采用圆形纸色谱法分离氨基酸

合集下载

氨基酸的纸色谱实验报告

氨基酸的纸色谱实验报告

氨基酸的纸色谱实验报告实验目的:通过纸色谱分离不同氨基酸,并观察其迁移距离和色谱图谱,从而了解不同氨基酸的性质和相对亲水性之间的差异。

实验原理:纸色谱是一种杂质、化合物等分离和鉴定的重要方法之一。

在纸色谱实验中,根据样品分子在移动相和固定相之间的亲和力和亲水性,将样品分子按照极性的不同进行分离。

在氨基酸的纸色谱实验中,利用纸张作为固定相,将不同氨基酸溶液放在纸上进行实验,通过观察它们在纸上的迁移距离和色谱图谱确定其性质。

实验步骤:1. 准备一张实验纸,并在纸的一侧划上一条水平线,离底部约1cm。

2. 准备各种氨基酸溶液,用滴管将每种溶液滴在纸上划线处,每滴约1cm远。

3. 等待溶液在纸上展开,使其上升,直至纸的上部。

4. 取出纸,用铅笔圈出各个斑点的位置。

5. 取纸上的样品斑点,用刮刀刮下,放入试管中。

6. 加入适量的显色剂,使溶液显色。

7. 将显色的溶液用比色皿装入分光光度计中,测定其吸光度。

8. 将各个样品的吸光度作图,得到色谱图谱。

实验结果:根据实验步骤中的吸光度测量,得到各个样品的吸光度值,在相应的坐标轴上作图,得到氨基酸的色谱图谱。

根据色谱图谱中氨基酸的迁移距离和吸光度大小,可以对不同氨基酸的性质和相对亲水性进行分析和比较。

讨论与结论:通过纸色谱实验,我们可以从色谱图谱中观察到不同氨基酸的迁移距离和吸光度的差异,根据这些差异可以推测不同氨基酸的相对亲水性和极性大小。

实验结果可以用于比较不同氨基酸之间的性质和相对亲水性,为进一步研究氨基酸在生物化学和分子生物学中的作用提供基础数据。

实验中可能存在的误差:1. 在显色剂的选择和使用过程中可能存在误差,影响吸光度测量的准确性。

2. 在氨基酸溶液的滴加和纸张展开的过程中,可能会存在人为操作的不一致性,导致实验结果的偏差。

3. 某些氨基酸可能由于其特殊性质和结构,导致在纸色谱实验中无法分离或显示。

改进措施:1. 在显色剂的选择和使用过程中,可以在多个实验中比较和确定最适合的显色剂,以提高实验结果的准确性。

氨基酸的纸色谱实验报告

氨基酸的纸色谱实验报告

一、实验目的1. 了解纸色谱法的基本原理和操作技术。

2. 掌握氨基酸纸层析法的实验步骤和注意事项。

3. 通过纸色谱法分离和鉴定氨基酸混合物中各个氨基酸的化学成分。

二、实验原理纸色谱法是一种以纸为载体的色谱分离技术,主要用于分离和鉴定混合物中的各种化合物。

在纸色谱法中,固定相为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂。

将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。

由于各组分在两相中分配系数不同,最终形成互相分离的斑点。

通过比移值(Rf值)与已知样品比较,进行定性分析。

氨基酸是一类含有氨基和羧基的有机化合物,是构成蛋白质的基本单元。

在纸色谱法中,氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数不同,导致其在滤纸上移动的距离不同,从而实现分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:(1)氨基酸混合物:甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等。

(2)层析滤纸(3)正丁醇、乙酸、水(混合液作为展开剂)(4)显色剂:三酮溶液2. 实验仪器:(1)层析缸(2)点样毛细管(3)小烧杯(4)培养皿(5)量筒(6)喷雾器(7)吹风机(8)直尺及铅笔四、实验步骤1. 准备层析滤纸:将层析滤纸裁剪成适当大小,用铅笔在滤纸的一端标记原点位置。

2. 点样:用点样毛细管将氨基酸混合物点在距滤纸一端约2~3cm的原点位置。

3. 展开剂准备:将正丁醇、乙酸、水按一定比例混合,作为展开剂。

4. 展开操作:将点好样的滤纸放入层析缸中,加入适量展开剂,确保展开剂液面高出滤纸上的样点。

5. 展开过程:密闭层析缸,待溶剂前沿线到达预定位置时取出滤纸。

6. 显色:将滤纸晾干,用喷雾器喷洒三酮溶液,在室温下晾干,观察显色结果。

7. 结果分析:根据各氨基酸斑点在滤纸上的位置,计算Rf值,与已知氨基酸的Rf值比较,进行定性分析。

五、实验结果与分析1. 氨基酸斑点在滤纸上分离,且各氨基酸斑点位置明显。

2. 通过计算Rf值,与已知氨基酸的Rf值比较,鉴定出各氨基酸。

纸层析法分离鉴定鸡蛋中的氨基酸

纸层析法分离鉴定鸡蛋中的氨基酸

纸层析法分离鉴定鸡蛋中的氨基酸一、实验目的1.掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的操作。

2.鉴定鸡蛋中是否含有丙氨酸和谷氨酸。

二、实验原理1.纸层析法层析系统通常都有固定相和流动相组成。

固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂。

此次实验的流动相为层析液水饱和酚。

不同物质在两相中的分配系数不同,随层析液的展开在两项之间发生分配,直至平衡。

该实验中谷氨酸和丙氨酸分别是亲水性和疏水性氨基酸,所以丙氨酸比谷氨酸迁移得快。

2..显色反应茚三酮与α-氨基酸反应生成紫红色化合物,故通过呈反应可初步鉴定氨基酸在滤纸上移动的位置。

3.相对迁移率Rf某物质在一定条件下分配系数是一定的,故移动速率也是恒定的,因此可根据Rf值来鉴定该斑点是何物质。

移动速率用Rf 值表示。

Rf=色斑中心至点样原点中心的距离溶剂前沿至点样原点中心的距离三、实验仪器与试剂1.实验器材新鲜鸡蛋、移液枪、水浴箱、圆形层析滤纸、毛细玻璃管、喷雾器、表面皿、催风机、圆规、直尺。

2.实验试剂1:1浓盐酸、0.01mol/L pH7.4磷酸盐缓冲溶液、0.1mol/L丙氨酸、0.1mol/L谷氨酸、0.5%茚三酮、水饱和酚溶液(层析溶液)。

四、实验内容1.氨基酸样品溶液的制备取新鲜鸡蛋液1g,加入10ml pH7.4的磷酸盐缓冲溶液,搅拌均匀,再加入10ml浓盐酸,在65℃水浴锅水解20分钟,即制得氨基酸不完全水解液。

