LA taq 资料
艾拉ALA(5-氨基酮戊酸)概述
艾拉ALA（5-氨基酮戊酸）概述1、艾拉（ALA）概述5-氨基酮戊酸盐酸盐（ALA）是近年来开发的第二代光敏剂，是一种体内血红蛋白合成过程的前体物。
正常情况下，ALA在细胞内的量很小，本身不产生光敏性。
外源性ALA进入体内后，可被增生活跃的细胞选择性吸收并积累，在细胞内转化为原卟啉IX（PpIX）等卟啉类物质。
细胞内的PpIX是一种很强的光敏剂，经过特定波长的红光照射后即发生光动力反应，产生活性氧如单线态氧等而杀死增生活跃的细胞，邻近正常组织不受任何影响。
作用原理图（上图）名称：5－氨基酮戊酸类别：西医药物药理作用本品是一种内源性的生化物质经ALA脱水酶及一系列酶促作用，生成具有强光敏作用的原卟啉Ⅸ（PPⅨ）。
PPⅨ的合成速度取决于本品拾成速度，而本品又受游离血红蛋白浓度的反馈调节，外源性的本品可绕过反馈抑制系统，使细胞合成聚起足量的PPⅨ。
用420～640nm光辐射含有PPⅨ的癌组织，在能量转移过程中产生单态氧（-O2），这种态氧达到一定浓度时可以破坏癌细胞。
另一种廉洁是光照射后激发态PPⅨ直接与生物分子作用或将能量转移给氧和水，使之形成自由基，通过自由基引起生物分子的一系列连锁反应，造成癌细胞的死亡。
Svanbery等发现肿瘤组织中的PPⅨ含量之比为1:2。
Regular等发现胃癌细胞中PP Ⅸ是其正常细胞的3～4倍。
实验证明ALA在体内转化成内源性PPⅨ其分布具有高选择性，肿瘤细胞及某些增殖较快的细胞转化率特别强，因而细胞内PPⅨ的含量也较其他细胞高，这是ALA－光动力疗法（ALA－PDT）的治疗基础。
Svanber在用本品治疗肿瘤时，在体表测得治疗前后肿瘤血管无明显改变，间接说明该法是利用细胞毒来杀伤细胞的而非通过破坏、阻塞肿瘤血管使用细胞坏死。
另一实验用电镜观察本品处理后的细胞，发现1h后，线粒体就明显肿胀，嵴消失，而其他细胞器官无明显变化，但24h后，整个细胞坏死，这说明本品杀伤细胞可能是先损伤线粒体而使细胞死亡。
5-ALA
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发酵培养实验材料
2、培养基 固体培养基(g／L)：酵母粉5，蛋白胨10， NaCl 10，琼脂18； 种子培养基(g／L)：酵母粉5，蛋白胨10， NaCl 10； 初始发酵培养基(g／L)：甘氨酸2，琥珀 酸3，酵母粉5，蛋白胨10，葡萄糖2，用1mol ／L的NaOH溶液调节pH至6．0左右。 以上各培养基在接种前均添加0．03g／ L的卡那霉素和0．034g／L氯霉素。63g琥珀酸 和36g甘氨酸溶解在850mL的蒸馏水中配成发酵 过程流加用前体混合液。
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5-氨基乙酰丙氨酸的检测方法
1、化学显色法 化学显色法 2、高效液相色谱法（HLPC） 高效液相色谱法（HLPC） 高效液相色谱法
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生产5-氨基乙酰丙酸的工程菌及其构建 和应用方法
生产５－氨基乙酰丙酸的工程菌，其 特征在于此菌是含有放射形土壤杆菌 的５－氨基乙酰丙酸合成酶基因的工 程菌，中文名为大肠埃希氏菌，拉丁 文学名为Escherichiacoli Rosetta （DE３）－pET－Ａ．Ｒ．ｈｅｍＡ， 在中国专利局指定的保藏单位中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心保藏，保藏编号为： ＣＧＭＣＣ
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发酵液的预处理
发酵液的离心 发酵上清液的脱色 发酵液的膜分离处理 萃取剂的预处理 ALA的萃取和反萃取 ALA的萃取和反萃取 ALA·HCl的浓缩结晶 ALA·HCl的浓缩结晶
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ALA萃取的较优工艺条件为：D2EHPA的体 积浓度为50％；萃取温度20℃，初始水 相pH6．5，萃取平衡时间30min，相比R 为0.5，二级萃取；反萃取温度30℃，反 萃取相盐酸浓度lmol／L，反萃取平衡时 间2h，相比r为0.5，一级反萃取。反萃 水相中ALA在210nm下的HPLC纯度为35．6 ％，萃取-反萃取过程ALA的总回收率为 71．6％。
taq酶和PCR
Ｔａｑ酶专场－－我们也许天天都在ＰＣＲ但我们对Ｔａｑ酶知多少呢？第一节概述聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。
