HPLC-ELSD测定鼻渊舒口服液中黄芪甲苷的含量

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高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量分析

高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量分析摘要】目的：建立高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量测定体系。

方法：应用高效液相色谱法测定蒙古黄芪和甘肃红芪的黄芪甲苷含量，色谱柱：Agilent Eclipse XBD-C18柱(150×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(44∶56)；柱温：26℃；流速：0.5 mL/min；检测波长：335 nm。

结果：黄芪甲苷测定的回归方程为Y=13.614X-1.4897，r=0.9999，线性范围为10.2-102μg/mL-1。

测定蒙古黄芪和甘肃红芪中的黄芪甲苷回收率分别为95.9%与94.5%，在3 d内基本能保持稳定，含量分别为0.289mg/g和0.284mg/g。

结论：高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量方法简便、灵敏度高、重现性好，可作为首选方法之一。

【关键词】高效液相色谱法黄芪黄芪甲苷【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）34-0192-02黄芪是中医临床最常用的大宗药材之一，具有营养和抗氧化等药理活性和药用价值，主要生长在西北干旱地区。

当前由于市场需求量不断增加，其野生资源受到极大威胁[1]。

其含有多糖、甲苷等主要生物活性成分，有抗心肌缺血、缺氧、病毒性心肌炎的作用[2]。

当前黄芪甲苷的测定方法有薄层色谱法与毛细管电泳法等[3]。

本文建立了高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量体系，希望为从天然植物中寻找低毒或无毒的抗氧化活性成分提供参考。

现报告如下。

1 实验仪器与方法1.1 实验仪器日本岛津公司LC-20AT高效液相色谱仪与色谱工作站，十万分之一电子天平XS205DU型，SQ21198B多功能食品加工机，UV-2450型紫外-可见分光光度计，DELTA320型pH计。

黄芪甲苷对照品购自中国药品生物制品鉴定所，石油醚、氯仿、正丁醇为色谱纯，甲醇、甲酸、无水乙醇、冰醋酸为分析纯，水为超纯水。

UPLC_ELSD法测定黄芪中的黄芪甲苷含量

第26卷,第3期光　谱　实　验　室Vol.26,No.3 2009年5月Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor atory May,2009UPLC-ELSD法测定黄芪中的黄芪甲苷含量杨俊王文辉　王齐　孙晓东　朱艳琴(昆明理工大学分析测试研究中心　昆明市学府路253号　650093)摘　要　采用Waters A cquity U P L C BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7 m),流动相为乙腈-水(30∶70),流速为0.2mL·m in-1,柱温30℃,用U P LC-EL SD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

黄芪甲苷在0.10—0.50mg·mL-1范围内有良好的线性关系(r=0.9990),平均回收率(n=6)为98.9%。

该方法快速、准确、重复性好,为黄芪的质量控制提供了一种快速准确的检测方法。

关键词　超高效液相色谱-蒸发光散射;黄芪;黄芪甲苷中图分类号:O657.7+2 文献标识码:B 文章编号:1004-8138(2009)03-0484-031　前言黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge.V ar.mongholicus(Bunge.)H siao或膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)B unge.的干燥根,具有补气升阳、固表止汗、托疮生肌、利水消肿的作用,为许多中成药的组成成分[1]。

黄芪中的主要化学成分包括皂苷类、黄酮类及多糖类等[2]。

黄芪甲苷为黄芪的主要有效成分,是其质量控制的主要指标,其分析方法已有比色法、UV 法、荧光分光光度法、薄层扫描法、HPLC法、HPLC-M S等[3—8]。

其中比色法和薄层法存在定量不够准确的缺点,HPLC-MS虽然有较高的准确性和灵敏度,但使用仪器昂贵,操作复杂,故不适合常规分析,目前高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法是较为常用的黄芪甲苷的测定方法。

HPLC-ELSD测定补中益气颗粒中黄芪甲苷含量

ＢｕｚｈｏｎｇＹｉｑｉＧｒａｎｕｌｅｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＨＰＬＣ；ＥＬＳＤ；ＢｕｚｈｏｎｇＹｉｑｉＧｒａｎｕｌｅｓ；Ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ１Ｖ
１１０℃ ，气体流速为３．０Ｌ－ｍｉｎ～。结果：黄芪甲苷浓度在２．６８２～２１．４５６ｇ内线性关系良好（ｒ＝０．９９９９）；平均回收率为９８．３％，ＲＳＤ＝１．０％。结论：该方法灵敏、准确，可用于补中益气颗粒的质量控制。
Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｗａｓ２．６８２～２１．４５６Ｉｘｇ（ｒ＝０．９９９９）．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｗａｓ９８．３％
２．４专属性试验
－，－．一
、
～
一
，
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果见图１。供试品色谱中，在与对照品相应位置上有色谱峰，主峰与其他成分分离良好，阴性对照对黄芪甲苷峰无干扰。
ｇ线性关系良好。
２．９回收率试验取补中益气颗粒样品（批号：１１０５０２，含量为
０．２２９４ｍｇ・ｇ）约４．０ｇ，精密称定，平行做６份，

