光度计㊂11.2天平:感量为1m g和0.01m g㊂11.3高压灭菌锅㊂11.4p H计:精度0.01㊂11.5涡旋振荡器㊂11.6组织捣碎机㊂11.7恒温水浴锅㊂11.8干燥器㊂11.9维生素B2吸附柱㊂12分析步骤12.1试样制备12.1.1试样的水解取样品约500g,用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用㊂称取2g~10g(精确至0.01g,约含10μg~200μg维生素B2)均质后的试样于100m L具塞锥形瓶中,加入60m L0.1m o l/L的盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞㊂将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在121ħ下保持30m i n,冷却至室温后取出㊂用氢氧化钠溶液调p H至6.0~6.5㊂12.1.2试样的酶解加入2m L混合酶溶液,摇匀后,置于37ħ培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解㊂12.1.3过滤将上述酶解液转移至100m L容量瓶中,加水定容至刻度,用干滤纸过滤备用㊂此提取液在4ħ冰箱中可保存一周㊂注:操作过程应避免强光照射㊂12.2氧化去杂质视试样中核黄素的含量取一定体积的试样提取液(约含1μg~10μg维生素B2)及维生素B2标准使用溶液分别置于20m L 的带盖刻度试管中,加水至15m L ㊂各管加0.5m L 冰乙酸,混匀㊂加0.5m L 30g /L 高锰酸钾溶液,摇匀,放置2m i n ,使氧化去杂质㊂滴加3%过氧化氢溶液数滴,直至高锰酸钾的颜色褪去㊂剧烈振摇试管,使多余的氧气逸出㊂12.3 维生素B 2的吸附和洗脱12.3.1 维生素B 2吸附柱硅镁吸附剂约1g 用湿法装入柱,占柱长1/2~2/3(约5c m )为宜(吸附柱下端用一小团脱脂棉垫上),勿使柱内产生气泡,调节流速约为60滴/m i n ㊂注:可使用等效商品柱㊂12.3.2 过柱与洗脱将全部氧化后的样液及标准液通过吸附柱后,用约20m L 热水淋洗样液中的杂质㊂然后用5m L洗脱液将试样中维生素B 2洗脱至10m L 容量瓶中,再用3m L ~4m L 水洗吸附柱,洗出液合并至容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀后待测定㊂12.4 标准曲线的制备分别精确吸取维生素B 2标准使用液0.3m L ㊁0.6m L ㊁0.9m L ㊁1.25m L ㊁2.5m L ㊁5.0m L ㊁10.0m L ㊁20.0m L (相当于0.3μg ㊁0.6μg ㊁0.9μg ㊁1.25μg ㊁2.5μg ㊁5.0μg ㊁10.0μg ㊁20.0μg 维生素B 2)或取与试样含量相近的单点标准按12.2和12.3操作㊂12.5 试样溶液的测定于激发光波长440n m ,发射光波长525n m ,测量试样管及标准管的荧光值㊂待试样管及标准管的荧光值测量后,在各管的剩余液(约5m L~7m L )中加0.1m L20%连二亚硫酸钠溶液,立即混匀,在20s内测出各管的荧光值,作各自的空白值㊂13 分析结果的表述试样中维生素B 2的含量按式(2)计算:X =(A -B )ˑS (C -D )ˑm ˑf ˑ1001000 (2)式中:X试样中维生素B 2(以核黄素计)的含量,单位为毫克每百克(m g /100g );A试样管的荧光值;B试样管空白荧光值;S标准管中维生素B 2的质量,单位为微克(μg );C标准管的荧光值;D标准管空白荧光值;m试样质量,单位为克(g);f 稀释倍数;100 换算为100克样品中含量的换算系数;1000 将浓度单位μg /100g 换算为m g /100g 的换算系数㊂计算结果保留至小数点后两位㊂。

