第十九章 平面色谱法1

第二节 薄层色谱法
creating a central science
Chr ma t gra phy
TLC是将固定相平铺于玻璃板、塑料或铝 片等光洁表面上制成薄层板，在此薄层板上
进行色谱分离的方法。
通过与适宜的对照物按同法所得的色谱 图作对比，可以进行药品的鉴别、杂质的检 查或含量的测定。
分析化学（药学专业）
分析化学（药学专业）
硅胶含水量（%） 活性分级 氧化铝含水量（%） 0 I 0 3 3 Ⅱ 15 6 Ⅲ 25 10 Ⅳ 38 15 Ⅴ 活性级别越大,含水量越多,吸附能力越小,活性越小 活性≠活性级别
分析化学（药学专业）
creating a central science
Chr ma t gra phy
分析化学（药学专业）
（high performance thin layer chromatography，HPTLC）
五、高效薄层色谱法
creating a central science
Chr ma t gra phy
高效薄层色谱法是在薄层色谱的基础上，
采用更细更均匀（粒度 5 ～ 7µm ）的吸附剂
Chr ma t gra phy
薄层色谱法（TLC）
纸色谱法（PC）
薄层电泳法（TLE）
分析化学（药学专业）
二、平面色谱法参数
（一）定性参数
creating a central science
Chr ma t gra phy
比移值 Rf ：组分迁移距离与流动相迁移距离之比。
原点至斑点中心的距离 L Rf 原点至溶剂前沿的距离 L0
分析化学（药学专业）
2. 展开
creating a central science
Chr ma t gra phy
(1)
(2)
单向线 性展开
双向线 性展开
环形 展开
向心 展开
多次 展开
分析化学（药学专业）
creating a central science
Chr ma t gra phy
边缘效应：指同一组分的斑点在薄层中部比 在边缘的移动速度要慢的现象。 消除方法： ① 使展开室中溶剂蒸气达到饱和； ② 薄层两侧边缘固定相刮去1～2cm；
creating a central science
Chr ma t gra phy
展开(development)
溶剂前沿
1cm
UV
起始线 A B
1cm
A B
分析化学（药学专业）
creating a central science
Chr ma t gra phy
分析化学（药学专业）
特点： ★分离能力强，斑点集中 ★灵敏度高
Chr ma t gra phy
creating a central science
第十九章 平面色谱法
(planar Chromatography)
主讲: 袁建梅 E-mail: yyjm@
版权所有：新乡医学院基础医学院化学教研室 Copyright © 2007 Xinxiang Medical College. All rights reserved.
----------------------------------------
☆参考物可是试样中的组 L (s) 分，也可以是另外加入 L(i) 的物质； ☆Rr值可大于1或小于1； 分析化学（药学专业）
被测物
（二）相平衡参数 1.分配系数和保留因子 2.K、k与Rf的关系
creating a central science
手动点样 分析化学（药学专业）
自动点样仪
（三）展开和展开剂的流速
1. 展开剂的流速
creating a central science
Chr ma t gra phy
经典的TLC中流动相的驱动力仅为吸附 剂的毛细作用。显然，由粗颗粒制成的薄层 板，展开剂迁移速度较快；而颗粒均匀、细
密的薄层板，展开剂移动速度较慢。
Chr ma t gra phy
分析化学（药学专业）
二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂
（一）吸附剂
creating a central science
Chr ma t gra phy
★ 颗粒小（粒度5～50µm，200～250目）；均匀 ★ 一般为白色； ★ 常用的固定相：
① 硅胶：硅胶H、硅胶G、硅胶GF254
分析化学（药学专业）
3.聚酰胺 聚酰胺是由酰胺聚合而成的高分子物质， 色谱常用的是聚己内酰胺。利用酰胺基与化合 物质子给体形成氢键而产生吸附。
creating a central science
Chr ma t gra phy