该方法一改传统分子克隆技术的模式，不通过活细胞，操作简便，在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107～108倍，大大提高了DNA的得率。
因此，现已广泛应用到分子生物学研究的各个领域。
PCR技术最早由美国Cetus公司人类遗传研究室Kary Mullis及同事于1985年发现并研制成功的；最早的应用报道是Saiki等1985年将PCR技术应用于β-珠蛋白基因扩增和镰刀状红细胞贫血的产前诊断。
随后使用了1976年Chien等分离的热稳定性Taq DNA聚合酶，使PCR操作大为简化，并使PCR自动化成为可能；1987年Kary Mullis等完成了自动化操作装置，使PCR技术进行实用阶段。
国内复旦大学1988年起开始研制耐热性多聚酶，军事医学科学院马立人教授等在1989年研制成功了PCR自动装置，并且不断推陈出新，最近研制的PTC-51A/B型DNA热循环仪体积小，造型美观，价格适宜，操作简单，尤为适宜国内应用。
PCR发明不到10年，却已获得广泛应用。
目前，每年都有上千篇文章发表。
1991年，期刊“PCR方法与应用”（PCr Methods and Application）在美国创刊，使有关学者有了自己的论坛和参考的专业期刊。
PCR技术作为一种方法学革命，必将大大推动分子生物学各有关学科的研究，使其达到一个新的高度。
1993年度诺贝尔化学将已于10月13日揭晓，Kary Mullis因发明了“聚合酶链式反应”而获得此殊荣。
现在世界各地都在使用PCR检测病人血液中的微量遗传物质，这一成就为精确诊断艾滋病及其它病症铺平了道路。
Premix LA Taq Version 2.0
Premix LA Taq®Version 2.0使用说明书TaKaRa Code：D333A●包 装 量： 500 μl×3支。
●制品说明本制品是PCR反应用的DNA Polymerase、Buffer、dNTP Mixture的2倍浓度的混合物。
DNA Polymerase使用了适合长片段扩增、性能优良的TaKaRa LA Taq。
使用时，只要加入Template和Primer，便可以进行PCR反应，大大地简化了操作过程，减少了PCR操作过程中的污染。
本制品扩增性能好，保存稳定性强。
使用本制品扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A”碱基，可直接克隆于T-Vector中。
●Premix溶液组成●PCR 反应条件3 Step PCR98℃ 10 sec55℃ or 60℃ 30 sec 72℃ 1 min/kbp2 Step PCR98℃10 sec 68℃ 1 min/kbp* 30 Cycles30 Cycles注）PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。
在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
●实验例结果M 1 2 3 41% Agarose gel 5 μl 电泳结果M ：λ−Hin d III digest DNA Marker*1 ：λ DNA 28 kbp PCR 产物2 ：λ DNA 1 kbp PCR 产物3 ：Human DNA 17.5 kbp PCR 产物4 ：Human DNA 3 kbp PCR 产物*：TaKaRa Code ：D3403A●注意事项PCR 的反应液请在冰中配制，然后置于PCR 反应仪上进行PCR 反应。
这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR 扩增的特异性，减少PCR 过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR 结果。
V2009.7。
2×Taq Master Mix
推荐使用反应体系：20~50μl
25μl 0.2-1.0μM(终浓度) 0.2-1.0μM(终浓度) 1-50ng（质粒） 10ng-1μg(基因组) 至50μl
*Mg2+终浓度为2mM
常用PCR循环：
当扩增片段<3K时
94℃
1分钟30秒
{ 94℃， 30秒
30次循环： 57℃， 30秒，
25～30次循环
{ {
若配合使用 Fast Taq系列Master Mix将大幅缩短了PCR鉴定所需的时间，并简化了实验操作步骤。
2×BenchTopTM Fast Taq Master Mix或 2×Fast Taq Master Mix体系配置
2× Fast Taq Master Mix 10μl
2taqmastermix10l5taq反应缓冲液dntp10mm4l05l9525分钟9430秒5530秒2530次循环721kb分钟10保温上游引物浓度10m1l下游引物浓度10m1lddh2o少量菌落或菌液做模板上游引物浓度10m1l下游引物浓度10m1ltaq酶ddh2o少量菌落或菌液做模板8l02l135l若配合使用fasttaq系列mastermix将大幅缩短了pcr鉴定所需的时间并简化了实验操作步骤