2.层析装置制作①标记取圆形层析滤纸,用圆规作半径为1.5cm的同心圆,再过圆心作三条夹角为60°的直线,与同心圆相交六个点,按顺时针标注序号1-6(注意要用铅笔标记)。

②点样用毛细玻璃管在1和4号点,点上丙氨酸,3和6号点,点上谷氨酸,剩下的2和5号点,点上样品溶液。

待干燥后,重复点样三次。

③制作滤纸芯,将滤纸芯插入圆滤纸的中央。

表面皿里装入层析液苯酚,放入滤纸,待层析溶液经过滤纸芯向上,升至圆滤纸,并向四周扩展,层析装置组装完毕。

氨基酸纸层析

氨基酸纸层析

实验二氨其酸的纸色谱一、实验目的1、学习色谱法分离的原理和类型。

2、学习用纸上层析法进行分离鉴定氨基酸的操作。

二、实验原理色谱法是利用混合物中各组分在同一物质中的吸附、溶解或者分配性能的不同,使混合物溶液流经该物质,经反复地吸附或分配等作用将各组分分离的一种操作方法。

纸色谱法是属于分配色谱的一种通常用特制的滤纸如新华一号滤纸作固定相(水为支持剂),含有一定比例的水的有机溶剂(展开剂)作流动相,应用于多官能团或高极性化合物如糖或氨基酸的分离鉴定。

圆形纸层析是纸层析的一种。

方法是用一张圆滤纸,将样品点在圆心的位置或距圆心而作的同心圆的圆周上,在滤纸中心插一纸芯,使溶剂沿滤纸芯从圆心向滤纸的四周展开,由于样品组分在固定相和流动相之间的分配不同,使得易溶于流动相中的组分,随着溶剂的展开在滤纸上移动得快一些,而在固定相中溶解度大的组分移动就慢一些,因此得到分离(图2-35(1))。

R f值:R f值是表示被分离的物质在层析图谱上的位置。

R f = 原点到层析斑点中心距离/ 原点到溶剂前沿的距离原点:为点样点的位置溶剂前沿:展开结束时溶剂达到的位置层析斑点:展开后,组分所达到的位置如图1样品中组分一的R f = OA / OC组分二的R f = OB / OCR f值取决于被分离条件物质在两相间的分配系数和两相间的体积比。

在同一实验条件下同一物质R f值是一常数。

所以R f值也是判断物质的主要物理常数之一。

但影响R f 的因素很多,因此在进行纸层析的操作过程中,必须严格控制条件,否则R f值不易重现。

在圆形纸层析中层析图谱显色后为弧形色带。

R f值最大的样品,其弧形色带距原点最远,最小的距原点最近,其余的便按序介于这二者之间。

注:滤纸本身是纤维素,纤维素分子上有许多羟基,羟基具有吸附水分的作用,纤维素的羟基能够和6-7%的水以氢键结合,即使把滤纸烘干,也很难把水分除去,所以滤纸外观上是干的,但实际上是含有水的,把干滤纸放在饱和的湿气之中,能吸附20%左右的水分。

氨基酸β折叠圆二色谱

氨基酸β折叠圆二色谱

氨基酸β折叠圆二色谱氨基酸β折叠圆二色谱是一种常用的方法,用于研究折叠蛋白质结构的构象和稳定性。

在本文中,我们将介绍氨基酸β折叠圆二色谱的原理、应用和优缺点。

一、原理氨基酸β折叠圆二色谱是一种光谱技术,基于圆二色效应。

圆二色效应是指右旋圆偏振光和左旋圆偏振光在通过手性分子(如氨基酸)后发生的旋光现象。

这种旋光现象与氨基酸的构象密切相关。

β折叠是一种常见的蛋白质次级结构形式,具有特定的氨基酸排列顺序和空间构象。

氨基酸的β折叠结构通过氢键和侧链之间的相互作用来维持稳定性。

在氨基酸β折叠圆二色谱中,对β折叠结构进行了定量分析,从而揭示了蛋白质的结构和稳定性。

二、应用氨基酸β折叠圆二色谱在生物化学和生物物理学领域有广泛的应用。

以下是几个主要应用领域的介绍:1. 蛋白质折叠研究:氨基酸β折叠圆二色谱可以用来研究蛋白质的折叠过程、折叠速率以及折叠中的中间态。

通过观察圆二色谱的变化,可以揭示蛋白质折叠的动力学和热力学机制。

2. 蛋白质结构预测:氨基酸β折叠圆二色谱数据可以用于预测蛋白质的结构和稳定性。

通过建立氨基酸序列和圆二色谱数据之间的关系模型,可以准确地预测蛋白质的二级和三级结构。

3. 蛋白质工程:氨基酸β折叠圆二色谱可以用于评估蛋白质的稳定性和可折叠性。

通过对不同突变体进行圆二色谱分析,可以筛选出具有理想结构和性质的蛋白质。

4. 药物研发:氨基酸β折叠圆二色谱可用于药物研发中的药物靶点筛选和药物与蛋白质相互作用的研究。

通过分析药物与蛋白质相互作用后的圆二色谱变化,可以评估药物的结合能力和选择性。

三、优缺点氨基酸β折叠圆二色谱作为一种蛋白质结构研究方法,具有以下优点和缺点:优点:1. 直接观察:氨基酸β折叠圆二色谱可以直接观察蛋白质的结构和稳定性,无需使用其他标记物或技术。

2. 高灵敏度:氨基酸β折叠圆二色谱对蛋白质的结构变化非常敏感,可以检测到微小的构象差异。

缺点:1. 仅限于β折叠:氨基酸β折叠圆二色谱主要针对β折叠结构,对其他结构形式的蛋白质有限。

纸色谱分离氨基酸

纸色谱分离氨基酸

二、实验原理
三、实验步骤
铺在白纸上 取层析滤纸
茚三酮与氨基酸作用 控制在0.2~0.5cm 1个已知 样,一个 混合样
层析纸制备
点样 2个点
喷显色剂
干燥
展开
放层析缸中展开
干燥
画出色斑
计算Rf值
比较样品和标准的Rf值 鉴 定 组 成
四、结果与分析
1.将实验结果填入下表
Ⅱ纸 甘氨酸 斑点中心距 离 混合氨基酸 1 2 丙氨酸 混合氨基酸 1 2
纸色谱分离氨基酸
授课单位:生命科学学院应用化学系
一、实验目的
1.了解纸色谱分离氨基酸的原理; 2.学习纸色谱进行定性分析的操作方法。
二、实验原理
1.色谱法----一种重要的分离分析方法。
起源:1906年,俄国植物学家 Michael Tswett
胡萝卜素 叶绿素a
叶黄素
叶绿素b
二、实验原理
石油醚 色素混合液 (流动相)
展开剂距离
Rf
10cm
结论
混合样品中含有


