3_5_二硝基水杨酸比色法快速测定烟草水溶性总糖_还原糖及淀粉的探讨
实验二十还原糖和总糖含量的测定—35-二硝基水杨酸比色定糖法
实验二十还原糖和总糖含量的测定—3、5-二硝基水杨酸比色定糖法目的要求1、掌握3，5-二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2、用3，5-二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中的总糖及还原糖。
3、熟悉721型光电比色计的原理及使用方法。
实验原理3，5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和器材1.试剂（1）6mol/L盐酸溶液、10%氢氧化钠溶液、碘化钾-碘溶液（碘试剂）、酚酞指示剂、85%乙醇。
（2）3，5-二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）：甲液——溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。
乙液——称取255g酒石酸钾钠，加到300ml 10%氢氧化钠中，再加入880ml 1%的3，5-二硝基水杨酸溶液。
将甲液与乙液相混合即得到黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温下，放置7～10d以后使用。
（3）0.2%葡萄糖标准液：准确称取200mg分析纯的葡萄糖（预先在70℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，冰箱保存备用。
2.器材试管和试管架、碱滴定管（50ml）、铁架台、滴定管夹、移液管（1ml，2ml）、移液管架、容量瓶（100ml）、铜水浴锅、玻璃漏斗、烧杯、铁三脚架、量筒（10ml、100ml）、电热恒温水浴、煤气灯、玻璃棒、白瓷板、721型分光光度计。
操作方法1.葡萄糖标准曲线的制定取9支刻度试管（25ml）或血糖管，分别按下表顺序加入各种试剂：DNS试剂1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5（ml）加热均在沸水浴中加热5min冷却立即用流动冷水冷却蒸馏水（ml）21.5 21.5 21.521.521.521.521.521.5 21.5 将上述各管溶液混匀后，在721型分光光度计上进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值,以葡萄糖浓度为横座标，光密度值为纵座标绘制出标准曲线。
3_5_二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究
第12卷第3期2004年9月纤维素科学与技术Journal of Cellulose Science and TechnologyVol.12 No.3Sept. 2004文章编号：1004-8405(2004)03-0017-043,5-二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究齐香君，苟金霞，韩戌珺，闫博（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西咸阳 712081）摘要：据相关资料报道，在碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸被还原糖还原生成的氨基化合物在540 nm波长下具有最大吸收，在此条件下该方法可测糖的适合浓度为3~4 mg/mL。
而对其吸收光谱的测定研究发现，生成的氨基化合物在483 nm处有最大吸收，在该波长下测糖范围是0.1~1.0 mg/mL，并且测量的相对误差为2.2%。
关键词：3,5-二硝基水杨酸；还原糖；最大吸收波长；测量范围中图分类号：Q53 文献标识码：A众所周知，还原糖测定在我们生产细菌纤维素的发酵过程中具有十分重要的意义。
由于3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）具有准确性高、重现性好、尤其适用于大批量样品的测定等特点，而广泛地被用来测定发酵液中的残余糖量，从而得出细菌在繁殖和合成纤维素的过程中的耗糖量。
据相关资料报道[1,2]，在碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸被还原糖还原生成的氨基化合物在540 nm波长下具有最大吸收，在沸水浴中显色时间2 min，在此条件下该方法可测糖的适合浓度为3~4 mg/mL。
而我们对其生成的氨基化合物的吸收光谱进行了研究，发现其λmax 不是540 nm，因此本文对3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的方法进行探讨与研究。
1 原理与方法1.1 原理在氢氧化钠和丙三醇的的存在下，还原糖能将3,5-二硝基水杨酸中的硝基还原成氨基，生成氨基化合物。
此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色，在一定波长下具有最大吸收，并且吸光度与还原糖含量有线性关系。
1.2 适用范围及特点此法适用于各类食品中的还原糖的测定，具有准确度高、重现性好、操作简便、快速等优点，尤其适用于大批量样品的测定。
生物化学
《生物化学》结课论文题目：淀粉中提取总糖及还原糖的研究【摘要】：通过本实验主要掌握还原糖和总糖的测定方法，学习用比色法测定还原糖的方法。
实验中用3，5-二硝基水杨酸（DNS)与还原糖共热解后被还原生成氨基化合物。
最后通过实验结果发现在NaoH和丙三醇存在下，3，5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的NaoH碱性溶液中此化合物呈红色，在540mm波长处有最大吸收，在一定范围内，还原糖与光吸收值呈直线关系，运用比色法能有效的测出样品中的含糖量。
通过测定发现还原糖的百分比含量为22.6%，总糖百分比含量为44%。
【关键词】：淀粉总糖还原糖比色法前言总糖具有还原性，在一定条件下能水解成还原糖，总糖也包括非还原糖。
用3，5--二硝基水杨酸比色法测定能区分总糖与还原糖，通过测定样品中的还原糖含量，高的为总糖，低的为还原糖。
3，5-二硝基水杨酸（DNS)与还原糖共热解后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，利用比色法可测定淀粉中总糖和还原糖。
