采用圆形纸色谱法分离氨基酸

Ｂ
从表 ２可 以看 出，普通滤纸也可用于色谱分 析 。但经多次实验表 明重复率较低 ，且样点成圆 形 ，胱 氨酸 的层 析 效果 不 理想 。因此 ，在试 验 教
液 ，将滤纸基本 打湿 。用 电吹风热风吹干。此 时 可显出各氨基酸的紫红色弧形带，如图 １所示。
用 铅 笔标 点各 弧形 色 带 的 中心 。
否则前者会 出现斑 点 “ 拖尾 ”现象，后者则会使
显 色 后 的样 点不清 晰 。
２３ 层 析 －
将滤 纸条 卷 成 筒 状插 入 滤 纸 小孔 ，注 意 吻合
紧密，以下端刚接触培养皿底 为宜；将 １ Ｌ层 ０ｍ 析溶剂加入干燥 、洁净的表面皿中，注意避免将 溶 剂 沾 到培 养皿 的边 沿上 ；将 点 好样 的滤 纸平 放 在培养皿上，纸 芯浸入层析溶剂中，用 同样大小 的培养皿迅速扣于其上 。此 时，可见溶剂沿纸芯 上升到圆形滤纸上 ，之后 以同心圆向滤纸四周缓 慢扩散 。待溶剂前沿扩散到距培养皿边缘约 ０ ． ５
ｚ Ａ Ｇ Ｓ ｕｎ ｉ Ｓ Ｉ ｕ ｊ ｚ Ａ Ｇ Ｓ ｕ ｕ Ｈ Ｎ ｈ —ａ Ｈ ｎ Ｊ Ｈ Ｎ ｈ － ａ ｊ
（ ． ｐｒ ｎ ｏ Ｂａｉ Ｓ ｉ ｃｓ ｉｎｉ Ａｇｉ ｌ ＭＵｎｖｒｉ ，Ｔａｊ ０ ３ ４ ｈｎ ：２ Ｃ ｌ ｇ ｆ ｃｅｃ ，Ｔａｊ １Ｄｅａｔ ｔ ｆ ｓ ｃ ｎｅ ，Ｔａｊ ｒ ｕｍｒ ｉｅｓｙ ｉｎｉ ３ ０ ８ ，Ｃ ｉａ ． ｏ ｅｅｏ Ｓ ｉｎｅ ｉ ｉ ｍｅ ｃ ｅ ｎ ｃ ｔ ｎ ｌ ｎ ｎ Ｕ ｉｅｓ ｆ ｃ ｎ ｅ ｅｈ ｏｏ ｙ ｉ ｊｎ３０ ２ ，Ｃ ｎ ） ｎｖｒｉ ｏ ｉ ｃ ＆Ｔ ｃｎ ｌｇ ，Ｔａ ｉ ０ ２ ２ ｈ ａ ｙ ｔ Ｓｅ ｎ ｉ
学中建 议采用新华 １ 号滤纸 。
纵上所述 ，采用 圆形色谱法分离氨基酸操作 简单 ，分离效果好 ，样点清晰 ，所需时间短 ，展 开剂的用量少， 且不易受污染。因此， 采用新华 １ 号滤纸 、大培养皿 （ Ｄ＝１ ２ｃ ｍ）分离氨基酸的方 法更适用于基础教学。 参考文献 ：
【 刘 约权，李贵深． １ 】 化学 教学论 】 北京 ：高等教育 出 ．
３ 结果 与讨论
本试验用直径不 同的两种培养皿做了两组试
验 ，试 验 结果 见表 １ 。
表１ 采 新华１ 纸 、 培养 涮 各 馥 值 用 号滤 在Ａ Ｂ 皿中 得 氨基 的
培养皿
Ａ
和滤纸条 ，而要用镊子夹取 。 ２２ 点样 ． 用干净的毛细玻璃管分别蘸取０１ ． ％胱氨酸、 ０１ 氨 酸 、０１ ．％甘 ．％酪氨 酸样 品各 一小 滴 在滤 纸 上 相应的点样处点样 ，然后将滤纸在空气 中晾干 。 注意 同一支毛细 管只能用于一种物质 的点样。样
版 社 ， ２ ０ ：８ — ７ ０５ ４ ８．
【】胡春． 机化学试验口 ２ 有 删．沈 阳： 中国医药科技 出版 社，
图 １ 显色后的纸色谱
２ ０ ： ７ －７ ． ０７ ０ ２
