高效液相色谱法测定蛋糕中的柠檬黄和日落黄含量

３１ 样 品前处理方法 的选择 ： ． 前处理对于准确测定样 品中的
ａ ｎ 波长 ４ ５ｎ 流速 １ ／ ｉ； 样量 １ Ｌ ｒｉ； ７ ｍ； ． ｍＬｍ ｎ 进 ０ Ｏ 。色谱 柱
Ｋ ｏ ｓ—１５ｔ 不 锈 钢 柱 ４６ｍｍ ２ ０ｍｍ。 ｒｍａｉＣＲ ｍ ｌ ｚ ． ￣０
拟 和性 。
『 王谦 ， ２ １ 展凤霞． 新鲜全血在不同血细胞 分析仪比对试验中的评
价． 山东大学学报（ 医学版 ） ０ ９ ４ （ ） ８７ ． ，２ ０ ， ７ ２ ：６—４
『 苏庆军 ， ３ １ 陈建 国， 王一男 ， 新鲜 全血在多 台血 细胞分析仪 等．
校准 中的应用． 华北 国防医药 ，２０ ， １５ ： ５５ ． ０ ９ ２ （ ） ５ —７
肌 钙 蛋 白 Ｉ（Ｔ 是 心 脏 的 结 构 蛋 白 ， 反 映 心 肌 细 胞 损 ｅ ｎＩ） 是
用过常规剂量半量 的去 乙酰毛花苷注射液治疗 ，所有患儿病
情 均 获 得 缓解 出 院 。并 于 治 疗 １～ ４ｄ 复 查 。 Ｏ １ 后
１ 统计学处理 ：数据 以 ＿ ３
２ 结 果
（ 稿 日期 ：０１ —２ ２ 收 ２ ２０ —０）
血清肌钙蛋 白 Ｉ ｌ 在， Ｊ急性肾炎合并心力衰竭 ，Ｌ 早期表达及临床应 用研究
武 警 青 海 总 队 医 院（ １０ ０ ８０ ０ ）
武 警 北 京 总 队 第ｚ 医 院 －
高建国 卫红英
王顺 涛
许粉侠
小儿急性肾小球 肾炎 （ Ｇ ） Ａ Ｎ 是儿科常 见的免疫反应性 肾 小球疾病 ， 属于感染后引起的免疫 、 变态反应性疾病 ， 起病急 ， 临床 以水肿 、 血尿 、 白尿 和高血 压为特 征 ， 累及 心脏 … 蛋 常 。
测器 ；Ｔ２ Ｓ电 子 分 析 天 平 （ 京 赛 多 利 斯 公 司 ）Ｈ ３ １ Ｂ ５ 北 ； Ｃ ５ ８高
２１ 标准曲线 ： ． 以柠檬黄浓度为横坐标 ， 峰面积为纵坐标 ， 进行
线 性 回归 ， 到 回归 方 程 ｌ ６ ６ ． Ｘ＋ ８１４４ ｒ０ ９ ， 得 ， ０１７９ １ ６ ．， ． ９４ ＝ ３ ＝９
为了改善食品的感官性状 ， 人们常在食 品中添加人工合成 着色剂（ 又称色素 ） 。色 素色泽鲜艳 、 色力强 、 着 性质稳定 、 可 任意拼色且价格便宜 。 柠檬黄和 日 落黄均为合成着色剂 ， 主要
为从 煤 焦油 中分 离 出来 的苯 胺 类化 学 物质 ， 身 没有 任 何 营 养 本
文通过对 国家标准 Ｇ ／５ ０ ． ＢＴ ０ ９３ ５中的液相色谱法进 行优化 ， 建立了准确测定蛋糕中柠檬黄和 日落 黄含 量的新方法 ， 可以 充分满足蛋糕 中柠檬黄及 日落黄 的检测需求 ， 现报告如下。
１ 材 料 与 方 法
１ 仪 器设 备 ： ｉ ｃ ｉ 一０ ０高效液相色谱仪 ． １ Ｈ ｔ ｈ Ｌ２０ ａ 紫外． 检 可见
