木质纤维素的定量测定及降解规律的初步研究

一对特异性引物扩增,产物的大小也能在凝胶电泳中区分[2]。本研究采用竞争基因片段大于目的基因的设计,利用了带有

内标的竞争基因片段进行竞争PCR 检测,仅仅是竞争PCR 产物的大小与目的基因有区别

。

图3　通过pQRS 定量小鼠免疫前后细胞因子基因表达

A 表示未免疫的小鼠细胞因子的竞争结果;

B 表示口蹄疫商品疫苗免疫小鼠后对各种细胞因子的定量分析;

C 表示

D N A 疫苗pC D -v p1免疫小鼠后,对细胞因子图的竞争PCR 结果。胶图的上方数字代表pQRS 的浓度(10n μg Πm L );

n 代表-5,-6,-7,-8,-9,

-10

由于DNA 片段E B 染色后,紫外光照射样品后激发的荧光亮度与DNA 片段浓度有线形关系可以用来确定DNA 的量,但这种线形关系是依赖于基本相同的目的基因,当两种DNA 片段大小相差较大时不能用此方法[7,8]。本研究使用的竞争基因片段和目的基因之间只差几十个碱基的区别,不需要考虑这种影响[9]。实验中为了控制不同实验组RT -PCR 的扩增结果的一致性,用HPRT 作为对照,既能进行动态的分析,也能比较RNA 提取的质和量。

在竞争PCR 检测之前,必需先进行各种细胞因子的PCR 条件的优化,每种细胞因子在特异性引物的不同决定了PCR 条件的不同,但大多是在退火温度上变化,如HPRT 和IFN -γ的退火温度可以达到60℃,而I L -10只能到54℃。同时镁离子浓度也是影响竞争PCR 结果的重要因素之一。实验中为了检测RNA 提取的质量,以保证竞争PCR 结果的可靠,使用内标的HPRT 基因作为对照,HPRT 在小鼠体内各种细胞中均有表达,而且免疫前后在表达量上变化不大。

本研究结果表明利用竞争PCR 分别对口蹄疫DNA 免疫、口蹄疫商品灭活疫苗免疫和未免疫的小鼠的脾脏表达的I L -2、I L -4、I L -10、I L -12和IFN -γ进行了定量检测,用DNA 疫苗pC D -vp1免疫小鼠后,I L -2和IFN -γ的mRNA 表达量上升了10-100倍(从10-8提高到10-7和10-6),表明DNA 疫苗pC D -vp1免疫后小鼠脾脏内T 细胞大多向Th1型分化和增殖。而以口蹄疫灭活疫苗免疫的小鼠,I L -4和I L -10的表达量明显上升(从10-8和10-9提高到10-7),表明口蹄疫灭活疫苗免疫后,小鼠脾脏T 细胞向Th2型分化和增殖。

因此利用竞争PCR 技术能够较为准确的定量分析疫苗免

疫接种小鼠脾脏表达各种细胞因子的水平,预测疫苗免疫接种后的细胞免疫趋势,为深入分析疫苗免疫小鼠产生的细胞免疫反应奠定了基础。

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木质纤维素的定量测定及降解规律的初步研究

杜甫佑,张晓昱3

,王宏勋

(华中科技大学生命科学与技术学院,湖北武汉430074)

摘要:为了准确地测定稻草及其发酵物中纤维素、半纤维素、木质素的含量,通过差重法进行定量测定,并以此评价白腐菌株Pleurotus sapidus 对稻草秸秆的降解状况,结果表明:利用差重法测定稻草发酵物中纤维素、半纤维素、木质素的百分含量是可行的,并能很好地评价白腐菌对稻草的降解规律,即降解过程中纤维素、半纤维素、木质素在前20d 降解的很快,之后降解减缓,在50d 内,纤维素被降解34.02%,半纤维素被降解56.29%,木质素被降解61.65%。

关键词:白腐菌;差重法;木质纤维素

中图分类号:Q53913 文献标识码:A 文章编号:1004-311X (2004)05-0046-03

Studies on Q uantitative Assay and Degradation La w of Lignocellulose

DU Fu -y ou ,ZH ANG X iao -yu 3

,W ANG H ong -xun

(C ollege of Life Science and T echnology ,Huazhong University of Science and T echnology ,Wuhan 430074,P 1R 1China )

Abstract :In order to determine the content of cellulose ,hemicellulose and lignin in straw and the fermentation a -ccurately ,this paper reported the quantitative assay through dispersion method ,which evaluate degradative status o -f straw by Pleurotus sapidus .The results show that the dis 2persion method which determinate the contents of ce -llulose ,hemicellulose and lignin in fermentation straw is feasible.We find out the degrada 2tion rule of straw by ad -opting improved dispersion method ,cellulose ,hemicellulose and lignin are degradated very quickly in early 20days ,after that ,the rates of degradation to them are decreased ,in the all 50days ,cellulose value is degradated 34.02%,hemicellulose value is degradated 56.29%,and lignin value is degradated 61.65%.

K ey w ords :white -rot fungi ;dispersion method ;cellulose ;lignin

第14卷第5期:462004年10月 生　物　技　术BI OTECH NO LOGY

V ol 114,N o 15:46

Oct 12004