血液分析仪检验ppt课件

第一节 血液分析仪的检测原理
现代血液分析仪综合应用了电学和光（化）学两 大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和细胞内容 物（血红蛋白）。
电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法； 光（化）学检测原理包括激光散射法和分光光度 法。 激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色的 细胞核、胞质颗粒等成分。
一、电学检测原理
2．分光光度法 主要用于血红蛋白测定。用于 血红蛋白测定的溶血剂有2大类：
①改良氰化高铁血红蛋白溶血剂： 测定波长为 540nm，稀释液含氰化物成分。
②非氰化高铁血红蛋白溶血剂：即稀释液不含 氰化物成分。如SLS-Hb法，测定波长为555nm。经 HiCN法校准后，既可达到与HiCN法相当的精密度 和准确性，又可避免HiCN法的试剂对检验人员的潜 在危害和对环境的污染。
图3-11 VCS细胞检测立体散点图
图3-12 VCS异常细胞检测 平面散点图位置
目前，该技术也可用于网织红细胞计数（图3-13） 和有核红细胞的计数。如网织红细胞计数时，采用
“透明剂”使红细胞内 血红蛋白溢出形成“影 细胞”，再用新亚甲蓝 对网织红细胞RNA进行 染色，采用VCS技术测 定和分析网织红细胞。
用于血液分析仪检测的光散射分析理论是采用Mie
同质性球体光散射理论。
例如，红细胞/血小板
经十二烷基硫酸钠和戊二
醛固定呈球形后，采用流
式细胞术激光散射法进行
红细胞数量和相关参数的
分析，其散点图见图3-7和
图3-8。
图3-7 线性化红细胞体积/ 血红蛋白浓 度（V/HC）散点图
图3-8 光散射法血小板计数和红细胞计数散点图
用于血液分析仪检测的染料分为荧光染料和非荧
光染料。
荧光染料有：碱性槐黄、噻唑橙、噁嗪、聚亚甲
基蓝和碘化丙啶等，主
要用于核酸染色，被激
光照射后产生荧光和散
射光，如采用荧光染料
和激光散射法原理进行
的网织红细胞计数（图
3-9） 。
图3-9 噻唑橙荧光染色网织红细胞检测散点图
非荧光染料有： 亚甲基蓝（用于核酸染色） 氯唑黑E（用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性 粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色） 过氧化物酶试剂。 经过染色的细胞随鞘液流经激光检测区时，被 染色部分可发生光吸收现象，使光检测器接收到的 散射光强度发生改变，从而区分细胞的种类。
电导性特别有助 于鉴别体积相同、但 内部结构 不同的细胞 （或相似体积的颗粒。
图3-4 射频电流检测原理
（二）光（化）学检测原理 1．激光散射法 将稀释、染色（化学染色或核酸
荧光染色）、球形化的细胞悬液注入鞘液流中央，单个 细胞沿着悬液和鞘液流 两股液流整齐排列，以 恒定流速定向通过石英 毛细管，即流体动力学 聚焦技术（图3-5） 。
图3-5 鞘流技术
当细胞（或颗粒）通过激光束被照射时，因其本身的
特性（如体积、染色程度、细胞内容物大小及含量、细胞
核密度等），可阻挡或改变激光束的方向，产生与其特征
相应的各种角度的散
射光（表3-1）。放置
在石英毛细管周围不
同角度的信号检测器
（光电倍增管）可接
收特征各异的散射光
（图3-6） 。
图3-6 流式细胞术检测通道和光路系统
（三）血液分析仪检测原理的综合应用
1．VCS技术 在白细胞检测通道，红细胞被溶解，白细 胞接近自然状态。应用VCS技术检测白细胞大小、结构特点等 （表3-2），并形成三维散点图（图3-10，图3-11） 。 VCS技术 检测病理性异常细胞的散点图位置见图3-12。
图3-10 体积（V）、电导（C）和光散射（S）法
内核酸含量成比例，所以
未成熟粒细胞、异常细胞
荧光染色深，成熟白细胞
荧光染色浅，从而得到
4DIFF白细胞散点图（图314）。
图3-14 白细胞分类—4DIFF散点图
（2）WBC/BASO通 道：在碱性溶血剂作用下， 除嗜碱性粒细胞外的其他 所有细胞均被溶解或萎缩， 经流式细胞术计数，可得 到WBC/嗜碱性粒细胞百 分率和绝对值及 WBC/BASO散点图（图3- 图3-15 白细胞分类—WBC/BASO散点图 15）。
图3-3 电阻抗法正常血小板 计数和拟合曲线直方图
图3-2电阻抗法正常红细胞直方图
为提高计数准确性，部分仪器 还采用3次计数、扫流和拟合 曲线等技术进行血小板计数 （图3-3）。电阻抗法还可用 于白细胞计数及白细胞三分群 分析。
2．射频电导法 高频电流能通过细胞பைடு நூலகம்，用高 频电磁探针渗入细胞膜脂质层，测定细胞的导电性， 提供细胞内部化学成分、胞核和胞质（如比例）、颗 粒成分（如大小和密度）等特征性信息。
第三章 血液分析仪检验
自动血液分析仪（AHA）[血细胞计数仪（blood cell counter）] ,是临床检验最常用的筛检仪器之一 。
传统的显微镜血细胞计数或分类方法: 速度慢、误差大、影响因素多，且难以满足临床 大量标本检测需求。 AHA可进行：
①全血细胞计数及其相关参数的计算。②白细胞分类。③血细胞计 数和分类的扩展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关 参数检测；幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板 比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。
图3-13 VCS原理新亚甲蓝染色网织红细胞散点图
2．电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法
（1）4DIFF通道：利用半导体激光流式细胞术、核酸荧
光染色技术，采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板，白细胞
膜仅部分溶解。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内，
使DNA、RNA和细胞器着
色。因为荧光强度与细胞
（3）未成熟髓细胞信息通道：采用射频、电阻抗
和特殊试剂结合法。在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼
稚细胞膜脂质含量高，结合硫化氨基酸的量多于较成
熟的细胞，对溶血剂有抵抗 作用。加入溶血剂后，成熟
1．电阻抗法 即库尔特原理（图3-1）。电阻抗 法是三分群血液分析仪的核心技术，可准确测出细胞 （或类似颗粒）的大小和数量。
电阻抗法还与其他 检测原理组合应用于 五分类血液分析仪中。
图3-1 电阻抗法细胞计数原理
例如，电阻抗法红细胞 计数和血小板计数是在相应 通道内进行计数，并根据二 者体积不同，采用浮动界标 法进行区分（图3-2）。