A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体
单克隆抗体项目商业投资计划书(范文参考)
单克隆抗体项目商业投资计划书目录一、行业上下游产品分析 (2)二、行业影响因素 (5)三、单克隆抗体行业面临的机遇与挑战 (8)四、智能制造 (12)五、创新驱动 (14)六、法人治理结构 (17)七、数字化转型升级 (19)八、股权激励 (22)声明：本文内容信息来源于公开渠道，所涉及项目数据根据行业模型获得，非真实项目指标。
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一、行业上下游产品分析（一）上游产品分析1、原材料单克隆抗体的生产涉及多种关键原材料，其中最重要的是细胞培养基、抗体制备用的抗原、以及生物反应器等。
细胞培养基提供了单克隆抗体生产所需的营养和生长因子。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640等。
这些培养基中包含氨基酸、维生素、矿物质、葡萄糖等成分，为细胞生长和抗体生产提供支持。
抗原的选择直接影响抗体的特异性和效能，因此在选择时需要充分考虑目标抗原的性质和需求。
生物反应器则用于大规模培养细胞，以提高抗体产量。
2、设备与技术单克隆抗体的生产还依赖于先进的设备和技术。
这些包括高效的细胞培养系统、生物反应器、分离纯化设备和检测分析仪器。
例如，现代化的生物反应器可以进行控制的环境调节，以优化细胞生长和抗体生产过程。
分离纯化技术如蛋白A亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤等，用于从复杂的细胞培养液中提取和纯化单克隆抗体。
3、制剂与包装上游产品的最后一环是抗体制剂的制备与包装。
制剂过程包括抗体的浓缩、配方优化、稳定剂添加等，以确保最终产品的稳定性和有效性。
包装过程则涉及将抗体产品以合适的形式封装，以便于存储和运输。
良好的制剂和包装可以显著提升产品的市场竞争力。
（二）下游产品分析1、药品生产单克隆抗体作为一种生物药物，其主要下游产品是药品。
经过临床试验验证后，单克隆抗体可以用于治疗各种疾病，如癌症、自身免疫性疾病、感染性疾病等。
重组单克隆抗体相关物质和相关杂质的研究与评价_韦薇
906［作者简介］韦薇，女，审评员，主要从事药品审评工作。
联系电话：（010）68585566，E-mail ：weiw@cde．org．cn 。
重组单克隆抗体相关物质和相关杂质的研究与评价韦薇，罗建辉，尹红章，项金忠（国家食品药品监督管理总局药品审评中心，北京100038）［摘要］重组生物技术制备的单克隆抗体（以下简称重组单抗）是生物制品中一类重要的药物类别。
近年来，由于其精确的靶向杀伤和中和等生物学效应，重组单抗在肿瘤、自身免疫性疾病等方面受到了广泛的研究和应用，并且在神经学、眼科学等其他疾病领域的研究也开始逐步发展起来。
目前，国内生产的重组单抗主要采用真核细胞培养表达的方法，在工艺研发和质量研究方面，药品企业对主要有效成分的结构研究和质量控制关注较多；但是对产品组成中的杂质和相关物质研究较少或关注度不够。
考虑到这些杂质或相关物质是重组单抗产品中的重要组成部分，将会影响到产品的质量、临床应用的安全性和有效性，应在研究中予以重视。
本文对重组单克隆抗体产品中相关杂质和相关物质的研究和评价进行了探讨。
［关键词］重组单抗；产品相关物质；产品相关杂质；工艺相关杂质［中图分类号］Ｒ95［文献标志码］C［文章编号］1003－3734（2014）08－0906－06Comments on the development and assessment of the drug impuritiesand substances related to recombinant monoclonal antibodiesWEI Wei ，LUO Jian-hui ，YIN Hong-zhang ，XIANG Jin-zhong（Center for Drug Evaluation ，China Food and Drug Administration ，Beijing 100038，China ）［Abstract ］Ｒecombinant monoclonal antibodies have been established as a major product class of biotech-nology-derived medicinal products and widely applied in the clinical fields of oncology ，autoimmune disease as well as neurology ，ophthalmology and so on ，due to their precisely targeted biological activates of cytotoxic and neutrali-zing effect in recent years．Nowadays ，pharmaceutical enterprises of China usually pay more attention towards the structure and quality control of the main substance produced from eukaryotic cells ，rather than the related impurities and substances．