目录摘要 (1)前言 (2)第一章概论 (3)第二章总糖及还原糖的提取分离与纯化方法的研究 (4)第三章实验部分 (5)3.1实验仪器 (5)3.2实验药品 (5)3.3实验步骤 (5)第四章4.1数据处理及结论 (7)4.2前景展望 (8)致谢 (9)参考文献 (10)第一章概论淀粉是葡萄糖分子聚合而成的，它是细胞中碳水化合物最普遍的储藏形式。
淀粉有直链淀粉和支链淀粉两类淀粉是植物体中贮存的养分，贮存在种子和块茎中，各类植物中的淀粉含量都较高。
淀粉可以看作是葡萄糖的高聚体。
淀粉除食用外，工业上用于制糊精、麦芽糖、葡萄糖、酒精等，也用于调制印花浆、纺织品的上浆、纸张的上胶、药物片剂的压制等。
可由玉米、甘薯、野生橡子和葛根等含淀粉的物质中提取而得。
总糖主要指具有还原性的葡萄糖，在一定条件下能水解成还原糖，总糖也包括非还原糖。
实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
3_5_二硝基水杨酸比色法快速测定烟草水溶性总糖_还原糖及淀粉的探讨
第22卷 第6期 云南农业大学学报V o l 122 N o 162007年 11月 Journal o fYunnan Agricu lturalU niversityN ov .2007收稿日期:2006-09-14 *通讯作者作者简介:尹建雄(1979-),男,湖南邵阳人,硕士研究生,主要从事烟草生理生化研究。
E -m a i:l ax i ong168@si na .com3,5-二硝基水杨酸比色法快速测定烟草水溶性总糖、还原糖及淀粉的探讨尹建雄1,2,卢 红2*,谢 强2,丁金玲2,李尼杭2(1.石林县天合烟叶复烤有限责任公司,云南石林6522001;2.云南农业大学烟草学院,云南昆明650201)摘要:通过还原糖对3,5-二硝基水杨酸的还原产物的吸收光谱分析,结果表明,该还原产物在500n m 波长下有最大吸收峰,但最佳的工作波长确定为540n m 。
同时找出了显色反应时间及显色剂的最佳用量。
并对烟草中水溶性总糖的提取方法进行了优化,建立了批量连续测定烟样中还原糖、水溶性总糖(进行酸水解)、淀粉的快速方法。
同时对多个烟样进行了测定,与伯川法测定结果比较,其相对误差在5%以内。
关键词:烟草;比色法;3,5-二硝基水杨酸中图分类号:TS 411 文献标识码:A 文章编号:1004-390X (2007)06-0829-05A Study on Rapid Colorim etric Deter m i nation ofW ater Sol uble Total Sugar,Reduci ng Sugar and St arch i nTobacco wit h 3,5-di nitrosalicylic AcidYIN J i a n -x i o ng 1,LU Ho ng 2,XIE Q i a ng 2,D ING J i n -li n g 2,LIN-i ha ng2(1.T I ANGHE T obacco T hresh i ng L ID ,CO.Stone F orest 652200,Ch i na ;2.F acu lty of T obacco Science ,Y unnan A gr i cultura lU n i ve rs i ty ,Kun m i ng 650201,Ch i na)Abst ract :The absorpti o n spectr um of 3,5-d i n itrosalicy lic aci d reducing product w ith reduc i n g sugar has been studied.The resu lt sho w s a m ax i m um absor p ti o n at 500nm,bu t the best w or k w aveleng thw as deter m i n ed by 540nm.The best ti m e o f color reaction and best suitable a m ount of the co l o r reagent w as g iven .The ex tracti o n m ethods of w ater so l u ble total sugar w as opti m ized ,and a rap i d conti n uous batch deter m i n ation of reducing sugar ,w ater so l u b le total sugar and starch w as estab lished .W hen so m e tobacco sa m ples w ere deter m i n ed .The re lati v e errors o f the resu lts obta i n ed by th is m ethod related to those obta i n ed by the Bertrand p sm ethod w ere under o f 5%.K ey w ords :tobacco ;co l o ri m etr y ;3,5-dinitrosalicy lic acid 烟草中的水溶性总糖、还原糖、淀粉对烟叶品质影响巨大,是烟草化学分析中的重要项目,水溶性总糖和淀粉通常都是通过水解(酶解或酸水解法)成单糖按还原糖的测定方法进行测定。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
3_5_二硝基水杨酸比色法测定淫羊藿多糖的含量
淫羊藿（Herba Epimedim ）为小檗科(Berberidaceae)植物朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥地上部分。
李时珍在《本草纲目》中称其有“辛温，无毒，坚筋骨，益精气，补腰膝，强心力”之功效[1]。
其所含的多糖成分有抗肿瘤、抗衰老等作用，药理实验显示淫羊藿多糖具有明显的免疫促进作用，是一种很有发展前途的生物调节剂。
据文献报道[2,3],苯酚硫酸法和DNS 法常用于植物多糖的含量测定，其中DNS 法通过测定总糖及单糖的含量,计算出多糖含量，该法灵敏、稳定、重复性好,可用于含多糖类中药的质量控制。
淫羊藿多糖尚未见有DNS 比色法测定报道，本试验对DBStt 色法测定淫羊藿多糖的含量进行研究。
