细胞工程学复习题

细胞工程学习题

1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应

A．加大盐的浓度B．加活性炭

C．加大分裂素的浓度D．加大生长素的浓度

2．下列实验中可能获得三倍体植株的是

A．小麦的茎尖培养B．番茄花药培养

C．玉米胚乳培养D．玉米花粉培养

3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是

A．体细胞B．生殖细胞C．受精卵D．干细胞

4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类

A．葡萄糖B．果糖C．麦芽糖D．蔗糖

5．农杆菌介导的转化方法主要适用于

A．草本植物B．木本植物C．单子叶植物D．双子叶植物

6．原生质体纯化步骤大致有如下几步：

①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。

③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。

④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体的培养密度为104～106／ml。

正确的操作步骤是：（）

A ①②③④B②③①④C③①②④D③②①④

7．常用的细胞融合剂是

A．刀豆球蛋白B．聚乙二醇（PEG）C．细胞松弛素B D．脂质体

8．利用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中，HAT培养基用来进行

A．细胞融合B．杂交瘤选择C．检测抗体D．动物免疫

9．下列过程中，没有发生膜融合的是

A．植物体细胞杂交B．受精过程

C．氧进入细胞中的线粒体D．单克隆抗体的产生

10．科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生

大量的单克隆抗体。与骨髓瘤细胞融合的是

A．经过免疫的B细胞B．没经过免疫的T细胞

C．经过免疫的T淋巴细胞D．没经过免疫的B淋巴细胞

二填空题

1、在植物组织培养基中，添加_____细胞分裂素_____ 能促进合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂与分化，促进芽的形成

2、在植物组织培养基中，添加_____肌醇_____ 能促进糖类物质的转化，也能促进愈伤组织的生长以及胚状体的形成

3、生长素是由__色氨酸_____通过一系列中间产物形成，在植物组织培养中生长素主要是用来刺激细胞的分裂和诱导根的分化，吲哚乙酸（IAA）、2、4-二氯苯养乙酸（2、4-D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸（IBA）等为类生长素。

4、细胞分裂素大多是__嘌呤_____的衍生物，在植物组织培养中细胞分裂素主要是用来______

5、生长素与细胞分裂素配比低有利于_芽_______的形成

6人工种子的结构: ______体细胞胚、人工种皮、人工胚乳__，在人工种子制作中，细胞培养初期加入细胞分裂抑制剂5-氨基尿嘧啶是为了满足_胚状体同步发育_______的要求

7植物次级代谢产物在培养系统中的积累会目标产物的合成具有反馈抑制，可以采用流加培养________和两相培养_________工艺技术克服

8 1923年法国科学家卡雷儿设计培养动物细胞的__卡式瓶_____，培养鸡心组织获得成功

三、名词解释

1．细胞工程

细胞工程是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的

地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术

2．细胞工程包含哪几方面的内容

① 植物快速繁殖②新物种培育③细胞工程生物制品④细胞疗法与组织修复

3．什么是植物组织培养，什么是植物细胞培养，为什么植物组织培养能够实现植物的大规模繁殖

植物组织培养是将植物器官、组织、细胞或原生质体等外植体材料无菌条件下培养在人工培养基上，在适当条件下诱发长成完整植株的一种技术。

植物细胞培养是在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增殖，获得大量细胞群体的一种技术。（植物组织培养目的，就是获得新的个体；植物细胞培养目的，就是获得大量的细胞。）

①不受季节、地域、气候和有害生物影响，培养条件可控②遗传性状相对稳定，具有较稳定的次级代谢产物的合成能力

③分化程度高，可产生高度分化的细胞合成的次级代谢产物，例如根、叶中合成的代谢产物

④激素自养型，成本低；生长速度快。注：外植体切割可以形成很多植株

4外植体

外植体主要指用于离体培养的植物或组织切段。一般来说，来源于生长活跃或生长潜力大的植物组织或器官的外植体更有利于诱导分化形成再生植株

5、器官发生途径与体细胞胚途径

器官发生途径：外植体诱导愈伤组织的形成，在激素的调控作用下，愈伤组织分化形成形态与功能不同的细胞，继而形成不同的器官，发育成完整的植株。(成熟细胞→愈伤组织→出根出芽→完整植株。植物的器官发生指在离体培养的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。)