分析化学（药学专业）
creating a central science
Chr ma t gra phy
吸附剂选择的基本原则：
分离弱极性物质，一般选用活性较强的吸附剂； 分离强极性物质，一般选用活性较弱的吸附剂。
分析化学（药学专业）
（二）展开剂
流动相：单一、二元、多元展开剂 常用的流动相极性顺序：
creating a central science
Chr ma t gra phy
2. 氧化铝
creating a central science
Chr ma t gra phy
由氢氧化铝高温脱水制得。具有分离能力强、 活性可以控制等优点。按制备条件不同，分为酸 性、中性、碱性氧化铝。
O Al O O OH Al O OH Al O OH Al O OH Al O
Acidic: -Al-OH Neutral: -Al-OH + -Al-OBasic: -Al-O-
Chr ma t gra phy
d
B A
2(L 2 L1) 2d R W1 W2 W1 W2
2. 分离数 SN
L0 SN 1 (W1 / 2 )0 (W1 / 2 )1
分析化学（药学专业）
X
W1 W2 W1 W2
d
平面色谱分离度示意图
F
（thin layer chromatography，TLC）
creating a central science
Chr ma t gra phy
固定相厚度可依据上样量的要求确定，越厚 容量越大，但分离效率越低。
分析化学（药学专业）
（二）点样
creating a central science
Chr ma t gra phy
将样品溶液滴加到薄层板上的操作； 溶解样品的溶剂，点样量，正确点样方法。
1 Rf Rf
Vm 1 K ( 1) Vs R f
creating a central science
Chr ma t gra phy
☆Rf为1时，k＝0，说明该组分在固定相上无保留； 而当Rf趋于0时，k趋于无穷大，说明该组分完 全被固定相保留； ☆组分不同，K不同，Rf不同； ☆测出Rf，已知Vm/Vs，则可测出K； ☆实验条件固定，Vs和Vm固定，Rf由K决定，K只 与组分性质一定，即Rf只与组分性质决定，因 此，Rf是定性参数
L1
- - - - - - - - - -A -----------. ----------------B
L0
L2
分析化学（药学专业）
creating a central science
Chr ma t gra phy
☆Rf值是分离组分的特征常数，与固定相、
流动相、操作条件有关； ☆同一物质在不同展开方式中得到的比移值 是不相同的。
creating a central science
Chr ma t gra phy
掌握吸附剂和展开剂的选择与性质
掌握薄层色谱法的定性和定量分析方法
掌握纸色谱的基本原理
熟悉平面色谱的分类及色谱参数
了解高效薄层色谱法和薄层扫描法
分析化学（药学专业）
creating a central science
③ 采用特别狭窄的展开室；
分析化学（药学专业）
（四）斑点的确定
creating a central science
Chr ma t gra phy
★ 光学检出法： 组分本身有颜色或有荧光（紫外 灯下观察） ★ 生物自显影： 又称生物抑酶检出，检测具有生 物活性的组分 ★ 蒸气显色法： 试样与一些物质的蒸气生成色斑 或产生荧光 ★ 试剂显色法： 选择适当的显色剂使之生成色斑
水>甲醇>乙醇>丙酮>正丁醇>乙酸乙酯>三氯 甲烷>乙醚>苯>四氯化碳>环己烷>石油醚
分析化学（药学专业）
选择原则：综合考虑被分离组分性质、展开剂 极性、吸附剂活度。
（2）固定相（硅胶、 氧化铝活度级）
（3）展开剂
（1）被分离物质
三、薄层色谱操作方法
（一）薄层板的制备
★ 软板、硬板、烧结玻璃板 ★ 硬板的制备： 薄层板的选择 薄层板的涂布 薄层板的活化
creating a central science
Chr ma t gra phy
分析化学（药学专业）
（三）定量分析
creating a central science
Chr ma t gra phy
1. 洗脱法 样品经薄层色谱分离后，收集样品 斑点处的吸附剂，然后用溶剂将斑点中的组分 洗脱下来，再用适当方法进行定量测定。 2. 目视定量法 根据斑点大小和颜色深浅估计 样品组分的近似含量的方法。 3. 薄层扫描法
② 氧化铝：氧化铝G、氧化铝H、氧化铝HF254 ③ 聚酰胺等 分析化学（药学专业）