1材料与仪器1.1材料D -无水葡萄糖对照品（中国生物制品检定所）；淫羊藿粗多糖（由本实验室提供）；3,5-二硝基水杨酸（上海润捷化学试剂有限公司）；其它试剂均为分析纯。
1.2仪器恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；紫外分摘要：目的:建立淫羊藿多糖的含量测定方法。
方法:采用3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS 法),测定淫羊藿中的还原糖和总糖的含量,并计算出总多糖的含量。
结果:DNS 试剂的用量为2mL ，显色温度为100℃,显色时间为5min,在520nm 处多糖含量与吸光度有良好的线性关系,加样回收率为96.66%～96.74%。
结论:该方法操作简便，测定结果准确，重复性好，可用于淫羊藿多糖的含量测定。
关键词：淫羊藿；多糖；3,5-二硝基水杨酸法doi:10.3969/j.issn.1008-1267.2012.01.023中图分类号：TQ224.6文章编号：1008-1267（2012）01-0060-03第26卷第1期2012年1月天津化工Tianjin Chemical Industry Vol.26No.1Jan.20123，5-二硝基水杨酸比色法测定淫羊藿多糖的含量杨浩，张曜武，张龙（青岛科技大学化工学院药学系，山东青岛266042）文献标志码：A收稿日期：2011-07-15作者简介：杨浩（1987-），女，硕士研究生。
3_5_二硝基水杨酸比色法测定烟草中水溶性总糖
烟草中的水溶性总糖包括葡萄糖 、果糖 、麦芽糖 和蔗糖 ,其中葡萄糖 、果糖 、麦芽糖是还原糖 ,蔗糖是 非还原糖 ,烟叶吸燃时 ,它们高温裂解成低级的醛 、 酮 ,使烟气呈酸性 (pH513～615) ,对烟气的香气和吃 味都有良好的作用 ,并能减少烟气的刺激性 ,因此是 决定烟叶品质的重要化学成分 。水溶性总糖是烟草 化学检测中必测的项目 , 其经典方法是铜系分析 法[1～4] ,该方法具有准确度高 、重现性好等优点 ,但 流程长 、步骤多 、操作繁 、试剂及水电消耗大 ,且只能 用于常量分析 。近年来 ,不少研究者对烟草中水溶 性总糖或还原糖的测定进行了研究 ,其方法多为比 色分析 ,但显色剂各有不同 ,如斐林试剂比色法[5] 、 磷钼酸比色法[6] 、邻甲苯胺比色法[7] 等 。本 文 用 3 ,52二硝基水杨酸比色法测定烟草中的水溶性总 糖 ,研究了 3 ,52二硝基水杨酸的还原产物的吸收光 谱 ,找出了显色剂的最佳用量 ,作了标准曲线 ,同时 探索了烟草中水溶性总糖的提取方法 ,并对 3 个烟 样进行了测定 ,与经典方法的测定结果比较 ,均令人 满意 。
Key words :Tobacco ;Water2soluble total sugar ;Colorimetry ;3 ,52dinitrosalicylic acid ;Absorption spectrum ;Standard
curve
(责任编辑 徐秀红)
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世纪之交云南烟草农业的构想与对策
雷永和
(云南烟草科学研究院农业研究所 玉溪 653100)
摘 要 总结了云南烟草业的成绩和烟草农业上存在的 4 个主要问题 。从可持续发展及知识农业的角度 ,阐 述了世纪之交发展云南烟草农业的构想和对策 ,包括解决目前存在的和今后发展中的科学技术问题的指导思想 、 具体内容及解决办法 。阐述了知识经济的内涵 ,知识农业与传统农业的区别 ,知识农业与烟草业的发展 、与科技人 才队伍的建设及提高烟农素质的关系 。提出培养高层次的专业技术人员 ,学术 、技术带头人 ,在职人员的素质教 育 、职业教育 、继续教育及提高烟农科学文化素质的问题及意见 。
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。
2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
面粉中还原糖的测定--3,5-二硝基水杨酸比色法
--3,5-二硝基水杨酸比色法
一、原理 还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一
定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶 解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的 双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定。再求出样品中 还原糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
将 6.3g DNS 和 262mL 2M NaOH 溶液，加到 500mL 含有 185g 酒石酸钾钠
的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容 至 1000mL，贮于棕色瓶中备用。
三、操作步骤
1．制作葡萄糖标准曲线
取 6 支 20ml 具塞刻度试管编号，按表 1 分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖 标准液、蒸馏水和 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应 液。
面粉，中性滤纸。 2．主要仪器 （1）比色管 （2）具塞玻璃刻度：20mL×9 （3）烧杯 （4）漏斗 （5）容量瓶：100mL,1000mL （6）刻度吸管：1mL；2mL；10mL （7）恒温水浴锅 （8）电子天平 （9）紫外可见分光光度计 3．试剂 （1）1mg/mL 葡萄糖标准液
准确称取 80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg，置于小烧杯中，加少量蒸 馏水溶解后，转移到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容 100mL，混匀，4℃冰箱中 保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将浸出液（含沉淀）过滤到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作
为还原糖待测液。
（2）显色和比色 取 3 支 20mL 具塞刻度试管，编号，按表 2 所示分别加入待测液和显色剂，
