卡瓦胡椒及胡椒的荧光AFLP分子标记研究
AFLP分子标记的发展及应用
AFLP分子标记的发展及应用分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段,直接体现基因组DNA 间的差异。
在过去30多年,DNA 分子标记得到了迅速发展。
扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP) 技术为第二代分子标记技术,是在随机扩增多态性(Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD) 和限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP) 技术上发展起来的DNA 多态性检测技术,同时拥有RFLP的高重复性和RAPD简便快捷的特点。
同其他以PCR 为基础的标记技术相比,AFLP 技术能同时检测到大量的位点和多态性标记,具有覆盖面广、高保真性、高效性、高分辨率、DNA用量少、事先勿需知道序列任何信息、可在全基因组产生标记、标记的分离遵循孟德尔遗传规律等优点,自1995年由Zabeau和Vos创建以来,已在动物、植物和微生物的分子系统学研究中得到应用,具有广阔的发展前景。
1 AFLP 标记的基本原理、操作流程及技术关键1.1 AFLP 标记的原理AFLP 标记的原理是对基因组总DNA 酶切后经PCR 进行选择性扩增。
先将基因组DNA 用两种限制性内切酶酶切成大小不等的片段,并与含有粘性末端的人工接头相连,形成酶切位点不同的限制性酶切片段,然后用与接头和位点相匹配的引物进行预扩增,预扩增产物作为进一步PCR 扩增的模板,再选用特异引物进行选择性扩增,扩增后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳将特异的限制性片段分离。
由于不同来源DNA 的酶切片段存在差异,因而产生了扩增产物的多态性。
1.2 操作流程AFLP 标记的具体操作流程为: ①DNA 提取和质量检测;②双酶切和酶切片段连接;③酶切连接片段的预扩增;④选择性扩增;⑤扩增产物在聚丙烯酰胺变性凝胶上电泳; ⑥将电泳后的凝胶进行显影检测及数据分析。
AFLP分子标记的发展及应用
收稿 日期：０ ０一 ｌ １ ２ １ Ｏ －５ 作者简介 ： 静（ ９９ ） 女， 刘 １ 一 ， 硕士， 师。Ｅ— ａ ：ｕ ｒ９ １ ＠１３ ＣＩ ７ 讲 ｍ ｉ ｌ ｊ￣ ７ ２ ６ ．Ｏ ｌ ｉｉ ｎ
京林业大学学报 ， ０ ０ ２ （ ） ７ — ３ ２０ ，２ ６ ：９ ８ ．
［］ 李 ６
１ ＡＬ Ｆ Ｐ标记 的基本 原 理 、 操作 流程 及 技
术 关键
１ １ Ａ ＩＰ 记的原 理 ． ＦＪ 标
ＡＬ Ｆ Ｐ标记 的原理是对基 因组 总 Ｄ Ａ 酶切 Ｎ
后 经 Ｐ Ｒ进行选 择性扩 增 。先将 基 因组 Ｄ Ａ用 ｃ Ｎ 两 种限制 性 内切 酶 酶 切成 大 小 不 等 的 片段 ， 与 并
不断改进和优化 ， 由此衍生出多种相关技术 ， 并 使其 在遗传多样 性、 种质 鉴定 、 遗传图谱构 建 、 因定位 等研 基 究 中得到广泛的应用。本文 即对 Ａ Ｌ ＦＰ的原理、 衍生技术及其应用等进行了介绍 。
关键词 ： 分子标记技术 ； Ｆ Ｐ 应用 ＡＬ ； 中图分类号 ： ５３ Ｑ ０ 文献标识号 ： Ａ 文章编号 ：０ １ ４４ （００ ０ － ０ ０ ０ １０ － ９ ２ ２ １ ） ５ ０ １ － ５
为第 二代分子标 记技术 ， 是在 随机 扩增 多态性 （ ａ ｄｍ ｍｐｉｅ ｏｙ ｏｐ ｉ Ｄ Ａ，Ｒ Ｐ Ｒ ｎ ｏ Ａ ｌ ｄＰ ｌ ｒｈ Ｎ ｉ ｆ ｍ ｃ Ａ Ｄ）和
限制 性 片 段 长 度 多 态 性 （ ｅｔｃｏ ｒ ｍ ｎ Ｒ ｓｉｉ Ｆａ ｅｔ ｒ ｔｎ ｇ
ｎｔ Ｐｌ ｏ ｈｓ Ｒ Ｌ ）技术上发展起来的 ｇＩ ｏ ｍ ｒ ｉ Ｉ ｙ ｐ ｍ， Ｆ Ｐ Ｄ Ａ多态性检测技术 ， Ｎ 同时拥有 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ的高重复 性和 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ简便快捷的特点。同其他 以 Ｐ Ｒ为 Ｃ 基础 的标 记 技 术 相 比 ， Ｆ Ｐ 技术 能 同 时 检 测 到 ＡＬ 大量 的位 点 和多态性 标记 ， 具有覆 盖面广 、 高保 真 性、 高效性、 高分辨率、 Ｎ Ｄ Ａ用量少、 事先勿需 知 道序列任何信息、 可在全基因组产生标记、 标记的 分离遵循孟德 尔遗传 规律等优点 ， １９ 自 ９５年 由 Ｚｂａ Ｖ ｓ ａｅｕ和 ｏｕ 创建以来 ， 已在动物、 植物和微生
AFLP分子标记技术在浙蒲2号种子纯度快速鉴定中的应用
Ｚ ｅ ｕ Ｎ ． ａ ｓ ｂｉ ｅ ｙ ａ ａｙ ｉ ｏ ｅ ｙ ｒ ｅ ｅ ａｉ ｈ ｐ ｏ ２ ｗ ｓｅ ｔ ｌ ｈ ｄ ｂ ｎ ｌｓ ｆｔ ｉ ｈ ｂ ｄ ｇ ｎ ｒ ｔ ｎ，ｐ ｒｎｓａ ｄ ａ ｂ ｅ ｄｎ ｉｅＪ ９ ａ ｓ ｓ ｈｒ ｉ ｏ ａ ｅ ｔ ｎ ｒ ｅ ｉｇ ｌ ０ ９．Ｔ ｏ ｐ ｉ ｆｐ ｉ ｒ ｎ ｗ ａｒ ｏ ｒ ｓ ｍｅ
《 植物 新 品种 保护 条 例》 有 关 育 种者 权 利 保 护 等 法规 的 颁 布 实施 ， 保 护 品种 选 育 者 的 知识 产 为 权 ， 少假 劣种 子 对农 户造 成 损失 ， 用 分 子 标 减 应 记技 术进行 品种 真 实性 快 速 鉴定 技术 正 备 受 关
注 Ｊ 】 。在 众 多 的 Ｄ Ａ分 子标 记 中 由于 Ｒ Ｐ Ｎ ＡＤ 技术 提供 的信 息 不够 全 面 ， 复性 差 ， 般 为 显 重 一
王玲 平 ， 丹 丽 ， 晓花 ， 宝根 ， 国景 戴 吴 汪 李
（ 浙江省农业科学院 蔬菜研究所 ， 浙江 杭州 ３０２ ） １０ １
摘
要： 以瓠瓜杂种一代浙蒲 ２号及其父 、 母本和品系 Ｊ９ Ｏ９为材料 ， 建立 了利用 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ分子标记技术进行瓠瓜
杂种纯度鉴定技术体系 。从 ６ 引物组 合 中筛选 出了两对 稳定 扩增 、 ４对 多态 性好 、 分辨 率高 的引物 组合 Ｅ ． Ａ Ｃ Ｍ Ｃ Ａ和 ＥＡ Ｃ Ｍ— Ｉ 可有效区分父 、 和杂种一代 ， Ｃ ／ —Ｔ — Ｃ Ｊ ＣＴ， 母本 适宜用 于浙蒲 ２ 号种子纯度快速鉴定。