高效液相色谱法测定保健食品中维生素B2的含量

前处理烦琐、检测周期长、成本高，不适用于基质相对简单的保健食品。中国药典采用的高效液相色谱 - 紫外检测法 [3]，前处理简单，但适用于成分单一
1 材料与方法 1.1 仪器与材料
的维生素 B2 片，对于添加多种维生素和矿物质的保
e2695 高效液相色谱仪，配紫外检测器（美国
检测波长：268 nm；进样体积：5 µL；流动相 A：乙前处理后上机测定。
腈；流动相 B：25 mmol/L 磷酸氢二钾溶液（用磷酸
（6）稳定性试验。取同一批样品前处理后，分别
调至 pH 5.0 ～ 7.0），梯度洗脱程序见表 1。
放置 0 h、6 h、12 h、24 h、36 h 和 48 h 后上机测定。
关键词：高效液相色谱法；保健食品；维生素 B2
Determination of Vitamin B2 in Healthy Food by High Performance Liquid Chromatography
LI Yu, HUANG Meishan, CHENG Linlin
(Infinitus (Yingkou) Co., Ltd., Yingkou 115000, China)
1.2.1 色谱条件
据响应值将标准溶液逐级稀释。以 3 倍信噪比时的
色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（4.6 mm× 浓度作为检出限；以 10 倍信噪比时的浓度作为定量 150 mm，2.7 µm）；流速：0.8 mL/min；柱温：25 ℃；限，取 6 份空白样品，加入定量限浓度的标准溶液，
序号本底值 /mg 加标量 /mg 测定值 /mg 回收率 /% 因此检出限为 0.52 µg/mL；标准溶液稀释到 10 倍信

高效液相色谱法测定障翳散中维生素B_2含量

１仪器与试药
２方法与结果
２１色谱条件ＺＲＡＢ色谱柱（．ｍ× ．ＯＢＸＳ —Ｃ４６ｍ２０ｍｍ，ｍ）流动相为甲醇一（９：１，速５５，水２７）流
１０ｍｒｎ柱温３．Ｌ・ｉ～，ａ０℃ ，测波长２７ｎ进样量检６ｍ，１，０理论塔板数按维生素Ｂ峰计算应 ≥２００：０。在此色谱条件下，生素Ｂ与其他组分能达到基线分维
方翠芬余潇苓俞建平，，
（．１浙江省食品药品检验所，州杭
［摘要］目的
３００２浙江省中医院，州１０４；．杭
３０１）１０６
建立高效液相色谱法测定障翳散中维生素的含量。方法以维生素Ｂ为对照品，ＯＢＸＳＺＲＡＢ
人民卫生出版社，０１３３２０：４．
的分离度最好，故选择０００５ｔｏ・。酸溶液作为．１ｌＬ硫ｏ
流动相。
３４检测波长的选择．
经二极管阵列检测器在线扫
高效液相色谱法测定障翳散中维生素Ｂ含量２
［］陆２
晓，李颖颖，李
飞．一酮缬氨酸钙的合成【］药学Ｊ．
液作流动相，０００５ｍｏ・。酸溶液作流动相时以．１ｌＬ硫
进展，０９３（）３ — ９２０，１１：７３．
［］国家药典委员会．３中华人民共和国药典（二部）ｚ．［］北京：化学工业出版社，０５附录１２２０：７．［］周海钧．４药品注册的国际技术要求质量部分［．Ｍ］北京：

紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法测定维生素B2片含量的实验设计

196Univ. Chem. 2023, 38 (9), 196–201收稿：2022-11-23；录用：2023-01-03；网络发表：2023-01-31*通讯作者，Email:*******************基金资助：上海交通大学医学院课程建设基金项目(BJ130********)•化学实验• doi: 10.3866/PKU.DXHX202211056 紫外-荧光检测器串联高效液相色谱法测定维生素B 2片含量的实验设计谢一凡1,2，姚莉韵1,2,*，杨若林2，蔡玉兴1，金玉杰1，李宁11上海交通大学医学院，基础医学实验教学中心，上海 2000252上海交通大学医学院，药物化学与生物信息学中心，上海 200025摘要：设计一种紫外检测器(UVD)与荧光检测器(FLD)串联的高效液相色谱法(HPLC)测定维生素B 2片含量的方法，并应用于实验教学。