2.思考:影响Rf值的因素?
五、实验关键点
(1) 在整个操作过程中,手只能接触滤纸边缘, 否则手指上的氨基酸会造成滤纸上众多斑点。 (2) 点样斑点不能太大(其直径应小于0.5cm), 防止氨基酸斑点重叠。
(3) 展层剂接触滤纸时一定要均匀、保持前沿线 与滤纸平行。
色谱柱
碳酸钙粉末 (固定相)
色带
二、实验原理
按固定相的固定方式,色谱法为
气相色谱法
柱色谱 固定相装于柱内的色谱法
液相色谱法
超临界色谱法 纸色谱 薄层色谱
平板色谱 固定相呈平板状的色谱法

纸色谱法分离氨基酸

纸色谱法分离氨基酸

纸色谱法分离氨基酸
说起这个纸色谱法分离氨基酸,咱们得先摆一摆啥子叫纸色谱法。

简单来说,就是把含有氨基酸的溶液滴到一张特殊的纸上,然后通过一些技术手段,让这些氨基酸在纸上头按不同的速度跑,最后就分开成了几道杠杠,每一道杠杠就代表了一种氨基酸。

要做这个实验,首先得选好纸,一般要选那种吸水性好的,质地均匀的滤纸。

然后把要分离的氨基酸溶液滴到纸上头,记得要滴得均匀点,莫要滴成一坨了。

接着就把这张纸放到一个密封的容器里头,里头还得加点溶剂,让这些溶剂能够慢慢往上爬,带着氨基酸一起跑。

这个跑的过程中,不同的氨基酸因为跟纸和溶剂的相互作用不一样,所以跑得速度也就不一样。

跑得快的就先到终点,跑得慢的就后到,这样一来,就实现了氨基酸的分离。

等跑完了,拿出来一看,纸上头就出现了几道颜色不一样的杠杠,每一道杠杠的颜色和位置都代表了不同的氨基酸。

这个时候,就可以通过测量这些杠杠的位置和颜色深浅,来判断氨基酸的种类和数量了。

总的来说,这个纸色谱法分离氨基酸还是比较简单直观的,不过要想得到准确的结果,还是得注意好多细节,比如纸的选择、溶剂的配比、实验的温度湿度等等。

只有这样,才能确保实验的成功和结果的准确。

氨基酸纸色谱实验报告

氨基酸纸色谱实验报告

氨基酸纸色谱实验报告氨基酸纸色谱实验报告引言:氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元,对于研究生物学和化学领域具有重要意义。

氨基酸的分离和鉴定是研究蛋白质结构和功能的关键步骤之一。

本实验旨在通过纸色谱法对氨基酸进行分离和鉴定,探究不同氨基酸在纸上的迁移率和色谱图谱。

实验材料与方法:实验所需材料包括氨基酸样品、滤纸、色谱槽、色谱溶液等。

首先,将滤纸剪成适当大小,然后将氨基酸样品溶解于色谱溶液中。

接下来,将滤纸浸泡于色谱溶液中,待其吸满后,将其放入色谱槽中。

在槽的一侧加入适量色谱溶液,使其与滤纸保持湿润。

将色谱槽放置在恒温水浴中,保持适当的温度。

观察滤纸上氨基酸的迁移情况,并记录下来。

实验结果与讨论:在实验中,我们选择了若干种常见的氨基酸作为样品,并进行了纸色谱分离实验。

通过观察滤纸上的迁移情况,我们得到了不同氨基酸的迁移率和色谱图谱。

首先,我们观察到不同氨基酸在纸上的迁移速率是不同的。

一般来说,极性较强的氨基酸会更容易迁移,而极性较弱的氨基酸则迁移较慢。

这是因为在纸上,极性较强的氨基酸与纸的极性较强的部分有更强的相互作用力,因此更容易被吸附和迁移。

而极性较弱的氨基酸则与纸的极性较弱的部分的相互作用力较小,因此迁移较慢。

其次,我们观察到不同氨基酸在纸上的迁移距离也不同。

迁移距离与氨基酸的分子量和极性有关。

一般来说,分子量较大的氨基酸迁移距离较短,而分子量较小的氨基酸迁移距离较长。

这是因为分子量较大的氨基酸在纸上的扩散速度较慢,因此迁移距离较短。

而分子量较小的氨基酸则扩散速度较快,因此迁移距离较长。

最后,我们观察到不同氨基酸在纸上的色谱图谱也不同。

色谱图谱反映了不同氨基酸在纸上的分离程度和迁移速率。

通过比较色谱图谱,我们可以判断氨基酸之间的相对含量和纯度。

例如,如果一个氨基酸的色谱图谱上只有一个峰,说明该氨基酸非常纯净;而如果一个氨基酸的色谱图谱上有多个峰,说明该氨基酸可能存在杂质或同分异构体。

结论:通过本实验,我们成功地利用纸色谱法对氨基酸进行了分离和鉴定。

纸层析法分离氨基酸实验报告

纸层析法分离氨基酸实验报告

纸层析法分离氨基酸一、前言纸层析法纸层析法又称纸色谱法,是目前广泛应用的一种分离技术。

本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。

现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。

它是一种以纸为载体的色谱法。

固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂;也可使纸吸留其他物质作为固定相,如缓冲液,甲酰胺等。

将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。

当组分移动一定距离后,各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点。

将纸取出,待溶剂挥发后,用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。

根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较,进行定性。

用斑点扫描仪或将组分点取下,以溶剂溶出组分,用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。

纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相。

在环境分析测试中,有时用纸层析法分离试样组分,它用于一些精度不高的分析,如3,4-苯并芘。

但不如GC、HPLC应用普遍。

做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎,浸出绿色液体,将液体与层析液(石油醚)混合,将滤纸一段进入混合液体,四种色素在层析液中的溶解度不同,在滤纸上留下4条色素带。

由此观查出各种色素的相对含量和种类。

纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离,叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b,它们在层析液中的溶解度不同,溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快,反之则慢;含量较多者色素带也较宽。

最后在滤纸上留下4条色素带,所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。

圆形滤纸层析法分离氨基酸(4).

圆形滤纸层析法分离氨基酸(4).