统的依据 形 态学 进 行 品种 纯 度鉴 定 大 多依 靠 田 间种植 ， 鉴定所需 时 间长 、 率低 ， 效 常不能 满足 种
卡瓦胡椒及胡椒的荧光AFLP分子标记研究
２０ ０ ７年 第 ７期
卡 瓦胡 椒及 胡椒 的 荧光 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ分 子 标 记 研 究
施 江 ，辛 莉 ，杨 彦 郑学 勤。 ，
（１ 河 南 科 技 大学 农 学 院 ，河 南 洛 阳 ４ １ ０ ； ． 京 鼎 国生 物技 术 有 限责 任 公 司 ， 京 １ ０ ８ ； ． ７０ ３ ２ 北 北 ０ ０ ８
ｎｅ ｉ ｉ ｌ ｒｔ ｏ ｆｉｉ ｎ ． Ｔｈｅ ｒ ｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈａ ｈｅ ｇｅ ｔｃ ｄ ｓ ａ ｃ ｔ ｅ ｖ ｎｄ ｏｔ ｅ ｔｃ ｓｍｉａ ｉｙ ｃ ｅ ｆｃｅ ｔ ｅ ｕ ｔ ｓ ｏ ｄ ｔ ｔｔ ｎｅ ｉ ｉｔ ｎ ｅ ｂｅ ｗｅ ｎ Ｋａ ａ ａ ｈ ｒ Ｐｉ ｒ ｇ ｒ ｐｅ ｅ ｍｐｌ ｓ ｓｗａ ａ ，ａ ｈｅｆｕ ｅ ｃ ｎｃ －ａ ｌ ｄ ＡＦＬＰ ｗａ ｐ ｉａ ｅ ｔ ｈ ｄ ｎ ｉｉａ ｉ ｎ ａ ｍ ｓ ｆ ｒ ｎｄ ｔ ｌ ｏｒ ｓ ｅ ｅ ｌ ｂｅｅ ｓａ ｐｌｃ ｂｌ ｏ ｔ ｅ ｉ ｅ ｔｆｃ ｔｏ ａ ｄ ＤＮ Ａ ｉ ｇｅ ｐｒｎ ｏ ｔ ｕ ｔｏ ｆＫａ ａ ｎ ｆｎ ｒ ｉ ｔｃ ｎｓ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｖ ． Ｋｅ ｒ ｓ：Ｋａ ａ￣Ｐｉ ｒｎｉ ｕ ； ｙ ｗｏ ｄ ｖ ｐｅ ｇｒ ｍ Ａｍｐｌ ｉ ｄ ｆ ａ ｍ ｅ ｔ ｌｎｇ ｈ ｐｏ ｙ ｉ ｅ ｒ ｇ ｆ ｎ ｅ ｔ ｌ ｍｏｒ ｈｉｍ Ｇｅ ｅ ｉ ｅ ａ ｉ ｎｓ ｐ ｐ ｓ ｎ ｔｃｒ ｌｔｏ ｈｉ
ｒ ｓ ｅ ｃ —ａ ｅ ｅ ｅ ｃ ｎ ｅ ｌ ｂ ｌ ｄ ＡＦＬ Ｐ，ｔ ｅ ３ ｅ ｍ ｐ ａ ｍ ｓｗｅ ｅｄ ｖ ｄ ｄ ｉ ｔ ｉ ｅ ｅ ｔ ｒ ｕ ｓａ ． ２ ｏ ｈ ｅ ｈ １ ｇ ｒ ｌ ｓ ｒ ｅ ｉ ｅ ｎ ｏ ５ ｄ ｆ ｒ ｎ ｏ ｐ ｔ ５ ｆｔ ｅ ｇ — ｆ ｇ ０
分子标记——AFLP原理和操作步骤
分子标记——AFLP原理和操作步骤一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。
但AFLP是通过P CR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。
实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。
实验中，根据需要通过选择在末端上分别填加了1～3个选择性核苷的不同引物，可以达到选择性扩增的目的。
这些选择性核苷酸使得引物能选择性地识别具有特异配对顺序的内切酶片段，进行结合，导致特异性扩增。
二、实验试剂Taq酶、EcoRI/ MseIEcoRI/ MseI接头、E+A引物M+C引物、T4DNALigaseE和M引物、琼脂、过硫酸胺、丙烯酰胺、尿素、硝酸银、甲酰胺、dNTPs、二甲苯青、冰醋酸、玻璃硅烷、50bpMark三、操作步骤（一）基因组DNA提取和纯化A、参考实验一的大量提取DNA实验方法，B、DNA的纯化：用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小，取出其中的1/3已提取的基因组D NA进行纯化，首先用TE缓冲液补满至总体积50ul，再等体积苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）、氯仿/异戊醇（2 4∶1）各抽提一次，离心吸上清液于Eppendorf管中，加入1/10体积的NaAC和二倍体积预冷的无水乙醇，－20℃放置2h以上，10000g离心10min，用70%的乙醇漂洗DNA沉淀2次，风干后溶于30μlTE缓冲液中，U V-2401PC（岛津）紫外分光光度计检测A260、A280值并定量，再用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小。
注：0.1-0.2g组织可用100ul溶液E溶，0.5g组织，溶液E可增加至300ul，此时DNA浓度大约为100ng/ul。
（二）限制性酶切及连接在0.2ml离心管中加入：模板量约为250ng，2.5μl 10×酶切缓冲液， 2.5μl 10×T4DNA连接酶切缓冲液，5U EcoRⅠ，5U MseⅠ，2U T4连接酶，50pmol MseⅠ接头（序列见表2），双蒸水补至25μl。
4个香菇品种的AFLP分子标记研究
4个香菇品种的AFLP分子标记研究AFLP分子标记技术是一种基于多态性DNA片段的分子标记技术，其利用限制性内切酶将DNA片段切割成不同长度的片段，并通过连接不同的引物（Primer）进行扩增和检测。
AFLP分子标记技术具有高多态性、高分辨率和高灵敏度等特点，因此在遗传学研究中得到了广泛的应用。
本文旨在利用AFLP分子标记技术对4个香菇品种进行分子标记研究，以期为香菇的遗传进化和品种改良提供科学依据。
一、研究目的本研究旨在利用AFLP分子标记技术对4个香菇品种进行分子标记研究，分析其遗传多样性和亲缘关系，为香菇的遗传改良提供科学依据。
二、材料与方法1. 实验材料本研究选取了4个香菇品种作为研究材料，分别为A、B、C和D品种。
2. DNA提取采用CTAB法从香菇的幼嫩菌盖组织中提取总DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳进行质量检测。
3. AFLP分子标记利用EcoRI和MseI两种限制性内切酶对提取的DNA进行酶切，并使用不同长度的引物进行扩增反应。
扩增产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到AFLP图谱。
4. 数据分析三、结果通过琼脂糖凝胶电泳检测，提取的香菇DNA质量良好，可以用于后续的AFLP分子标记分析。
通过AFLP图谱分析，发现4个香菇品种之间存在较高的遗传多样性，同时构建了系统发育树和聚类图，明确了它们之间的亲缘关系。
四、讨论本研究利用AFLP分子标记技术对4个香菇品种进行了分子标记研究，分析了它们的遗传多样性和亲缘关系。
结果表明，香菇品种之间存在较高的遗传多样性，这为香菇的遗传改良提供了重要的数据支持。
通过AFLP分子标记技术，还可以筛选出具有优良遗传特性的亲本，为香菇育种提供了更多的选择。