体细胞胚发生途径：外植体诱导愈伤组织的形成，愈伤组织分散成单个细胞，单个细胞培养形成体细胞胚，体细胞胚促进胚胎发育形成再生植株。(成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株。指体细胞在离体培养过程中经过了胚胎发育过程。)

6．玻璃化现象

植物组织培养中，常会出现一些半透明状的畸形试管植物，这类植物体被称为“玻璃苗”，这种现象称为玻璃化现象，又称过度水化现象。

7、采用体外受精技术获得试管动物时，为什么要对精子进行体外获能技术处理

精子获能是指精子获得穿透卵子透明带能力的过程。雄性精液中含有“去能因子”（多是：糖蛋白），附在精子表面，是顶体酶的抑制剂，抑制了精子的受精能力。去能因子的清除，使精子顶体酶活性恢复，具有受精能力。主要依靠宫颈、子宫及输卵管液中的β淀粉酶、胰蛋白酶、β葡糖苷酶及唾液酸酶，水解糖蛋白等“去能因子”。

※增强精子活力，使精子具有在体外与卵子结合的能力（精子获能）并能发生顶体反应。精子获能在生育上具有重要意义，通过获能不仅增强了精子活力，而且关键是去除了精子表面的覆盖物，暴露出精子膜和卵子的结合位点，使精子具有发生顶体反应的能力。当精子遇上卵子时，精子头部的“顶体”脱落，顶体酶释放，使卵子的放射冠和透明带溶解，精子进入卵细胞达到受精的目的。

8、超排卵技术

超数排卵：雌性动物用促卵泡素和促黄体素处理后，从输卵管中冲取成熟卵子，可直接与获能精子受精。（人工地使动物的激素水平达到阀值，诱发卵的成熟与排放）

※为了获得足够的卵母细胞需要采用超数排卵技术。诱导家畜超数排卵需注射外源激素，其目的就是人工地使动物的激素水平达到阈值，从而诱发卵的成熟与排放。

9、在动物细胞核移植实验中为什么要对供核细胞进行饥饿培养

供核细胞可以是动物原代细胞或传代细胞。分离制备单个动物细胞，体外培养得到正常二倍体体细胞系，然后进行1～5 天的缺血饥饿培养，诱使细胞处于“静止”状态（一般进入G0 期）。GO期细胞从生长方面看处于静止状态，在适宜刺激下，能被触发，从静止状态进入增殖状态。为核移植效率提供保证。

※因为体外培养得到正常二倍体体细胞系，通常采用处于G0期细胞作为核移植的供体细胞。在5～10d内将培养液中的血清浓度从10％逐渐减少到0.5％（即血清饥饿法），造成营养缺乏，才能诱导细胞脱离正常周期而进入G0期，所以需对供核细胞进行饥饿培养。G0期细胞处于静止状态，在适宜的刺激下，细胞能被触发，从静止状态进入到增殖状态。

10、聚乙二醇诱导细胞融合的原理，为什么要对融合细胞筛选

(PEG的促融合机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。)

聚乙二醇诱导细胞融合的原理：

①PEG分子具有轻微的负极性，可以与具有正极性基团的水分子、蛋白质、碳水化合物形成氢键，在相邻的原生质体间起到分子桥的作用，使原生质体接触。当PEG分子被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新分配。此时，一种原生质体上带正电的基团可能与另外一个原生质体中带负电的基团相连，导致原生质体融合。②除了PEG的这种分子桥作用外，它可以改变膜的物理和化学性质，增加类脂膜的流动性，使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能，从而促进细胞融合。