２ 测量 值与定性鉴定 ． ５ 量 出各弧形色带 中心到 原点的距离和溶剂前
（） ４ 标准的待测氨基酸溶液： ． Ｏ１ ％胱氨酸水 溶液 、０１ ． ％甘氨酸水溶液和 ０１ ． ％酪氨酸水溶液
（ 加微 量 盐酸使 之溶 解 ）的混合 溶液 ：
（ ）展开剂 １Ｊ ５ 【 ｌ ．正丁醇 ： 醋酸 ： 水＝４： ： ｌ
１（／ ； Ｖ Ｖ）
比移值 （ 本文用 表示 ）小。笔者采用圆形纸色 谱法进行氨基酸的分离试验，即在相 同条件下用
点直 径约 为２ｍｉ， ｌ 点样 量 不宜 过 多 ， ｌ 也不 宜过 少 ，
甘氨酸
０３ ．４
０２ ．３
胱氨酸
０１ ．６ ０１ ．０
酪氨酸
０４ ．６ ０４ ．４
Ｂ
从表 １ 中可 以看 出培养皿 的大小对试验结果
有一定影响。在相 同的展开剂 中，大培养皿中纸
色谱 的 ０大，而 小培养皿中纸色谱的Ｒ（ ｄ 。 Ｉ 【 ｆ￣ ＂ ｊ 这说明 直与展开 时间，即展开的高度有关。大 培养皿中纸色谱的展开时间长 ，展开高度较大 ， 各氨基 酸分离完全，斑点清晰，得到的彤值较大； 小培养皿中纸色谱的展开时间过短，展开高度较 低 ，比移值较小的胱氨酸分离不完全 ，斑点不够
Ｍ ａｃ ， ０ ８ ｒｈ ２ ０
文章编号：１０ — ３ ４（ ０ ８ １０ ３ － ２ ０ ８ ５ ９ ２０ ）０ －０ ８０
采用圆形纸 色谱法分离氨基酸木
张淑娜 ’ ，石 军 ’ ，张淑娟 ２
（． １ 天津农学院 基础科学系 ，天津 ３０ ８；２ 天津科技大学 理学院，天津 ３０２ ） ０３４ ． ００２
纸色谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方
法 之 一 。纸 色 谱属 分配 色 谱 ， 以滤 纸 为载 体 ，滤 纸 所 吸 附的水 为 固定相 ，展开 剂 为流 动相 ， 由于
同一张滤纸对 ３种 己知的标准氨基酸进行层析， 层析后， 对滤纸上的氨基酸用茚三酮显色， 得到 ３ 种标 准氨 基酸 的 值 。现 将 方法介 绍 如下 。
培养皿
Ａ
甘氨 酸
０２ ．４ ０１ ．４
胱氨酸
００ ．４ ００ ． ４
酪氨酸
０４ ．７ ０－０ ３
前沿的位置，用 电吹风吹干。 ２４ 显 色 ． 将滤纸平放在培养皿上， 在距滤纸约 ３ ～４ ｍ ｃ
的上 方 用 喷 雾 器 向滤 纸 均 匀 喷 洒 ０１ ．％茚 三 酮 溶
摘
要 ： 文尝试采用 圆形纸色谱法对氨基酸进行分离 。分别将 新华 １ 本 号滤纸与普通滤纸置于直径
不 同的培养皿中做对 比试验 。结果表明 ，采用新华 １号滤纸 、在大培养皿 （ Ｄ＝１ ｍ）中的分离 ２ｃ 效 果较好 。圆形纸色谱法具有操作简单 、耗时短 、分离效果好等优 点，更适合基础教学 。
