鸡蛋清中提取溶菌酶方法的研究

合集下载

蛋清溶菌酶提取实验报告

一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。

2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。

3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。

它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。

2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。

四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。

2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。

将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。

3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。

4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。

重复洗涤2-3次。

5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。

6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。

7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。

五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。

2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。

根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。

六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。

2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。

蛋清溶菌酶提取技术的研究共3篇

蛋清溶菌酶提取技术的研究共3篇蛋清溶菌酶提取技术的研究1蛋清溶菌酶提取技术的研究概述在医学、食品、制药等行业中，蛋清溶菌酶（ovomucin）是一种重要的蛋白质，在不同领域中有不同的应用价值。

目前，提取蛋清溶菌酶的方法有多种，根据对目标产物的要求，选择合适的提取工艺是提高提取效率、降低成本，同时保证产品品质的关键。

传统的蛋清溶菌酶提取方法包括酸碱处理、物理打碎等方法，虽然能得到目标产物，但这种方法存在不少问题，例如操作复杂，产物纯度不高等。

近年来，一些新技术如超声波提取、微波提取等逐渐被应用到蛋清溶菌酶提取中，为蛋清溶菌酶提取研究带来了新思路和新突破。

酸碱处理法酸碱处理法是传统的蛋清溶菌酶提取方法，主要是通过对蛋清的酸碱性调节使得蛋清溶菌酶在溶液中释放。

酸碱处理法操作简单，但是由于酸碱处理对蛋清溶菌酶的结构影响较大，使其产物的纯度较低。

物理打碎法物理打碎法是另一种常用的蛋清溶菌酶提取方法，主要是通过机械力的作用使蛋清溶菌酶从细胞中释放。

其优点是成本低，但存在操作复杂、易受外界因素影响，同时产物纯度低的缺陷。

超声波提取法超声波提取法是一种新兴的蛋清溶菌酶提取技术，该方法通过超声波的力量使细胞壁破裂，从而使蛋清溶菌酶易于释放。

相比传统的提取方法，该方法具有操作简单，提取效率高，提取速度快，产物纯度优等明显优点。

微波提取法微波提取法是另一种新兴的提取技术，该方法主要是通过微波辐射使蛋清细胞壁被加热；随着温度升高，蛋清溶菌酶会逐渐释放。

该方法具有提取速度快、提取效率高等优点，但是同时由于微波剩余辐射等原因，该方法的应用还存在一些安全隐患。

总结综上所述，提取蛋清溶菌酶是目前相关行业中的重要问题之一，选择适合的提取方法具有重要的实际应用价值。

传统的方法虽然操作简单，但存在许多问题，因此越来越多的新技术被应用到该领域。

超声波提取、微波提取是比较新兴的技术，在提取效率，产物纯度等方面都具有很大的优势。

我们需要深入研究新技术在蛋清溶菌酶提取中的应用，不断探索新的提取方案，为相关行业的发展贡献力量提取蛋清溶菌酶是一个重要的问题，不仅在生命科学研究中有广泛应用，而且在食品工业、医药等领域也有着重要的应用价值。

如何从蛋清中提取溶菌酶

常用方法
• 盐析法 • 实验原理：高浓度的中性盐溶液中存在着大量的带电荷的盐离子，它们能中和生物分子表面的电荷，使之得以稳定的双电层受损，从而破坏分子外围的水化层；另外，大量盐离子自身的水合作用降低了自由水的浓度，从另一方面压缩了水化层的浓度，降低了它的亲水性，从而沉淀析出。 • 离子交换法 • 实验原理：离子交换剂与溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行，离子交换剂由基质、电荷基团(或功能基团)和反离子构成。
从蛋清中提取溶菌酶的方法
溶菌酶作用机制
• 溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。 • 它作用于N一乙酰氨基葡萄糖胺和N一乙酰胞壁酸之间的B一1，4糖苷键，能使某些细菌细胞中粘多糖成分分解。因而具有溶菌能力。 • 溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，处理革兰氏阳性细菌可得到原生质体。溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用，因此可用作食品烧杯中，边搅拌边加入蛋白质5％的食盐粉末，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过高或沉淀于容器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀．溶解后再用0．1mol／L的NaOH溶液调节 pH9．5-pH10.0。置于4℃环境中，数天后即有溶菌酶结晶出现，将酶晶体过滤，收集结晶沉淀粉，用丙酮脱水，真空干燥即为粗产品。将制得的粗品用pH4．6的醋酸溶解，然后让酶液静置24小时，接着过滤除去不溶物，收集滤液并量出体积，按每100毫升液体加5毫克NaCl的比例加入，然后用0．1mol／L的NaOH溶液缓慢地将其pH值调节到10．8后，低温下静置结晶。为加速结晶过程可向酶液中加入溶菌酶晶种，待结晶完全后再倾去上清液，用布氏漏过滤可得溶菌酶结晶。如纯度不高，可重复操作提纯，直至达到所需的纯度为止，结晶于30—40℃得溶菌酶产品。