该实验方案能克服常规HPLC 法(单一检测器)存在的缺限，同时实验过程中学生不仅掌握了HPLC 的操作，而且能了解UVD 和FLD 的原理及应用，利于培养学生的综合检测能力和拓展思维能力。

关键词：高效液相色谱法；紫外-荧光双检测器；维生素B 2片；含量测定；实验教学中图分类号：G64；O657.7+2Experimental Design for HPLC Determination of Vitamin B 2 in Tablets via UVD-FLD Connected in SeriesYifan Xie 1,2, Liyun Yao 1,2,*, Ruolin Yang 2, Yuxing Cai 1, Yujie Jin 1, Ning Li 11 Basic Medical Experimental Teaching Center, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200025, China.2 Medical Chemistry and Bioinformatics Center, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200025, China.Abstract: The high performance liquid chromatography (HPLC) method of UV detector-fluorescence detector (UVD-FLD) connected in series for the determination of vitamin B 2 in tablets was designed as a teaching experiment. This method can overcome the limitations of common HPLC by a single detector. Through the application of this method for experimental teaching, students could not only master the basic theory and operation of HPLC, but also understand the principles and functions of UVD and FLD. Furthermore, it also improved the undergraduate students’ experimental skill and comprehension.Key Words: HPLC; UV detector-fluorescence detector; Vitamin B 2; Contentdetermination; Laboratory teaching维生素B 2也称核黄素(化学结构见图1)，缺乏可引起口角炎、舌炎、贫血等[1]。

提取时间和温度对高效液相色谱法测定维生素预混合饲料中维生素B2含量的影响

含量的检测结果。其中，维生素 B2 是 B 族维生素
[5]
的一种，是动物体内黄酶类辅基的组成部分，当缺
乏时会影响机体的生物氧化，发生代谢障碍
[6- 9]
。
同时维生素 B2 在日常环境中并不稳定，易受光
照、金属离子等因素影响降低其活性[10-11]，因此维
生素 B2 是监督检测部门检测的一个重要参数。
gradients at 80, 90 ℃ and 100 ℃, the extraction time was set as four gradients at 20, 30, 40 min, and 50 min. The
cross test was conducted on 12 groups of each sample, with three replicates in each group. The results showed that
产过程中，需要加入适量的维生素预混合饲料以维
纯）、三乙胺（分析纯），国药集团化学试剂有限公
持动物体正常的生长和发育
[1-4]
。维生素预混合饲
料主要是由多种维生素饲料添加剂与载体或稀释剂
配制而成，载体主要分为有机载体和无机载体，不
同的载体不仅影响预混合饲料的混合质量、添加剂
的稳定性和活性，也因其成分的复杂性影响维生素
liquid chromatography
维生素是维持动物体健康所必需的一类有机化
二水合乙二胺四乙酸二钠（EDTA，优级纯）、
合物，动物体自身不能合成或合成量不能满足动物
庚烷磺酸钠（优级纯），上海麦克林生化科技股份有
体需求，必须从食物中获取，因此在动物饲料的生