ｐ ｐ ｒｎｂｇ ｅ ｕｔｒ ｉｈ （ ： １ ｍ ） ｗａ ｅｔｒ ａ ｅｏ ｅｓ Ｔ ｅｍｅ ｏ ａ ｎ ｙａ ｖ ｔｇ ｓ ｓ ｃ ｓｅ ｓ ｐ ｒｔ ｎ ａ ｉｇ ｒ ｌ ｅｄ ｓ Ｄ ｅ ｉ ｃ ｕ ２ｃ ｓ ｔ ｎｔ ｔ ｒ． ｂ ｅｔ ｈ ｈ ｈ ｈ ｔ ｄｈ ｓｍａ ｄ ａ ａ ｅ ， ｕ ｈａ ａｙｏ ａｉ ， ｈ ｎ ｅ ｏ
ｃ 处 时 ，取 出滤纸 ，拔 出纸 芯 ，用 铅 笔标 出溶 剂 ｍ
清 晰，得到的彤值较小。因此 ，在试验教学中， 应该采用直径较大的培养皿作为反应容器 。 此外 ，
笔者还用普通 中速滤纸代替层析纸进行 了上述试 验 ，试验结果如表２ 。
表２采用普遥滤纸在 Ａ Ｂ培养皿中测得各氨 、 基酸的 值
Ｒｆ ：
量壹 鏖±堂 ： 至垦盛± 堕 尘 童
溶剂前沿至原点中心 的距离
圆心画两条相互垂直的线，在每条线上距离圆心 １ ｍ 处打点做记号，作为点样处，并分别在其边 ｃ 缘处标 出 “ 甘、胱 、酪 ”字样。然后，在 圆心处 用打孔器打一个小孔 。因手指上含有一定量的氨
基酸 ，必 须注 意 不 能用 手 直 接接 触 分析 用 的滤纸
样品各成分在两相溶剂 中的分配系数不同而实现 分离【。纸色谱具有操作简单 、分离效能较 高、 ｌ Ｊ 所需仪器设备廉价、应用广等特 点，既是分离、 分析氨基酸混合物的常用方法，也是大学基础实 验教学中必须 掌握的内容。纸色谱法按操作方法 分为垂直型和水平型两类【。垂直型是将滤纸条 ２ 】
（ ）０１ ６ ．％茚 三 酮溶 液 ：０１ｇ 茚 三 酮 溶 于 ．
１０ｍＬ ９ ％乙醇 中。 ０ ５
收稿 日 ：２０ —１— ８ 期 ０７ ２ １ 作者简 介：张淑娜 （９８ ，女， 宁阜新人 ， １７ 一） 辽 助理试验师 ， 硕士 ， 主要从事实验室的管理与教学工作。联系 电话：（２ ） ５９２ １ ０２ ８４５ １。
关键词 ：圆形纸色谱；氨基酸 ；分离
中图分类号 ：０ ５ ．４ ６ ７７
文献标识码 ：Ａ
Ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ ｏ ｉ ｏＡｃｄ ｙ Ｃｉｃ ｌ ｒＰ ｐ ｒＣｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ｅ ａ ａｉ ｆ ｏ Ａｍ ｎ ｉ ｓｂ ｒ ｕ ａ ａ ｅ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｐ ｙ
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第ｌ ５卷 第 １ 期 ２０ ０ ８年 ３月
天 津 农 学 院 学 报 Ｊｕ ａｏ ａｊ ｇｉ ｌ ｒ ｎ ｅ ｉ ｏｒ ｌｆ ｉ ｉ Ａ ｒ ｕ ｕ ｌ ｉ ｒｔ ｎ Ｔ ｎｎ ｃ ｔ ａＵ ｖ ｓｙ
Ｖｏ．５ Ｎｏ１ １１ ， ．