产品用途：
1）常规PCR鉴定及较短片段的PCR克隆； 2）需较高灵敏度的PCR扩增； 3）平端PCR产物加A；
使用建议：
使用本制品扩增得到的PCR产物具有3'端"A"突出，可直接 克隆于T-Vector中；
PCR的反应液请在冰上配制，然后置于PCR反应仪上进行 PCR反应；
本制品扩增灵敏度较高，建议反应循环数不要高于32； 复杂模板扩增可选择使用2× SpecificTM Taq Master Mix（目 录号：E010）。 如实验室长期需要对同一片段进行扩增，建议采用 防污染 PCR扩增检测2×Master Mix（目录号：E061），以避免PCR产 物的气溶胶污染。
嗜肺军团菌的检测
深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查摘要:目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。
方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定，再以聚合酶链式反应（PCR）等方法加以验证。
结果共采集水样28件，分离到1株军团菌，经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。
结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染，需引起重视，防止军团菌病发生。
关键词:军团菌;嗜肺军团菌;冷却塔;污染状况Detection of Legionella pneumophila in cooling tower water of central air conditioning system in Shenzhen City.ZHANG Ran，CHEN Gui-bing，SHI Xiao-lu，et al.（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）Abstract:Objective To investigate the contamination status of cooling water of central air conditioning syatem with Legionella pneumophila in in hotels，buildings and subways in Shenzhen City. Methods Cooling tower water samples from central aircondi-tioning system were randomly taken，cultured and then Legionella pneumophilia was isolated.Pobymerase chain reaction（PCR）was used for confirmation of the differentiation. Results Twenty-eight cooling water samples were collected and a strain of Legionella pneumophilia serovar Lp1was isolated. Conclusion The water in cooling tower of central air conditioning system in Shenzhen City has been contaminated with Legionella pneumophilia and measures be taken for preventing infection with Legionella pneumophilia.Key words:Logionella;Leginella pneumophilia;Cooling tower;Contaminationstatus军团菌是引起军团菌病的一种急性呼吸道传染病的病原体，于1977年在美国首次发现并证实。
口腔解剖生理学