鸡蛋清溶菌酶提取实验具体步骤

从鸡蛋中提取溶菌酶的步骤1.鸡蛋清样品制备及粗分离将4～5 个（为一个小组，同时两个小组共同进行试验）新鲜鸡蛋打入烧杯然后用矿泉水瓶子吸出蛋黄，分离得鸡蛋清（鸡蛋清pH 值不得小于8.0），量其体积（量筒50ml），加入两倍蛋清体积的（可用双蒸水替代）去离子水，边加边缓慢搅拌，拌匀后用两层纱布过滤除去脐带块和碎蛋壳等，然后用1 mol ／L 的HCl 溶液调pH 值至7.0 左右，再用脱脂棉过滤收集滤液。

2. 724 弱酸性阳离子交换树脂的再生及层析1.吸附：将处理好的蛋清约200 mL，加入32 g再生的724 树脂中，缓慢搅拌吸附6 h。

2.洗涤、洗脱：待分层后，将蛋清液倒去，用去离子水反复冲洗，以去除杂蛋白，滤干树脂，用等体积的0.15mol ／L pH 值为6．5 的磷酸缓冲液洗涤，加入等量的10％（NH4）2SO4溶液搅拌洗脱30 min，使溶菌酶从树脂上洗脱下来，收集洗脱液，4℃冰箱静置过夜。

第二天，有白色沉淀析出，离心（15 min，10 000r ／min）收集沉淀，沉淀物为溶菌酶粗产品浓缩1·透析除盐、去碱性蛋白：4℃条件下，用去离子水透析24 h 左右（1天）直到透析完全（用BaCl2与透析液发生反应直到没有浑浊产生为止）。

离心去除透析袋中沉淀，向透析清液中慢慢加入1 mol ／L 氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH 值上升至8．0～9．0，如有白色沉淀，即离心去除；（碱性蛋白在此pH条件下会到等电点然后就会沉淀）2·聚乙二醇浓缩：盐析物用1 倍去离子水溶解成稀糊状，装入透析袋，在装有聚乙二醇的试管中吸水浓缩，收集浓缩液；3·冷冻干燥：用3 mol ／L 盐酸调pH值至5．0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶。

溶菌酶纯度检测SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法①凝胶板的制备：用30％分离胶贮液、pH 值为8.9 分离胶缓冲液、10％浓缩胶贮液、pH 值为6.7浓缩胶缓冲液、10％SDS、1％TEMED、重蒸馏水、10％APS 溶液配制而成；②溶菌酶的处理：用磷酸缓冲液制成50 μg ／mL 的溶液，取10~80 μL 点样于凝胶板上③电泳：电流为10 mA，时间4 h；④固定、染色和脱色：电泳完毕，将胶板从玻璃板上取下，分别在固定液与染色液中浸泡10～30 min，用水漂洗干净，再用脱色液脱色。