实验一圆形滤纸层析法分离氨基酸(4)(一)原理用各种标准氨基酸的混合物和几种未知氨基酸在相同条件下的同一张圆形滤纸上进行层析,层析后滤纸上的氨基酸用茚三酮显色剂显色得到纸色谱和各种标准及未知氨基酸的Rf值,将未知氨基酸的Rf值与各种标准氨基酸的Rf值相对照,以达到分离、鉴定氨基酸的目的(详见前文)。

必须注意手指印含有一定量的氨基酸,故不能用手直接接触分析用的滤纸和滤纸条,要用镊子钳夹滤纸边。

(二)仪器和试剂(1)圆形滤纸(直径15厘米),滤纸条(2×1厘米2)。

(2)毛细玻管(3)培养皿(直径11~12厘米)(4)电吹风机(5)喷雾器(6)剪刀、圆规、直尺、铅笔(7)标准氨基酸溶液:0.1%丙氨酸水溶液,0.1%精氨酸水溶液,0.1%酪氨酸水溶液(加微量NaOH使之溶解)。

(8)层析溶剂:正丁醇:醋酸:乙醇:水=4:1:1:2(V/V)混合的上清液。

(9)0.1%茚三酮溶液:0.1克茚三酮溶于100毫升95%醇中。

(10)待测氨基酸样品:丙氨酸、精氨酸、酪氨酸混合溶液每种氨基酸的浓度均为0.1%。

(三)操作步骤1.滤纸的处理取圆形滤纸一张以滤纸中心为圆心,用圆规划半径为1厘米的圆,在圆心处用打孔器打一个小孔。

用铅笔过圆心将滤纸分成4等份,并在滤纸边缘上分别标上丙、精、酪、混字样。

2.点样在圆规划的圆周上每一等份的中点(即原点)用干净毛细玻管小心点上0.1%丙氨酸、0.1%精氨酸、0.1%酪氨酸和混合氨基酸样品,点样直径约为2毫米,不宜过大,并把滤纸放在空气中凉干。

3.层析将滤纸条插入滤纸小孔,注意吻合紧密,下端刚好接触培养皿底为宜。

且吸量管吸取层析溶剂5~10毫升加入干燥、洁净表面皿中,勿使溶剂沾到培养皿的边沿上,将点好样品的滤纸平放在培养皿上,纸芯侵入层析溶剂中,并迅速用同样大小的培养皿严密覆盖在上面。

此时可见溶剂沿纸芯上升到圆形滤纸上,然后向滤纸四周徐徐扩散。

待溶剂前沿到培养皿边缘约0.5厘米处时,即可取出滤纸,拔出纸芯,用铅笔标出溶剂前沿的位置,用电吹风机吹干。

氨基酸的纸色谱分析

氨基酸的纸色谱分析

氨基酸的纸色谱分析作者:夏凡来源:《科技创新导报》 2013年第26期夏凡(南京化工职业技术学院应用化学系江苏南京 210048)摘?要:纸色谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方法之一。

纸色谱法还是分离、分析氨基酸混合物的常用方法。

该文以正丁醇:乙酸:水=4:1:5的溶剂系统为展开剂,长12?cm、宽14?cm的大张双圈定性滤纸为色谱滤纸,在实验温度30℃下进行纸色谱分析实验,以丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸五种氨基酸分别点样,以Rf值表示实验结果,得到以上实验条件下五种氨基酸的Rf值,可为从事氨基酸纸色谱分析实验者提供定性分析的参考结论。

关键词:纸色谱分析氨基酸中图分类号:O658.1 文献标识码:A 文章编号:1674-098X(2013)09(b)-0121-01纸色谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方法之一。

纸色谱属分配色谱,以滤纸为载体,滤纸所吸附的水为固定相,展开剂为流动相,由于样品各成分在两相溶剂中的分配系数不同而实现分离[1]。

纸色谱法应用广泛,纸色谱具有所需仪器设备简单,操作方便、所需样品量少和灵敏度较高等优点[2],既是分离、分析氨基酸混合物的常用方法,也是生物类专业课程实验教学中必须掌握的内容。

纸色谱分析法是用滤纸作为惰性支持物的微量分离的分析层析法。

层析溶剂(扩展剂)由一定比例的多元溶剂构成。

1 材料与方法1.1 实验器材手套,塑料薄膜,白线,针,小刀,直尺,毛细管,大烧杯(1000?mL),小烧杯:(500?mL)培养皿:(直径9?cm),定性滤纸(双圈牌90?cm×90?cm大张滤纸:用小刀和直尺裁取长12?cm、宽14?cm的一张),电吹风。

1.2 实验试剂(1)扩展剂:为4份水饱和的正丁醇和一份醋酸的混合物共72?mL,充分静置后分层,放出下层水分,取上层液体作扩展剂。

(2)氨基酸溶液:0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸(各组分浓度均为0.5%)各50?mL。