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14.公元前（gongyuanqian）miladiyadin ilgiri 15.例如（liru）masilan，alayluq，misal 16.世纪（shiji）asir 世纪广场 asir maydani 17.关于（guanyu）haqqida，alaqidar，togriluq 18.广泛（guangfan）kangdairida 19.记载（jizai）hatirilimak，yazmaq 20.其中（qizhong）uning ichida，jumlidin 21.对（dui）qarita，togra，udul 22.萌发（mengfa）chiqmaq，bihlanmaq ，usup chuqmaq 23.颞下颌（niexiahe）chika-asti igak（asti chag） 24.关节（guanjie）bugum 25.脱位（tuowei）chiqiq，sugak bugumliri chiqip katmak 26.整修（zhengxiu）ongxax，tuzax 27.详细（xiangxi）tapsili，eniq 28.深度（shendu）chongqurluq
口腔解剖生理学
绪论：口腔解剖生理学的发展与地位
今天的复习内容
• 1.新单词 • 2.口腔解剖生理学的定义 • 3.口腔解剖生理学的任务
今天的新单词
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药物联合前庭康复训练治疗持续性姿势-感知性头晕的效果及与多巴胺受体D2 TaqIA基因多态性的相关性
・88・实用临床医药杂志Journal of Clinical Medicine in Practice2021,25(1):88-92.脑科学研究专题药物联合前庭康复训练治疗持续性姿势-感知性头晕的效果及与多巴胺受体D2TaqIA基因多态性的相关性李蕊1孟宏涛2马勇智1李薇彳(武警陕西省总队医院，1卫勤处，2.卫生防疫科，3.门诊部，陕西西安，710054)摘要：目的探讨药物联合前庭康复训练治疗持续性姿势-感知性头晕(PPPD)的疗效及与多巴胺受体D2TaqIA基因 多态性的相关性。
方法将60例PPPD患者随机分为对照组(给予盐酸曲舍林片)和联合组(给予盐酸曲舍林片联合前庭康复训练)，每组30例。
2组均治疗42d。
采用眩晕残障程度评定量表(DHI)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HADA)、艾森克人格量表(EPQ)和躯体分类量表(SOMS-7)评估2组的疗效。
采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)和琼脂糖凝胶电泳实验检测多巴胺受体D2TaqIA基因多态性。
结果联合组治疗第42天时的DHI评分、SOMS-7评分、HAMA评分.HADA评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)o2组的PCR扩增条带都位于310bp 左右的位置，条带清晰且明亮，扩增结果良好。
PCR-RFLP显示多巴胺受体D2TaqIA的A1A1多态基因型只有1个310bp片段，A2A2基因型可被酶切为180、130bp共2个片段，A1A2杂合基因型被酶切后产生310、180、130bp共3个片段。
2组A1A1、A1A2、A2A2基因型分布以及等位基因A1、A2分布频率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。
相关性分析及多元回归分析发现，A1位点基因的表达频率与PPPD治疗后人格特征趋于稳定呈正相关，且是其独立影响因素。
结论药物联合前庭康复训练治疗PPPD效果显著，且治疗后的稳定型状态与多巴胺受体D2TaqIA基因A1位点基因高频率表达有关。
Long Range PCR技术的方法学研究与初步应用
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｗｅ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ＰＣＲ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ，ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ
ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒｓ ｕｓｅｄ，ｔｈｅ Ｍ９２＋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ
３０ｓｅｃ，ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｔｅｍｐｒａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎｎｅａｌｉｎｇ－ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｔ ａｂｏｕｔ ６８。Ｃ，ｔｈｅ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｉｓ ａｂｏｕｔ １ ｋｂ／ｍｉｎ ｆｏｒ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ３０ ｃｙｃｌｅｓ；ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ａｔ ７２＂（２ ｆｏｒ １ ０ ｍｉｎｓ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ａｒｅ：ｉｎ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ５０“１ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｍｉｘｔｕｒｅ：
ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｌｏｎｇ Ｒａｎｇｅ ＰＣＲ ｃａｎ ｂｅ ｒｅｌｉａｂｌｙ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ １ ５ Ｋｂ ｌｅｎｇｔｈ
ｇｅｎｏｍｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｉｓ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｅｘｐｌｏｒｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ
raji细胞
Raji细胞
Raji细胞是一种常用的白血病细胞系，起源于Burkitt淋巴瘤患者，是研究白
血病和其它相关疾病的重要工具。
Raji细胞具有一定的特殊性质，使其在医学研究中广泛应用。
起源和特性
Raji细胞最初是从Burkitt淋巴瘤患者的淋巴结中分离出来的。
这种细胞系具
有较高的增殖速度和活性，能够在细胞培养基中持续增殖并形成克隆。
Raji细胞继承了Burkitt淋巴瘤病人中存在的某些特定遗传变异，使其在实验研究中表现出特
殊的表型和生物学行为。
在医学研究中的应用
Raji细胞是研究白血病和相关疾病的重要细胞模型。
科研人员利用Raji细胞进行各种实验，探索白血病细胞的增殖机制、基因变异以及药物敏感性等问题。
此外，Raji细胞还被广泛用于疾病的治疗策略研究，例如免疫疗法和靶向治疗的检测。
未来展望
随着生物技术的不断发展，人们对Raji细胞及其在医学研究中的应用仍有很多未知领域需要深入探索。
未来，科研人员可能会通过基因编辑等技术对Raji细胞
进行改造，以模拟更多种类的白血病细胞，促进医学研究的进一步发展。
总的来说，Raji细胞作为一种重要的细胞模型，在医学研究领域发挥着关键作用。
通过不断深入研究和探索，Raji细胞有望帮助科研人员更好地理解和治疗各种白血病和相关疾病，为人类健康事业作出更大的贡献。
山羊PNPLA3基因克隆及序列分析
山羊PNPLA3基因克隆及序列分析苟圣松1，林亚秋2，王永2，朱江江2,3*（1.西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041；2.青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室，四川成都 610041；3.青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室，四川成都 610041）摘 要：PNPLA3蛋白属于patatin样磷脂酶家族，能够参与脂肪积累和脂肪动员，且该蛋白与肝脏炎症、肝纤维化密切相关。
本研究旨在克隆PNPLA3基因序列并进行生物信息学分析，以简州大耳羊为实验对象，屠宰后，采集皮下脂肪组织，Trizol法提取组织总RNA，利用RT-PCR法克隆山羊PNPLA3基因序列，对所获得的序列进行生物信息学分析。
结果显示：克隆得到山羊PNPLA3基因序列1 564 bq（GenBank登陆号：MN643056），其中CDS区1 344 bp，5'UTR 234 bp，3'UTR 49 bp，编码447个氨基酸残基；山羊PNPLA3氨基酸序列与绵羊（Ovis aries）、牛（Bos taurus）、大鼠（Rattus norvegicus）、小鼠（Mus musculus）和人（Homo sapiens）的氨基酸序列相似性分别达到83.89%、81.21%、56.38%、56.15%、58.42%；山羊PNPLA3蛋白与绵羊亲缘关系最近，而与原鸡（Gallus gallus）的亲缘关系较远；山羊PNPLA3蛋白为疏水性酸性蛋白，大部分由α螺旋和无规则卷曲构成，分别占比44.07%、39.6%，有18个丝氨酸、3个苏氨酸、3个酪氨酸磷酸化位点，无信号肽剪切位点，有2个跨膜结构域，具有1个PNPLA家族同源结构域，STRING数据库检索到PNLIP、PNPLA2、LIPC、PNLIPRP3等蛋白可能与PNPLA3蛋白存在相互作用关系。