鸡蛋溶菌酶提取实验报告

一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。

2. 了解溶菌酶的性质和功能。

3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。

溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。

2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。

四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。

2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。

3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。

静置2小时，收集沉淀。

4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。

5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。

6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。

静置2小时，收集沉淀。

7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。

五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。

2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。

3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。

4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。

5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。

6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。

7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。

鸡蛋清中溶菌酶的分离提取

本研究采用二次硫酸铵沉淀结合离子交换层析的方法，从鸡蛋清中分离提取溶菌酶。首先，鸡蛋清原液用Tris-HCl缓冲液稀释5倍，在4℃下静置6小时后，经50%硫酸铵沉淀收集上清液。接着，通过80%硫应用Q.Sepharose FF阴离子交换层析，直接在透过液中一步分离得到SDS-PAGE电泳纯的溶菌酶。经过此过程，酶比活由144.13 U/mg提高到2235 U/mg，酶活性提高了超过15倍，回收率为15.76%。重要的是，通过硫酸铵两级沉淀后，只需收集Q-Sepharose FF阴离子交换层析的透过液，即可简便地分离得到溶菌酶，同时还可一次性制备其他中性和酸性蛋白，从而简化了工艺并降低了生产成本。

鸡蛋清溶菌酶的提取及电泳鉴定

目前国内有大连生化、天津东原、烟台金梓等厂家生产，初步满足了国内科研及医药工业的需求。
进口溶菌酶，存在着价格较高，进口环节复杂等诸多方面的限制。
国产溶菌酶工业刚刚起步，生产规模小，工业水平落后，产品的质量与国际标准差距较大。存在提取率低，处理量小和产品比活低等缺点。
我国是世界上最大的产蛋国家，原料来源丰富，目前鲜蛋基本作为初级食品食用，深加工不足。而发达国家的鲜蛋加工业可以加工较高，得到的溶菌酶纯度高，还能分离纯化经化学修饰而失活的溶菌酶以及具活性的溶菌酶，亦能用于检测酶与底物相结合的氨基酸残基。对于浓缩与精制微量的溶菌酶，区分天然溶菌酶和修饰酶，或探索与底物结合的酶分子氨基酸残基状况等问题，这是很有效的方法。缺点：由于亲和吸附剂的制作较为复杂，成本高，而且操作难度大，限制了它在工业上的大规模利用。
目前美国、加拿大、荷兰、法国、德国、丹麦、意大利、日本等国家均生产溶菌酶，其产量与日俱增。近年来，溶菌酶被用作天然防腐剂，极大的促进了其市场需求，每年以10%的速率增长，现在市场规模约为700吨。
我国的食品工业、精细化工业、医药工业对溶菌酶具有较大的需求。我国于上世纪70年代采用离子交换法生产溶菌酶。
（2）非酶学测定法：电泳法使用历史较长，测定的溶菌酶含量包括有活性及失去活性的溶菌酶总量。
免疫法技术的发展而产生的。此类方法灵敏度高，为定性也较好。但是这类方法需要制备抗体，实验条件较酶学法复杂，因此大大限制了该类方法的应用。
盐析法
1878年Hammarster首次使用，是粗分离蛋白质的重要方法之一。
价廉易得，分段效果比其他盐好，性质温和，即使浓度很高时也不会影响蛋白质的生物学活性。
实际工作中将饱和硫酸铵溶液的饱和度定为100%或1。盐析某种蛋白质成分所需的硫酸铵数量折算成100%或 1饱和度的百分之几，即称为为该蛋白盐析的饱和度。

蛋清溶菌酶分离实验报告

一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取、分离纯化技术。

2. 掌握电渗析/超滤内在耦合（EDUF）技术在分离蛋白中的应用。

3. 分析实验过程中影响分离效果的因素，优化实验条件。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然碱性蛋白质，具有抗菌、消炎和抗病毒等功能。

溶菌酶广泛存在于鸡蛋清中，含量丰富。

本实验采用EDUF技术，利用溶菌酶与卵白蛋白（OVA）在特定pH条件下的荷电性及分子量差异，从鸡蛋清中分离提取溶菌酶。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、PVDF100超滤膜、氯化钠、磷酸缓冲液、溶菌酶标准品等。