氨基酸纸色谱实验报告

氨基酸纸色谱实验报告

氨基酸纸色谱实验报告实验目的,通过氨基酸纸色谱实验,了解氨基酸的分离和鉴定方法,掌握氨基酸的色谱分离技术。

实验原理,氨基酸是生物体内重要的有机化合物,它们具有氨基和羧基,是生物体内蛋白质的组成单位。

氨基酸纸色谱是利用氨基酸在纸上移动的速度差异,通过色素显色和色谱分离的方法,对氨基酸进行分离和检测。

实验仪器和试剂,氨基酸标准品、纸色谱板、色谱槽、显色剂(如二硝基苯胺溶液等)。

实验步骤:1. 将纸色谱板切成适当大小,用氨基酸标准品在纸板上均匀涂抹。

2. 将涂有氨基酸的纸板放入色谱槽中,加入适量显色剂。

3. 观察显色情况,记录氨基酸在纸板上的色谱图谱。

4. 根据色谱图谱,计算氨基酸的Rf值,并进行鉴定。

实验结果与分析:通过实验,我们成功地分离了氨基酸,并得到了色谱图谱。

根据色谱图谱,我们计算出了各个氨基酸的Rf值,并进行了鉴定。

实验结果表明,氨基酸在纸色谱板上的移动速度存在差异,可以通过色谱分离的方法进行检测和鉴定。

实验结论:氨基酸纸色谱实验是一种简单、有效的氨基酸分离和鉴定方法。

通过本次实验,我们掌握了氨基酸纸色谱的操作技术,并对氨基酸的分离和检测有了更深入的了解。

实验注意事项:1. 在实验操作过程中,要注意纸色谱板的处理,避免污染和损坏。

2. 显色剂的选择和使用要准确,避免影响实验结果。

3. 实验后要及时清洗实验仪器和试剂,保持实验环境的整洁。

通过本次氨基酸纸色谱实验,我们对氨基酸的分离和检测方法有了更深入的了解,这对于进一步开展相关研究具有重要的意义。

希望本次实验能够为相关领域的学习和研究提供参考和帮助。

纸层析法分离鉴定氨基酸

纸层析法分离鉴定氨基酸

原点到层析点中心的距 离 X Rf 原点到溶剂前沿的距离 Y
在一定条件下(如温度、展层剂的组成、 层析纸质量等不变),某种物质的Rf 值是常 数,因此可作为定性依据。 由于氨基酸无色,可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色,从而作定性分析。本 色: 用喷雾器均匀喷上0.1%水合茚三酮 正丁醇溶液,然后用电吹风吹干即可显出各层 析斑点。
溶剂前沿
Y X
卷成筒状的滤纸
氨基酸显色后的图谱
四、计算:
用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值。
原点到层析点中心的距 离 X Rf 原点到溶剂前沿的距离 Y
样品aa 赖氨酸 甘氨酸 标准aaRf 混合aaRf
2. 器材:
层析缸;层析滤纸(新华一号);毛细管;喷雾器;电 吹风;直尺;铅笔;针线或透明胶带 ;一次性手套 。

Lys
Gly
Pro Val
Leu 混合样品
纸层析点样标准图

4、展层:将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒 状,用透明胶纸粘接或用线缝好,纸的两边不 能接触。将滤纸直立于层析缸中(注意:点样 的一端在下,展层剂的液面需低于点样线1cm , 滤纸勿与缸壁接触),盖好层析缸盖,进行展 层。待溶剂上升15~20 cm时,取出滤纸,用铅 笔描出溶剂前沿界线,电吹风吹干。
1. 在层析缸中装入展层剂,其高度约1.5~2cm。 2. 准备滤纸: 戴上手套,取层析滤纸(长22 cm、 宽14 cm)一张,在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画 一条直线,在此直线上每间隔2cm作一记号,为点 样位置(即原点),如图。注意事项:手不能直接 接触滤纸;直线与底边平行。 3. 点样:用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这 6个位置上,点样点干后再点一次。注意每点在纸 上扩散的直径,最大不超过3mm。

纸层析法—氨基酸的分离与鉴定

纸层析法—氨基酸的分离与鉴定

纸层析法——氨基酸的分离与鉴定一、 实验目的1、 了解纸层析法的使用原理。

2、掌握用纸层析法分离蛋白质的操作步骤。

二、 实验原理1、 纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析方法,滤纸上的纤维具有羟基,是亲水基团,滤纸吸附水作为固定相,其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。

当展层剂流经固定相时,固定相上的样品由于亲水、疏水能力不同,在两相之间不断分配,疏水能力强的多溶于流动相,随流动相移动距离较远,亲水能力强的移动距离则较近。

2、 所有的氨基酸的α碳上均连接一个氢原子和两个亲水基团羧基(—COOH )与氨基(—NH 2),唯一的不同则在于R 基团。

因此R 基团在氨基酸的亲水疏水能力对比中起到了决定性的作用。

本实验采用丙氨酸,苯丙氨酸,天冬氨酸,其R 基团分别是—CH 3,—CH 2—C 6H 5,—CH 2—COOH ,其亲水疏水能力迥异,能在滤纸上明显分开。

3、 Rf 值表示原点中心至显色斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离比。

在一定条件下,Rf 值为定值,其影响的因素有物质本身的性质,溶剂的性质,PH 值,温度,滤纸的性质等等,本实验不予探究。

在测量原点中心至显色斑点中心的距离时,由于斑点的形状不规范(近似圆形),所以,一般取斑点的重心,测量出重心与起点的距离即可。

4、 显色原理:茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热,引起氨基酸氧化脱氧,脱羧反应,最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发生作用生成紫色物质。

Y X R f ==原点到溶剂前沿的距离离原点到层析点中心的距三、试剂(一)提前配制试剂8*10-3mol/L丙氨酸溶液:精确称取0.356g晶体,溶解后定容到500ml。

8*10-3mol/L苯丙氨酸溶液:精确称取0.661g晶体,溶解后定容到500ml。

8*10-3mol/L天冬氨酸溶液:精确称取0.532g晶体,溶解后定容到500ml。

(将上述三种溶液装于小瓶中实验时,每两组共用一组试剂)正丁醇88%甲酸蒸馏水茚三酮晶体注:实验时,以上试剂均为每两组同学共用一组试剂。

采用圆形纸色谱法分离氨基酸

采用圆形纸色谱法分离氨基酸

否则前者会 出现斑 点 “ 拖尾 ”现象,后者则会使
显 色 后 的样 点不清 晰 。
23 层 析 -
将滤 纸条 卷 成 筒 状插 入 滤 纸 小孔 ,注 意 吻合
紧密,以下端刚接触培养皿底 为宜;将 1 L层 0m 析溶剂加入干燥 、洁净的表面皿中,注意避免将 溶 剂 沾 到培 养皿 的边 沿上 ;将 点 好样 的滤 纸平 放 在培养皿上,纸 芯浸入层析溶剂中,用 同样大小 的培养皿迅速扣于其上 。此 时,可见溶剂沿纸芯 上升到圆形滤纸上 ,之后 以同心圆向滤纸四周缓 慢扩散 。待溶剂前沿扩散到距培养皿边缘约 0 . 5
c 处 时 ,取 出滤纸 ,拔 出纸 芯 ,用 铅 笔标 出溶 剂 m
清 晰,得到的彤值较小。因此 ,在试验教学中, 应该采用直径较大的培养皿作为反应容器 。 此外 ,
笔者还用普通 中速滤纸代替层析纸进行 了上述试 验 ,试验结果如表2 。
表2采用普遥滤纸在 A B培养皿中测得各氨 、 基酸的 值
3 结果 与讨论
本试验用直径不 同的两种培养皿做了两组试
验 ,试 验 结果 见表 1 。
表1 采 新华1 纸 、 培养 涮 各 馥 值 用 号滤 在A B 皿中 得 氨基 的
培养皿

和滤纸条 ,而要用镊子夹取 。 22 点样 . 用干净的毛细玻璃管分别蘸取01 . %胱氨酸、 01 氨 酸 、01 .%甘 .%酪氨 酸样 品各 一小 滴 在滤 纸 上 相应的点样处点样 ,然后将滤纸在空气 中晾干 。 注意 同一支毛细 管只能用于一种物质 的点样。样
点直 径约 为2mi, l 点样 量 不宜 过 多 , l 也不 宜过 少 ,
甘氨酸
03 .4
02 .3