本实验成功克隆出山羊PNPLA3基因，为进一步阐明PNPLA3基因在调控山羊脂质代谢中的作用及分子机制提供基础资料。
cavanillesia英文介绍
cavanillesia英文介绍Cavanillesia, also known as the tree of jewels or the sapphire tower, is a genus of flowering plants in the family Malvaceae. This genus consists of only one recognized species, Cavanillesia platanifolia, which is native to the tropical rainforests of Central and South America.Cavanillesia platanifolia is a large tree that can reach heights of up to 30 meters. It has a distinctive feature of a thick, straight trunk that supports a spreading crown of large, palmate leaves. The leaves are deeply lobed and can measure up to 1 meter in diameter. They are green on the upper surface and a lighter shade of green underneath.The most striking feature of Cavanillesia platanifolia is its large, showy flowers. These flowers are bell-shaped and can measure up to 30 centimeters in length. They occur in clusters at the ends of the branches and have a vibrant purple color, earning it the name "sapphire tower". The flowers are pollinated by bats and attract a variety of insects and birds with their sweet nectar.After the flowers, Cavanillesia platanifolia produces large, woody capsules containing numerous seeds. These capsules are about the size of a human fist and are protected by a tough outer layer. When ripe, thecapsules split open and release the seeds, which are then dispersed by wind or water.Cavanillesia platanifolia is highly valued for its timber, which is used in construction and for making furniture. However, due to deforestation and habitat loss, this species is considered vulnerable in its natural habitat. Efforts are being made to conserve and protect the remaining populations of Cavanillesia platanifolia.In conclusion, Cavanillesia is a genus that consists of one recognized species, Cavanillesia platanifolia. It is a large tree with distinctive palmate leaves and produces large, showy purple flowers. This species is valued for its timber but is threatened by habitat loss. Conservation efforts are important to ensure the survival of Cavanillesia platanifolia.。