五、结论六、参考文献1. 刘伟, 胡千庆. 香菇种质资源遗传多样性及AFLP分析[J]. 农业生物技术学报, 2012, 20(3): 543-548.。
AFLP分子标记技术及其应用2
涪陵师范学院生命科学系 主讲人：江 波
AFLP分子标记技术及其应用
? 一、什么叫AFLP ？ ? 二、AFLP 的基本原理是什么？ ? 三、AFLP 的实验过程怎样？ ? 四、AFLP 的应用研究如何？ ? 五、对AFLP 的评价
我们都知道世界是多姿多彩的，可以说是 五彩斑斓，花样百出，无奇不有！从生物
?AFLP （Amplified Fragment Length Polymorphism，
扩增片断长度多态性） ? 事实上，还有很多分子标记术像SSR、ISSR、
SRAP（相关序列扩增多态性）另外，还有现在号称 为第三代分子标记的SNP（ 单核苷酸多态性) 等
AFLP 的基本原理
? 基因组DNA经两种限制性内切酶酶切，形成分子 量大小不等的随机限制性酶切片段，将特定的人 工合成的短的双链接头连在这些片段的两端，形 成一个带接头的特异片段，通过接头序列和PCR 引物3ˊ端选择性碱基的识别，对特异性片段进行 预扩增和选择性扩增。最后只有那些两端序列能 与选择性碱基配对的限制性酶切片段才能被扩增； 最后将选择性扩增产物在高分辨率的变性聚丙烯 酰胺凝胶上电泳，寻找多态性扩增片段。
叫做扩增片断长度多 h.所得数据可在实验室之间交
态性。
流和比较
分子标记的历史：
? 第一代分子标记技术 RFLP （Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段长度多态性）
? 第二代分子标记技术 RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA ）
a.多态性高；
b.共显性遗传，在二倍体的生 物中能区分纯合与杂合状态；
种质资源分析中RFLPRAPDAFLPSSR的比较研究
种质资源分析中RFLPRAPDAFLPSSR的比较研究种质资源分析是研究物种的遗传多样性和亲缘关系的重要手段之一、其中，RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)、RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)、AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) 和SSR (Simple Sequence Repeat) 是四种常用的分子标记技术。
以下是对这四种技术的比较研究详解：1.RFLP：RFLP技术是一种早期的分子标记技术，通过检测DNA的限制性内切酶切割产生的DNA片段的长度差异，从而分析基因座的多态性。
RFLP技术具有高度的稳定性和可重复性，适用于分析DNA序列中的比较大的多态性位点。
然而，该技术由于耗时、耗费精力和使用的放射性同位素等缺点，已逐渐被其他技术所取代。
2.RAPD：RAPD技术是一种基于随机引物扩增多态DNA片段的技术。
其原理是随机应变的引物与目标DNA中的功构象区结合，经为引物扩增产物进行电泳分离后，通过比较DNA带型的差异来分析物种间的遗传关系。
RAPD技术具有快速、简单和经济的优点，但因为扩增产物的非特异性和多态性，其结果存在一定的误差和不可重复性。
3.AFLP：AFLP技术是一种基于PCR扩增的多态性位点标记方法。
它在RAPD的基础上引入了限制性内切酶切割，因此具有较高的清晰度和可重复性。
AFLP技术在物种间遗传多样性和亲缘关系研究中广泛应用，特别适用于对有限数量的DNA样本进行分析。
4.SSR：SSR技术是一种基于PCR扩增的微卫星位点标记方法，也被称为简单重复序列标记。
它通过特异性引物扩增不同物种DNA中的高度可变区域，然后利用电泳分离进行检测。
SSR技术具有高度多态性、遗传稳定性和高度重复性等优点，被广泛应用于种质资源分析和分子育种。
利用AFLP分子标记探讨蜡梅种质资源的遗传多样性
利用AFLP分子标记探讨蜡梅种质资源的遗传多样性赵冰;张启翔【期刊名称】《生态学报》【年(卷),期】2007(27)11【摘要】利用AFLP分子标记技术,对中国蜡梅种质资源7个野生种群的遗传多样性进行了研究.利用筛选出的3对引物,共扩增出253条谱带,其中218条多态带,多态位点占86.17% ;种群间的基因分化系数为0.2906,说明蜡梅基因多样性主要存在于种群内;种群总的Nei s基因多样性指数为0.2933,Shannon信息多态性指数为0.4487,蜡梅总的遗传多样性水平较高.蜡梅不同种群遗传多样性水平差异较大,种群多态位点百分率在65.44%～87.16%之间,Nei s基因多样性指数为0.1653～0.4012,Shannon信息多态性指数为0.3132～0.5603.神农架种群(SN)和保康种群(BK)的遗传多样性水平较高.用NTSYS2.01版软件对样品进行UPGMA聚类分析,结果7个种群并没有按地理距离进行聚类.最后提出要对各蜡梅野生群体采取相应的迁地和就地保护措施.【总页数】8页(P4452-4459)【作者】赵冰;张启翔【作者单位】北京林业大学园林学院,国家花卉工程技术研究中心,北京,100083;北京林业大学园林学院,国家花卉工程技术研究中心,北京,100083【正文语种】中文【中图分类】Q948【相关文献】1.利用AFLP分子标记对广西荔枝优稀种质遗传多样性及分类研究 [J], 彭宏祥;曹辉庆;朱建华;廖惠红;黄凤珠;李江舟;梁文2.利用AFLP分子标记分析夏枯草种质资源遗传多样性 [J], 江建铭;沈宇峰;孙乙铭3.蜡梅AFLP分子标记技术体系的建立 [J], 赵冰;张启翔4.蜡梅种质资源遗传多样性研究进展 [J], 茅允彬;李名扬;眭顺照5.蜡梅种质资源遗传多样性的ISSR分析 [J], 赵冰;张启翔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
AFLP分子标记技术及其在药用植物研究中的应用
［］ 晓 慧 ， ． ６ ２谢 等 ５ ６咧 临床 药 物 咨 询 刚 顾 性 分 析 中 阑 药 房 ．０ １ ２０ ，
１ （ ）： ３ ～ ４ ９ ２ ７ ４ ８ ３
终 得 到 各 方 的 支 持 和 院方 的 资助 ． 物 咨 询服 务 一 定 会 更 好 药
的 为 广大 患 者 服 务 。