高效液相法测定维生素B2原料药的含量

高效液相法测定维生素B2原料药的含量唐红梅;罗文华;陈华;樊宇戎;张金莲【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2009(6)1【摘要】目的:建立HPLC法测定维生素B2的含量方法.方法:色谱柱为Agilent ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm,3.5μm);流动相为甲醇-0.35%磷酸的0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液(26:74);检测波长267 nm;流速1.0 ml/min;柱温35℃.结果:维生素B2在1.5～12 μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为Y=94.617 65X-0.467 68(r=0.999 95,n=6),低、中、高三种浓度的回收率分别为99.48%、99.26%、100.54%,RSD分别为0.37%、0.18%、0.18%.结论:该法快速、准确,灵敏度高,重现性好,可用于维生素B2的质量控制.【总页数】3页(P45-47)【作者】唐红梅;罗文华;陈华;樊宇戎;张金莲【作者单位】江中药业股份有限公司,江西南昌,330004;江中药业股份有限公司,江西南昌,330004;江中药业股份有限公司,江西南昌,330004;江中药业股份有限公司,江西南昌,330004;江西中医学院,江西南昌,330004【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.高效液相色谱法测定五维葡钙口服溶液中维生素B1、维生素B2的含量 [J], 刘元欢;彭建梅;罗燕;陈东波2.高效液相色谱法测定六维胶丸中维生素B1、维生素B2、烟酰胺含量 [J], 海彩虹;董锦燕;盛爱军3.反相高效液相色谱法测定复方肝浸膏片中维生素B1、维生素B2的含量 [J], 曾玉梅4.高效液相色谱法测定复方肝泰乐胶囊中维生素B1、维生素B2、烟酰胺和苯巴比妥含量 [J], 杨帆;李海英5.高效液相色谱法测定功能性饮料中维生素B1、维生素B2含量 [J], 黄伟志; 黄桂东; 钟先锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