柠檬黄和 日落黄含量至关重要 。 采用乙醇 ： 水 （ ： １溶液 氨水： ７２ ） ：
与样 品混匀后超声 、 再离心的方法提取样品中的色素 ， 对提取
・
５２ ・ ０
塞 医垫苤蠢 ｌ ０
第ｊ 第 朔 ９ 鲞
一
』
ｔａ Ｍ ｄｃ ｅｈｉ ｉ １ 。ｉｌ ｃ ｃ ａＴ
，
Ｍａ Ｏ１ ｖ ２ ２，Ｖｏ ．１ １ ９，Ｎｏ ．５
１ 样 品 前 处 理 ： 确 称 取 ５ｇ 品 （ 确 到 ０ｏ ）加 ３ ． ５ 准 样 准 ．１ｇ ， ０
ｍＬ乙醇： 氨水： （：：）溶 液放入离心管中 ，混匀后超 声 ５ 水 ７２１ ｍｉ， ｎ 离心 ５ｍｉ（ ０ ｍｉ）收集上清液于 ８ ｎ ３０ ０ｒ ｎ ， ／ ０℃水 浴 中除 去 乙醇和氨＿ 剩余 为样 品溶液 。 ３ ｌ ， 将样 品溶液置于 ６ ０℃恒温水 浴 ２ ｎ后用柠檬酸调节 至 ｐ ６ ０ｍｉ Ｈ＝ ，将 １ｇ聚酰胺粉加少许 水调成粥状 ， 倒人样 品溶 液中 ， 续搅 拌后以垂融漏斗抽滤 ， 持 用 ６ ０℃ ｐ ＝ Ｈ ４水洗涤 ３ ５次 ，甲醇： － 甲酸混合溶液洗涤 ３ ５ － 次， 再用水洗 至中性 ， 乙醇： 用 氨水 ： （：：） 水 ７ １溶液解吸 ３ ５次 ， ２ － 每次 ５ｍＬ 收集解 吸液于蒸发皿 中， ， 加乙酸 中和 ，０ 水浴 １０ｏ Ｃ 蒸发近干 ， 加水溶解 ， 定容至 ５ｍ ， ０ ５Ｉ Ｌ 经 ． ｍ滤膜过滤至样 ４ ， ｚ 品瓶 中进行高效液相色谱测定 。
用医技 杂志 ２ １ 年 ５ ０２ 月第 １ 卷箜 期 ９
』
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・
５ ０１ ・
仪器之间测定结果 的可 比性 和可靠性 ， 保证 实验室 内结果 的
一
参 考 文 献
『１ 彭 明婷 ，谷小林 ，王文丽 ，等． 同方 法校准血液分 析仪结果 １ 不 比较． 中华检验 医学杂志 ，２ ０ ２ （ ） ５３ ． ００， ３ １ ：３ —７
为 １．、０ 、０ 、０ 、０ ￣ｍＬ ０ ２ ． ３． ４ ． ５．ｐ ／ 。 ０ ０ ０ ０ ０ ｇ
） 甲醇 为色谱 ；
２３ 回收率 ：对不含 目标物样品加标 ，每个加标水平重复 ３ ． 次， 计算 回收率 ， 结果见第 ５ ２页表 ２ ０ 。
３ 讨 论
１ 色谱条件 ： ． ４ 流动相 ： 甲醇 、．２ｍ ｌ ００ ｏ Ｌ乙酸铵溶液梯度洗 ／ 脱 ：甲醇 ：０ ３ ％，％／ ｉ；５ ９ ％，％／ ｉ；８ ２ ％～ ５ ３ ｍｎ ３ ％～ ８ ９ ｍ ｎ９ ％继续 ６
家标 准物 质 中心 ） 度 Ｏ５ ｇｍ ； 酸铵 溶 液 （ ． ｏ Ｌ ； 浓 ． ｍ ／Ｌ 乙 ０ ００ ｉ １ ） ２ｎ／
结果表 明柠檬黄标 准在 ０ ５ ￣／ Ｌ范围内线性 良好。 ～ ０［ ｍ ｇ
