传统乳制品中产_氨基丁酸乳酸菌的培养基优化_孟和毕力格

（ "#678 59: ;< =9>?8 @>;A7B1C;D;38 9CE @>;7C3>C77?>C3， F>C>GA?8 ;< HEIB9A>;C， )I11;A $"$$"% ， J1>C9； &#=7K9?AL7CA ;< M;;E NB>7CB7 9CE HC3>C77?>C3， OCC7? F;C3;D>9 P3?>BIDAI?7 QC>R7?G>A8， )I11;A $"$$"% ， J1>C9） :49&1*.&： !"# #$"%&’ !""" ! " #$%& &$’& ()*+,-%$*. */ ! ! 01$.* 2,%3)$- 0-$+ #04 4-)55.5+ *265-%$.’ *. 4%)0$.4 $4*70%5+ /)*1 8*.’*7$0. /5)15.%5+ +0$)3 ()*+,-%4 ，0.+ $%4 /5)15.%0%$*. -,7%,)5 15+$,1 #04 *(%$1$95+ 23 *)%&*’*.07 5:(5)$15.%4# ;54,7%4 4&*#5+ %&0% *(%$1$95+ 15+$,1 4&*,7+ 25 -*.%0$.5+ & < %*%07 -0)2*.， 01*.’ #&$-& %&5 )0%$* */ ’7,-*45 0.+ 0740-5 ’,1 #04 +," ， 0.+ %&5 )0%$* */ 4*3 (5(%*.5 0.+ 3504% 5:%)0-% #04 ",+ $. %&5 %*%07 .$%)*’5.， 0.+ %&5 %*%07 -0)2*.! .$%)*’5. )0%$* #04 ",&# 8*)5*=5) %&5 -*.%5.% */ (3)$+*:07 (&*4(&0%5 #04 $#"- < $. %&$4 15+$,1# >&5 3$57+ */ ?@A@ #04 "$#2% ’ B C 0/%5) -,7%$=0%5+ $. *(%$1$95+ 15+$,1 /*) /0 & 0% +& D 23 %&5 4%)0$.# ;28 5+139： 70-%$- 0-$+ 20-%5)$,1； -,7%,)5 15+$,1 *(%$1$90%$*. !! 01$.* 2,%3)$- 0-$+； SN&$"#+’ ’ ’ ’ 文献标识码： P’ ’ ’ ’ 文 章 编 号： "$$&!$+$0 （ &$$/ ） $2!$"&T!$T 中图分类号： ’ ’ 乳酸菌广泛存在于各种传统发酵食品中， 通过 乳酸发酵赋予食品特殊风味的同时， 对其营养和功 能方面也产生重要影响。近几年来， 我们对我国 各 地少数民族传统发酵乳制品中乳酸菌资源的分离保 藏研究中发现， 有许多菌种具有较好的潜在应用价 值。其中， 某些乳酸菌产生的一种抑制性神经递 质—!! 氨基丁酸， 属新兴的食品功能因子。有研究
传统乳制品中产 ! ! 氨基丁酸乳酸菌的 培养基优化
!， " !， " !， " !， " !， " " " 孟和毕力格 ， 冀林立 ， 罗# 斌 ， 张彦斌 ， 李# 莉 ， 宿淑辉 ， 王# 婧 （ "# 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室， 内蒙古呼和浩特 $"$$"% ； &# 内蒙古农业大学食品科学与工程学院， 内蒙古呼和浩特 $"$$"% ）
［ #@ ］ @"> 8 5B>;6 7 ’， D" EBEFEB< ， #>#G 灭菌 #;=2C 备用 ； HI) 液体培养基 % 胰蛋白胨（ 02134 ）#56 7 ’， 酵母浸
> 所 示。 由 结 果 可 知： 不同的碳源对于发酵液中 )*+* 含量影响极为显著 （ D Y 5B5# ） ， 单糖中以葡萄 糖作为碳源时 !B ("#$)# !"## $ # 生长量 及 发 酵 液 中 )*+* 含量均最高， )*+* 含量可达 AB#> Z 5B5@6 7 ’； 其 次为乳糖， 其发酵液中 )*+* 含量达 EB#K Z 5B5K6 7 ’。 多糖中以糊精作为碳源时菌体生长量也相对较好， 其发酵 液 中 )*+* 量 也 能 达 到 ;B#> Z 5B5E6 7 ’。因 此， 考虑菌体生长量和 )*+* 的生成量关系的同时， 选择葡萄糖和糊精作为复合碳源。