2. 实验仪器：电渗析/超滤装置、电子天平、pH计、分光光度计、离心机、恒温水浴锅等。

四、实验步骤1. 预处理：将鸡蛋清用4层纱布过滤，去除杂质。

2. 调节pH值：将过滤后的鸡蛋清用1 mol/L的HCl溶液调节pH值至7.0。

3. 电渗析/超滤：将调节pH值后的鸡蛋清加入EDUF装置中，设置操作电压为5.0V，原料室和回收室料液流量均为50mL/min，进行电渗析/超滤。

4. 收集溶菌酶：将电渗析/超滤后的溶液用离心机离心，收集沉淀。

5. 纯化：将沉淀用磷酸缓冲液（pH值为8.0）溶解，通过离子交换树脂纯化溶菌酶。

6. 活性测定：采用分光光度法测定溶菌酶的活性。

五、实验结果与分析1. 溶菌酶回收率：在操作电压为5.0V，采用PVDF100超滤膜，原料室和回收室料液流量均为50mL/min的条件下，溶菌酶的回收率可达21.05%。

2. 溶菌酶纯度：经纯化处理后，溶菌酶的纯度可达100%。

3. 溶菌酶活性：通过分光光度法测定，溶菌酶的活性为2.30U/mg。

4. 影响分离效果的因素分析：（1）pH值：溶菌酶在pH值为8.0时活性最高，因此在纯化过程中将pH值调节至8.0。

（2）操作电压：操作电压越高，溶菌酶的回收率越高，但电压过高会导致溶菌酶变性，因此选择5.0V为最佳操作电压。

（3）超滤膜材料：PVDF100超滤膜对溶菌酶的截留效果较好，因此选择该膜材料。

鸡蛋中溶菌酶的提取

鸡蛋中溶菌酶的提取，纯化及纯度鉴定李莹姝蒋华云*（南京师范大学生命科学学院，南京 210046）摘要：从蛋清中用724弱酸性阳离子交换树脂提取溶菌酶，然后用硫酸铵溶液洗脱，盐析得到溶菌酶。

用葡聚糖凝胶层析（SephadexG-75）纯化溶菌酶，收集峰值处样品。

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳鉴定个步骤留样及所得溶菌酶样品的纯度。

溶菌酶得率为0.0474mg/100ml（0.03g/kg）；葡聚糖凝胶层析过程纯化样品得到了洗脱峰曲线，但未能收集到峰值处样品；电泳结果显示在纯化过程中溶菌酶纯度不断升高。

本实验溶菌酶得率较低，提取工艺有待改进，需进一步减少样品损失；层析过程需进一步熟练掌握，以更好达到纯化效果。

关键词：溶菌酶；离子交换树脂，凝胶层析；SDS-PAGEExtraction, purification and purity of Egg lysozymeYings Li Huay Jiang*(College of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, China)Abstract:From egg white, with 724 weak acid cation exchange resin extraction of lysozyme, and then eluted with ammonium sulfate, salting to be lysozyme. With dextran gel chromatography (SephadexG-75) purified lysozyme, the peak of the sample collection. By SDS-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) electrophoresis and identified steps to stay kind of purity of the samples from lysozyme. Lysozyme yield 0.0474mg/100ml (0.03g/kg); dextran gel chromatography purified samples obtained during elution peak curve, but failed to collect samples at the peak; electrophoresis showed that the purification process of lysozyme enzyme purity rising. In this study, lysozyme was the low rate of extraction process could be improved, the need to further reduce sample losses; chromatography process needs further proficiency in order to better achieve purification.Key words:lysozyme, Ion exchange resin, Gel chromatography, SDS-PAGE溶菌酶( Lysozyme , 1,4－β－N－溶菌酶) 是一种专门作用于革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的β-1,4- 糖苷键的水解酶, 因而又称为胞壁质酶或者N- 胞壁质聚糖水解酶。

提取溶菌酶的实验报告

一、实验目的1. 学习并掌握溶菌酶的提取方法；2. 了解溶菌酶的分离纯化过程；3. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；4. 学习溶菌酶纯度鉴定与分子量测定。