3,5-二硝基水杨酸比色法测定废烟草中总糖
紫 外可 见分光 光度 计 ： ５ ； 烟 草 ： 昌卷 烟 ７ ５Ｓ废 许 厂 ； １ｍｇ・ 葡 萄 糖 标 准 液 ： 确 称取 １ ５ ｍＬ 准 ０ ℃烘 至恒 重 的 分 析 纯 葡 萄糖 １ ０ ｍｇ溶 于 少 量 蒸 馏 水 ０ 中， 溶解 后移 入 １ ０ｍＬ容量 瓶 中， ０ 用蒸 馏 水 定容 至
是 指采用 造纸 工艺 的基本 原理 ， 以化工工 艺技 术 ， 辅 把 烟梗 、 烟末 、 烟 片 以及低 次 等烟 叶经过 一定 的工 碎
艺技 术处 理 ， 制造 出符 合卷 烟 配 方 需 要 的一 种 生 产 工艺 ． 而在 烟草 薄 片 的生产 过 程 中如何 控 制糖 类 和
其他物 质 的 比例 以制成 高档 香０ ６年 １ 月 ２
Ｄｅ ．２ ６ ｃ ００
［ 文章 编 号 ］１０ —４ ８ （０ ６ １—０ ２０ ０ ３ ６ ４ ２ ０ ）２０ ６ —４
３ ５二 硝基 水 杨 酸 比色 法 测定 废 烟 草 中总糖 ，一
赵 春 玲 ，王 秀 霞 ，李 琼
（ １湖北工业大学化 学与环境 工程 学院，湖北 武汉 ４ ０ ６ ；２莱阳农 学院理 学院，山东 青 岛 ２ ６ ０ ） ３０８ ６ １９
［］ ２
．
４ 三醇 ， ５ｇ丙 摇匀 ， 冷却 后加 水至 总体 积 １０ ０ｍＬ ０ ，
贮 于棕 色瓶 中备用 ． 斐林试 剂 ： 液 ， 取 ６ ． ２ｇ硫 酸 铜 ， 于 蒸 Ａ 称 ９ ８ 溶 馏水 ， 稀释 至 １０ ０ｍＬ； 并 ０ Ｂ液 ， 取 ３ ６ｇ酒 石 酸 称 ４ 钾钠 与 １ ０ｇ氢 氧 化 钠 ， 于蒸 馏 水 ， 全溶 解 后 ， ０ 溶 完 用水 稀释 至 １０ ０ｍＬ， ０ 贮存 于橡 胶塞 玻璃 瓶 内． 氢氧 化 钠 溶 液 （ ０ ） Ｐ （ ） ２ ， ｂ Ａｃ 。溶 液 （ ０ ） ２ ， ＮａＳ 溶 液 （ ０ ） 浓 盐 酸 （ Ｏ １ ． 以上 试 剂 均 为 分 析
3,5二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究
3,5二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究一、本文概述本文主要研究了3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法在测定溶液中还原糖的应用。
还原糖是一类具有还原性的单糖和低聚糖，如葡萄糖、果糖和麦芽糖等，它们在许多生物化学反应中发挥着重要作用。
因此，准确测定溶液中的还原糖含量对于理解生物过程、食品工业、医药研究等领域具有重要意义。
DNS比色法是一种常用的还原糖测定方法，其原理是利用DNS试剂与还原糖在碱性条件下发生氧化还原反应，生成一种在煮沸条件下呈棕红色的化合物，其颜色深浅与还原糖含量成正比。
通过比色法测定这种化合物的吸光度，就可以间接计算出溶液中还原糖的含量。
本文将详细介绍DNS比色法的实验步骤，包括试剂的配制、实验条件的优化、以及实际样品的分析等。
还将探讨影响测定结果的各种因素，如温度、pH值、反应时间等，以提高测定的准确性和可靠性。
本文还将对DNS比色法与其他常用还原糖测定方法进行比较，以评估其在实际应用中的优缺点。
通过本文的研究，旨在为相关领域的研究人员和技术人员提供一种准确、简便的还原糖测定方法，为深入研究还原糖的生物化学性质和应用提供有力支持。
二、3,5二硝基水杨酸比色法基本原理3,5-二硝基水杨酸（3,5-dinitrosalicylic acid，DNS）比色法是一种常用的测定溶液中还原糖含量的方法。
该方法基于还原糖与DNS试剂在碱性条件下发生氧化还原反应的原理。
在反应过程中，还原糖将DNS试剂中的硝基还原为氨基，生成了一种深红色的化合物，这种化合物的颜色深浅与还原糖的含量成正比。
DNS比色法的反应过程可以分为两个阶段。
在碱性环境下，DNS 试剂与还原糖发生缩合反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
然后，该中间产物进一步与还原糖反应，生成一种深红色的氨基化合物。
这种颜色变化可以通过比色法进行定量测定，从而确定溶液中还原糖的浓度。
DNS比色法具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此在食品、农业、生物等领域得到了广泛应用。
3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖
樱桃还原糖测定-3,5－二硝基水杨酸比色法(DNS法)一．原理3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
此法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少，是一种很好的糖定量测定方法。
二．试剂1. 3,5－二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）先配置1% 3,5－二硝基水杨酸溶液；A液：溶解6.9 g结晶酚（苯酚）于15.2 mL 10％氢氧化钠中，并用水稀释至69 mL，再向此溶液中加入6.9 g亚硫酸氢钠；B液：称取255 g酒石酸甲钠，加到300 mL 10％氢氧化钠中，再加入880 mL 1％3,5－二硝基水杨酸溶液；将A液和B液相混合即得黄色的DNS试剂，保存于棕色试剂瓶中，在室温下放置7~10天后使用，保存期为两个月。
2. 葡萄糖标准曲线配制准确称取100 mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 mL，保存于冰箱备用。
将1 mg/mL 葡萄糖标准溶液用蒸馏水按照下表进行稀释：三．样品制备和测定将樱桃果肉匀浆后，取约0.08 g的匀浆，加入4 mL蒸馏水混匀后静置进行提取，离心收集上清液备用。
将0.2 mL各浓度的葡萄糖标准溶液或（0.15 ml稀释至合适倍数的样品溶液）与0.15 mL DNS试剂混匀，沸水浴中加热5 min后立即用流动冷水冷却，加入2.15 mL蒸馏水（样品液加水7.2 ml）后测定OD520 nm。
以OD520 nm值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
（1）标准曲线：以1为例：取了0.2 ml稀释好的葡萄糖溶液，含糖质量0.02 mg，待测液总体积2.5 ml，葡萄糖液浓度为0.008 mg/mL，对应OD值。