以日落黄浓度为横坐标 ，峰面积为纵坐标 ，进行线性 回
归 ， 回归方程 Ｙ １１４ ４９Ｘ＋ ０ ．，＝ ．９ ， 得 ＝ ２ １ ． ７ ９８ ２１ ｒ０ ９６ 结果表 明 ９ 日落黄标准在 ０ ５ 咖 Ｌ范围内线性 良好 。 ０ ２２ 精密度 ： １ ． 按 ． ４色谱条件对 同一蛋糕样品平行测定 ６次 ， 符合分析化学要求 ， 结果见表 １ 。
度和 回收率 实验 ，可 以看 出本 实验方法 具有较 高的精密 度 （Ｓ Ｒ Ｄ分别 为 １１ ．％和 Ｏ８ ％） ． ３ 和回收率 （５ １ １ 。 ９ ％～ ０ ％） ３ 色谱条件 的选择 ： ． ２ 通过实验发现可见光区有效克服了目
落黄． 食品研究 与开发 ， ０ ０ ３ （ ） １４ １５ ２ １ ， １９ ： ３ ．３ ．
参 考 文 献
［］ 中华 人民共和 国卫生部 中 国国家标准 化管理 委员会 ． Ｂ ５ １ Ｇ ３— ２０ ０ ３食 品 中合成 着 色剂 的测 定． 京 ：中 国标 准 出 版社 ， 北
２ ０ ０ ３：８ １ ． ．１
液进行抽滤洗脱 ， 优化 了国标 中的前处 理方法 ， 能更充分 的
『 李 军． ４ １ 血细 胞分 析仪 的质 控与 结果 比对 ． 检验 医学 与 临床 ，
２ ０ ．５ １ ） ７ ５ ７：０１ ．２ １ 收 Ｉ ２ ２０ ．３）
高效液相色谱法测定蛋糕中的柠檬黄和 日落黄含量
山 西省 疾病 预 防 控 制 中心 （３ ０ ２ ００１ ） 赵 霞 郭舒 岗 米 尔芳
的 变 化 ，笔 者对 ３ 无 并 发 症 的 Ａ Ｎ患 儿 及 ３ ８例 Ｇ ４例 合 并 心
与健 康对照组 和无合并 症组相 比 ，合 并心力衰 竭组 的 Ａ Ｎ患儿血清 ｃｎＩ Ｇ Ｔ 水平 显著增高 （ ＜ ． ）而无合并症 组 Ｐ ００ ， ５
与健 康对照组相 比差 异无统计学 意义（ ＞ ． ）恢复期 复测 Ｐ ００ ， ５
表 １ 精 密度实验结果
无水 乙醇 ： 氨水： ７ ：） 水（ ： １溶液 ； ２ 聚酰胺粉过 ２ ０目筛 ； ０ 柠檬 酸 溶 液 （０￣１ｏｍ ） 甲醇 ： ２ ｏ Ｌ ； 甲酸溶液 （ ：， ６４ 纯， 其他试剂均为分析纯。 １ 标 准溶液 的配制 ： ． ３ 用移液管准确移取柠檬黄标 准液 ０２ ．、 ０４ ０６ ０ 、． ｍ ， 别置于 １ Ｌ比色管 中 ， ．、．、． １ Ｌ 分 ８ ０ ０ｍ 用水 定容 至 刻度 ， 浓度分别为 １．、００ ３ ．、００ ５ ． ｕＣ Ｌ 其 ００ ２ ．、００ ４ ．、０ ｇｍ 。 ０ 用移 液 管 准 确移 取 日落 黄 标 准 液 ０ 、．、．、．、． ． ０４ ０６ ０８ １ ２ ０ ｍＬ 分别置于 １ Ｌ比色管中 ， ， ０ｍ 用水定容至刻度 ， 其浓度分别