二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清中。

溶菌酶能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，导致细菌细胞壁破裂，从而起到杀菌作用。

本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、考马斯亮蓝G-250、邻苯二甲酸氢钾、苯酚、硫酸铜、氢氧化钠、无水乙醇等；2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平等。

四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋清，用4倍体积的0.1mol/L的NaOH溶液溶解；（2）将溶液搅拌均匀，置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用等体积的4倍体积的0.1mol/L的HCl溶液调节pH至4.5；（4）将溶液置于高速离心机中，以10000r/min离心30分钟；（5）取上清液即为粗提溶菌酶。

2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定（1）取粗提溶菌酶溶液，用硫酸铵饱和溶液进行盐析，调节硫酸铵浓度为0.5mol/L；（2）将溶液置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用高速离心机以10000r/min离心30分钟，取沉淀；（4）将沉淀用0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲溶液溶解，得纯化溶菌酶溶液；（5）测定酶活力和蛋白浓度，酶活力单位以每分钟产生1μmol的产物为1个单位，蛋白浓度采用考马斯亮蓝G-250法测定。

3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）取纯化溶菌酶溶液，进行SDS-PAGE电泳分析；（2）根据电泳结果，计算溶菌酶的分子量；（3）根据纯化溶菌酶溶液的蛋白浓度和酶活力，计算溶菌酶的纯度。

五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取通过实验，成功提取了鸡蛋清中的溶菌酶，提取率为0.5%。

从蛋清浓厚蛋白中提取溶菌酶技术的研究

ｕｔｆｔｔｎｔｍｐｒｔｒ５ｏ，ｍａｅｉｌｉｕｄｐ８５，ｉｉｃｉｎｐｅｓｒ．８ＭＰｎｅｈａｈｒｃｎｅｔａｉｎＵｌ— ｌａｌａｉｒｉｒｏｅｅａｕｅ３ＣｔｒｑｉＨ．ａｌｎｅｔｒｓｕｅ００ａａｄｔｎｕｒｆｅｏｃｎｒｔ．ｔｏｈｉｏｉ
ｍａｏｒｐ．Ｔｈｏｉａｈｒｆｈｒｔｏｘｒｃｉｎｃｎｔｏｓｆｒｅｇｗｈｔｙｓｚｍｅａｅｏｔｉｅｓｆｌｏｔｇａｈｙｅｐｔｌｕａｍｉａｉｎｅｔａｔｏｄｉｉｎｏｇｉｅｌｏｙｒｂａｎｄａｌｗｓ：ｄｌｉｎｉｅ，ｏｏｉｏ４ｔｓｕｔｍ
ｍａｅｙｌｓｚｍｅｅｚｍｅａｔｉａｅｉ１１９％，ｔｅｌｓｚｍｅｔｎｍｉｓｉｓ７．７％，ｔｅｌｓｚｍｅａｔｉｆｓｍｐｅｔｌ，ｙｏｙｎｙｃｉｔｒｔｓ３．３ｖｙｈｙｏｙｒｓｓｉｔｉ３５ａｖｙｈｙｏｙｃｉｔｏａｌｖｙ
Ｋｅｒｓｅｇｗｈｔ；ｌｓｚｍｅ；ｕｔｆｔｔｎａｉｉｙｗｏｄ：ｇｉｅｙｏｙｌａｉｒｉ；ｆｎｔｒｌａｏｙ
溶菌酶在酶学研究中是一种有重要意义的酶，
但我国目前缺乏适合工业化生产高质量溶菌酶的可行性工艺。目前，直接结晶法、超滤法、离子交换树脂吸附法、亲和层析等常被用来提取溶菌酶。超滤法是利用控制超滤膜孔径大小来滤过杂质，水及小分子物质可以通过，从而获取产物。亲和层析法是根据作用酶与底物有特异亲和力的特性，利用酶分子独有的专一性结合位点或结高活性、高纯度溶菌酶的分离纯化方法的主要研究方向，这也是本研究的主要研究方法之一。利用超滤法与亲和层析法相结合方法对鸡蛋清溶菌酶进行适合工业化生产的提取精制研究。期望研究成果可应用于大规模的工业生产，提高生产效益，从而促进我国溶菌酶产业的快速发展。

