鸡蛋中雌激素快速降解体系的研究

胞 菌可 以作为饲料食 品添加剂及 含有芳烃类物质肥料的降解
物 。近年来 ， 世界各 国都非 常重 视对睾丸酮丛 毛单 胞菌的
研究 ， 目前 已经对其生物学特性 、 分子遗传学 、 生物化学等方 面进行 了深入 的研究 并取得 了一些成 果 。德 国马堡 大学
的熊光 明博士研究发现 ， 睾 丸酮丛毛单胞菌的 ３ 一羟类固醇 脱 氢酶 （ ３ ａ—Ｈ Ｓ Ｄ ） 降解基 因在 降解消化 多环芳 烃类物质 中 起 主导作用 ， 并对这个基因的调控机理进行 了初步研究 ， 研究
相色谱荧光法检测雌激素 ， 程序繁琐也不易于操作。
睾丸酮丛毛单胞 菌（ Ｃ ｏ ｍ ａ ｍ ｏ ｎ ａ ｓ ｔ ｅ ｓ ｔ ｏ ｓ ｔ ｅ ｒ ｏ ｎ ｉ ） 是 一 种 革 兰
雌激素 （ 雌二醇 ） ， 购自Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ 公 司， 纯度 ９ ８ ％。
１ ． ３ 仪 器与 设 备
（ １ ． 内蒙古民族大学生命科学学 院， 内蒙古通辽 ０ ２ ８ ０ ４ ２ ； ２ ． 内蒙古赤峰市松山区农牧业局 ， 内蒙古赤峰 ０ ２ ４ ０ ０ ５ ）
摘要 ： 利用睾丸酮丛毛单胞菌 （ 菌株 Ｃ ｏ ｍ ａ ｍ ｏ ｎ ａ ｓ ｔ ｅ ｓ ｔ ＋ａ ｃ ｔ ５ ） 具有 消化多环 芳烃类 化合物 的特性 ， 以雌 激素 （ 雌二 醇） 为底 物 ， 筛选降解雌激素 的培养条件 ， 以期使 雌激素在鸡 蛋 中的含 量相对 降低 ， 从 而为高效 降解 食品 中多环芳烃
ＫＨ２ ＰＯ４、１ ．５ ｇ Ｋ２ ＨＰ Ｏ４ ・ ７ Ｈ２ ０、０． ０ ２ ｇ Ｃａ Ｃ１ ２ 、０． ０ ５ ｇ
源性雌激素的生理 、 生化作用 。 鸡蛋是我们餐桌上必备 的营养食 品 ， 而通过 鸡饲料进入
鸡蛋 中的环境雌 激素 间接影 响了人类 的健康 。环 境激 素 对人类的三大主要危害是导致男性生殖能力下 降、 胎儿 畸型 、
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江苏农业科学
２ ０ １ ３年第 ４ ｌ 卷第 １ ０期
李依韦， 薛兰兰．鸡蛋 中 雌 激素快速降解体 系的研 究［ Ｊ ］ ．江苏农业科学， ２ ０ １ ３ ， ４ １ （ １ ０ ） ： ２ ６ ０ — ２ ６ ２
鸡
类物质奠定基础。使 用分光光度计测定细菌生长 曲线及 降解 曲线 ， 高效液相 色谱法测定雌激素含量。试验结果表 明 ，
菌株 Ｃ ． ｔ ｅ ｓ ｔ ＋ ａ ｃ ｔ ５ 降解雌激素的最适底物浓度为 １ ０ ０ ～ ２ ０ ０ ｉ ｘ ｇ ／ ｍ Ｌ ， 最适温度为 ３ ０℃ ， 最适 ｐ Ｈ值为 ７ ． ０ ； 将菌株 ｃ ｔ ｅ ｓ ｔ ＋ ａ ｃ ｔ ５在此条件下培养 ４ ８ ｈ ， 雌激素的降解效率达 ８ ４ ％ 以上 ， 培养 ７ ２ ｈ ， 雌激素几乎完全降解 。可 以认 为经过筛选而 建立 的降解体 系具有较高的可行性 ， 从而为以后的研究 提供 了基础 。