食品中维生素B2的测定

食品安全国家标准食品中维生素B2的测定1范围本标准规定了食品中维生素B2的测定方法㊂本标准第一法为高效液相色谱法,第二法为荧光分光光度法,适用于各类食品中维生素B2的测定㊂第一法高效液相色谱法2原理试样在稀盐酸环境中恒温水解,调p H至6.0~6.5,用木瓜蛋白酶和高峰淀粉酶酶解,定容过滤后,滤液经反相色谱柱分离,高效液相色谱荧光检测器检测,外标法定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1盐酸(H C l)㊂3.1.2冰乙酸(C H3C O OH)㊂3.1.3氢氧化钠(N a O H)㊂3.1.4三水乙酸钠(C H3C O O N a㊃3H2O)㊂3.1.5甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.6木瓜蛋白酶:活力单位ȡ10U/m g㊂3.1.7高峰淀粉酶:活力单位ȡ100U/m g,或性能相当者㊂3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液(0.1m o l/L):吸取9m L盐酸,用水稀释并定容至1000m L㊂3.2.2盐酸溶液(1+1):量取100m L盐酸,缓慢倒入100m L水中,混匀㊂3.2.3氢氧化钠溶液(1m o l/L):准确称取4g氢氧化钠,加90m L水溶解,冷却后定容至100m L㊂3.2.4乙酸钠溶液(0.1m o l/L):准确称取13.60g三水乙酸钠,加900m L水溶解,用水定容至1000m L㊂3.2.5乙酸钠溶液(0.05m o l/L):准确称取6.80g三水乙酸钠,加900m L水溶解,用冰乙酸调p H至4.0~5.0,用水定容至1000m L㊂3.2.6混合酶溶液:准确称取2.345g木瓜蛋白酶和1.175g高峰淀粉酶,加水溶解后定容至50m L㊂临用前配制㊂3.2.7盐酸溶液(0.012m o l/L):吸取1m L盐酸,用水稀释并定容至1000m L㊂3.3标准品维生素B2(C17H20N4O6,C A S号:83-88-5):纯度ȡ98%㊂3.4标准溶液配制3.4.1维生素B2标准储备液(100μg/m L):将维生素B2标准品置于真空干燥器或装有五氧化二磷的干燥器中干燥处理24h后,准确称取10m g(精确至0.1m g)维生素B2标准品,加入2m L盐酸溶液(1+1)超声溶解后,立即用水转移并定容至100m L㊂混匀后转移入棕色玻璃容器中,在4ħ冰箱中贮存,保存期2个月㊂标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参见附录A㊂3.4.2维生素B2标准中间液(2.00μg/m L):准确吸取2.00m L维生素B2标准储备液,用水稀释并定容至100m L㊂临用前配制㊂3.4.3维生素B2标准系列工作液:分别吸取维生素B2标准中间液0.25m L㊁0.50m L㊁1.00m L㊁2.50m L㊁5.00m L,用水定容至10m L,该标准系列浓度分别为0.05μg/m L㊁0.10μg/m L㊁0.20μg/m L㊁0.50μg/m L㊁1.00μg/m L㊂临用前配制㊂4仪器和设备4.1高效液相色谱仪:带荧光检测器㊂4.2天平:感量为1m g和0.01m g㊂4.3高压灭菌锅㊂4.4p H计:精度0.01㊂4.5涡旋振荡器㊂4.6组织捣碎机㊂4.7恒温水浴锅㊂4.8干燥器㊂4.9分光光度计㊂5分析步骤5.1试样制备取样品约500g,用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用㊂称取2g~10g(精确至0.01g)均质后的试样(试样中维生素B2的含量大于5μg)于100m L具塞锥形瓶中,加入60m L的0.1m o l/L盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞㊂将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在121ħ下保持30m i n,冷却至室温后取出㊂用1m o l/L氢氧化钠溶液调p H至6.0~6.5,加入2m L混合酶溶液,摇匀后,置于37ħ培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解㊂将酶解液转移至100m L容量瓶中,加水定容至刻度,用滤纸过滤或离心,取滤液或上清液,过0.45μm水相滤膜作为待测液㊂注:操作过程应避免强光照射㊂不加试样,按同一操作方法做空白试验㊂5.2仪器参考条件a)色谱柱:C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,填料粒径5μm,或相当者;b)流动相:乙酸钠溶液(0.05m o l/L)-甲醇(65ʒ35);c)流速:1m L/m i n;d)柱温:30ħ;e)检测波长:激发波长462n m,发射波长522n