２ Ｔｅ ｃ ｉｇ Ｈｏ ｐｔ ｌｏ ｈ ｎ ｏ ｇ Ｕ ｎｖ ｒ ｉ ｆＴＣＭ ， ｉｎ ｎ ２ ０ １ ） ． ａ ｈ ｎ ｓ ｉａ ｆＳ ａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｓｔ ｏ ｙ Ｊ ａ ５ ０ １
ＡＢＳ ＴＲＡＣＴ ： ＯＢＪ ＥＣＴＩ ＶＥ
Ａ ｍ ｐ ｉｉｄ ｆａ ｌｆｅ ｒ ｇｍ ｅ ｔｌ ｎ ｈ ｐ ｌ ｍ ｏｒ ｓ （ ＦＩＰ） ｉ ｅ ｍｏｌｃ ａ ａ ｋ ｒ ｔ ｃ ｉ ｅ ｉ ｅ ｎ ｅ ｇｔ ｏ ｙ ｐｈｉｍ Ａ ｓ ａ ｎ ｗ ｅ ｕｌｒｍ ｒ ｅ ｅ ｈｎｑｕ ｎｖ ｎ—
（ 东中 医 药 大 学 ， 东 济 南 ２０ ５ ；．山 东省农 科 院 作物 所 ， 东 济 南 ２ ０ ０ ；．山 东 中 医药 大 学 附属 医院 ， 东 济 南 ２ ０ １ ） 山 山 ５３５１ 山 ５ １０ ２ 山 ５０ １
摘 要 ： 增 片段 长度 多 态性 （ ｍｐｉ ｅ ｒｇ ｎ Ｌ ｎ ｔ ｏｙ ｏ ｐ ｉ Ａ Ｌ ） 一 种 在 Ｐ Ｒ技 术 和 Ｒ Ｌ 扩 Ａ ｌ ｉ Ｆ ａ ｍｅ ｔ ｅ ｇｈ Ｐ ｌｍ ｒ ｈｓ ｆｄ ｍ， Ｆ Ｐ 是 Ｃ Ｆ Ｐ标 记 技 术 基 础 上 发 明 的新 的分 子 标 记技 术 。本 文 简述 了 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ分 子 标记 技 术 的原 理 和 特 点 ， 述 了其 在 药 用植 物 遗 传 连 锁 图 谱 的 构 建 综 遗 传 多样 性 研 究 、 质 资源 鉴 定 等 方 面 的 应 用 情 况 ， 对 其 发 展 前 景进 行 了展 望 。 种 并
AFLP：一种适用于水产动物研究的分子标记技术
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产物 ， 能够在 遗传关 系 十分相 近 的材料 中产生 多态性 ， 而 且 Ｄ Ａ用量少 ， Ｎ 检测效率高 。 具有可靠性好 、 分辨率高等特
点。 此外 ， Ｆ Ｐ Ａ Ｌ 既可用于分析不 同复杂程度的基 因组 Ｄ Ａ， Ｎ 也可用于分析克 隆 Ｄ Ａ大片段 。 Ｎ 它不仅是 一种 Ｄ Ａ指纹技 Ｎ
第２卷 第４ ５ 期
２１ ０ ０年 ４月
现
代
渔
业
信
息
Ｖｏ．５ １ Ｎｏ４ ２ ．
Ａｐ ． ２ １ ｒ， ０ ０
Ｍ ＯＤＥ ＲＮ Ｉ ＨＥ ＥＳ Ｉ ０ＲＭ ＡＴ ０Ｎ ＦＳ ＲＩ ＮＦ １
ＡＦＬＰ ： 一 种 适 用 于 水 产 动 物 研 究 的
分 子 标 记 技 术
的物种 。因此 ， Ｆ Ｐ Ａ Ｌ 是一 种非常适 合于水 产动物研 究 的分
子标记 。
ｌ
Ｌ ｇ ｉ ｎ ｗ ｉｈ ｃ ｒ ｐｏ ｄｌ ｇ ａ ｐｔ ｒ ｌ ａｔｏ ｔ ｏｒｏｓ ｎ ｎ ｄａ ｏ ｓ
１ ＡＦ Ｐ基 本 原 理 Ｌ
ＡＬ Ｆ Ｐ的基本 原理是 基 因组 Ｄ Ａ经 限制性 内切 酶双 酶 Ｎ
AFLP分子标记技术的发展及其在海洋生物中的应用
第26卷第1期 海 洋 水 产 研 究 Vol.26,No.1 2005年2月 MA RIN E FISH ERIES RESEA RCH Feb.,2005・综述・AFL P分子标记技术的发展及其在海洋生物中的应用王伟继1 岳志芹2 孔 杰1 王清印1(1中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛266071)(2中国海洋大学海洋生命学院,青岛266003)摘 要 A FL P分子标记技术是一种建立在PCR技术和RFL P标记基础上的新的DNA指纹技术,具有多态性丰富、结果稳定可靠、重复性好、所需DNA量少,且可以在不需预先知道基因序列的情况下进行研究等特点,现已被广泛应用于遗传图谱构建、遗传多样性分析、系统进化及分类学、遗传育种和种质鉴定以及基因定位等方面。
本文简要介绍A FL P分子标记技术的原理、特点、发展及其在海洋生物中的应用现状及前景展望。
关键词 A FL P 分子标记 海洋生物中图分类号 Q7 文献识别码 A 文章编号 100027075(2005)0120080206Development of AFLP and its application in m arine organismWAN G Wei2ji1 YU E Zhi2qin2 KON G Jie1 WAN G Qing2yin1 (1Yellow Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy Fishery Sciences,Qingdao266071)(2Ocean University of China,Marine Life College,Qingdao266003)ABSTRACT A FL P(Amplified Fragment Lengt h Polymorp hism)is one of t he newly devel2 oped DNA fingerp rint techniques based on PCR and t he RFL P(Restriction Fragment Lengt h Polymorp hism)techniques.High polymorp hisms,good rep roducibility,low usage of DNA template amount and no requirement of p rior knowledge of genome sequences are advantages of A FL P.A FL P has been applied widely in construction of genetic linkage map,assessment of ge2 netic polymorp hism,pedigree analysis,breeding p ractice and gene po sitioning.In t his paper, t he p rinciple,characteristics of A FL P and it s applications in marine biology were int roduced and discussed.KEY WOR DS A FL P Molecular marker Marine organism A FL P(Amplified Fragment Lengt h Polymorp hism)———扩增片段长度多态性技术,又称为SRFA(Se2 lective Rest riction Fragment Amplification),是由荷兰Keygene公司科学家Zebeau Marc和Vos Pieter等发展起来的一种检测DNA多态性的新方法,于1993年获得欧洲专利局专利。