纸色谱法分离氨基酸实验报告

纸色谱法分离氨基酸实验报告

纸色谱法分离氨基酸实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法【实验目的】1.学习氨基酸纸层析法的基本原理2.掌握氨基酸纸层析的操作技术【实验原理】纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相。

在层析时,将样品点在距滤纸一端约2,3cm的某一处,该点称为原点;然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数(Kd)不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上。

物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值(rate of flow, Rf)来表示。

所谓Rf,是指在纸层析中,从原点至氨基酸停留点(又称为层析点)中心的距离(X)与原点至溶剂前沿的距离(Y)的比值:在一定条件下某种物质的Rf值是常数。

Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

【器材与试剂】(一)器材1.层析缸2.点样毛细管3.小烧杯4.培养皿5.量筒6.喷雾器7.吹风机(或烘箱)8.层析滤纸(新华一号)9.直尺及铅笔(二) 试剂1. 扩展剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液)将正丁醇和乙酸以体积比4?1在分液漏斗中进行混合,所得混合液再按体积比5?3与蒸馏水混合;充分振荡,静置后分层,放出下层水层,漏斗内即为扩展剂。

2. 氨基酸溶液0.5%赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸以及它们的混合液(各组份均为0.5%)。

?3. 显色剂0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。

【实验步骤】1.准备滤纸取层析滤纸(长22?、宽14?)一张,在纸的一端距边缘2,3?处用铅笔划一条直线,在此直线上每间隔3?作一记号,如右图所示。

2.点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这4个位置上,干后重复点样2,3次。

实验二圆形滤纸色谱法分离氨基酸

实验二圆形滤纸色谱法分离氨基酸

实验二圆形滤纸色谱法分离氨基酸一、原理用各种标准氨基酸的混合物和几种未知氨基酸在相同条件下的同一张圆形滤纸上进行层析。

层析后滤纸上的氨基酸用茚三酮显色剂显色得到纸色谱和各种标准及未知氨基酸的Rf值,将未知氨基酸的Rf值与各种标准氨基酸的Rf值相对照,以达到离、鉴定氨基酸的目的。

必须注意手指印含有一定量的氨基酸,故不能用手直接接触分析用的滤纸和滤纸条,要用镊子钳夹滤纸边。

二、仪器和试剂1.圆形滤纸(直径15厘米)、滤纸条(2x1 厘米)2.毛细玻管3.培养皿( 直径 l1-12 厘米 )4.电吹风机5.喷雾器6.镊子、剪刀、圆规、直尺、铅笔7.标准氨基酸溶液:0.1%丙氨酸水溶液,0.1% 精氨酸水溶液,0.1% 亮氨酸水溶液(加微量NaOH 使之溶解)8.层析溶剂:正丁醇:醋酸:乙醇:水 =4:1:1:2(V/V) 混合后的上清液。

9.0.1%茚三酮溶液:0.1克茚三酮溶于100毫升95%乙醇中。

10.待测氨基酸样品:丙氨酸、精氨酸、亮氨酸混合溶解(每种氨基酸的浓度均为0.1%) 。

三、操作:1.滤纸的处理取圆形滤纸一张以滤纸中心为圆心,用圆规画半径为1厘米的圆,在圆心处用打孔器打一个小孔。

用铅笔过圆心将滤纸分成4等份,并在滤纸边缘上分别标上丙、精、亮、混字样。

2.点样在圆规画的圆周上每一等份的中点(即原点) 用干净毛细玻管小心点上0.1%丙氨酸、 0.1%精氨酸、0.1%亮氨酸和混合氨基酸样品,点样直径约为2毫米,不宜过大,并把滤纸放在空气中晾干。

3.层析将滤纸条卷成圆筒(如灯芯),插入滤纸小孔,注意吻合紧密,勿使滤纸芯突出纸面,下端刚好接触培养皿底为宜。

用吸量管吸取层析溶剂5-10 毫升加入干燥、洁净的培养皿中,勿使溶剂沾到培养皿的边沿上,将点好样品的滤纸平放在培养皿上,纸芯浸入层析溶剂中, 并迅速用同样大小的培养皿严密覆盖在上面。

此时可见溶剂沿纸芯上升到圆形滤纸上,然后向滤纸四周徐徐扩散。

氨基酸纸层析

氨基酸纸层析

实验二 氨其酸的纸色谱 一、 实验目的 1、学习色谱法分离的原理和类型。

 2、学习用纸上层析法进行分离鉴定氨基酸的操作。

 二、 实验原理 色谱法是利用混合物中各组分在同一物质中的吸附、溶解或者分配性能的不同,使混合物溶液流经该物质,经反复地吸附或分配等作用将各组分分离的一种操作方法。

 纸色谱法是属于分配色谱的一种通常用特制的滤纸如新华一号滤纸作固定相(水为支持剂),含有一定比例的水的有机溶剂(展开剂)作流动相,应用于多官能团或高极性化合物如糖或氨基酸的分离鉴定。

 圆形纸层析是纸层析的一种。

方法是用一张圆滤纸,将样品点在圆心的位置或距圆心而作的同心圆的圆周上,在滤纸中心插一纸芯,使溶剂沿滤纸芯从圆心向滤纸的四周展开,由于样品组分在固定相和流动相之间的分配不同,使得易溶于流动相中的组分,随着溶剂的展开在滤纸上移动得快一些,而在固定相中溶解度大的组分移动就慢一些,因此得到分离(图2-35(1))。

 Rf值: Rf值是表示被分离的物质在层析图谱上的位置。

 Rf = 原点到层析斑点中心距离 / 原点到溶剂前沿的距离 原点:为点样点的位置 溶剂前沿:展开结束时溶剂达到的位置 层析斑点:展开后,组分所达到的位置 如图1样品中组分一的Rf = OA / OC 组分二的Rf = OB / OC Rf值取决于被分离条件物质在两相间的分配系数和两相间的体积比。

在同一实验条件下同一物质Rf值是一常数。

所以Rf值也是判断物质的主要物理常数之一。

但影响Rf的因素很多,因此在进行纸层析的操作过程中,必须严格控制条件,否则Rf值不易重现。

 在圆形纸层析中层析图谱显色后为弧形色带。

Rf值最大的样品,其弧形色带距原点最远,最小的距原点最近,其余的便按序介于这二者之间。

 注:滤纸本身是纤维素,纤维素分子上有许多羟基,羟基具有吸附水分的作用,纤维素的羟基能够和6-7%的水以氢键结合,即使把滤纸烘干,也很难把水分除去,所以滤纸外观上是干的,但实际上是含有水的,把干滤纸放在饱和的湿气之中,能吸附20%左右的水分。