1例亨廷顿舞蹈病的诊断经验(附家系报告)
3结果
家系成员Ⅲ2、Ⅲ4、Ⅲ5和Ⅲ6基因组DNA样品分别经PCR扩增后，2%琼脂糖凝胶电泳检测显示：健康成员只在250bp附近出现一个条带，而亨廷顿舞蹈病患者除了出现一条正常条带外，在约400bp附近出现一条异常电泳条带。该家系中Ⅲ4和Ⅲ6均出现一条异常扩增电泳条带，而Ⅲ2和Ⅲ5经PCR鉴定后不含有异常扩增条带（图3），提示Ⅲ4和Ⅲ5为致病基因IT15携带者。参照基因序列图，240bp的片段包含25个CAG重复，400bp的DNA片段约包含75个CAG重复。CAG重复次数=(PCR产物长度-164)/3，最后结果误差在±（1-2）个CAG重复。
4讨论
本文先证者神志不清，反应迟钝，记忆力减退，已不能正常工作，且症状有加重趋势，显示大脑皮质广泛受累。其脑部MRI结果显示双侧脑部尾状核萎缩和侧脑室扩大，提示脑部影像学出现异常改变；与之相应得，基因检测结果发现：患者Ⅲ4和家系成员Ⅲ6的IT15基因5’端编码区内的CAG三核苷酸重复序列数目＞40次，超过正常范围，支持其可能系亨廷顿病患者。
通过对郑州市一例亨廷顿舞蹈病患者的发病情况进行了调查，应用聚合酶链反应扩增IT15基因、结合脑部的MRI图像对家系内IT15基因的CAG重复次数进行检测，并对临床症状，影像学检测和CAG重复次数进行了分析。
Taq酶_生物学_自然科学_专业资料
随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。
目前市面上有多种Taq 酶，能够满足多方面的实验需要。
那么，如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等，我们在这儿将主要的Taq酶归归类，其性质、用途也就一目了然了。
高特异性Taq酶高度特异性地扩增所需的片段是PCR最基本的要求，影响PCR特异性的因素很多，包括模板、引物性质及质量、反应条件的控制等等，而高特异性Taq酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程，也为PCR产物快速有效的纯化（PCR产物直接纯化）打下了基础。
这类酶最典型的代表是热启动Taq酶。
大家都知道，在PCR第一个循环变性之前，有一个升温的过程，引物和模板会有一些非特异性配对，如果这时Taq酶发挥活性，就很容易产生非特异性扩增，由于循环初期模板量非常少，产生的非特异性条带经过后面的指数扩增，就会严重干扰目的片段的扩增，甚至导致特异性条带不能扩出。
而热启动Taq酶是必需经过高温才能激活的酶，因此在初始循环的变性之前它没有活性，不会产生非特异性扩增，这就大大提高了PCR扩增的特异性。
第一代热启动Taq酶往往直接在Taq酶上做一些修饰，比如用抗体抑制，蜡封等，如Clontech、Stratagen、Gibcol-LTI的一些产品，由于抗体、蜡等异物的掺入，对实验造成一定的影响，也给试验者带来一些不便。
新一代的热启动Taq 酶是通过内部改造的重组酶，真正实现便利的热启动，代表产品如QIAGEN公司的HotStar 系列，无需别的辅助抑制物，也不用担心抑制不稳定，使用起来方便、高效。
此外，由于几乎所有的Taq酶产品都带有相应的反应缓冲液，缓冲液的品质也对保证Taq酶特异性扩增起着不可忽视的作用，一般的缓冲液中调节H键作用的盐只有KCl，QIAGEN公司的缓冲体系通过KCl、（NH4）SO4盐离子体系的平衡调节也提高了酶作用的特异性。
paa熔点
paa熔点PAA，全称为聚醋酸乙烯，是一种具有广泛应用前景的高分子化合物。
它的熔点是137-139℃，属于高熔点的聚合物之一。
在本文中，我将介绍PAA的熔点、其性质和应用，并探讨对PAA熔点的影响因素。
我们来了解一下PAA的一般特性。
PAA是由乙烯单体聚合而成的聚合物，具有无色、无味、无毒的性质。
它是一种热塑性高分子材料，可在高温下熔化成为流动的液体，并在冷却后重新形成固体。
PAA是具有分子链结构的聚合物，其分子链中含有大量的醋酸乙烯基团，这使得PAA具有优异的耐溶解性和化学稳定性。
此外，PAA还具有较高的抗拉强度和耐热性能，使得它在工业领域中得以广泛应用。
PAA的熔点是137-139℃。
这是指在达到该温度时，PAA由固态转变为液态。
熔点是一个重要的物理性质参数，对于聚合物的加工和使用具有重要意义。
对于PAA而言，熔点的高低将直接影响其加工性能和稳定性。
较高的熔点意味着PAA需要更高的温度才能达到熔化状态，这可能会增加加工的难度和成本。
另一方面，较低的熔点可能会导致在高温条件下失去稳定性，降低PAA的耐热性能。
影响PAA熔点的因素很多，首先是聚合反应的条件。
在聚合反应中，反应温度、催化剂种类和反应时间等因素都将对PAA的熔点产生直接的影响。