AFLP分子标记技术的新进展及其在法医植物学中的应用
Ｋｅ ｏ ｄ：ｆ ｅｓ ｅ ｉｎ ； ｏａｙ ｒｖ ｗ ［ ｂｉ ｔｎ ｔｐ］ ｍｏ ｃ ｌ ａｋｒ Ａ Ｌ ｙ ｗ ｒ ｓ ｏ ｎｉ ｍ ｄ ｉｅ ｂ ｔ ； ｅｉ ｐ ｌ ａ ｏ ｙ ｅ ｒ ｃ ｃ ｎ ｅ ｕ ｃｉ ； ｌ ｕａ ｍ ｒｅ； Ｆ Ｐ ｅ ｒ
Ｐ Ｒ技 术 的 出现 是 Ｄ Ａ遗 传 分 析 的一 场 革 命 ， Ｃ Ｎ
中 的应 用情 况 。
关键词 ：法 医学； 植物 学； 综述 ［ 文献类型 号 ： Ｆ ９ ． Ｄ ７５ ２ 文 献标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ — ６ ９ ２ ０ ）５ ０ ７ — ３ ０４ ５ １ （０ ８ ０ — ３ ５ ０
院 ， 海 ２０３ ） 上 ０ ４ ３
摘 要 ：扩 增 片 段 长 度 多态 性 （ｍｐｉｅ ｒｇ ｎ ｅ ｇｈ ｐ ｌｍｏｐ ｉ ＡＦ Ｐ 是 一 种 用 来 检 测 基 因组 多 态 ａ ｌ ｄ ｆａ ｍｅ ｔｌｎ ｔ ｏｙ ｒｈｓ ｉ ｆ ｍ， Ｌ ）
性 的新 一代 分子 标 记 。 有 分辨 率 高 、 定性 好 、 复性 好 等 特 点 。 年 来， 究人 员对 该 技 术进 行 了不 断 的 具 稳 重 近 研 优 化 和 完善 ． 由之衍 生 出 多种 相 关 技 术 。 Ｆ Ｐ技 术 在 动 物 、 物 及 微 生 物 等 许 多研 究领 域 已有 广泛 应 用 ， 并 ＡＬ 植 在 法 医植 物 学 中得 到 初 步发 展 并 成 为 研 究 热 点 。 本 文 主 要 介 绍 了 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ技 术 的 新 进 展 以及 在 法 医植 物 学
实验推荐分子标记技术AFLP
实验推荐分子标记技术AFLP 引言：分子标记技术是现代遗传学和分子生物学研究中不可或缺的工具之一。
由于其高度多态性和高分辨率的特点，AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism，扩增片段长度多态性）技术在种质资源评价、基因组构建和进化生态学研究等领域得到广泛应用。
本文将介绍AFLP 技术的基本原理、实验步骤及数据分析方法，旨在为研究人员提供一种高效、准确的分子标记技术。
一、AFLP技术的原理AFLP技术利用限制性内切酶对基因组DNA进行特异性切割，然后通过PCR扩增和电泳分离等步骤，获得多态性的DNA序列。
其原理流程如下：1. DNA提取：从不同样本（如植物、微生物等）中提取总DNA，保证所需的DNA质量和浓度。
2. 酶切反应：选择适当的限制性内切酶对DNA进行切割，生成特定的DNA片段。
3. 适配体连接：将适配体序列连接到DNA片段的末端，使其成为PCR扩增的起始模板。
4. 扩增反应：利用引物对连接的DNA片段进行PCR扩增，生成大量的AFLP产物。
5. 电泳分离：将扩增的AFLP产物进行电泳分离，根据片段的大小而呈现不同的迁移距离。
6. 成像和数据分析：利用凝胶图像获取AFLP分析结果，并进行数据分析和解读。
二、AFLP实验步骤AFLP实验的具体步骤如下：1. 样本准备：选择适当数量的样本，根据研究目的确定样品的种类和数量，并进行相应的预处理。
2. DNA提取：采用合适的DNA提取方法提取样本中的总DNA，并进行质量和浓度检测。
3. 酶切反应：选择合适的限制性内切酶对DNA进行酶切反应，生成DNA片段。
4. 适配体连接：将适配体序列连接到DNA片段末端，以便进行扩增反应。
5. 扩增反应：利用PCR技术对连接的DNA片段进行扩增，生成大量的AFLP产物。
6. 电泳分离：将扩增的AFLP产物进行凝胶电泳分离，根据片段大小进行排序，形成AFLP图谱。
7. 图谱分析：根据AFLP图谱进行数据分析，解读样品之间的遗传关系。
《2024年胡椒碱衍生物的荧光分析与蛋白的相互作用研究》范文
《胡椒碱衍生物的荧光分析与蛋白的相互作用研究》篇一一、引言随着生命科学技术的不断发展，蛋白质与小分子化合物的相互作用成为了研究的热点。
胡椒碱衍生物作为一种具有生物活性的小分子化合物，其与蛋白质的相互作用机制研究对于理解其生物活性和药物作用机理具有重要意义。
本文旨在通过荧光分析技术，研究胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用，为进一步的药物设计和开发提供理论依据。
二、材料与方法2.1 材料实验所使用的胡椒碱衍生物、蛋白样品、缓冲液及其他试剂均为市售产品，且符合实验要求。
2.2 方法2.2.1 荧光分析技术利用荧光光谱仪，对胡椒碱衍生物进行荧光分析。
通过测定其激发光谱和发射光谱，了解其荧光性质。
2.2.2 蛋白与胡椒碱衍生物的相互作用研究将蛋白与不同浓度的胡椒碱衍生物进行混合，利用荧光光谱、圆二色光谱等技术，观察蛋白的构象变化，以及胡椒碱衍生物与蛋白的结合情况。
三、实验结果3.1 胡椒碱衍生物的荧光性质通过荧光光谱测定，发现胡椒碱衍生物具有明显的荧光性质，其激发光谱和发射光谱均呈现出良好的对称性。
3.2 蛋白与胡椒碱衍生物的相互作用将蛋白与不同浓度的胡椒碱衍生物混合后，观察到蛋白的构象发生变化。
随着胡椒碱衍生物浓度的增加，蛋白的构象变化越来越明显。
同时，通过荧光滴定实验，发现胡椒碱衍生物与蛋白之间存在明显的相互作用，且呈现出剂量依赖性。
3.3 相互作用机理初步探讨通过圆二色光谱等手段，初步探讨了胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用机理。
发现胡椒碱衍生物能够与蛋白发生静电作用、氢键等相互作用，从而影响蛋白的构象。
四、讨论4.1 荧光分析技术在蛋白与小分子化合物相互作用研究中的应用荧光分析技术是一种常用的研究蛋白与小分子化合物相互作用的方法。
通过测定小分子的荧光性质以及其与蛋白相互作用后的构象变化，可以了解小分子化合物与蛋白的相互作用机制。
本文利用荧光分析技术，研究了胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用，为进一步的药物设计和开发提供了理论依据。
胡椒实时荧光定量PCR内参基因的筛选