标 中 ２４ｎ ５ ｍ处梯度洗脱造成 的基线 漂移 ， 免了 ２ ４ｎ 避 ５ ｍ波
表 ２ 回收率实验结果
长下 的杂 峰的出现 ， 所以选取 ４ ５ｎ ７ ｍ为测定 波长 ， 在此 波长 下进行梯度洗脱 ， 目标物峰形好 ， 重现性好 ， 干扰少。 总之 ，本 实验建立 了准确测定蛋糕 中柠檬黄和 １落黄色 ３ 素的方法 ， 可以为蛋糕 中柠檬 黄及 日落黄这两种合成着 色剂 的测定提供参 考。
［］ 米尔芳 ，王彩云 ，赵霞 ， 可见光区多种波 长梯 度洗脱 同时 ２ 等． 测定六种色素的方法研究． 实用医技杂志 ，２ ０ ，１ （ ） ４ ９ ０ ９ ６６ ： ８． ［］ 王冬妍 ， 书宁． ３ 杨 高效液相色谱法测定杏罐 头中的柠檬 黄 、日
提取蛋糕 中的色素且大大缩短 了抽滤洗脱的时间。通过精 密
致性 。以上结果表 明 ： ２台血细胞 分析仪具有 很好 的可 比 通过 比对可 以得出 ， 病房与 门诊血细胞分析仪在 白细胞 、
性， 各台血液分析仪各项检测指标 的结果稳定 、 精密度好。 红细胞 、 血红蛋 白、 血小 板上具有 良好 的相关性 ， 回归方程 良 好 。可同时对血 常规项 目进行检测 。同时 ， 我们也发 现白细 胞、 红细胞 、 红蛋 白、 血 血小板 等 ４个血细胞分析仪 主要项 目 的检测在病房 与 门诊血 细胞分 析仪上 的检测结果 无 明显 差 别， 因此可 以认为 ２台仪器 的检测 结果具有很好 的准确性 和
速离心机 （ 安徽中科 中佳科学仪器有限公 司）Ｋ 一０ Ｖ超 声 ；Ｑ ３０ 波清洗器 （ 昆山市超声仪器有限公司 ） 。 １ 试剂…柠檬黄标准液［ Ｂ （ １００ １ ． ２ ： Ｇ Ｗ Ｅ） ０ ０ ａ国家标准物质 中心 ］ 浓度 ０ ０ｍｇ Ｌ 日落黄标准液 Ｇ Ｗ（ １００ ３ ，国 ． ／ ； ５ ｍ Ｂ Ｅ）０ ０ ａ
表示 ，采用 Ｓ Ｓ ０ Ｐ Ｓ１． ０统计 软
件 ， 间资 料 采 用 ｔ 验 ， Ｐ ０ ５为差 异 有 统 计 学 意 义 。 组 检 以 ＜． ０
伤的一种特异 的 、 高敏感 的生化标记物１ ２ ］ 。为进一步探讨急性 肾炎合并心力衰竭早期时对心脏功能 的影 响 ， 以及 在不产 生 心 电图变化或不能引起 心肌 酶升高的微小 心肌坏死 时 ｃｎＩ Ｔ
２ 结 果
价值 。人体食 用过 量的柠檬黄和 日落黄可 引起 过敏 、 腹泻 等 症状 ， 还可能对人体 的肾脏 、 肝脏和神经系统造成危害 。 世界
各 国对 色 素 的 品 种 、 用 范 围 和 使 用 量 都 有 严 格 限 制 ， 此 使 因 对食 品中 的柠 檬 黄和 日落黄 进 行准 确 检测 就 显 得尤 为 重要 。 本
ｃｎＩ Ｔ 水平较急性期明显下降 ， 见表 １ 。
表１ ＡＧ Ｎ急性期患儿及健 康对照组 血清 ｃ ｎＩ水平（ ） Ｔ ；