m;f)进样体积:20μL㊂5.3标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线㊂5.4试样溶液的测定将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到相应的峰面积,根据标准曲线得到待测液中维生素B2的浓度㊂5.5空白试验要求空白试验溶液色谱图中应不含待测组分峰或其他干扰峰㊂6分析结果的表述试样中维生素B2的含量按式(1)计算:X=ρˑVmˑ1001000 (1)式中:X 试样中维生素B2(以核黄素计)的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 根据标准曲线计算得到的试样中维生素B2的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液的最终定容体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);100 换算为100克样品中含量的换算系数;1000 将浓度单位μg/m L换算为m g/m L的换算系数㊂结果保留三位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他当取样量为10.00g时,方法检出限为0.02m g/100g,定量限为0.05m g/100g㊂第二法荧光分光光度法9原理维生素B2在440n m~500n m波长光照射下发生黄绿色荧光㊂在稀溶液中其荧光强度与维生素B2的浓度成正比㊂在波长525n m下测定其荧光强度㊂试液再加入连二亚硫酸钠,将维生素B2还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为试样中维生素B2所产生的荧光强度㊂10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂10.1试剂10.1.1盐酸(H C l)㊂10.1.2冰乙酸(C H3C O O H)㊂10.1.3氢氧化钠(N a O H)㊂10.1.4三水乙酸钠(C H3C O O N a㊃3H2O)㊂10.1.5木瓜蛋白酶:活力单位ȡ10U/m g㊂10.1.6高峰淀粉酶:活力单位ȡ100U/m g,或性能相当者㊂10.1.7硅镁吸附剂:50μm~150μm㊂10.1.8丙酮(C H3C O C H3)㊂10.1.9高锰酸钾(KM n O4)㊂10.1.10过氧化氢(H2O2):30%㊂10.1.11连二亚硫酸钠(N a2S2O4)㊂10.2试剂配制10.2.1盐酸溶液(0.1m o l/L):吸取9m L盐酸,用水稀释并定容至1000m L㊂10.2.2盐酸溶液(1+1):量取100m L盐酸,缓慢倒入100m L水中,混匀㊂10.2.3乙酸钠溶液(0.1m o l/L):准确称取13.60g三水乙酸钠,加900m L水溶解,用水定容至1000m L㊂10.2.4氢氧化钠溶液(1m o l/L):准确称取4g氢氧化钠,加90m L水溶解,冷却后定容至100m L㊂10.2.5混合酶溶液:准确称取2.345g木瓜蛋白酶和1.175g高峰淀粉酶,加水溶解后定容至50m L㊂临用前配制㊂10.2.6洗脱液:丙酮-冰乙酸-水(5+2+9,体积比)㊂10.2.7高锰酸钾溶液(30g/L):准确称取3g高锰酸钾,用水溶解后定容至100m L㊂10.2.8过氧化氢溶液(3%):吸取10m L30%过氧化氢,用水稀释并定容至100m L㊂10.2.9连二亚硫酸钠溶液(200g/L):准确称取20g连二亚硫酸钠,用水溶解后定容至100m L㊂此溶液用前配制,保存在冰水浴中,4h内有效㊂10.3标准品维生素B2(C17H20N4O6,C A S号:83-88-5):纯度ȡ98%㊂10.4标准溶液配制10.4.1维生素B2标准储备液(100μg/m L):将维生素B2标准品置于真空干燥器或装有五氧化二磷的干燥器中干燥处理24h后,准确称取10m g(精确至0.1m g)维生素B2标准品,加入2m L盐酸溶液(1+1)超声溶解后,立即用水转移并定容至100m L㊂混匀后转移入棕色玻璃容器中,在4ħ冰箱中贮存,保存期2个月㊂标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参见附录A㊂10.4.2维生素B2标准中间液(10μg/m L):准确吸取10m L维生素B2标准储备液,用水稀释并定容至100m L㊂在4ħ冰箱中避光贮存,保存期1个月㊂10.4.3维生素B2标准使用溶液(1μg/m L):准确吸取10m L维生素B2标准中间液,用水定容至100m L㊂此溶液每毫升相当于1.00μg维生素B2㊂在4ħ冰箱中避光贮存,保存期1周㊂11仪器和设备11.1荧光分光光度计㊂11.2天平:感量为1m g和0.01m g㊂11.3高压灭菌锅㊂11.4p H计:精度0.01㊂11.5涡旋振荡器㊂11.6组织捣碎机㊂11.7恒温水浴锅㊂11.8干燥器㊂11.9维生素B2吸附柱㊂12分析步骤12.1试样制备12.1.1试样的水解取样品约500g,用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用㊂称取2g~10g(精确至0.01g,约含10μg~200μg维生素B2)均质后的试样于100m