>B#@ Z 5B5E MO 5B>@ Z 5B5E 5B## Z 5B5;
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!"#$ 实验方法
#B>B#% 菌株活化% 将真空冷冻干燥保藏的菌种接种 ,5G 培养 #E F >@V ， 于 -./ 液体培养基中， 待生长良 好后， 重复上一步骤 #F> 次， 使菌株活力恢复至正常 生长状态。 #B>B>% 发酵液的制备 % 取上述活化好的培养液 （活 K ， 菌计数 为 # T #5 31W 7 =’ ） 按 @L 接 种 量 接 种 于 含 ,56 7 ’ 谷氨酸钠的 HI) 液体培养基中， ,>G 静置培 养 KEV 。 #B>B,% 发酵液中 !$ 氨基丁酸含量的测定 #B>B,B# % 样 品 预 处 理 % 将 #B>B> 中 的 培 养 液 离 心 （ KEE5 T 6 ， #;=2C ， @G ） ， 将上清液用 5B#=4N 7 ’ 的 "(N 稀释适当倍数， 经 5B@; "= 滤膜过滤后待用。 #B>B,B>% )*+* 标 准 溶 液 的 配 制 % 配 制 ;B55==4N 7 ’ 5B>5 、 5B,5 、 5B@5 、 的 )*+* 溶 液， 并 稀 释 至 5B#5 、 5B;5==4N 7 ’。 #B>B,B,% 衍生化% 邻苯二甲醛 （ 8&* ） 为衍生试剂， 柱 前衍生。 #B>B,B@% 色谱条件% 色谱柱： R8.+*S・M3N2DX S0+$ (#< 柱 （ @BE== T >;5==， ; "=， *62NOCP ） ； 流 动 相： 流动 相 * 为乙酸钠 #5B>;@6 、 三乙胺 5B;=’ 和乙酸 5BA=’， 调节 D" ;B< ， 定容至 #555=’； 流动相 + 为乙腈； 流动 相 ( 为蒸馏水。梯度洗脱程序如表 # ， 柱温 >AG ； 荧 ［ #; F #A ］ 。 光检测器， 检测波长为 >;@C=； 进样量为 5B; "’
［" ］ 证明， !! 氨基丁酸具有调节血压 、 改善睡眠、 增强 ［& ］ ［+ ］ 记忆 、 对癫痫的预防和治疗作用 以及调节生殖功
成的天然氨基酸， 分布非常广泛， 在动物、 植物和微 生物中均有存在 。 UP@P 是谷氨酸在谷氨酸脱羧 （ UDIA9L9A7 E7B9?:;X8D9G7 ， UP=） 酶 作用下， 经 9! 脱羧 反 应 转 化 而 来。 近 年 来， 已 发 现 !"#$%#%##&’ ("#$)# ［0 ］ ［2 ］ ’&*"+# ("#$)# 、!"#$%*"#)((&’ +","#"’-) 、!"#$%*"#)((&’ ［% ］ ［/ ］ *,-.)’ 、 !"#$%*"#)((&’ +("/$",&0 等 乳 酸 菌 具 有 生 成 ［ "$ Y"& ］ UP@P 的能力， 并且已有研究者 通过筛选获得生 成 UP@P 的乳酸菌并开发了降血压功能的发酵乳， 同时通过动物实验证实了其降血压作用的有效性。 我们从已鉴定保藏的部分乳酸菌菌株中筛选到一株 生成 UP@P 的 !"#$%#%##&’ ("#$)# ()"" ! " ， 以之为出 发菌株， 在发酵条件优化的基础上， 通过单因素实验 及正交实验， 进一步对其培养基组成进行了优化， 以 期为使用这种食品安全级微生物进行 UP@P 的生产 以及富 含 UP@P 的 功 能 性 食 品 的 生 产 提 供 参 考 依据。
表 >% 不同碳源对发酵液中 )*+* 含量、 菌体量及 D" 的影响 碳源 葡萄糖 乳糖 果糖 糊精 蔗糖 可溶性淀粉 丁二酸钠 80E55 )*+*（ 6 7 ’） *J ,B;<@ Z 5B5#> AB#> Z 5B5@ EB#K Z 5B5K +[ >B#<@ Z 5B5>, ;B<A Z 5B5@ (3 ;B#> Z 5B5E
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