通常情况下，较高的反应温度和较长的反应时间将有助于提高聚合度，使PAA的熔点也相应增加。
此外，选择不同类型的催化剂也会影响聚合反应速率和聚合度，从而改变PAA的熔点。
PAA的分子结构和分子量也会对熔点的确定起到重要作用。
分子结构上，PAA的醋酸乙烯基团数目或分布方式将影响分子间的相互作用力，从而影响PAA的熔点。
分子量方面，较高的聚合度通常意味着较高的熔点。
这是因为较长的分子链会增加分子间的相互吸引力，导致需要更高的温度才能克服这些力使PAA熔化。
不同的添加剂、共聚单体或改性技术也可能会对PAA的熔点产生影响。
添加剂可以通过改变PAA分子链的结构或相互作用力来调节熔点。
肿瘤微环境中Lewis肺腺癌细胞调控巨噬细胞表型转换
肿瘤微环境中Lewis肺腺癌细胞调控巨噬细胞表型转换顾国民; 布力布·吉力斯汉; 卢素琼; 王秀丽; 刘春玲【期刊名称】《《基础医学与临床》》【年(卷),期】2019(039)009【总页数】7页(P1252-1258)【关键词】miR-550a; 肺癌; 巨噬细胞; 外泌体【作者】顾国民; 布力布·吉力斯汉; 卢素琼; 王秀丽; 刘春玲【作者单位】新疆医科大学第三临床医学院(附属肿瘤医院)肺内科二病区新疆乌鲁木齐 830054【正文语种】中文【中图分类】R392.1肺癌(lung cancer)是最常见的呼吸系统恶性肿瘤，其发病率和病死率在中国的肿瘤类疾病中长居首位，但是传统的治疗手段放化疗会给人体带来较为严重的不良反应[1-3]。
肿瘤的免疫治疗以及肿瘤细胞、免疫炎性细胞、细胞外基质等构成的肿瘤微环境逐渐成为研究热点。
肿瘤微环境不仅仅与肿瘤的发生、生长和转移有关，而且还影响许多肿瘤的临床疗效[4]。
有研究表明，在肿瘤微环境中炎性肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage，TAM)与肿瘤细胞接触对肿瘤的发生、发展过程具有有着促进或抑制作用[5]。
有证据显示外泌体在肿瘤细胞与微环境中的间质细胞之间作为信息交流的重要途径[6]。
其将囊泡内mRNA、DNA、蛋白、脂质等具有生物学功能的物质运输到靶细胞发挥其作用。
本研究通过Lewis肺腺癌细胞(Lewis lung adenocarcinoma cells,LLCs)与巨噬细胞的共培养，观察巨噬细胞的炎性因子的表达与表型转换情况。
旨在阐明LLC与巨噬细胞的细胞通讯对巨噬细胞表型调控的机制，为进一步探究肺癌的发生发展提供理论实验基础，为肺癌的预防与治疗提供潜在作用靶点。
1 材料与方法1.1 材料Lewis肺腺癌细胞系LLC(上海歌凡生物科技有限公司)；巨噬细胞系(上海研谨生物技术有限公司)；DMEM 培养基、10% 胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶和RPMI-1640 培养基、青-链霉素(Gibco公司)；乙酸双氧铀(Sigma-Aldrich公司)；小干扰RNA (small interfering RNA，siRNA，上海吉玛制药技术有限公司)；ELISA试剂盒(上海西唐生物技术有限公司)；Real-time PCR 探针试剂盒(MBI公司)1.2 方法1.2.1 细胞共培养与处理:利用Transwell小室将吞噬细胞分别与正常肺泡上皮细胞(normal alveolar epithelia cells)nAECs和LLCs进行共培养，将含有1×106个/mL 细胞的200 μL的 nAECs与LLCs悬液分别加入铺有基质胶的Transwell小室上室，下室中加入1×106个/L细胞的800 μL的吞噬细胞接种下室，培养液采用含10%胎牛血清、1 000 U/mL 青霉素、100 mg/mL链霉素及1 μg/mL LPS 的RPMI 1640细胞培养液。
a2la认证
A2LA是美国实验室认可协会的缩写，是国际实验室认可合作组织（International Laboratory Accreditation Cooperation）简称ILAC的成员之一。
中文名
美国实验室认可协会
外文名
A2LA
全称
Laboratory Accreditation
简称
ILAC(A2LA是ILAC的成员之一，并非A2LA的简称是ILAC)
缩写
AALA
A2LA是美国实验室认可协会的缩写，英文全称是American Association for Laboratory Accreditation，有时也会缩写为AALA。
A2LA是国际实验室认可合作组织（International Laboratory Accreditation Cooperation）简称ILAC的成员之一，和中国合格评定国家认可委员会CNAS/中国实验室国家
认可委员会CNAL一样，其认可的检测或校准机构颁发的证书都是在国际上MRA多边互认的机构内，是互相承认的。