黄芪甲苷的含量测定研究进展

黄芪甲苷的含量测定研究进展摘要黄芪甲苷是中药黄芪的主要有效成分，含量测定方法较多，其测定方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法、荧光法等。

关键词黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪为常用中药,性温,味甘,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能,用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泄脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水肿、久溃不敛、慢性肾炎、蛋白尿、糖尿病等症[1]。

现代药理研究表明,黄芪具有器官保护、免疫调节、强心、降糖、抗衰老、抗炎抗病毒等作用[2]。

近年来，对黄芪甲苷的含量测定方法的研究很多，本文就几种常用方法进行介绍。

1.高效液相色谱法(HPLC法)HPLC法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷所产生的的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。

1.1HPLC-UV法：黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收λmax=200.08nm,紫外检测灵敏度低，干扰因素多[3]，目前HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器,闵庆璐等[4]采用HPLC-UV法测定丹黄祛瘀片中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Kromasil C18 柱（250mm×4.6mm）,流动相乙腈-水(32:68)，流速1.0ml/min,检测波长203nm。

结果线性范围0.066~0.330mg/ml(r=0.9993)回收率为95.0%~105.0%,平均回收率100.1%（RSD=2.0%，n=9）。

1.2HPLC-示差折光检测法：由于黄芪甲苷在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。

池玉梅等[5]应用HPLC-示差折光检测法测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersil ODS 2（4.6mm×200mm,5μm）,流动相为甲醇-水（67:33），结果线性范围1~5μg/ml,回收率为98.1%，RSD为2.02%。

该方法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确可靠。

HPLC-ELSD法测定复聪合剂中黄芪甲苷的含量

ａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄｏｆＦｕｃｏｎｇＭｉｘｔｕｒｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＨＰＬＣ—ＥＬＳＤｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅ
２０１３Ｖｏ１．８．Ｎ（
，
・
药物研究・
ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ法测定复聪合剂中黄芪甲苷的含量
陆萍倪立高效液相色谱法测定复聪合剂的含量，提高复聪合剂的质量标准。方法
采用高效液相色谱法一蒸发光散射检测器（ＨＰＬＣ— ＥＬＳＤ）法测定合剂中黄芪甲苷的含量，以Ｓｙｍｍｔｒｙ
，ｒ＝０．９９２２（ｎ＝５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｉｓ
Ｃ１８为色谱柱（３．９ｔｎｎｌ ×１５０ＩｎＵｌ，５ｍ），乙腈一水（３５：６５）为流动相；流速为０．５ｍＬ・ａｒｉｎ～；柱温为
室温；ＥＬＳＤ参数：漂移管温度１０５ｏＣ，氮气流速２．７ｍＬ・ｒａｉｎ。结果（ｎ＝５）。结论
ｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅｉｎＦｕｅｏｎｇＭｉｘｔｕｒｅ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎ；ＳｙｍｍｔｒｙＣｌ８（３．９ｍｍＸ１５０Ｉｌｌｍ，５Ｈ１），ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ；ａｅｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ —ｗａｔｅｒ（３５：６５），ｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；ｒｏｏｍｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．ＥＩＳＤｐａｒａｍｅｔｅｒｓ；

HPLC-ELSD测定黄芪破壁饮片中黄芪甲苷的含量

在（１．２９１３～１０．３３０）￣ｇ范围内线性关系良好（ｒ＝０．９９９８）。结论该方法简便快速，可作为黄芪破壁饮片中黄芪
甲苷的含量测定方法。
【关键词】黄芪破壁饮片；黄芪甲苷；ＨＰＬＣ— ＥＬＳＤ；含量测定
【摘要】目的建立测定黄芪破壁饮片中黄芪甲苷含量的高效液相一蒸发光散射检测的方法。方法采用Ｃ１８柱
（５Ｉｘｍ，２００ｍｍｘ４．６ｍｍ），乙腈一水（３２：６８）为流动相，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，蒸发光散射检测器漂移管温度８０ ℃。载气流速２．７ｍＬ／ｍｉｎ。结果该方法回收率９９．５％（ＲＳＤ＝２．０％），精密度ＲＳＤ＝１．４％，重复性ＲＳＤ＝２．５％，黄芪甲苷
ａｎｄｔｈｅｌｆｏｗｒａｔｅｏｆｃａｒｒｉｅｒｇａｓｗａｓ２．７ｍＩＪｍｉｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｗａｓ９９．５％（ＲＳＤ＝２．０％）．Ａｇｏｏｄ
ｐｒａｃｔｉｃｌａａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｏｒｆｄｅｔｅｍｉｒｎａｔｉｏｎｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎａｓｔｒａｇａｌｕｓｂｒｏｋｅｎ — ｃｅｌｌｐｉｅｃｅｓ．

黄芪甲苷的测定方法

黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较为黄芪的主要活性成分之一。

能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。

现代药理研究表明，黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。

近年来，对的含量测定方法的研究很多。

本人就几种常用方法作一比较。

1高效液相色谱法(I-R_C法)HPLC法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。

1．1 HPLC—uv法属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收f max200．8 nm)。