L具塞锥形瓶中,加入60m L0.1m o l/L的盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞㊂将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在121ħ下保持30m i n,冷却至室温后取出㊂用氢氧化钠溶液调p H至6.0~6.5㊂12.1.2试样的酶解加入2m L混合酶溶液,摇匀后,置于37ħ培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解㊂12.1.3过滤将上述酶解液转移至100m L容量瓶中,加水定容至刻度,用干滤纸过滤备用㊂此提取液在4ħ冰箱中可保存一周㊂注:操作过程应避免强光照射㊂12.2氧化去杂质视试样中核黄素的含量取一定体积的试样提取液(约含1μg~10μg维生素B2)及维生素B2标准使用溶液分别置于20m L 的带盖刻度试管中,加水至15m L ㊂各管加0.5m L 冰乙酸,混匀㊂加0.5m L30g /L 高锰酸钾溶液,摇匀,放置2m i n,使氧化去杂质㊂滴加3%过氧化氢溶液数滴,直至高锰酸钾的颜色褪去㊂剧烈振摇试管,使多余的氧气逸出㊂12.3 维生素B 2的吸附和洗脱12.3.1 维生素B 2吸附柱硅镁吸附剂约1g 用湿法装入柱,占柱长1/2~2/3(约5c m )为宜(吸附柱下端用一小团脱脂棉垫上),勿使柱内产生气泡,调节流速约为60滴/m i n㊂注:可使用等效商品柱㊂12.3.2 过柱与洗脱将全部氧化后的样液及标准液通过吸附柱后,用约20m L 热水淋洗样液中的杂质㊂然后用5m L洗脱液将试样中维生素B 2洗脱至10m L 容量瓶中,再用3m L ~4m L 水洗吸附柱,洗出液合并至容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀后待测定㊂12.4 标准曲线的制备分别精确吸取维生素B 2标准使用液0.3m L ㊁0.6m L ㊁0.9m L ㊁1.25m L ㊁2.5m L ㊁5.0m L ㊁10.0m L ㊁20.0m L (相当于0.3μg ㊁0.6μg ㊁0.9μg ㊁1.25μg ㊁2.5μg ㊁5.0μg ㊁10.0μg ㊁20.0μg 维生素B 2)或取与试样含量相近的单点标准按12.2和12.3操作㊂12.5 试样溶液的测定于激发光波长440n m ,发射光波长525n m ,测量试样管及标准管的荧光值㊂待试样管及标准管的荧光值测量后,在各管的剩余液(约5m L~7m L )中加0.1m L20%连二亚硫酸钠溶液,立即混匀,在20s内测出各管的荧光值,作各自的空白值㊂13 分析结果的表述试样中维生素B 2的含量按式(2)计算:X =(A -B )ˑS(C -D )ˑmˑf ˑ1001000 (2)式中:X试样中维生素B 2(以核黄素计)的含量,单位为毫克每百克(m g /100g );A 试样管的荧光值;B 试样管空白荧光值;S 标准管中维生素B 2的质量,单位为微克(μg );C 标准管的荧光值;D 标准管空白荧光值;m 试样质量,单位为克(g);f 稀释倍数;100换算为100克样品中含量的换算系数;1000 将浓度单位μg /100g 换算为m g/100g 的换算系数㊂计算结果保留至小数点后两位㊂14精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂15其他当取样量为10.00g时,方法检出限为0.006m g/100g,定量限为0.02m g/100g㊂附录 A维生素B 2标准溶液的浓度校正方法A .1 标准校正溶液的配制准确吸取1.00m L 维生素B 2标准储备液,加1.30m L0.1m o l /L 的乙酸钠溶液,用水定容到10m L ,作为标准测试液㊂A .2 对照溶液的配制准确吸取1.00m L0.012m o l /L 的盐酸溶液,加1.30m L0.1m o l /L 的乙酸钠溶液,用水定容到10m L ,作为对照溶液㊂A .3 吸收值的测定用1c m 比色杯于444n m 波长下,以对照溶液为空白对照,测定标准校正溶液的吸收值㊂A .4 标准溶液的浓度计算标准储备液的质量浓度按式(A.1)计算:ρ=A 444ˑ104ˑ10328(A.1)式中:ρ 标准储备液的质量浓度,单位为微克每毫升(μg /m L );A 444标准测试液在444n m 波长下的吸光度值;104将1%的标准溶液浓度单位换算为测定溶液浓度单位(μg /m L )的换算系数;10标准储备液的稀释因子;328 维生素B 2在444n m 波长下的百分吸光系数E 1%1c m ,即在444n m 波长下,液层厚度为1c m 时,浓度为1%的维生素B 2溶液(盐酸-乙酸钠溶液,p H=3.8)的吸光度㊂附录B维生素B2的液相色谱图维生素B2标准溶液的液相色谱图见图B.1㊂图B.1维生素B2标准溶液的液相色谱图。