鸡蛋提取溶菌酶的方法

鸡蛋提取溶菌酶的方法鸡蛋白是一种丰富的蛋白质源，其中含有溶菌酶（lysosome），可以在细菌和真菌的溶解中发挥重要作用。

溶菌酶是一种具有溶菌、抗菌活性的酶类。

鸡蛋提取溶菌酶的方法主要包括以下几个步骤：1. 鸡蛋的分离：首先将新鲜的鸡蛋进行分离，只保留蛋清（蛋白质）部分，去除蛋黄。

2. 蛋清处理：将蛋清中的蛋白质与溶菌酶分离，可以采用酸碱沉淀法。

将蛋清加入适量的酸（如醋酸）中，使酸度下降到pH 4以下，随后使用碱（如氢氧化钠）中和酸性溶液，使溶液pH回升到中性左右。

这一过程中，溶菌酶会发生沉淀现象，可以方便地分离出来。

3. 溶菌酶的除杂：蛋清中可能还存在其他酶类或蛋白质，为了获得纯净的溶菌酶，可以进行一轮或多轮的洗涤与纯化。

例如，可以使用盐析法，通过逐渐增加溶液中的盐浓度来沉淀溶菌酶，然后用溶液洗涤沉淀物，最后得到纯净的溶菌酶。

4. 溶菌酶的浓缩与干燥：将纯净的溶菌酶溶液通过浓缩技术（如超滤或冷冻干燥）使溶液浓度增大，得到较为浓缩的溶菌酶溶液。

5. 溶菌酶的活性测定：对提取得到的溶菌酶进行活性测定，可以通过测定其对特定底物的溶解能力来评估溶菌酶的活性。

常见的测量方法包括显色法和滴定法等。

鸡蛋提取溶菌酶的方法相对简单，但有一些需要注意的注意事项：1. 鸡蛋的新鲜度对溶菌酶的提取效果有一定影响，新鲜的鸡蛋中溶菌酶的含量较高。

因此，在进行实验时应选择新鲜的鸡蛋。

2. 溶菌酶的活性与条件相关，如温度、酸碱度等。

在提取过程中需要控制好这些条件，以保证溶菌酶的稳定性和活性。

3. 提取得到的溶菌酶需储存于低温（通常-20C）下，否则易失活。

4. 鸡蛋中的蛋白质含量较高，在提取过程中需要留意对蛋白质的处理，避免产生其他影响或污染。

需要特别注意的是，提取溶菌酶并非只有上述方法，还可以根据实际需要结合其他技术和方法进行提取，例如离心、层析、电泳等。

总结起来，鸡蛋提取溶菌酶的方法包括鸡蛋的分离、蛋清处理、溶菌酶的除杂、溶菌酶的浓缩与干燥以及溶菌酶的活性测定等步骤。

鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化

四、实验材料和方法
四、实验材料和方法
1、实验材料：新鲜鸡蛋、磷酸缓冲液（PBS）、乙酸乙酯、正丁醇、蛋白酶抑制剂、透析袋。
四、实验材料和方法
2、实验设备：高速离心机、真空泵、氮气仪、色谱柱。 3、实验方法：（1）鸡蛋卵清的收集：将新鲜鸡蛋打破，分离出卵黄和卵清，收集卵清备用。（2）粗提：将收集的卵清加入磷酸缓冲液（PBS），搅拌均匀后进行高速离心，取上清液即为粗提液。（3）沉淀：向粗提液中加入等体积的乙酸乙酯，充分混合后静置分层，取下层沉淀。（4）
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化
目录
01 一、背景介绍
03 三、实验原理
02 二、研究目的 04 四、实验分析
07 参考内容
06 六、结论与展望
一、背景介绍
一、背景介绍
溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的天然抗菌酶，具有抗菌、抗炎、抗病毒等多种生物活性。近年来，随着人们对食品安全和药物研发的度不断提高，从天然生物资源中提取和纯化溶菌酶成为了一个热门领域。鸡蛋卵清作为一种丰富的天然资源，具有较高的溶菌酶含量，因此成为了提取和纯化溶菌酶的重要来源。本次演示旨在探讨鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化方法，以期为相关领域的研究提供参考。
四、实验材料和方法
复溶：将沉淀物真空干燥后，加入适量正丁醇溶解，再加入透析袋中透析去除小分子杂质。（5）色谱分离：将透析后的溶液通过色谱柱进行分离，收集流出液，检测其中溶菌酶的纯度和含量。（6）鉴定：采用光谱分析、分子量测定等方法对纯化的溶菌酶进行鉴定。
五、实验结果及分析
五、实验结果及分析
二、研究方法与技术
1、材料与设备
1、材料与设备
本研究采用新鲜鸡蛋作为原料，使用离心机、分光光度计、电泳仪等设备进行实验。

鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究

鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!一、引言鸡蛋清溶菌酶是一种重要的生物催化剂，在生物学、医药、食品和环境领域具有重要应用价值。

从蛋清蛋壳中提取溶菌酶的关键技术

从蛋清蛋壳中提取溶菌酶的关键技术2010-03-01 点击数：327华南理工大学食品学院郑建仙鸡蛋清中溶菌酶的含量约为3.5％，是提取溶菌酶的方便来源。

但不同产地的鸡蛋，其蛋清中溶菌酶的含量有所不同。

工业上多采用直接结晶法、亲和色谱法、离子交换法、超滤和亲和色谱联合使用法等方法生产溶菌酶。

●直接结晶法在鸡蛋清中加入5%的NaCl，调节pH到10左右，加入溶菌酶晶种，在0℃—5℃静置结晶，分离蛋清，得到结晶物，经纯化后再进行重结晶。

●离子交换法溶菌酶是一种阳离子型蛋白质。

它由阴离子交换树脂吸附，使其从蛋清中分离出来，然后用0.3mol/L以上食盐水洗脱树脂，洗脱液经透析、超滤、冷冻干燥便得粉状产品。

●亲和色谱法利用酶与底物专一性结合形成复合物的特点，以羧甲基甲壳素（CM-CH）为底物专一性结合溶菌酶，然后用水和稀醋酸洗脱，洗脱液经透析、超滤、喷雾干燥或真空干燥便得粉状产品。

利用亲和沉淀从蛋清中分离溶菌酶也是溶菌酶制备研究的一个热点。

Stermberg等1974年报道了应用聚丙烯酸（PAA）形成PAA-溶菌酶聚电解质复合物。

Chern等于1996年应用pH敏感的亚微粒丙烯酸胶浆以及Eudragit L100作为溶菌酶的沉淀剂。

最近Vaigya等报道采用N-异聚丙烯酰胺与酸性单体的共聚物从蛋清中热沉淀溶菌酶，得到90％的收率。

他们认为使用共聚物从蛋清中热沉淀溶菌酶比使用pH敏感聚合物具有更多的优点，因为后者通常只有较低的得率。

●其他方法用水或稀酸将鸡蛋清稀释2.5—10倍，调整液体pH至2.5—7.0，在此弱酸性水溶液中加入少量钙并加热，使溶菌酶以外的蛋白质大部分凝固，从分离出的上清液和凝固物的洗净液中提取溶菌酶。

Owen等1997年报道，使用连续逆流、膨胀床吸附系统分离溶菌酶，该技术克服了一般填充床柱层析的一些存在问题，诸如填充材料的压实、沟槽的形成和由于上样溶液微粒引起的柱阻塞等。