紫外检测灵敏度低，干扰因素多，目前 HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。

苏瑞强Ⅲ等采用 HPLC法测定黄芪甲苷的含量，色谱柱为YWG—C18柱0．9 mm x250 mm，5 m)，流动相为乙腈一水(1：2．3)，检测波长为 203nm，结果线性范围为0．86—5．27 I,L g／mL，加样回收率为 97．52％，RSD为3．10％。

1．2 HPLC一示差折光检测法由于在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。

池玉梅等四应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精 12I服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersi|ODS 2(4．6ram X 200ram，5 I,Lm)，流动相为甲醇一水(67：33)，结果黄芪甲苷线性范围是1-5 g／ml，回收率为98．1％，RSD为2．02％。

该法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确、可靠。

1．3 RP—HPLC法路玫等[3j采用RP—HPLC法测定黄芪注射液中的含量。

色谱柱为Nova—PakC18柱0．9ram xl5Omm，4la,m)，流动相为乙腈一水一磷酸(1：2：O．1)，检测波长为203nm，柱温为40％。

实验中将样品蒸干，采用水饱和的正丁醇溶解，用氨试液洗涤后蒸干，残渣用甲醇溶解。

结果加样回收率为94．7％，RSD为2．6％。

HPLC-ELSD法测定益心通脉颗粒中黄芪甲苷的含量

ｓｙｆｒｃｎｅｔｅｅｍｉａｉｎｏｉｈｏｐｅｏｕｎ．ａｏｔｎｔｒｎｔ．ＦｒＬｅｒｓｈｒ１ｃｌｍｎａｄ４６ｍｍ５ｏｄｏＣ８ｘ１０ｍｍ，ｍ，ＭｏｉｈｓｒＭｅｈｎｌ５ｔｘｂｌｐａｅｆｔａｏ — ｅｏ
ｗｔ７：５，ｅｏｉ．ＬｍｎＣｌｍｅａｒｆ０，ａｉ８Ｌｐｖｐｒｉｇｔｃｔｒｇａｅ５２）Ｖｌｃｙ１０ｍ／ｉ，ｏｍｎｔｐｒｕｅｏ４ ℃ Ｖｒｎ３０一Ｃｔｅｅａｏａｖｌｈｓａｅｎｒ（ｔｕｅｔｒａｙｔｅｉｔｉ
，
度范围内峰面积的对数值与浓度的对数值呈良好的线性关系，ＰＣ —ＥＳ法测定的线性范围为０２～ＨＬＬＤ
．
１ｍ／Ｌ；关系数ｒ０９９７平均回收率为９．％；Ｓ０３％。结论：高效液相色谱一蒸发光散射检测ｇｍ相：．９；９５ＲＤ＝．５用法测定益心通脉颗粒中黄芪甲苷的含量，方法简便，果准确结关键词益心通脉颗粒；芪甲苷；量测定：ＰＣ—ＥＳ黄含ＨＬＬＤｄｉ０３６／．ｓ．０００．０ｓ
ｄｔｃｏ．ｓｌＴｉｍｅｈｄｃｎｂａｕｅｉｔｅｏｏｅｔａｅｓｐｒｔｄｉｈｘｅｍｅｔｈｏｃｎｒｔｎｅｅｔｒＲｅｕｔｈｓｔｏａｅｍｅｓｒｄｗｔｏｈｒｍｐｎｎｓｒｅａａｅｎｔｅｅｐｍｎ，ｔｅｃｎｅｔｉｓ：ｈｃａｏｏｕｔｅｋａｅｉｉｈｃｐｆｔｅｃｎｅｔｔｎｏｕｒｃｌｖｌｅａｄａｇｏｉｅｒｒｌｔｎｈｐｈｉｅｒｆｉｍｐｒｙｐａｒａｗｔｎｔｅｓｏｅｏｏｃｎｒｉｆｎｍｅｉａａｕｎｏｄｌａｅａｉｓｉ，ｔｅｌａｉｈｈａｏｎｏｎ

含黄芪制剂中黄芪甲苷的含量测定

含黄芪制剂中黄芪甲苷的含量测定摘要：该文旨在建立某黄芪制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法测定含量。

所采用方法：采用蒸发光散射检测器（ELSD）以黄芪甲苷为对照品对黄芪中黄芪甲苷进行HPLC-分析，色谱柱为C18柱，甲醇-水（75∶25）为流动相，流速1.0 mL/min，柱温40 ℃；漂移管温度83.8 ℃，载气（空气）流速2.0 L/min。

结果：所建立的含量测定方法结果准确，便捷，专属性强，无干扰，可用于控制该制剂的质量。

关键词：黄芪甲苷HPLC-ELSD 含量测定含黄芪制剂中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1674-098X （2015）01（b）-0036-02中药黄芪含有黄芪甲苷、黄芪多糖等多种成份，其中黄芪甲苷为主要活性成分，具有降压、保护心肌、减轻心肌缺血和增强免疫力等作用[1-2]。

该研究建立某黄芪制剂（六类新药，研发中。

主要含黄芪、砂仁等）中黄芪甲苷的含量测定方法，为该制剂的质量控制提供方案。

1 仪器、试药与样品1.1 仪器Agilent1100高效液相色谱议；Alltech2000蒸发光散射检测器；AB250D十万分之一电子天平。

1.2 试药黄芪甲苷标准品（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯和分析纯；其余所用试剂均为分析纯；黄芪等药材购自广州致信药业有限公司。