ｇ ｏ ｐ ｒｔ ｎｅ ｅ ｔ ｔ —ａ ｉｇａ ｄＳ ｎ Ｓ ｔＳ ｒ ｕｔｂｅｆ ｒ ｏ ｎ ａ ｏ ａ ｔａ ｈｎ ． ｏ ｄｓ ａａｉ ｆ ｃ， ｉ ｅ ｏ ｍｅ ｓｖｎ ｎ Ｏｏ ． ｏｉ ｍｏ ｅｓ ｉ ｌ ｏ ｆｕ ｄ ｔ ｎ ｌｅ ｃ ｇ ’ ａ ｉ ｉ
Ｋｅ ｒ ｓ ｃｒ ｕａ ａ ｒ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ｙ ｗｏ ｄ ： ｉｃ ｒ ｐ ｐ ｒ ｍａｏ ｒ ｐ ｙ． ａ ｎ ｃ ｄ ｓ ｐ ｒ ｔｏ ｌ ｅ ｃ ｍｉ ｏ ａ ｉ ： ｅ ａ ａ ｎ ｉ
置于 垂 直位 ，使流 动相 向上 或 向下 扩散 ：水平 型 是将 圆形滤 纸 置于 水平 位 ，溶 剂 由 中心 向四周 扩 散 ，此法 也称 为 圆形 纸色 谱法 。 天 津 农学 院基 础 化 学实 验室 自教授 “ 色 谱 纸 分离氨基酸”以来，一直采用 “ 上行法 ”进行氨 基 酸 的分 离 。但 此法 操 作繁琐 、耗 时 ，所测 定 的
ｌ 仪器和试剂
（ ）新华 １ 滤纸 （ １ 号 ＝９ ｍ 或 １ ｍ） ｃ ３ｃ ，滤 纸条 （ ×ｌ ｍ２： １ ） ｃ
（ ）毛细玻璃管 （ ＝０ ｍ） ２ Ｒ ．ｍ ； ５ （ ）培养皿 Ａ （ ３ Ｄ＝１ ２ ｍ）和培养皿 Ｂ （ ｃ Ｄ
＝８ｃ ｍ）各 ２个 ；
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第１ 期
张淑娜 ，等 ：采用 圆形纸色谱 法分离氨基酸
・ ９・ ３
２ 操作步骤
２１ 滤纸 的 处理 ． 取 直径 为 １ ｍ 的圆形 滤 纸一 张 ，用 铅笔 过 ３ｃ
沿到原点的距离，求 出各标准氨基酸 的‘ 值 ，比 较各弧形色带的 值及色泽。
Ａｂ ｔ ａ ｔ ： Ａ ｔ ｏ ｏ ｅ ａ ａｉ ｎ ｏ ｍｉ ｏ ａ ｉ ｓ ｂ ｉ ｕ ａ ａ ｅ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ｓ ｒ ｐ ｒｅ ．Ｔｈ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓ ｓｒ ｃｓ ｍｅｈ ｄ ｆ ｒ ｓ ｐ ｔ ｆ ａ ｎ ｃｄ ｙ ｃｒ ｌｒ ｐ ｐ ｒ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒｐ ｙ ｗａ ｅ ｏ ｔ ｄ ｒ ｏ ｃ ｅ ｅ ｐ ｒｍｅ ｔ Ｗａ ｏ ｒ ｔｄ ｗｉ ｎ ｕ ｌ ｅ ｐ ａｅ ｔ Ｘｉ ｈ ａ １ｆ ｍｒｐ ｐ ｒ ｒ ｒ ｉ ａ ｙ ｆｌ ｒｐ ｐ ｒ ｎ ｃ ｌ ｒ ｉｈｏ ｄ ｆｅ ｅ ｔ ｉ ｅ ． ｈ ｅ ｕ ￣ ｓ ｏ ｔ ａ Ｘｉ ｈ ａ １Ｆ ｔ ｒ ｈ ｉ ａ ｄｎ ｒ ｔ ａ ｅ ｏ ｏ ｉ ｅ ｅ ｉ ｕ ｔ ｅ ｄ ｓ ｆ ｉ ｒ ｎ ｚ ｓ Ｔ ｚｒ ｓ ｌ ｈ ｗ ｔ ｎ ｕ ｉ ｅ ｕ ｓ ｈ ｌ