胡椒实时荧光定量PCR内参基因的筛选作者：胡丽松范睿伍宝朵吴刚谭乐和郝朝运来源：《热带作物学报》2017年第10期摘要为筛选胡椒不同组织间稳定表达的最佳内参基因，以胡椒栽培种‘热引1号’的主根、主蔓、花序和不同发育时期果实共8个组织为材料，采用实时荧光定量PCR技术，分析Polyubiquitin 1、Polyubiquitin 2、Polyubiquitin 3、GAPDH 1、GAPDH 2、Histone 3-1、Histone 3-2、Cyclophilin、Actin等共9个不同持家基因的表达差异情况。
基于各个基因的Ct值，利用geNorm、NormFinder和BestKeeper分析候选持家基因表达的稳定性。
结果表明，在不同的组织中，9个持家基因的表达量存在差异。
3个软件分析出的结果有所不同，综合分析结果显示，Histone 3-1表达最为稳定，其次为Polyubiquitin 1、GAPDH-2。
内参基因标准化因子的配对差异分析（Vn/n+1）表明，Histone 3-1和Polyubiquitin 1是分析胡椒基因表达模式的最佳内参基因组合。
关键词胡椒；实时荧光定量PCR；内参基因中图分类号 Q949.732.3 文献标识码 AThe Identification of Internal Control Genes for Real-timePCR Normalization in Black PepperHU Lisong， FAN Rui， WU Baoduo， WU Gang， TAN Lehe， HAO Chaoyun*Spice and Beverage Research Institute， CATAS， Wanning， Hainan 571533， ChinaAbstract In order to identify the suitable internal control gene for the gene expression analysis in black pepper， the expression of 9 housekeeping genes， including Polyubiquitin 1， Polyubiquitin 2， Polyubiquitin 3， GAPDH 1， GAPDH 2， Histone 3-1， Histone 3-2， Cyclophilin and Actin were assessed by using real time quantitative PCR in 8 different tissues. On the basis of Ct value comparison， the stability of housekeeping gene expression was analyzed by using geNorm，NormFinder and BestKeeper. The results of comprehensive ranking by three methods indicated that the most stable three reference genes were Histone 3-1， Polyubiquitin 1 and GAPDH 2. The value of pairwise variation Vn/n+1 suggested that Histone 3-1 and Polyubiquitin 1 had to be used together for normalization， which would make the expression of target genes more reliable in black pepper.Key words Black pepper； real-time PCR； internal control genedoi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.10.021实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR，qPCR）是一种新的核酸定量技术，通过在PCR反应体系中添加特定荧光基团，对整个PCR 反应过程中的产物变化进行实时监测[1-2]。
卡瓦胡椒及胡椒的AFLP分子标记探讨
卡瓦胡椒及胡椒的AFLP分子标记探讨施江;辛莉;杨彦;郑学勤【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2007(035)024【摘要】为了探讨卡瓦胡椒与胡椒及胡椒属其他野生种的亲缘关系.以6份卡瓦胡椒、21份栽培胡椒和野生胡椒、1份不同属的草胡椒28份种质为试材,提取叶片DNA,从64对引物中筛选出带型好、多态性和分辨率高的引物进行AFLP扩增,并运用MVSP3.13f软件进行聚类分析.筛选出的4对引物共扩增出191个条带,其中189个具有多态性,占98.6%.AFLP分子标记结果表明,在相似系数0.52处将28份种质分为6个类型,6份卡瓦胡椒聚成一类,说明卡瓦胡椒为胡椒科胡椒属,但与胡椒及其近缘野生种间亲缘关系有一定的距离.该研究为选择卡瓦胡椒嫁接用砧木、卡瓦胡椒的分子鉴定和构建卡瓦胡椒指纹图谱提供了依据.【总页数】4页(P7415-7417,7419)【作者】施江;辛莉;杨彦;郑学勤【作者单位】河南科技大学农学院,河南洛阳,471003;河南科技大学农学院,河南洛阳,471003;北京鼎国生物技术有限责任公司,北京,100088;热带作物生物技术国家重点实验室,海南海口,571101【正文语种】中文【中图分类】S641.3【相关文献】1.卡瓦胡椒及胡椒的AFLP分子标记探讨 [J], 施江;辛莉;杨彦;郑学勤2.卡瓦胡椒及胡椒的荧光AFLP分子标记研究 [J], 施江;辛莉;杨彦;郑学勤3.胡椒的化学成分、药理作用及与卡瓦胡椒的对比 [J], 韦琨;窦德强;裴玉萍;陈英杰4.卡瓦胡椒及胡椒的RAPD聚类分析 [J], 施江;辛莉;郑楷;李建国;郑学勤5.卡瓦胡椒SCAR分子标记的研究 [J], 施江;辛莉;谭琳;郑学勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
动物育种中AFLP分子标记技术的应用
动物育种中AFLP分子标记技术的应用
江昱
【期刊名称】《西南民族大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2004(030)002
【摘要】简述了AFLP分子标记的原理、流程、技术关键及其优化措施,对AFLP 技术的特点进行了评价,综述其在动物育种中的研究,最后对AFLP的应用前景进行展望.