1.3 样品的制备按制剂处方称取黄芪30 g和其他药材。

将除黄芪外的其他药材置圆底烧瓶中，加12倍量水，接挥发油提取器，提取1 h，所得挥发油弃去，水提液过滤，保留待用；药渣加入黄芪，加8倍量水，加热回流提取1 h，所得水提液过滤，保留待用；再加6倍量水，加热回流提取0.5 h，水提液过滤，与前两次水提液合并，浓缩至每毫升药液中含药材1 g，搅拌加入95%的乙醇至含醇量为60%，放置过夜，抽滤取滤液，即样品液。

2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品15 mg置100 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀。

HPLC-ELSD法测定参芪升阳补血胶囊中黄芪甲苷的含量

，
Ａｂｔａｔ０ｂｅｔｅＴｓａｌｈａｄｔｒｎｔｎｍｅｏｒａｔｇｌｓｅＩｉｈｎｉｅｇａｇｕｕａｓｌｙＨＰｃＥｓ．ｓｃ：ｊｃｉｏｅｔｂｉｅｅｍｉａｉｔｄｆｓｒａｉｎＳｅｑｓｎｙｎｂｘｅｐｕｅｂＬ — ＬＤｒｖｓｏｈｏａｏｄＶｈＣｓ
ＤｔｒｎｔｎｏｅｃｎｅｔｆａｔａａｏｉｅⅣ ｉｈｎｉｈｎｙｎｂｘｅＣｐｕｅｅｅｍｉａｉｆｈｏｔｎｓｒｇｌｓｏｔｏｄｎＳｅｑｓｅｇａｇｕｕａｓｌｓ
ｂＰＬＣ— ｙＨＥＬＳＤ
ｍ）ａｄａｅｏｉｉ－ｔｒ（８：６）ａｂｌｐａｅＴｈｏａｅｏｂｌｐａｅｗｓ０８ｍＬ・ｎ．ｈｕｅｔｍｐｒ — ｎｃｔｎｔｌｗａｅ．３ｒｅ２ｓａｍｏｉｈｓ．ｅｆｗｒｔｆｅｌｍｏｉｈｓａ．ｅｍｉ～Ｔｅｔｂｅｅａ
ｄｉ１．９９ｊｉｎ１０ — ４７２１Ｊ６Ｏ１ｏ：０３６／．ｓ．０４２０．０ｌＯ．１ｓ
中图分类号：９７编号：０４２０（０１０－４７０１０－４７２１）６０１－２
［］国家食品药品监督管理局．１新药转正标准：７第５册［］ｓ．
北京：民卫生出版社，０９３ —５人２０：４３．
ｒ］余翔．Ｌ３ＨＰＣ法测定鼻渊丸中绿原酸的含量［］西北药Ｊ．
学杂志，００，５３１９１１２１２（）：６ — ７．

高效液相色谱法分析和制备黄芪中的黄芪甲苷含量

高效液相色谱法分析和制备黄芪中的黄芪甲苷含量张文敬;张倩;张涛;穆祥;胡格【摘要】[目的]本试验利用高效液相色谱法分析和制备黄芪水煎液中的黄芪甲苷并通过质谱对收集到的组分进行鉴定.[方法]分析型色谱条件为色谱柱为EcliPseXDB-C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,柱温25℃,流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,进样量20μL.制备型色谱条件为色谱柱为HypersilC18(20 mm×300 mm,10μm)柱,流速10 mL/min,进样量2 mL,其他同分析型色谱.质谱分析法为电喷雾离子化(electrospray ionization,ESI)源,源电压3.5 kV,正、负离子检测,鞘气(N2)流速80a.u.,辅助气(N2)流速15 a.u.,碰撞气体为氦气,毛细管温度350℃,毛细管电压±5V.采用全离子扫描方式,扫描范围50～2 000 m/z.[结果]经分析型色谱得标准曲线回归方程为A=0.1717 C+0.4657,r=0.9996,在0.01～0.2 mg/mL范围内线性关系良好.制备型色谱方法得到的峰型较好,峰间隔适当,能够将相邻组分分离.收集保留时间为26 min的组分,经分析型色谱和ESI-MSn鉴定该组分为黄芪皂甙Ⅳ (astragaloside Ⅳ),即黄芪甲苷,且纯度可达95％.[结论]该方法精密度高、稳定性可靠、重现性好、加样回收率高,收集到的成分准确,纯度高,适用于黄芪中黄芪甲苷的分析和制备.【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2016(031)003【总页数】6页(P80-85)【关键词】黄芪;黄芪甲苷;高效液相色谱法【作者】张文敬;张倩;张涛;穆祥;胡格【作者单位】北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室,102206北京;北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室,102206北京;北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室,102206北京;北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室,102206北京;北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室,102206北京【正文语种】中文【中图分类】R284.1中药黄芪(Radix Astragali)是豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根，味甘性微温，具有益气固表，补气养血，利水消肿，脱毒，敛疮生肌等功效[1]。