氨基酸β折叠圆二色谱

氨基酸β折叠圆二色谱

圆二色谱是一种用于研究生物大分子如蛋白质、核酸等二级结构的光学性质实验技术。

通过测量样品在左旋和右旋圆偏振光下的吸收差异,可以获得有关分子结构的信息。

氨基酸的β折叠是蛋白质中的一种常见二级结构形式。

其主要特征是在其氨基酸序列中,相邻的氨基酸残基通过氢键相连,形成稳定的折叠结构。

这种结构在圆二色谱中表现出特定的吸收峰,通常位于210-230nm的紫外可见光区段。

对于圆二色谱的分析,通常会使用平面偏振光作为光源,当这种光照射到蛋白质分子上时,由于蛋白质的不对称空间结构(如α-螺旋、β-折叠、β-转角等),蛋白质对左、右偏振光的吸收度会有所不同。

通过测量不同波长下的这种差异,可以绘制出该蛋白质的圆二色光谱图。

由于Δε可能呈正值也有可能呈负值,因此圆二色谱的谱峰有正峰和负峰之分。

不同的蛋白质结构或氨基酸的峰值也不同,例如α-螺旋在190nm 处有一正峰、208nm处有一负峰,而β-转角在195-198nm区间有一正峰、217nm处有一负峰。

这些信息有助于了解蛋白质的空间结构和其动力学性质。

氨基酸纸色谱实验报告

氨基酸纸色谱实验报告

一、实验目的本次实验旨在通过纸色谱技术,学习并掌握氨基酸混合物中各个氨基酸的分离和鉴定方法,加深对纸层析原理和操作技术的理解。

二、实验原理纸层析法是一种利用固定相和流动相之间的分配系数差异来分离混合物中各组分的色谱技术。

在纸层析法中,滤纸作为惰性支持物,滤纸纤维素上吸附的水分作为固定相,展层用的有机溶剂作为流动相。

样品点在距滤纸一端约2~3cm的某一处,称为原点。

在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上。

物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值(Rf值)来表示。

Rf值是指从原点至氨基酸停留点中心的距离与原点至溶剂前沿的距离的比值。

在一定条件下,某种物质的Rf值是常数,Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

三、实验器材与试剂1. 器材:- 层析缸- 点样毛细管- 小烧杯- 培养皿- 量筒- 喷雾器- 吹风机- 层析滤纸- 直尺及铅笔2. 试剂:- 标准氨基酸混合物- 展开剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液)- 显色剂(如吲哚酚、茚三酮等)四、实验步骤1. 样品制备:将标准氨基酸混合物用适量溶剂溶解,配制成一定浓度的溶液。

2. 点样:用点样毛细管吸取样品溶液,在距滤纸一端约2~3cm处点样,重复点样3次,每次点样后晾干。

3. 展开层析:将点好的滤纸放入层析缸中,加入适量的展开剂,使液面高出滤纸上的样点。

密封层析缸,待溶剂前沿达到预定位置时取出滤纸。

4. 显色:将展开后的滤纸用适当显色剂显色,观察并记录各氨基酸斑点位置。

5. 数据处理:用直尺测量各氨基酸斑点中心至原点的距离,计算Rf值。

五、实验结果与讨论1. 实验结果:通过纸层析法,成功分离并鉴定了标准氨基酸混合物中的各个氨基酸,得到各氨基酸的Rf值。

2. 结果分析:根据Rf值与标准氨基酸图谱进行比较,可以确定各氨基酸的种类。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
c 处 时 ,取 出滤纸 ,拔 出纸 芯 ,用 铅 笔标 出溶 剂 m
清 晰,得到的彤值较小。因此 ,在试验教学中, 应该采用直径较大的培养皿作为反应容器 。 此外 ,
笔者还用普通 中速滤纸代替层析纸进行 了上述试 验 ,试验结果如表2 。
表2采用普遥滤纸在 A B培养皿中测得各氨 、 基酸的 值

要 : 文尝试采用 圆形纸色谱法对氨基酸进行分离 。分别将 新华 1 本 号滤纸与普通滤纸置于直径
不 同的培养皿中做对 比试验 。结果表明 ,采用新华 1号滤纸 、在大培养皿 ( D=1 m)中的分离 2c 效 果较好 。圆形纸色谱法具有操作简单 、耗时短 、分离效果好等优 点,更适合基础教学 。
版 社 , 2 0 :8 — 7 05 4 8.
【】胡春. 机化学试验口 2 有 删.沈 阳: 中国医药科技 出版 社,
图 1 显色后的纸色谱
2 0 : 7 -7 . 07 0 2
2 测量 值与定性鉴定 . 5 量 出各弧形色带 中心到 原点的距离和溶剂前
M ac , 0 8 rh 2 0
文章编号:10 — 3 4( 0 8 10 3 - 2 0 8 5 9 20 )0 -0 80
采用圆形纸 色谱法分离氨基酸木
张淑娜 ’ ,石 军 ’ ,张淑娟 2
(. 1 天津农学院 基础科学系 ,天津 30 8;2 天津科技大学 理学院,天津 302 ) 034 . 002
Ab t a t : A t o o e a ai n o mi o a i s b i u a a e h o t g a h s r p re .Th x e i n s sr cs meh d f r s p t f a n cd y cr lr p p r c r ma o rp y wa e o t d r o c e e p rme t Wa o r td wi n u l e p ae t Xi h a 1f mrp p r r r i a y fl rp p r n c l r iho d fe e t i e . h e u  ̄ s o t a Xi h a 1F t r h i a dn r t a e o o i e e i u t e d s f i r n z s T zr s l h w t n u i e u s h l
维普资讯
第1 期
张淑娜 ,等 :采用 圆形纸色谱 法分离氨基酸
・ 9・ 3
2 操作步骤
21 滤纸 的 处理 . 取 直径 为 1 m 的圆形 滤 纸一 张 ,用 铅笔 过 3c
沿到原点的距离,求 出各标准氨基酸 的‘ 值 ,比 较各弧形色带的 值及色泽。
l 仪器和试剂
( )新华 1 滤纸 ( 1 号 =9 m 或 1 m) c 3c ,滤 纸条 ( ×l m2: 1 ) c
( )毛细玻璃管 ( =0 m) 2 R .m ; 5 ( )培养皿 A ( 3 D=1 2 m)和培养皿 B ( c D
=8c m)各 2个 ;
培养皿