OD值对应的是待测液中葡萄糖的浓度。
（2）待测液总糖含量：Y=kX+b。
Y：反应液样品的浓度。
Y*7.5：7.5ml反应液样品的总糖质量。
基于3,5-二硝基水杨酸比色法建立一种快速测定总糖含量的方法
基于3,5-二硝基水杨酸比色法建立一种快速测定总糖含量的方法任婧;李景富;张佳;刘俊芳;许向阳;姜景彬【摘要】本实验利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法对番茄果实总糖含量进行了测定,并初步建立了微型化DNS比色法测定总糖含量的实验方法和DNS比色法测定番茄总糖含量的最佳条件,对影响测定结果的因素:测定波长、显色剂用量、显色时间进行了单因素试验.结果表明,540 nm波长、0.2 mL DNS、沸水浴4 min为最佳测定条件.该最佳测定条件下,葡萄糖含量在20~200 μg与吸光值呈良好的线性关系.利用得到优化方法对4个番茄品种的总糖含量进行了测定,结果表明测定样品在1.5 h内的吸光值较为稳定,RSD为2.19%~2.88%.本研究得到番茄果实总糖含量测定的优化方法,是一种稳定、高效可行的测定方法,为番茄高糖品种的鉴定和筛选提供了依据.【期刊名称】《黑龙江科学》【年(卷),期】2017(008)010【总页数】4页(P66-69)【关键词】番茄;DNS;酶标仪【作者】任婧;李景富;张佳;刘俊芳;许向阳;姜景彬【作者单位】东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036【正文语种】中文【中图分类】TS255.7番茄(Lycopersicon esculentum Mill)，原产于南美洲的秘鲁和墨西哥，营养丰富，是人们餐桌上不可缺少的蔬菜。
番茄也是全世界种植最为普遍的蔬菜作物之一。
番茄含有VA、VC、叶酸、钾等主要的营养元素，其中富含的番茄红素可以清除人体内的活性氧自由基，延缓衰老，同时具有预防癌症、心血管疾病等功能[1]。
因此，近些年番茄果实的风味品质和营养含量也越来越受到人们的关注[2]。
3，5-二硝基水杨酸比色法测定废烟草中总糖
3，5-二硝基水杨酸比色法测定废烟草中总糖第21卷第6期V0I.21NO.6湖北工业大学JournalofHubeiUniversityofTechnology2006年12月Dec.2006[文章编号]1003—4684(2006)12—0062—043,5一二硝基水杨酸比色法测定废烟草中总糖赵春玲,王秀霞,李琼(1湖北工业大学化学与环境工程学院,湖北武汉430068;2莱阳农学院理学院,山东青岛266109)[摘要]对3,5-二硝基水杨酸比色法测定总糖含量的条件进行了研究,结果表明:最佳比色波长为540nm,显色剂的最佳用量为2.5mL,沸水浴时间为5min.对废烟草样品进行测定,试验表明:该方法在2～240/zg?mL浓度范围内遵循比耳定律,呈线性关系(R一0.9993),变异系数为0.46,平均回收率为98.9,该法的准确性和精密度均较好.与经典的斐林试剂法相比,具有操作简便,快速,测定成本低等特点.尤其适合于低浓度糖样的测定.[关键词]废烟草;总糖;3,5-二硝基水杨酸比色法;斐林试剂法[中图分类号]$572.01[文献标识码]:A烟草的综合利用是烟草行业21世纪的重要研究方向.废烟草是卷烟生产过程中产生的烟梗,碎叶,碎末等的总称.如果将这些废料经济合理地利用起来,对于减少原料消耗以实现烟草行业的清洁生产具有重要的现实意义.其中,将烟草下脚料通过工艺处理,如采用造纸法生产来制造所谓"烟草薄片"并将之回用于卷烟生产过程,可以说是实现废烟料综合利用的有效途径之一[】].造纸法烟草薄片生产是指采用造纸工艺的基本原理,辅以化工工艺技术,把烟梗,烟末,碎烟片以及低次等烟叶经过一定的工艺技术处理,制造出符合卷烟配方需要的一种生产工艺.而在烟草薄片的生产过程中如何控制糖类和其他物质的比例以制成高档香烟,是一个新的课题.含糖量是衡量烟草品质好坏的重要指标之一[2].因此,准确地测定废烟草中的总糖含量对回收废料中的含糖物质并用于卷烟再生产过程具有指导作用.废烟草中的主要成分与正常烟草中所含有效成分基本相似但含量有差异,而目前有关废烟草中的总糖含量测定尚未见报道.笔者采用了3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法对废烟草中的总糖进行了测定.其测定原理是利用还原糖能使DNS还原为棕红色的3一氨基一5一硝基水杨酸,在一定范围内,还原糖. 的量和棕红色物质的颜色深浅的程度成一定比例关系[3].笔者对影响测定的多种因素进行了探讨,以期得到最佳测定条件.1材料与方法1.1仪器,材料与试剂紫外可见分光光度计:755S;废烟草:许昌卷烟厂;1mg?mL葡萄糖标准液:准确称取105℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg溶于少量蒸馏水中,溶解后移入100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至100mL,混匀,4℃冰箱中保存备用.DNS试剂:称取6.5gDNS溶于少量热蒸馏水中,加入2mol?L氢氧化钠溶液325mL,再加入45g丙三醇,摇匀,冷却后加水至总体积1000mL,贮于棕色瓶中备用.斐林试剂:A液,称取69.82g硫酸铜,溶于蒸馏水,并稀释至1000mL;B液,称取346g酒石酸钾钠与100g氢氧化钠,溶于蒸馏水,完全溶解后,用水稀释至1000mL,贮存于橡胶塞玻璃瓶内.氢氧化钠溶液(20),Pb(Ac).溶液(20),NaSO溶液(10).浓盐酸(以上试剂均为分析纯).1.2样品预处理称取100g废烟草于2000mL的烧杯内,加入1000mL的热水,在80℃的水浴加热2h,然后再过滤,得到浸提糖液.取糖液100mL(视含糖量而定)于250mL容量瓶内,加入20mL的20Pb(Ac)2溶液,至沉淀完全为止.并加入20mL109/6NazSO[收稿日期]2006—07—03[作者简介]赵春玲(1971一),女,山东齐河人,湖北工业大学讲师,研究方向:分析化学.第21卷第6期赵春玲等3,5一二硝基水杨酸比色法测定废烟草中总糖63溶液,至不再产生沉淀为止.加水至刻度,摇匀,过滤得上清液.取上清液5OmL于100mL容量瓶内,加入5mL的37浓盐酸.并在68℃水浴加热15min.取出后流水冷却.然后用2ONaOH溶液调节pH值至7.5左右,加水至刻度,摇匀并静置.1.3试验方法1.3.1最佳比色波长的测定分别取1mL蒸馏水及2mL的DNS试剂,在沸水浴里加热5min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,用蒸馏水定容至25.OOmL,摇匀.