HPLC测定黄芪甲苷概况

HPLC测定黄芪甲苷概况黄芪甲苷(AstragalosideⅣ)是中药黄芪中的特征性成分,目前黄芪药材以及含黄芪的单方及复方中药制剂大多以黄芪甲苷为质量评价指标,由于黄芪甲苷只在紫外末端有吸收,以往文献报道以薄层扫描方法居多,近年来,通过HPLC方法测定黄芪甲苷以其在准确性、重现性、灵敏度等方面的优势而逐渐为人们广泛使用,本文对近五年来HPLC法测定黄芪药材及制剂中黄芪甲苷的前处理方法及色谱条件两方面综述如下。

1前处理1.1提取纯化黄芪本身含有多种成分,复方中药成分更加复杂,而黄芪甲苷的含量相对较低,在药材中最高含量不到0.2%[1],因此在HPLC测定前进行适当有效的前处理对于保护色谱柱和提高供试液中黄芪甲苷含量都非常必要。

1.1.1样品[2](合剂)置分液漏斗中,乙醚提取,弃去乙醚液(乙醚脱脂),水层用水饱和正丁醇提取,合并正丁醇提取液(正丁醇提取),1%氢氧化钠溶液洗涤正丁醇液,再用正丁醇饱和的水洗至中性(1%氢氧化钠处理),蒸干,残渣用甲醇溶解定容。

1.1.2样品[3](黄芪口服液)正丁醇提取,1%氢氧化钠处理,蒸干,残渣加水溶解后上D101大孔吸附树脂柱,先后用水和30%乙醇洗脱,弃去洗脱液,用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,蒸干,甲醇定容。

1.1.3样品[4](黄芪注射液)加氢氧化钾,振摇使溶解,正丁醇提取,1%磷酸二氢钠水溶液洗涤,蒸干,甲醇定容。

1.1.4样品[5](复方口服液)正丁醇提取,1%氢氧化钠处理,蒸干,残渣用水溶解,上大孔树脂柱,先用水洗,再以75%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干,甲醇定容。

1.1.5样品[6](黄芪药材)粉碎,乙醚脱脂。

将药材置索氏提取器中,加甲醇提取,回收甲醇,提取液蒸干(甲醇索氏提取),残渣用水饱和正丁醇溶解,转入分液漏斗中,1%氢氧化钠处理,蒸干,甲醇定容。

1.1.6样品[7](颗粒剂)研细,甲醇索氏提取,残渣加水溶解,乙醚脱脂,水层正丁醇提取,加1%磷酸二氢钾水溶液洗涤,正丁醇层减压浓缩至干。

HPLC—ELSD法测定新生脉散液中黄芪甲苷的含量

温：３５￣Ｃ；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度１００ｏＣ，载气流速２．６ｍＬ・ｍｉｎ～。结果：线性范围为０．０２４～０．２４０ｍｇ・ｍＬ（ｒ＝０．９９９７），平均回收率为９９．０９％，ＲＳＤ为１．５５％（ｎ＝６），重复性ＲＳＤ为１．２２％（ｎ＝６），精
取缺黄芪的新生脉散液样品，按“ 供试品溶液
的制备 ” 项下操作制备阴性对照溶液，与新生脉散液供试品溶液进行比较，结果阴性对照对新生脉散
密度ＲＳＤ为０．６４％（ｎ＝６），稳定性ＲＳＤ为１．６１％。结论：本方法操作简便，准确灵敏，可用于新生脉散液
的质量控制。
关键词：新生脉散液
黄芪甲苷
ＨＰＬＣ — ＥＬＳＤ
ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４ — ３８４９．２０１３．Ｏ１．０２６
停证）的有效方剂，在临床应用中疗效显著。处方由黄芪、刺五加、党参、丹参等中药材组成，具有益气、活血、利水的功效。黄芪为方中君药，补气固表，利尿托毒，其主要有效成分为黄芪甲苷… 。本文采用ＨＰＬＣ — ＥＬＳＤ法测定新生脉散液中黄芪甲苷的含量［２－６１，以期为控制新生脉散液的质量提供参考。

HPLC法测定归芪补血口服液中黄芪甲苷的含量

HPLC法测定归芪补血口服液中黄芪甲苷的含量在临床中，通过等度洗脱的高效液相色谱法，对归芪补血口服液中所含的微量物质黄芪甲苷的含量进行测定，在测试中，经过对不同的样品进行检测和对比，确立起了最好的提取条件以及检测条件。

这样的方法十分的简便容易操作，测量的精密度和准确度都是十分值得参考的，具有很好的稳定性，回收率也比较高，所以能够作为测定归芪补血口服液中黄芪甲苷提供方法的依据。

标签：高效液相色谱法；归芪补血口服液；黄芪甲苷；提取随着我国医药事业的发展，在我国很多的常见药物中，有很多时具有营养机制和抗氧化价值的，其药理活性和药用价值都是十分值得研究的，这些药物在我们的实际生活中跟人体健康密切相关。

黄芪中富含有很多的黄芪皂苷、黄酮等化合物，这些化合物自身有十分强的生物活性，归芪补血口服液能够用在治疗细胞免疫功能低下的慢性肝炎，也可以用于慢性活动性肝炎，在临床中治疗的效果十分的有效。