AM-AM-FS-Jp-0020 维生素B2高效液相色谱法的定量测定

个人收集整理-ZQ维生素高效液相色谱法地定量测定.适用范围本方法对大量地试料都能较简单、准确地进行食品中三种型式维生素地分别定量测定.试料中地黄素单核苷酸()及黄素腺嘌呤二核苷酸（）能通过酸加水分解，全转变成核黄素而测定维生素总量..原理概要.主要试剂和仪器.主要试剂甲醇：高效液相色谱用溶液：用调.核黄素标准容液：将维生素标准品用温水溶解成为μ,取其加数滴醋酸，于褐色具塞瓶中保存于冰室中.使用时以水稀释为μ地溶液.不用时注意保存在阴暗处.标准容液：将用水溶解并调制成μ（换算成核黄素）溶液.标准容液：将用水溶解并调制成μ（换算成核黄素）溶液..仪器带有荧光检测器地高效液相色谱仪..过程简述.试验溶液地调制：称取一定量地试料用均化器或研钵尽可能地研细，对脂肪多地试料要先进行脱脂.然后加水，在（～）℃水浴上边搅拌边加热提取～分钟.提取液冷却后调成（～）μ地维生素溶液作为试验溶液..高效液相色谱条件色谱柱：（×）,硅胶填充柱预柱.色谱柱温度：℃移动相：甲醇∶溶液()(∶)流速：检出器：荧光检出器（激发：,发射：）.定量取试验溶液μ注入色谱柱中，读出维生素各型地荧光峰高.标准工作曲线地作成：已知浓度地维生素各型地标准溶液μ（含有～），进行同样地色谱操作，作出维生素各型地各标准工作曲线..结果计算利用标准工作曲线求出试验溶液中维生素各型地量（μ）,用下式算出试料中维生素各型地量.维生素各型（核黄素、和）地量（μ）××(试料取样量（）)—试验溶液地总量（）.来源：《卫生试验法·注解》版日本药学会编。

HPLC法测定小麦中维生素B2的含量

HPLC法测定小麦中维生素B2的含量发布时间：2022-05-05T03:01:54.779Z 来源：《科学与技术》2022年第30卷1期作者：杨雪，李硕[导读] 建立了HPLC法测定小麦中维生素B2的含量杨雪，李硕黑龙江八一农垦大学大庆 163319摘要：建立了HPLC法测定小麦中维生素B2的含量。

采用C18色谱柱进行分离，以乙酸钠:甲醇=65:35为流动相，用高效液相色谱仪进行测定，结果表明：维生素B2在0.01-0.20mg/L范围内呈现良好的线性关系，相关系数为0.9994，检出限为0.020mg/100g，加标回收率为91.3-94.1%，RSD为0.91-1.20%，该方法简单、高效、准确，可以满足测定需求。

关键词：小麦；维生素B2；高效液相色谱仪小麦是我国四大主粮之一，近年来，我国小麦种植面积不断增加，产量逐年增长，小麦是日常生活中不可缺少的，它可以为我们提供身体所需的碳水化合物、微量元素以及维生素等[1]，其中含有的维生素B2，又名核黄素，可以促进细胞再生，保护皮肤，无论大人还是小孩都需要日常补充，在人体生长代谢中有着至关重要的作用[2],还可以降低身体各个部位发生炎症的概率[3-4]。

目前，维生素B2的主要检测方法有高效液相色谱法[5],荧光分光光度法[6],超高效液相色谱法-质谱联用法[7],本文根据食品安全国家标准[8]及相关文献，对小麦中的维生素B2含量的测定方法进行了改进，利用高效液相色谱仪测定，该方法操作简单、价格低廉、结果准确。

1 实验部分 1.1仪器与试剂液相色谱仪（美国Waters公司e2695型，配有荧光检测器），高压灭菌锅（上海博讯医疗仪器股份有限公司，CJJ79-1），pH计（梅特勒-托利多仪器上海有限公司，PF20），电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂，HH?B11?500-S-Ⅱ），分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司，ML204），注射器，滤膜（铭诚生物科技有限公司）维生素B2标准品（天津阿尔塔科技有限公司），盐酸、氢氧化钠（科密欧试剂有限公司），乙酸钠（泉瑞试剂），高峰淀粉酶、木瓜蛋白酶（源叶生物），甲醇(德国Fisher试剂公司)，超纯水1.2色谱条件色谱柱：C18（150mm×4.6mm）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：激发波长462nm，发射波长522nm；流动相：乙酸钠溶液-甲醇（65:35）；进样量：10μL1.3标准曲线的制备 1.3.1标准储备液在100mL容量瓶中精准称取10mL浓度为100mg/L的维生素B2标准溶液，加入超纯水定容至刻度，得到10mg/L维生素B2标准储备液。