【总页数】5页(P205-209)
【作者】江昱
【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041
【正文语种】中文
【中图分类】Q75;S813
【相关文献】
1.AFLP分子标记技术及其在蔬菜遗传育种中的应用进展 [J], 侯雷平;梅燚;崔艳玲;陈海丽;孟淑春
2.AFLP分子标记技术在蚕豆遗传育种中的应用 [J], 李萍
3.AFLP分子标记技术及其在家蚕遗传育种中的应用 [J], 张友洪;肖金树;周安莲
4.AFLP分子标记技术在杨树遗传育种中的应用 [J], 杨淑红;张瑞粉;孙淑云
5.谈AFLP分子标记技术及其在动物遗传育种中的应用 [J], 郑嫩珠;陈晖;陈岩锋;郑丽祯;缪中纬
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胡椒实时荧光定量PCR内参基因的筛选
胡椒实时荧光定量PCR内参基因的筛选胡丽松;范睿;伍宝朵;吴刚;谭乐和;郝朝运【摘要】In order to identify the suitable internal control gene for the gene expression analysis in black pepper,the expression of 9 housekeeping genes,including Polyubiquitin 1,Polyubiquitin 2,Polyubiquitin 3,GAPDH1,GAPDH 2,Histone 3-1,Histone 3-2,Cyclophilin and Actin were assessed by using real time quantitative PCR in 8 different tissues.On the basis of Ct value comparison,the stability of housekeeping gene expression was analyzed by using geNorm,NormFinder and BestKeeper.The results of comprehensive ranking by three methods indicated that the most stable three reference genes were Histone 3-1,Polyubiquitin 1 and GAPDH 2.The value of pairwise variation Vn/n+1 suggested that Histone 3-1 and Polyubiquitin 1 had to be used together for normalization,which would make the expression of target genes more reliable in black pepper.%为筛选胡椒不同组织间稳定表达的最佳内参基因,以胡椒栽培种‘热引1号’的主根、主蔓、花序和不同发育时期果实共8个组织为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析Polyubiquitin 1、Polyubiquitin2、Polyubiquitin3、GAPDH 1、GAPDH 2、Histone 3-1、Histone 3-2、Cyclophilin、Actin等共9个不同持家基因的表达差异情况.基于各个基因的Ct值,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper分析候选持家基因表达的稳定性.结果表明,在不同的组织中,9个持家基因的表达量存在差异.3个软件分析出的结果有所不同,综合分析结果显示,Histone 3-1表达最为稳定,其次为Polyubiquitin1、GAPDH-2.内参基因标准化因子的配对差异分析(Vn/n+1)表明,Histone 3-1和Polyubiquitin 1是分析胡椒基因表达模式的最佳内参基因组合.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2017(038)010【总页数】6页(P1901-1906)【关键词】胡椒;实时荧光定量PCR;内参基因【作者】胡丽松;范睿;伍宝朵;吴刚;谭乐和;郝朝运【作者单位】中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁571533【正文语种】中文【中图分类】Q949.732.3实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR，qPCR）是一种新的核酸定量技术，通过在PCR反应体系中添加特定荧光基团，对整个PCR反应过程中的产物变化进行实时监测[1-2]。
《2024年胡椒碱衍生物的荧光分析与蛋白的相互作用研究》范文
《胡椒碱衍生物的荧光分析与蛋白的相互作用研究》篇一一、引言近年来，随着生物化学和分子生物学的发展，对生物大分子如蛋白质的研究越来越深入。
其中，蛋白质与小分子化合物的相互作用研究成为了热门领域。
胡椒碱衍生物作为一种具有独特生物活性的化合物，其与蛋白质的相互作用研究具有重要的科学意义和应用价值。
本文旨在通过荧光分析技术，研究胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用机制，为相关药物设计和开发提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料（1）蛋白样品：选择具有代表性的蛋白样品，如酶、受体等。
（2）胡椒碱衍生物：合成一系列不同结构的胡椒碱衍生物。
（3）荧光试剂：选择适合的荧光试剂，如荧光染料、荧光探针等。
2. 方法（1）荧光分析技术：利用荧光光谱仪，测定胡椒碱衍生物与蛋白相互作用的荧光强度、荧光寿命等参数。
（2）蛋白表达与纯化：采用基因克隆、表达及纯化技术，获得目标蛋白。
（3）分子对接：利用计算机模拟技术，预测胡椒碱衍生物与蛋白的结合模式和亲和力。
三、实验结果1. 荧光分析结果通过荧光光谱分析，发现胡椒碱衍生物与蛋白在特定条件下存在明显的荧光增强或减弱现象。
不同结构的胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用表现出不同的荧光特性。
通过测定荧光寿命，可进一步了解相互作用的动力学过程。
2. 分子对接结果利用计算机模拟技术，预测了胡椒碱衍生物与蛋白的结合模式和亲和力。
结果表明，胡椒碱衍生物能够与蛋白形成稳定的复合物，且不同结构的衍生物与蛋白的结合能力存在差异。
3. 蛋白表达与纯化结果通过基因克隆、表达及纯化技术，成功获得了目标蛋白。
经质谱和氨基酸序列分析，确认了蛋白的正确性。
为后续的相互作用研究提供了可靠的实验材料。
四、讨论1. 相互作用机制根据荧光分析和分子对接结果，推测胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用机制。
可能存在静电作用、氢键、疏水作用等多种相互作用力参与其中。
不同结构的胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用力类型和强度可能存在差异。
2. 结构与活性的关系通过对不同结构的胡椒碱衍生物与蛋白的相互作用研究，发现结构与活性之间存在一定的关系。
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收稿日期:2007-03-26基金项目:国家 十五 重点攻关课题(2001BA 707B);河南科技大学校基金作者简介:施 江(1966-),男,四川巴中人,副教授,博士,主要从事植物分子生物学与植物基因工程研究。
卡瓦胡椒及胡椒的荧光AFLP 分子标记研究施 江1,辛 莉1,杨 彦2,郑学勤3( 1.河南科技大学农学院,河南洛阳471003; 2.北京鼎国生物技术有限责任公司,北京100088;3.热带作物生物技术国家重点实验室,海南海口571101)摘要:对6份卡瓦胡椒材料、23份栽培胡椒和野生胡椒材料、1份不同属的草胡椒材料、1份不同科的普通烟材料,共计31份试验材料,进行荧光AFLP 分子标记,研究卡瓦胡椒与胡椒及其他近缘野生种的亲缘关系。
结果表明,在相似系数0.52处将31份种质划分为5个类群,第1个类群有普通烟,第2个类群有草胡椒,第3个类群是卡瓦胡椒,第4个类群有胡椒,第5个类群有山胡椒、蒌叶和蒟蒌。
说明卡瓦胡椒与胡椒及其他近缘野生种的亲缘关系有一定距离,为卡瓦胡椒真伪性的分子鉴定和构建卡瓦胡椒的指纹图谱提供了基础性的工作。