不仅如此，归芪补血口服液还可以用来治疗白细胞减少症及和血小板减少性紫癜。

在对蒙古黄芪中的皂苷类和黄酮类有效成分的相关的研究和探索中发现，皂苷类成分拥有14个共有峰，而黄酮类成分则具有12个共有峰[1-3]，这些数据说明这些成分的化学成分是十分复杂的，那么对有效物质的提取和检测的要求就会变的很高。

1材料与仪器试剂：95％乙醇；无水乙醇；氯仿；正丁醇；丙酮；无水乙醚；盐酸；碳酸钡；乙酸酐。

上述所有的剂都是分析纯。

仪器：UV-2401P紫外分光光度仪，TG328B 光电分析天平；CKQ-250DE型数控超声波清洗器。

Gilentlloo高效液相色谱仪；HH-S2系列恒温水浴锅；FTIR一8400S型红外光谱仪；GSP-84-02型磁力恒温搅拌器，上述仪器都是由岛津公司生产。

2检测的方法与取得的结果2.1对黄芪甲苷的提取归芪补血口服液50ml加入6倍体积量(V／V)的60％乙醇，NaOH饱和溶液调节pH至12，温度：调节至60°，通过加热回流提取2次，最终得到提取液200ml，之后通过减压浓缩获取到浓缩液约100ml。

HPLC—ELSD法测定养心颗粒中黄芪甲苷的含量

维普资讯
南京中医药大学学报２００６年９月第２２卷第５期
一
２￣．ｅ．２００ＵＮＬＦ＆ＪＮＣＵＶＲＳｏ２ｎ５Ｓｏ０６
容量离心机（海安亭科学仪器厂）电子天平上；（Ａ１０）上海精密科学仪器有限公司）Ｆ１４（。
１２试药．
黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，号：１７６２０２）批１０３ —０３３。养心颗粒
精密称定，离心管中，甲醇２Ｌ，声提取置加０ｍ超２ｉ，置２ｍｎ离心１ｉ，速为２５０ｒ０ｍｎ静ｉ，５ｍｎ转０／
１１仪器．
Ｌ一Ａ高效液相色谱仪（Ｃ１Ｄ０日本岛津公司），
醇一水（９２）７：１为流动相；蒸发光散射检测器。漂移管温度９ ℃ ，体流量２２ＬＭ。理论板数０气．０ＳＰ
按黄芪甲苷峰计算应不低于４０００。２２对照品贮备液的制备．
及中风后遗症属于气虚血瘀痰阻而见肢体不遂、
黄芪甲苷在１９２．６ｇ内呈现较好的．５～９７０Ｐ－本方法操作简便，果准确，属性强，用于控制该制剂结专可
速为０７ＬｍｎＥＳ．０ｍ／ｉ；ＬＤ检测，移管温度９ｑ气体流量２２ＬＭ。结果漂ｏＣ，．０ＳＰ线性关系，均加样回收率为９．３，Ｓ为２５％。结论平６２％ＲＤ．８

HPLC-ELSD

含量测定。
关键词：高效液相色谱一蒸发光散射检测法；养血饮口服液；黄芪甲苷
中图分类号：Ｇ４２４．３１文献标识码：Ｂ文章编号：１６７１ — １２４６（２０１５）１６ — ００８２ — ０３
养血饮口服液是由黄芪、当归、鹿角胶、阿胶等制成的，具有补气养血、益肾助脾之功效，主治气血两亏、崩漏下血，体虚
赢弱、血小板减少及贫血，对放疗和化疗后引起的白细胞减少也有一定的治疗作用。方中的黄芪为君药，黄芪甲苷为其主要
（ｒ＝０．９９９５，ｎ＝６），表明浓度与峰面积在５４．１８～８６６．８０￣ｇ／ｎａ的范围内呈良好的线性关系。
２．６检出限与定量限
色谱柱：ＳｉｎｏｅｈｒｏｍＯＤＳ — ＡＰ（４．６×２５０ｎｌｎｌ，５ｔＬｍ）；流动相：以乙腈为流动相Ａ，以水为流动相Ｂ；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温
ＯＤＳ－ＡＰ（４．６ｘ２５０ｍｍ，５ｐ，ｍ）色谱柱，梯度洗脱，流动相Ａ为乙腈，流动相Ｂ为水，流速１．０ｍ］／ｍｉｎ，柱温３０，进样量２０ｌ；蒸
发光散射检测器条件：漂移管温度４５℃，压缩空气压力３５０ｋＰａ。在以上条件下测定养血饮口服液中黄芪甲苷的含量。结

HPLC-ELSD测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量

HPLC-ELSD测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量陈光辉;赵志强;张久胜;陈进钱;彭新华【摘要】目的:建立舒筋通络颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD),色谱柱为DIONEX C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(38∶ 62),流速为1.0mL·min-1,柱温为30℃,载气流速为2.5 L·min-1,漂移管温度为105℃.结果:黄芪甲苷的线性范围为0.968 8～9.688 μg,平均回收率为98.9％,RSD=1.2％.结论:该方法重现性好、灵敏、准确,可作为舒络通络颗粒的质量控制方法.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2013(015)012【总页数】3页(P1086-1088)【关键词】HPLC-ELSD;舒筋通络颗粒;黄芪甲苷;含量测定【作者】陈光辉;赵志强;张久胜;陈进钱;彭新华【作者单位】神威药业有限公司,河北石家庄051430;神威药业有限公司,河北石家庄051430;神威药业有限公司,河北石家庄051430;神威药业有限公司,河北石家庄051430;神威药业有限公司,河北石家庄051430【正文语种】中文舒筋通络颗粒是由牛膝、骨碎补、川芎、天麻、黄芪、葛根、威灵仙等9味中药组成，具有补肝益肾、活血舒筋功效[1]，是神威药业集团研制的国家二类中药保护品种。