以蒸馏水作参比溶液,在440~800 nm波长范围内,用分光光度计测定各个波长处的光吸收值,得到DNS显色剂的吸收曲线.取1mL的1mg?mL葡萄糖标准溶液,1mL的蒸馏水与2mL的DNS试剂,其它步骤同上. 以空白溶液作参比,在440～800nm波长范围内测定吸收值,得到葡萄糖的吸收曲线.1.3.2显色剂用量的选择分别取一定量的显色剂,1mL蒸馏水和1mL1mg?mL葡萄糖标液显色测定.以1.0mL蒸馏水代替葡萄糖标准液为空白.1.3.3沸水浴时间的影响将其它条件固定,改变沸水浴时间,测定反应体系的吸光度.1.3.4稳定性试验测定反应体系随时间变化的吸光度.1.3.5标准曲线的制作分别取一定量的1.0mgmL葡萄糖标准液和蒸馏水.再分别加入DNS试剂2.5mL,进行显色测定.1.3.6干扰性试验取制备的供试液1.0mL,加入2.5mLDNS试剂和1.0mL蒸馏水,用蒸馏水定容至25.OOmL,摇匀,以蒸馏水作参比溶液测定吸光度.1.3.7样品测定取制备的试液稀释适当倍数后各5份,每份1.0mL,按1_3.2项操作.所测样品吸光度值从标准曲线中求出还原糖含量,再计算出废烟草中总糖含量.1.3.8斐林试剂法测定总糖].2结果与分析2.1吸收光谱测定显色剂和葡萄糖标准液在440～800nm范围内的吸收光谱,实验表明两者在低于480nm 以下所测的吸光度都十分不稳定,所以对于测定无实际意义.DNS试剂在480nm处达到最大吸收(图1),葡萄糖标准液在500nm处达到最大吸收(图2).理论应该选择500nm作为测定波长,而在500 nm,520nm处的DNS试剂干扰较大(吸光度值为0.374和0.109),并且吸收值较不稳定.因此,选用540nm作为测定波长(此处DNS的吸光度值为0. 055),显色反应的灵敏度虽有所下降,却消除了干扰,提高了测定的准确度和选择性,因而比较合适. ::图1/nm图2葡萄糖标液的吸收曲线2.2显色剂用量图3为显色剂用量与吸光度关系曲线,在a～b范围内,曲线平直,吸光度出现稳定值,因此可在n ～6范围内选择合适的显色剂用量.在此范围内选择DNS试剂的用量为2.5mL.v/mL图3显色剂用量与吸光度关系曲线2.3沸水浴时间的影晌由图4可知,沸水浴时间在3min内,显色液的吸光度随显色时间的延长而增加较快,3min之后, 吸光度随时间变化不大.尤其在5min之后,显色后的吸光度已基本趋于稳定.因此,取DNS试剂与还原糖反应的显色时间为5min.O51O152O沸水浴时间/rain图4吸光度一沸水浴时间曲线2.4稳定性试验由图5可知,吸光度在3O～60min内稳定,随着时间的推移,吸光度缓慢减小.因此要保证显色后的60min内测定吸光度,以减少误差.32l0O0O32lO0O64湖jb工业大学2006年第6期图5吸光度与稳定时间的关系曲线2.5标准曲线实验得到回归方程为Y一0.0066X一0.0246, R:0.9993,在2~240/lg?mL范围内呈良好线性关系.2.6干扰性试验按1.2项中方法除蛋白后烟草浸提液仍带有颜色,为考察颜色对测定的影响,按1.3.6做干扰试验得到烟草浸提液的吸光度值为0.021.说明糖液的颜色的干扰不大,无需进行进一步脱色处理,但需要选不加热的样品糖液和DNS试剂作参比,以消除色素影响.2.7方法的精密度与重复性表1和表2分别表示精密度和重复性实验结果.从表1中可以看取同一均匀样品5份,测得废烟草浸提液中的总糖含量为0.656,变异系数为0.30%,说明该方法具有较好的精密度.从表2可以看出该方法的重复性实验结果较为理想.表1精密度实验结果2.8回收率回收率实验结果见表3.由表3可知,采用DNS比色法测定废烟草中的总糖含量,方法的回收率在97～101%之间,说明该方法准确度较高.表3回收实验结果样品加入量/ug回收量/ug回收率/500.0500.o500.0500.0500.05O2.3487.1498.5494.7490.9100.597.499.798.998.22.9DNS比色法和斐林试剂法的比较两种方法的测定结果比较见表4.表4DNS比色法与斐林试剂法结果比较样品号DNS比色法/斐林试剂法/0.6560.6590.6560.6600.660O.655O.672O.6690.668O.668O.665O.672由表4知,DNS比色法与经典的斐林试剂法所得的总糖含量的差异性不显着.斐林试剂法是经典的测糖方法,以其试剂稳定,需用仪器设备少等优点而被广为采用.然而,由于各种内外因素的影响,即使是熟练的技术人员,在实际操作过程中,须多次平行测定才能满足误差要求,实验过程比较费时,而且对于含量低的样品测定误差较大,需要对样品进行浓缩处理.DNS比色法与之相比,具有快速省时,操作简单,试剂消耗少等优点.3结论与展望笔者研究了DNS比色法测定废烟草水提取物中的总糖含量.通过单因素实验确定:样品量和显色剂用量为1:2.5,煮沸5min后,以不煮沸的样品液与DNS试剂作为测定时的参比液,在540nm处测定吸光度.在最佳实验条件下所得的葡萄糖标准曲线,其回归方程为Y一0.0066X一0.0246,R一0.9993,在2～240#g?mL-1范围内呈良好线性关系.试验证实,此法与经典的斐林试剂法测定结果差异性不显着.并且DNS比色法测定总糖稳定性好, 重现性好,测定结果的精密度,准确度高.这是因为DNS比色法消除了斐林试剂法测定过程中的加热温度,滴定速度等很难控制的参数,操作简单,测定快速准确,测试成本低.笔者已将膜分离等高新技术应用于制造烟草薄片的最新工艺,该工艺中,废烟草水提液中糖类物质O655O34443●●●●●OOOOO96OO55566566666●●●●●OOOOO27O376566566666●●●●●OOOOO6O6845655566666●●●●●OOOOOO23676565566666●●●●●OOOOO847325556566666●●●●●OOOOO782O65566566666●●●●●OOOOO第21卷第6期赵春玲等3,5一二硝基水杨酸比色法测定废烟草中总糖65的检测并回用是重要一环,尤其是在检测低浓度的[2]含糖提取液方面,DNS比色法显示出明显的优势.[参考文献][1]韩卿,张美云,吴养育.造纸法烟草薄片制造工艺的研究[J].西北轻工业学院,2002,1(20):19—22.[3][4]施剑,张怀壁.对测定烟草中水溶性总糖含量使用萃取剂的探讨[J].烟草科技,1993,102(5):21—22.宋占午,王莱,刘艳玲,等.3,5一二硝基水杨酸测定还原糖含量的条件探讨[J].