关键词:卡瓦胡椒;胡椒;扩增片段长度多态性;亲缘关系中图分类号:Q949.732.3 文献标识码:A 文章编号:1004-3268(2007)07-0080-05Studies on the AFLP M olecular M arkers ofK ava and P ip er nigrumSH I Jiang 1,XIN Li 1,YANG Yan 2,ZH ENG Xue qin3(1.Co lleg e of A g ronom y,H enan U niv ersity of Science and T echnolog y,Luoy ang 471003,China;2.Beijing Dingg uo Biotechno lo gy CO.,LT D,Beijing 100088,China;3.State K ey L aborato ry of T ropitcal Crop Biotechno lo gy ,H aikou 571101,China)Abstract :The genetic relationship betw een Kava and P ip er nigr um has been studied by the AFLP mo lecular marker s.31test m aterials w ere used in the paper,including 6Kava genotypes,23cultiv ated and w ild peppers,1P ep eromia p ellucid a kunth and 1tobacco.Based o n the fluo r escence labeled AFLP,the 31g erm plasms w ere devided into 5different gr oups at 0.52of the ge netic sim ilar ity coefficient.The result show ed that the g enetic distance betw een Kav a and other Pip er germplasms w as far,and the fluorescence labeled AFLP w as applicable to the identification and DNA fingerprint construction o f Kav a.Key words :Kava;Pip er nigrum ;Am plified frag ment leng th po lymor phism;Genetic r elationship 卡瓦胡椒(Pip er methy sticum )具有治疗焦虑症、抑郁症、促进睡眠和提高睡眠质量的显著疗效,对于缓解精神紧张和放松肌体都有很好的作用,且毒负作用小[1]。
国内卡瓦胡椒制剂所需的卡瓦胡椒原料均需从南太平洋岛国进口,目前海南热带作物生物技术研究所、浙江林科院等单位在进行卡瓦胡椒的人工栽培研究。
本研究的目的是通过AFLP分子标记技术分析卡瓦胡椒与胡椒及胡椒属其他几个野生种的亲缘关系远近。
AFLP 技术在烟草[2]、玉米[3,4]、茶树[5]、杨树[6]、板栗[7]、罗非鱼[8]等的种质资源遗传多样性研究及亲缘关系研究方面应用广泛,但卡瓦胡椒及其近缘种的AFLP 分子标记研究,目前国内外尚未见有报道[9,10]。
笔者从南太平洋岛国引入了6份卡瓦胡椒材料,其他近缘种胡椒!80!材料采自兴隆热带植物园胡椒属种质资源圃,进行卡瓦胡椒及其近缘种的AFLP分子标记研究,为卡瓦胡椒嫁接用砧木的选择提供依据、卡瓦胡椒真伪性的分子鉴定和构建卡瓦胡椒的指纹图谱提供基础性的工作。
1材料和方法1.1材料本试验使用的材料见表1。
其中编号为31的材料是茄科的普通烟,起着 路标 的作用,其余30表1荧光AFLP试验材料编号材料名称采集地备注1山胡椒(Pip er hance i M axim)霸王岭Pip erac eae2草胡椒(Pep er omia p elluc id a Kunth.)儋州两院P ep eromia3蒌叶(Pip er betle L.)儋州两院原产印度尼西亚,Pipe r4蒟蒌(Pip er sarme ntosum Roxb.)两院海口校区Pip er5卡瓦胡椒1号(Piper methysticum Forst.f.,俗名Kava)南太平洋岛国斐济Pip er,绿杆6卡瓦胡椒2号(Piper methysticum Forst.f.,俗名Kava)同上Piper,绿杆7卡瓦胡椒3号(Piper methysticum Forst.f.,俗名Kava)同上Piper,绿杆,节部肿大8卡瓦胡椒4号(Piper methysticum Forst.f.,俗名Kava)同上Piper,绿杆,节部肿大9卡瓦胡椒5号(Piper methysticum Forst.f.,俗名Kava)同上Piper,红杆10卡瓦胡椒6号(Piper methysticum Forst.f.,俗名Kava)同上Piper,红杆11印尼大叶种(Pipe r nigr um L.)兴隆热带植物园Pip er12班尼约尔1号(P iper nigru m L.)同上Pip er,原名P anniy ur-113古晋(Pip er nigr um L.)同上P ip er,原名K uching14大山(P ip er sp.)同上Pip er15山蒌(P ip er sp.)同上Pip er161号杂交种(P ipe r nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀印尼大叶种173号杂交种(P ipe r nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀印尼大叶种185号杂交种(P ipe r nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀印尼大叶种196号杂交种(P ipe r nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀印尼大叶种207号杂交种(P ipe r nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀293(印尼大叶种∀班尼约尔1号) 218号杂交种(P ipe r nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀胜20(柬埔寨∀印尼大叶种) 22印柬45(Pipe r nigr um L.)同上Pip er,印尼大叶种∀柬埔寨23班293(Pipe r nigr um L.)同上P ip er,印尼大叶种∀班尼约尔1号24班柬印(Pip er nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀柬埔寨∀印尼大叶种25班云大(Pip er nigr um L.)同上P ip er,班尼约尔1号∀云选一号∀大山26云选一号(Pipe r nigr um L.)同上Pip er27大山∀印尼(Pipe r nigr um L.)同上Pip er28柬印93(Pipe r nigr um L.)同上Pip er,柬埔寨∀印尼大叶种29班柬印20(P ipe r nigr um L.)同上30班柬印43(P ipe r nigr um L.)同上31普通烟(N icotiana tabacum)热带作物生物技术国家重点实验室温室份材料均为胡椒科材料。
1.2生化试剂E co R#和M se#,T4DN A lig ase购自美国Bi o lab公司,Taq酶购自美国基因公司,聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂购自美国BBI公司,其他常规化学试剂均为国产分析纯。
1.3模板DNA的制备采用CTA B法提取植物基因组DNA[11,12]。
1.4接头和引物的准备E co R#和M se#接头:E co R#接头15∃-CT C GT A GAC T GC GT A CC-3∃E co R#接头25∃-AAT T GG T AC GCA GTC TAC-3∃M se#接头15∃-GAC GAT GAG TCC T GA G-3∃M se#接头25∃-TAC T CA GGA CTC AT -3∃设计的接头由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,在合成的同时将E co R#接头2和M se#接头2的5∃端磷酸化。
然后,E co R#接头1,2和M se#接头1,2分别退火形成E co R#接头和M se#接头[13]。
E co R#预扩增引物序列(Eo):5∃-GAC TGC GTA CCA AT T CA-3∃M se#预扩增引物序列(M o):5∃-GA T GAG!81!TCC T GA GTA AC-3∃E co R#选择性扩增引物:E15∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A A C-3∃E25∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A A G-3∃E35∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A C A-3∃E45∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A C T-3∃E55∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A C C-3∃E65∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A C G-3∃E75∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A G C-3∃E85∃-G A C T GC GT A CCA AT T C A G G-3∃M se I选择性扩增引物:M1∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACA A-3∃M2∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACA C-3∃M3∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACA G-3∃M4∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACA T-3∃M5∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACT A-3∃M6∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACT C-3∃M7∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACT G-3∃M8∃5∃-GA T G AG T CC T GA G T A ACT T-3∃以上引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。