酶促反应动力学实验设计

⑵ 琥珀酸。⑶ 0.02mol/L琥珀酸。⑷ 0.2mol/L丙二酸。⑸ 0.02mol/L丙二酸。⑹ 0.02%甲烯蓝
2. 器材 ⑴ 试管及试管架。⑵ 滴管、漏斗、纱布。⑶ 刻度吸量管。⑷ 高速组织捣碎机。⑸ 烧杯、研钵。⑹ 恒温 水浴箱。
1.酶的提取液的制备：从家兔肝组织中提取琥珀酸脱氢酶，加入1/15 mol/L Na2HPO4溶液5ml混匀后用干净的烧杯收集备用。 2取试管5支，按照下列表格操作
add relevant headline, modify the text content, 4.将试管放置在实验台上时，注意随时观察甲烯蓝褪色情况。 also can copy your content to this directly.
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谢谢观看！
本设计实验以琥珀酸脱氢酶为例，观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争 性抑制作用。在隔绝空气的条件下，从加入的甲烯蓝的褪色情况来判断琥 珀酸脱氢酶的活性
02
实验步骤设计
实验步骤设计
温度对酶活性的影响
1. 试剂 ⑴ 1/15 mol/LpH6.8磷酸盐缓冲液（phosphate-bufferedsaline，PBS)：称取NaH2PO4· 2H2O10.4 g ，溶于1000 mL蒸馏水中，即为1/15 mol/L NaH2PO4液。称取Na2HPO4· 12H2O 23.88 g，溶于 1000 mL蒸馏水中，即为1/15 mol/L Na2HPO4液。 取1/15 mol/LNaH2PO4液51 mL，加1/15 mol/L Na2HPO4液49 mL，混匀，即为1/15 mol/L pH 6.8 磷酸盐缓冲液。 ⑵ 1%淀粉液。 ⑶ 0.3%稀碘液：溶解2 g KI于20 mL蒸馏水中，加入1g碘，于量筒中稀释到300 mL。 ⑷ 0.9%NaCl。 2. 器材 ⑴ 试管及试管架。⑵ 滴管。⑶ 刻度吸量管。⑷ 恒温水浴、冰水浴、沸水浴。⑸ 白瓷比色盘 。
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0.2 —— 0.1
0.2
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Leabharlann Baidu
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—— 1.2 0.1
3.各管混匀后，沿试管的内壁加入石蜡油（隔绝空气），放置37℃水 浴中保温，观察各管甲烯蓝的褪色情况，并记录褪色的所需要的时间 ，解释其现象。
03
注意事项
抑制剂对酶活性的影响
【实验注意事项】 1.加入不同浓度的丙二酸或琥珀酸时，一定要看清楚试剂的浓度。
试剂ml 酶提取液 0.2mol/L琥珀酸 0.02mol/L琥珀酸 1 1 0.2 —— 2 1 0.2 —— 3 1 0.2 —— 4 1 —— 0.2 5 —— 0.2 ——
0.2mol/L丙二酸
0.02mol/L丙二酸 蒸馏水 0.02%甲烯蓝
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淀粉经淀粉酶催化水解为葡萄糖的不同阶段，与碘试剂作用的颜色反应如下： 淀粉（蓝色)→紫色糊精（紫色)→红色糊精（红色)→无色糊精（不显色)→麦芽糖 （不显色)→葡萄糖（不显色)。
抑制剂对酶活性的影响
能降低酶活性，甚至使酶活性完全丧失活性的物质，被称为酶的抑制 剂。酶的抑制分为可逆性抑制与不可逆性抑制。不可逆性抑制剂与酶生成 共价结合的复合物，或以其他结合方式生成结合牢固且难以再解离的复合 物。可逆性抑制剂多为与酶的底物化学结构相似的物质，可与酶的活性中 心结合，从而使酶与其底物结合的比例减少，降低酶促反应速率，但当加 大底物浓度时，可逆转其抑制。
实验原理：酶作为生物催化剂与一般催化剂一样呈现温度效应，酶促反应开始 时，反应速度随温度升高而增快，达到最大反应速度时的温度称为某种酶的最 适温度。由于绝大多数酶是有活性的蛋白质，当达到最适温度后，继续升高温 度，引起蛋白质变性，酶促反应速度反而逐步下降，以至完全停止。
酶的最适温度不是一个常数，它与作用时间长短有关。测定酶活性均在酶促反 应最适温度下进行。常用恒温水浴保持温度恒定。大多数动物来源的酶最适温 度为37~40℃。 本设计性实验以人唾液淀粉酶为例，观察高温（沸水浴）、最适温度 （37℃水浴）和低温（冰水浴）环境对酶活性的影响，并根据底物即淀粉水解 的快慢来判断酶活性的高低。
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1
实验目的及原理 实验方案设计 实验注意事项
目录
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01
实验目的及原理
实验目的及原理
实验目的：酶促反应动力学研究酶促反应的速度以及影响酶促反 应速度的各种因素。影响酶促反应的因素主要包括酶浓度、底物
浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂。本实验主要讨论温度对酶
活性的影响、抑制剂对酶活性的影响。掌握酶的最适温度的概念 ;掌握温度对酶活性的影响；掌握酶的抑制剂种类、概念；掌握 酶的竞争性抑制剂的动力学特点。
4.将A，B，C试管中的试剂滴一滴在白瓷比色盘上，然后分别向三个 盘里滴加2～3滴稀碘液
5.比色，得出实验结果，并小组讨论出实验结论
试管
1/15mol/L磷 0.9%NaCl（ml） 1%淀粉液（ml） 人淀粉唾液 温度（℃ 酸缓冲液（ml 酶（ml）
A B C
4
4 4
2 2 2
2 2 2
2 2 2
2.滴加液体石蜡时沿管壁倾斜加入，盖住液面即可。
请添加小标题
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3.观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。 modify the text content, also can copy your
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【注意事项】 1.严格控制水浴时间
抑制剂对酶活性的影响
【实验试剂和器材】 1. 试剂 ⑴ 1/15 mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液：称取9.078 g KH2PO4溶于蒸馏水中，1000 mL容量瓶中稀释到刻度，为 1/15 mol/L KH2PO4溶液。称取23.87 g Na2HPO4· 12H2O溶于蒸馏水中，于1000 mL容量瓶中稀释到刻度，为 1/15 mol/L Na2HPO4溶液。 取1/15 mol/L KH2PO4溶液175 mL，1/15 mol/L Na2HPO4溶液825 mL，混合，即为1/15 mol/L pH7.4磷酸盐 缓冲液。
实验步骤
1.收集唾液淀粉酶 2.取三支试管，分别编号为A，B，C。向三只试管中加入4mL磷酸缓 冲液，2mL0.9%NaCl，然后再向三支试管中加入2mL淀粉液。 3.将A，B，C三支试管分别装入100℃，37℃，0℃恒温水浴箱中恒温 水浴5min,使每支试管保持恒温后再分别向每支试管中加入2mL人唾液 淀粉酶，再恒温水浴5min。