现代药理学研究表明，舒筋通络颗粒组方中的黄芪，主要含皂苷类、黄酮类、多糖类及氨基酸类成分等，黄芪总皂苷(AST)具有免疫调节、护肝作用[2]，其中黄芪甲苷(AST-Ⅳ)为活性指标成分。

现行的舒筋通络颗粒标准[3]要求测定骨碎补的含量，未对其他成分进行定量测定。

为了更好地控制本品质量，保证临床疗效，笔者研究建立并验证了HPLC-ELSD检测黄芪甲苷含量的方法。

1.1 仪器DIONEX Ultimate 3000高效液相色谱系统(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自动进样器，变色龙色谱工作站)，Alltech 2000 ES蒸发光散射检测器。

不同生长年限黄芪中黄芪甲苷的含量测定

不同生长年限黄芪中黄芪甲苷的含量测定张军武;赵琦;王昌利【摘要】Objective: To determine astragaloside IV in HuangQi (Astragalus membranaceus [Fisch.]Bge.vor. mongholicus [Bge.] Hsiao) with different growth years. Method: HPLC-ELSD was adopted, C18 column(4.6 mm x 150 mm, 5 μm), mobile phase: acetonitrile: water (32:68), the flow rate: 1.0mL/min, temperature of ELSD detector drift tube: 105°C, flow rate:2.7mL/min. Result: The content of astragaloside IV in HuangQi cultivated more than 12 months was higher than the standards in codex and the highest content was HuangQi cultivated for 36 months. Conclusion: HuangQi cultivated for more than 12 months could be gathered as required.%目的:测定不同生长年限黄芪中黄芪甲苷的含量.方法:采用HPLC-ELSD 法测定,色谱柱为C18色谱柱(4.66mm×1506mm,56μm),流动相为乙腈∶水(32∶68),流速为l.06mL/min,ELSD 检测器漂移管温度:105℃,氮气流速:2.76mL/min.结果:生长12 个月以上的黄芪中黄芪甲苷含量均符合中国药典标准,36个月的黄芪甲苷含量最高.结论:黄芪的采收时间应选择生长12 个月以上者.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2012(025)003【总页数】2页(P30-31)【关键词】黄芪;黄芪甲苷;生长年限;HPLC-ELSD【作者】张军武;赵琦;王昌利【作者单位】陕西中医学院,陕西,咸阳,712046;咸阳市卫生学校;陕西中医学院,陕西,咸阳,712046【正文语种】中文【中图分类】R282.4黄芪为常用中药材，具有补气升阳、利水消肿、益气固表之功效。

新型电喷雾式检测器CAD与蒸发光散射检测器ELSD用于分析黄芪甲苷的

自从２００５年对乙脑减毒活疫苗实施批签发至今，已签发该制品１７００余批，３亿多人份。

总体合格率在９９．７％以上。

对某企业生产的乙脑减毒活疫苗应用趋势分析后发现，该企业生产的乙脑减毒活疫苗质量较为稳定，批间一致性较好。

绝大部分检测结果都在警戒限内，偶尔有超出行动限的结果，在展开详细的调查后，未发现严重影响产品质量的因素。

总体上说明企业的生产工艺较为稳定，质量控制方法也比较稳定，从而保证了乙脑减毒活疫苗质量的稳定性。

标准品的检测结果是判定试验是否成立的关键因素，对标准品和内控品活性的趋势分析，首先可以反映标准品和内控品的稳定性，若其活性降低，不符合要求，则应制备新一代标准品。

其次可以间接反映试验方法的稳定性，试验系统中人员、仪器、试剂等若出现重大的变更或出现重大的操作失误，都可能对标准品的结果有重大的影响，可表现在结果超出警戒限或行动限，此时应溯源整个试验系统，查明原因后及时纠正，以保证试验结果的准确性。