西北师范大学(自然科学版),1997,33(2):52—55.刘福岭,戴行钧.食品物理与化学分析方法[M].北京:轻工业出版社,1978:50—64. OnDeterminingtheTotalSugarinTobaccoResidueswith3,5-DinitrosalicyliCAcidColorimetryZHAOChu-ling,W ANGXiu—xia,LIQong(1SchoolofChemicalandEnvironmentalEngin.,HubeiUniv.ofTechnology,Wuhan430068,China;2TheCollegeofScience,LaiyangAgricultureUniv.Qingdao,266109,China) Abstract:Factorsaffectingthe3,5一Dinitrosa1icy1icacidticle.Itissuggestedthatthebestsuitablewavelengths(DNS)determinationhavebeenstudiedinthisar—fordeterminationiS540nm,andthebestsuitableamountofcolorreagentis2.5mL.Theboilingtimefordevelopingshouldbeabout5min.Whe ntobaccoresiduessamplesaredetermined.Beefs1awisobeyedinaconcentrationrangeof2~240gmLf or540nmwithagoodcorrelationcoefficient(R===0.9993).Theproposedmethodhasagoodprecision withaRSDof0.46%paredwiththeclassicalFehlingmethod,DNScolor imetryissimpler,morerapidandcheaper.Thismethodespeciallyissuitablefordetermining1owercon c'entrationto—ta1sugarofsamples.Inaword,DNScolorimetrywil1bebenefitonreusingoftobaccoresidues .Keywords:tobaccoresidues;totalsugar;3,5一Dinitrosalicylicacidcolorimetry;fehlingmethod[责任编辑:张培炼]。
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第22卷 第6期 云南农业大学学报 Vol 122 No 162007年 11月 Journal of Yunnan Agricultural University Nov .2007 收稿日期:2006-09-14 3通讯作者 作者简介:尹建雄(1979-),男,湖南邵阳人,硕士研究生,主要从事烟草生理生化研究。
E -mail:axi ong168@sina .com3,5-二硝基水杨酸比色法快速测定烟草水溶性总糖、还原糖及淀粉的探讨尹建雄1,2,卢 红23,谢 强2,丁金玲2,李尼杭2(1.石林县天合烟叶复烤有限责任公司,云南石林6522001;2.云南农业大学烟草学院,云南昆明650201)摘要:通过还原糖对3,5-二硝基水杨酸的还原产物的吸收光谱分析,结果表明,该还原产物在500n m 波长下有最大吸收峰,但最佳的工作波长确定为540n m 。
同时找出了显色反应时间及显色剂的最佳用量。
并对烟草中水溶性总糖的提取方法进行了优化,建立了批量连续测定烟样中还原糖、水溶性总糖(进行酸水解)、淀粉的快速方法。
同时对多个烟样进行了测定,与伯川法测定结果比较,其相对误差在5%以内。
关键词:烟草;比色法;3,5-二硝基水杨酸中图分类号:TS 411 文献标识码:A 文章编号:1004-390X (2007)06-0829-05A Study on Rapi d Color imetri c Deter m i n ati on of WaterSoluble Tot al Sugar ,Reduci n g Sugar and St arch i nTobacco with 3,52di n itros ali cyli c Aci dYIN J ia n 2xiong 1,LU H ong ,XI E Q ia ng 2,D IN G J in 2ling 2,L I N i 2ha ng2(1.TI A NGHE Tobacco Threshing L I D ,C O.St one Forest 652200,China;2.Faculty of T obacco Science,Yunnan Agricultural University,Kun m ing 650201,China )Abstract:The abs or p ti on s pectru m of 3,52dinitr osalicylic acid reducing p r oduct with reducing sugar has been studied .The result shows a maxi m u m abs or p ti on at 500nm ,but the best work wavelength was deter m ined by 540nm.The best ti m e of col or reacti on and best suitable a mount of the col or reagent was given .The extracti on methods of water s oluble t otal sugar was op ti m ized,and a rap id continuous batch deter m inati on of reducing sugar,water s oluble t otal sugar and starch was established .W hen s ome t obacco sa mp les were deter m ined .The relative err ors of the results obtained by this method related t o those obtained by the Bertrand πs method were under of 5%.Key words:t obacco;col ori m etry;3,52dinitr osalicylic acid 烟草中的水溶性总糖、还原糖、淀粉对烟叶品质影响巨大,是烟草化学分析中的重要项目,水溶性总糖和淀粉通常都是通过水解(酶解或酸水解法)成单糖按还原糖的测定方法进行测定。