Ghosh等报道，采用小型的中空纤维超率系统从蛋清干粉中分离溶菌酶。

鸡蛋清中溶菌酶的分离纯化 26

五、方法改进
方法：反胶团萃取
原理：当表面活性剂溶于大量与水不相溶的有机溶剂中，达到一定浓度时，会形成极性头在内，非极性头在外的聚集体，这种聚集体为反胶团(当体系中含量一定量的水，则在反胶团中心有一个水池，可以包围水溶性的蛋白质分子(这种反胶团的有机溶剂与蛋白质水溶液混合时，一定条件下，蛋白质分子能够从水相进入到反胶团的中心水池，经过分相后，再将有机相与另一水相接触，改变条件，即可打开胶团，释放蛋白质分子，从而达到萃取分离的目的。
鸡蛋清中溶菌酶的分离纯化
生制12 李雅 26
一、实验材料——鸡蛋清
理化性质：溶菌酶广泛存在于自然界中，其中以蛋清含量最为丰富。从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。它富含碱性氨基酸，有4对二硫键维持酶构型，是一种碱性蛋白质，其N端为赖氨酸，C端为亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌；鸡蛋清中溶菌酶是一种罕见的稳定蛋白质，对温度和酸不敏感，在弱碱性条件下稳定；鸡蛋清中溶菌酶的等电点为10.8，远大于鸡蛋清中其他蛋白质的等电点。
操作：用粗蛋清溶液进行分离纯化,可使溶菌酶的纯度提高16～20倍, 达到0.62～0.76 mg/mg蛋白,这种亲和反胶团系统可以重复使用三次, 加入聚氧乙烯(120)去水三梨糖醇三油酸酯(Tween85)作为辅助表面活性剂可以提高反胶团系统的容量。在pH9.16的前水相中,使用含有 Tween85(20 g/L)的反胶团可以使溶菌酶的产率超过70%。为了进一步提高反微团萃取分离的选择性,可在反微团表面活性剂的烷基连接对待分离蛋白质具有生物专一性的配基,实现反微团亲和萃取分离。
二、方法及原理
方法：离子交换色谱法原理：离子交换法是利用溶液中各种带电粒子与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离的操作技术,由于具有简便、高效、成本低,通常选择弱酸性阳离子交换树脂进行分离。

蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究

蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究一、引言蛋清是一种富含溶菌酶的天然源，溶菌酶具有广泛的应用价值，在医药、食品、环境等领域发挥着重要作用。

因此，高效提取蛋清中的溶菌酶，并开发可靠的定量测定方法具有重要意义。

二、蛋清中溶菌酶的提取方法研究进展2.1 传统提取方法1.直接破碎法–原理：将鸡蛋或鸭蛋直接破碎，通过离心等方法分离溶菌酶。

–优点：简单、快速。

–缺点：溶菌酶的提取率和纯度较低。

2.盐析法–原理：通过加入适量的盐类使溶菌酶沉淀，然后进行后续纯化。

–优点：提取率较高。

–缺点：纯化过程繁琐，提取时间较长。

2.2 新型提取方法1.超声提取法–原理：利用超声波作用下产生的微小气泡破坏细胞结构，释放溶菌酶。

–优点：提取效率高，提取时间短。

–缺点：对溶菌酶活性有一定影响。

2.酶解法–原理：使用特定酶解剂使蛋清中的蛋白质部分降解，释放溶菌酶。

–优点：提取效率高，对溶菌酶活性影响较小。

–缺点：酶解过程需要精确控制条件。

三、蛋清中溶菌酶的定量测定方法3.1 比色法1.基于物质的变化–原理：溶菌酶对某种物质具有催化作用，该物质的变化可以被检测器测定。

–优点：操作简单，成本较低。

–缺点：适用范围有限。

2.酶联免疫吸附法–原理：利用特异性抗体与溶菌酶结合，通过测定抗体与酶的结合程度来定量溶菌酶。

–优点：高灵敏度，高特异性。

–缺点：实验操作复杂。

3.2 光学测定法1.比色法–原理：溶菌酶具有特定的吸收光谱，在特定波长下可以测定其浓度。

–优点：操作简单，结果准确。

–缺点：需要专用仪器。

2.荧光法–原理：利用溶菌酶在特定条件下的荧光特性来定量测定其浓度。

–优点：高灵敏度，高选择性。

–缺点：试剂成本较高。

四、结论通过对蛋清中溶菌酶的高效提取方法和定量测定方法的研究，我们可以得出以下结论： 1. 新型提取方法如超声提取法和酶解法可以提高溶菌酶的提取率和提取效率。

2. 定量测定方法如酶联免疫吸附法和荧光法具有高灵敏度和高特异性。