甘氨 酸
02 .4 01 .4
胱氨酸
00 .4 00 . 4
酪氨酸
04 .7 0-0 3
前沿的位置,用 电吹风吹干。 24 显 色 . 将滤纸平放在培养皿上, 在距滤纸约 3 ~4 m c
的上 方 用 喷 雾 器 向滤 纸 均 匀 喷 洒 01 .%茚 三 酮 溶
3 结果 与讨论
本试验用直径不 同的两种培养皿做了两组试
验 ,试 验 结果 见表 1 。
表1 采 新华1 纸 、 培养 涮 各 馥 值 用 号滤 在A B 皿中 得 氨基 的
培养皿

和滤纸条 ,而要用镊子夹取 。 22 点样 . 用干净的毛细玻璃管分别蘸取01 . %胱氨酸、 01 氨 酸 、01 .%甘 .%酪氨 酸样 品各 一小 滴 在滤 纸 上 相应的点样处点样 ,然后将滤纸在空气 中晾干 。 注意 同一支毛细 管只能用于一种物质 的点样。样
否则前者会 出现斑 点 “ 拖尾 ”现象,后者则会使
显 色 后 的样 点不清 晰 。
23 层 析 -
将滤 纸条 卷 成 筒 状插 入 滤 纸 小孔 ,注 意 吻合
紧密,以下端刚接触培养皿底 为宜;将 1 L层 0m 析溶剂加入干燥 、洁净的表面皿中,注意避免将 溶 剂 沾 到培 养皿 的边 沿上 ;将 点 好样 的滤 纸平 放 在培养皿上,纸 芯浸入层析溶剂中,用 同样大小 的培养皿迅速扣于其上 。此 时,可见溶剂沿纸芯 上升到圆形滤纸上 ,之后 以同心圆向滤纸四周缓 慢扩散 。待溶剂前沿扩散到距培养皿边缘约 0 . 5

从表 2可 以看 出,普通滤纸也可用于色谱分 析 。但经多次实验表 明重复率较低 ,且样点成圆 形 ,胱 氨酸 的层 析 效果 不 理想 。因此 ,在试 验 教
液 ,将滤纸基本 打湿 。用 电吹风热风吹干。此 时 可显出各氨基酸的紫红色弧形带,如图 1所示。
用 铅 笔标 点各 弧形 色 带 的 中心 。
p p rnbg e utr ih ( : 1 m ) wa etr a eo es T eme o a n ya v tg s s c se s p rt n a ig r l ed s D e i c u 2c s t nt t r. b et h h h h t dh sma d a a e , u ha ayo ai , h n e o
z A G S un i S I u j z A G S u u H N h —a H n J H N h - a j
( . pr n o Bai S i cs ini Agi l MUnvri ,Taj 0 3 4 hn :2 C l g f cec ,Taj 1Deat t f s c ne ,Taj r umr iesy ini 3 0 8 ,C ia . o eeo S ine i i me c e n c t n l n n U ies f c n e eh oo y i jn30 2 ,C n ) nvri o i c &T cn lg ,Ta i 0 2 2 h a y t Se n i
纸色谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方
法 之 一 。纸 色 谱属 分配 色 谱 , 以滤 纸 为载 体 ,滤 纸 所 吸 附的水 为 固定相 ,展开 剂 为流 动相 , 由于
同一张滤纸对 3种 己知的标准氨基酸进行层析, 层析后, 对滤纸上的氨基酸用茚三酮显色, 得到 3 种标 准氨 基酸 的 值 。现 将 方法介 绍 如下 。
点直 径约 为2mi, l 点样 量 不宜 过 多 , l 也不 宜过 少 ,
甘氨酸
03 .4
02 .3
胱氨酸
01 .6 01 .0
酪氨酸
04 .6 04 .4

从表 1 中可 以看 出培养皿 的大小对试验结果
有一定影响。在相 同的展开剂 中,大培养皿中纸
色谱 的 0大,而 小培养皿中纸色谱的R( d 。 I 【 f ̄ " j 这说明 直与展开 时间,即展开的高度有关。大 培养皿中纸色谱的展开时间长 ,展开高度较大 , 各氨基 酸分离完全,斑点清晰,得到的彤值较大; 小培养皿中纸色谱的展开时间过短,展开高度较 低 ,比移值较小的胱氨酸分离不完全 ,斑点不够
学中建 议采用新华 1 号滤纸 。
纵上所述 ,采用 圆形色谱法分离氨基酸操作 简单 ,分离效果好 ,样点清晰 ,所需时间短 ,展 开剂的用量少, 且不易受污染。因此, 采用新华 1 号滤纸 、大培养皿 ( D=1 2c m)分离氨基酸的方 法更适用于基础教学。 参考文献 :
【 刘 约权,李贵深. 1 】 化学 教学论 】 北京 :高等教育 出 .
关键词 :圆形纸色谱;氨基酸 ;分离
中图分类号 :0 5 .4 6 77
文献标识码 :A
பைடு நூலகம்
S p r t n o i oAcd y Cic l rP p rCh o t g a h e a ai f o Am n i sb r u a a e r ma o r p y
维普资讯
第l 5卷 第 1 期 20 0 8年 3月
天 津 农 学 院 学 报 Ju ao aj gi l r n e i or lf i i A r u u l i rt n T nn c t aU v sy
Vo.5 No1 11 , .
( )01 6 .%茚 三 酮溶 液 :01g 茚 三 酮 溶 于 .
10mL 9 %乙醇 中。 0 5
收稿 日 :20 —1— 8 期 07 2 1 作者简 介:张淑娜 (98 ,女, 宁阜新人 , 17 一) 辽 助理试验师 , 硕士 , 主要从事实验室的管理与教学工作。联系 电话:(2 ) 592 1 02 845 1。
() 4 标准的待测氨基酸溶液: . O1 %胱氨酸水 溶液 、01 . %甘氨酸水溶液和 01 . %酪氨酸水溶液
( 加微 量 盐酸使 之溶 解 )的混合 溶液 :
( )展开剂 1J 5 【 l .正丁醇 : 醋酸 : 水=4: : l
1(/ ; V V)
比移值 ( 本文用 表示 )小。笔者采用圆形纸色 谱法进行氨基酸的分离试验,即在相 同条件下用
g o p rt ne e t t —a iga dS n S tS r utbef r o n a o a ta hn . o ds aai f c, i e o me svn n Oo . oi mo es i l o fu d t n le c g ’ a i i
Ke r s cr ua a r h o t g a h y wo d : ic r p p r mao r p y. a n c d s p r to l e c mi o a i : e a a n i
相关文档
最新文档