还原糖经典的测定方法是铜还原-滴定法(如芒森・沃克法[1]、伯川法[2]),该方法具有准确度高、重现性好等优点,但流程长、步骤多、操作繁、试剂及水电消耗大,只能用于小数量样品的常量分析。
虽然有人对水溶性总糖的提取过程进行了改进、优化[3,4],但效果不是很明显。
最新的烟草行业标准[5]采用连续流动分析仪测定水溶性糖,但所用仪器比较昂贵。
一般实验室所用的比较快捷的方法当属比色分析法,如斐林试剂比色法[6]、磷钼酸比色法[7]、邻甲苯胺比色法[8]、硫酸-蒽酮法[9]等。
本文以3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitr osali2 cylic acid,DNS)为显色剂,对烟草中水溶性总糖的提取方法进行了优化,建立了批量连续测定烟样中水溶性总糖、还原糖和淀粉的比色测定方法。
该方法方便快捷,与伯川法(Bertrand’s method)相比,相对误差5%以内。
1 材料与方法1.1 主要仪器与试剂1.1.1 仪器 731型紫外-可见分光光度计1.1.2 试剂015mg/mL葡萄糖标准液:将分析纯葡萄糖在80℃下烘干至恒重,精确称取500mg,加少量蒸馏水溶解,移入100mL容量瓶中并定容、摇匀,即为5mg/mL葡萄糖标准液。
精确吸取上述标准液10 mL移入100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。
3,5-二硝基水杨酸显色剂:采用许尧兴等的方法[10]并作如下优化:取酒石酸钾钠182g,加热溶于800mL蒸馏水中。
于热溶液中依次加入氢氧化钠21g,3,5-二硝基水杨酸613g,苯酚5g,无水亚硫酸钠5g,搅拌至溶解,冷却后移入于1000 mL容量瓶并用蒸馏水定容至刻度,混匀,贮于棕色试剂瓶中,于暗处放置3d后使用。
1.2 操作步骤1.2.1 标准曲线的绘制分别量取015mg/mL葡萄糖标准溶液0,013, 016,019,112,115,118和210mL,置于具塞25 mL试管中,吸取蒸馏水分别补充至210mL,再各加210mL DNS试剂。
盖上塞子,置于沸水浴中加热6m in,取出,用流动冷水冷却后用蒸馏水定容到刻度25mL,充分摇匀,静置10m in后,在紫外可见分光光度计上于540n m波长下,以空白(即量取标准溶液0mL)为参比液,测其吸光度。
经回归统计求出其回归方程。
1.2.2 糖分的提取(1)还原糖的提取。
先天晚上称取磨碎后的烟样(过80目筛)100mg于100mL大试管中,加入10mL80%乙醇,浸泡过夜。
次日加入热蒸馏水10mL,并在80℃水浴中加热015h,过滤于100mL 容量瓶中,并用热蒸馏水反复冲洗滤渣,定容,即为还原糖待测液。
(2)水溶性总糖的提取。
吸取上述还原糖待测液25mL于250mL三角瓶中,并加入1∶3(浓盐酸与蒸馏水体积比)的盐酸溶液7mL,置于沸水浴中酸化015h,加1～2滴甲基红指示剂,用10%Na OH调至中性或偏碱性(pH=710～715),转移到100mL容量瓶并定容。
即为水溶性总糖待测液。
(3)淀粉待测液的制备。
将步骤(1)中滤渣用50mL蒸馏水洗入250mL三角瓶中,加入5∶4(浓盐酸与蒸馏水体积比)的盐酸溶液7mL,置于100～105℃恒温烘箱中酸化215h,加1～2滴甲基红指示剂,用10%Na OH调至中性或偏碱性(pH= 710～715),转移到100mL容量瓶并定容。
1.2.3 糖分的测定分别取还原糖待测液2100mL,水溶性总糖待测液2100mL,淀粉待测液4100mL,加入3,5-二硝基水杨酸显色剂2100mL,按标准液的处理方法测定吸光度,然后从标准曲线上查出对应的浓度并计算总糖含量。
糖%(以葡萄糖计)=[葡萄糖(μg/mL)×100]/ [烟样重(mg)×1000×(1-含水率)]×100%2 结果与讨论2.1 反应产物吸收光谱特性已报道的还原产物的最大吸收波长有: 474n m[11],480n m[12],483n m[13],484n m[14], 490n m[15,16],492n m[17],495n m[18,19],500n m[20,21], 503n m[22]。
而采用的工作波长也有:520n m[23～25], 530n m[26],540n m[27～32],550n m[33,34],560n m[35], 610n m[36]。
最大吸收波长不一,而采用作为工作波长大多也没有说明其原因。
所以本文对反应产物吸收光谱特性进行了探索,以确定最佳工作波长。
表1 不同波长下吸光度值及其比值Tab.1 The abs orbance under different wavelength波长/nmwavelength460470480490500510520530540550560570580590600610 A0 1.514 1.517 1.320.7680.3770.1550.0780.0430.0240.0120.0110.0090.0070.0060.0050.005A 1.545 1.545 1.56 1.472 1.29 1.0770.9330.8090.6970.5660.5010.4350.3680.3180.2620.218 A/A0 1.02 1.02 1.18 1.92 3.42 6.9511.9618.8129.0447.1745.5548.3352.575352.443.6 038云南农业大学学报 第22卷 取015mg/mL 葡萄糖标准液1100mL,用蒸馏水补充至2100mL,加显色剂2100mL,按步骤1.2.1进行显色反应。
直接以蒸馏水为参比液,用731型紫外-可见分光光度计在400～700n m 波长范围内每10nm 波长间隔测定显色反应液吸光度值(A )及原参比液(即空白)(A 0)吸光度值,它们之间的差值可认为是还原反应产物的吸光度。
光谱图(见图1)显示,还原产物在500n m 波长下有最大吸收。
这与以前报道的最大吸收峰不同,这可能是由于紫外可见分光光度计的型号不同及不同的溶液干扰体系所致。
综合以前的报道,可以推定最大吸收波长应在490～510nm 之间。
在500nm 波长下测定有最大吸光度值,即可以获得比较高的灵敏性。
但此波长下原参比液也有较大的吸光度值,而且所测得的数据稳定性差。