对乙型脑炎病毒滴度参考品滴定结果的趋势分析结果，除反映参考品的稳定性较好，仍可继续分发使用。

也反应中检院和企业的方法都比较稳定，一致性也较好。

除对成品和标准品进行趋势分析外，企业在对原辅材料及工艺用水的质量控制中，也可纳入趋势分析的理念。

对供应商的检定结果及企业的检定结果进行趋势分析，以保证原辅材料的稳定性，从而从源头上保证生产过程的稳定性。

在对生产环境的控制中，也可纳入趋势分析的理念，对空气净化系统及温度控制系统监测结果进行趋势分析，及时发现异常并加以纠正。

在对生产环节的质量控制中，每一质控点的数据都可纳入到趋势分析中，以保证早期发现问题，及时解决问题。

在进行趋势分析时，有时需考虑一些特殊情况。

如标准品换代（特别是用于相对定量的标准品），实验系统、生产工艺中重大改变，都需重新累积批数来计算均值及标准差。

在对趋势分析结果进行分析时，也应考虑检定结果可能来自不连续批次的情况。

本文对乙型脑炎减毒活疫苗质量控制中的趋势分析原则和方法进行了阐述，并通过趋势分析，发现该制品的生产工艺和产品质量较为稳定，检定方法也比较稳定可靠。

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法使其沉淀，以无法进行加样回收率的考察。但本文旨在所使用葡萄糖乙醇作为对照品，红景天中的总多糖含量进行对
检测，不是对红景天中的葡萄糖乙醇进行检测，且其方法而并学验证结果显示该方法的稳定性、密度、复性良好，明精重表该方法能够有效地检测红景天中的总多糖含量。
［］戚雁飞．灵芝中灵芝多糖的含量测定［］中国中药杂志，４Ｊ．
２０２（０：５８３０６，１１）８２— ５
本实验采用分光光度计法，葡萄糖为对照品，过硫酸以经
葸酮显色后测定吸收度。该方法操作简便，上待测溶液的加
现代中西医结合杂志ＭｏｅｎＪｕｎｌｆｎｅｒｔｒｉｏａＣｉｅｅａｄＷｅｔｒＭｅｉｉ０１Ｎｖ２（１ｄｒｏｒａｏｔａｅＴａｔｎｌｈｎｓｎｓｎｄｎ２１ｏ，０３）Ｉｇｄｄｉｅｃｅ管中，标准曲线制备项下的方法，精密加入硫酸蒽酮溶照自“
检测鼻渊舒口服液中黄芪甲苷的含量。色谱柱为Ｌｃｒｓｈｒ．４６ｍｍ×１０ｍｍ，ｍ）流动相为甲醇一水（５２）ｉｏｐｅ．ｈＣ（５５，７：５，
流速为１０ｍＬｍｉ，温为４．／ｎ柱０℃ ，测器为Ｖａｉｎ３０一Ｌ检ｒ８ａＣ型蒸发光散射检测器。蛄果该方法能很好地分离被测
・９９・３８
制备时间较短，合在短时间内对多批次的红景天多糖含量适进行分析筛选。
由于多糖提取方法为水提醇沉，对照品葡萄糖乙醇无而
液５ｍ ” ，法测定吸光度，标准曲线上读出供试品溶液Ｌ起依从中含葡萄糖的质量（ｇ，算，得。结果见表１ｍ）计即。
表１不同产地红景天多糖含量测定结果
产地圣地红景天四川大花红景天西藏大花红景天多糖含量／％３５．０１０．６１９．８产地玫瑰红景天高山红景天狭叶红景天多糖含量／％２８．１４８．７２９．８
笔者采用硫酸蒽酮法考察了不同产地红景天药材的多糖成分
［李丹红，玉彩，文．红景天植物生物活性研究进展［］２］孟赵Ｊ．毒
理学杂志，０８８：２３３２０（）３０— ２
组分与其他杂质，实验浓度范围内峰面积的对数值与浓度的对数值呈良好的线性关系。ＨＬ在ＰＣ—ＥＳ法测定的线ＬＤ
性范围为２２０ｍ／，关系数ｒ０９９，均回收率为９．％，Ｓ０～０ｇＬ相：．９平６９８ＲＤ＝０３％。结论用高效液相色谱一蒸发．５
［稿日期］２１０Ｏ收０１— ４一１
ＨＬＰＣ—ＥＳＬＤ测定鼻渊舒口服液中黄芪甲苷的含量
陈国宁
（苏省盐城市第二人民医院，苏盐城２４０）江江２０３
［要］一的摘研究鼻渊舒口服液中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱一蒸发光散射检测法
光散射检测法测定鼻渊舒口服液中黄芪甲苷的含量，法简便，果准确。方结［键词］鼻渊舒口服液；芪甲苷；Ｌ关黄ＨＰＣ—ＥＳＬＤ
［图分类号］Ｒ２．中９７２［献标识码］Ｂ文［文章编号］１０８４（０１３３８００８— ８９２１）１— ９９— ２站，Ｓ３自动进样器，Ｔ３Ａ２０Ａ３０柱温箱，Ａ一３型静音无油空Ｃ气泵，Ｐ１Ｄ电子天平，１１型ｐ／测试器，Ｑ一２０型Ｂ２１６７ＨｍｖＣ５超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）。
［参考文献］
３讨论
［］马根顺，丁．红景天的药理作用研究进展［］中国实用医１罗Ｊ．
药，０９４（８：２２８２０，２）２７— ２
红景天中的多糖在抗应激和增强机体免疫力方面有着显著的作用，不同产地和种类的红景天功效之间有差异。但
含量，中高山红景天多糖含量最高为４８％，其．７四川大花红景天含量最低只有１０％，检测结果对进一步说明红景天．６该
多糖含量与药效及 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 地的关系有指导意义。
［］李西林，艺蕾．红景天多糖的化学药理研究进展［］３南Ｊ．中国中医药信息杂志，０６，３３：０２０１（）１７—１０１