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 试 验 材料
后 吹干 ； 用色谱级 甲醇定容后 ， 再用 Ｈ Ｐ １ １ ０ ０高效液相色谱测 定雌 激 素 残 留 量 ， 色谱 柱为 迪马公 司 的 Ｄ ｊ ａ ｒ ｎ ｏ ｎ ｓ ｉ ｌ Ｃ 。
养基作为空 白对照。测定 Ｄ 值， 将 每次取样 的溶液 样 品
离心后取上清液 ， 用氯仿萃取并收集有机相 ， 旋转蒸 发仪蒸发
结果表 明， ３ ａ—Ｈ Ｓ Ｄ是许多 Ｃ 一Ｃ 多 环芳烃类 化合 物分解
代谢途径 中最初的酶之一 。 。本研究报道了睾丸酮丛毛单 胞菌降解鸡蛋 中雌激素的方法 。
关键词 ： 雌激 素 ； 睾丸酮丛 毛单胞菌 ； 生物降解 中图分类号 ： Ｑ ９ ３ ６ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ２—１ ３ ０ ２ （ ２ ０ １ ３ ） １ Ｏ一 ０ ２ ６ ０— ０ ２
环境雌激素是一类具有雌激 素效 应的物质 ， 可 以模拟 内
节ｐ Ｈ值 至 ７ ． ２ 。 无 机 盐 培养 基 （ １ Ｌ ） ： 分别将 ０ ． １ ０ ｇ Ｍ ｇ Ｓ Ｏ ・ ７ Ｈ ２ ０、 ０ ． ５ ｇ
Ｆ ｅ （ Ｓ Ｏ ４ ） ３ 、 ０ ． ０ ５ ｍ ｇ Ｃ ｕ Ｓ Ｏ ４ 、 ０ ． ０ ５ ｍ ｇ Ｚ ｎ Ｓ Ｏ ４ 溶于 ９ ０ ０ ｍ Ｌ去 离
子水中 ， 再定容至 １ Ｌ ， 灭菌前调节 ｐ Ｈ值至 ７ ． ２ 。
１ ． ２ 试 验 药 品
降低人体的免疫机能等 ， 因此有必要对鸡 蛋 中的雌激素进 行检测 ， 但是通过高效液相色谱法 、 紫外分光光度法和高效 液
Ｈ Ｐ １ １ ０ ０高效液相色谱仪 ； ７ ２ １ 可见分光光度计。
１ ． ４ 试 验 方 法
氏阴性细菌 ， 它不仅存在于土壤 、 泥浆 、 水体 中， 而且也存在于 人体 的胃、 肠道 中， 由于它可以利用 甾体类和多环芳烃类化合
物 作 为 生 长 所 需 的碳 源 等能 源 ， 因此 在 农 业 上 睾 丸 酮 丛 毛 单
１ ． ４ ． １ 雌激素 的降解试验
将菌株 Ｃ ． ｔ ｅ ｓ ｔ ＋ａ ｃ ｔ ５接种于营养
肉汤 培养 基 中， 在 ３ Ｏ ｏ Ｃ、 １ ８ ０ ｒ ／ ａ ｒ ｉ ｎ条 件 下 振 荡 富集 培 养 ２ ４ ｈ ， １ ０ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ离心 １ ０ ｍ ｉ ｎ后收集菌体 ， 再 将菌体悬浮于 灭 菌蒸馏水中制成菌悬液（ Ｄ １ ５ ０ ：１ ） 。 将菌 株 Ｃ ． ｔ ｅ ｓ ｔ＋ａ ｃ ｔ ５的 菌悬 液 接 种 在 雌 二 醇 浓 度 为 ｍＬ的无机盐培养基 中， ３ Ｏ℃、 １ ８ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 条 件下振荡 培养 ７ ２ ｈ， 每６ ｈ取样测定 １次 ， 以未加菌 的相 同营养 肉汤培