However ，these impurities and substances are parts of the product components ，and may impact on product quality 、clinical safety and effectiveness．Therefore ，they should be recognized as equally important as the main substance and be investigated．This article will present comments on the research and evaluation of the related impurities and substances in recombinant monoclonal antibody products．［Key words ］recombinant monoclonal antibody ；product-related substances ；product-related impurities ；process-related impurities重组单抗在表达、制备或是储存过程中，由于各种微环境的影响，如机械剪切、氧化作用、酶的作用等物理、化学或生物因素，导致抗体的降解或发生翻译后修饰，从而获得异质性（heterogeneity ），产生变异体（variants ），如片段化、氧化、脱氨基等。
三种方法纯化相思子毒素单抗的比较
随着人类对生命 科学研究的深入 ， 克隆抗体 ２— 核酸蛋 白检测仪 ， 单 １１ 上海青浦沪西仪器厂； Ｍ１ Ｌ ７
现 已广泛应 用 于生 命 科 学 、 疫 学 、 物 化 学 、 子 型记 录仪 ， 青示 波 器 厂 ； Ｔｒｐ Ｍ ｒｔｉ 免 生 分 永 Ｈｉ ａ Ｔ １ｍＬｐｏｅ ｎ
（ 吉林大学畜牧兽医学院 ， 吉林长春 １ ０ ６ ） ３ ０ ２
采 用硫酸铵沉淀法 、 酸一 酸铵 法和硫 酸铵一 辛 硫
１ １ 材料 ．
相思子毒索单抗腹水 由本实验室制
蛋 白 Ａ 亲和 层 析 法 三 种 方 法分 离 纯化 相 思 子 １１１ 试剂 ＿．
毒素单抗 ， 并采 用十 二 烷基 硫 酸 钠 聚 丙烯 酰 备， 蛋白检测试剂盒（ ｃ ｒｔｎＡ ｓ ｉ 自 Ｂ Ａ Ｐｏｅ ｓ ｙ ｔ ｉ ａＫ ）
维普资讯
罗胜军等 ： 三种方法纯化相思 子毒 索单抗 的比较
７ ３
淀用适 量 Ｐ Ｓ溶解 后 吸出并 装 入 透 析袋 内 ， ４＿ Ｂ 于 Ｃ 条件 下 ， １ ０倍 体积 的 Ｐ Ｓ透 析 ２ ， 对 ０ Ｂ ４ ｈ 中途 换 液
３次～４次 。取 出透 析袋 ， 出蛋 白溶 液 ， ４℃条 吸 在 产物， 分装后 于 一２ ０℃保存 ［ １ ］
酸铵 沉 淀 法较 差 ； 同 方 法 纯 化 后 的 单 抗 活 统有限公司； －４５ 不 ＷＤ ９０Ｂ型水平摇床 ， 沃德生物医学 性 未见 降低 仪器公司； 量 可调 移液 器 ， 微 芬兰 Ｅ Ｐ ＭＤ Ｆ公 ＰＥ Ｏ
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关键词 ： 思子毒 素 ； 相 单克 隆抗体 ； 纯化
司；Ｈ ３０ Ｔ 一０ 梯度混合器， 上海青浦沪西仪器厂； Ｄ Ｈ
－ 一
单克隆抗体制备的基本原理
单克隆抗体制备的基本原理It was last revised on January 2, 2021单克隆抗体制备的基本原理一、单克隆抗体的概念抗体（antibody）是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。
常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。
一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。
即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。
因而，常规血清抗体又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。
由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。
因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。
随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以实现。
1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合，形成B 细胞杂交瘤。
这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。
通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），简称单抗。
与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。
单抗技术的问世，不仅带来了免疫学领域里的一次**，而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用，促进了众多学科的发展。
德国科学家柯勒（Georges Ko1er）和英国科学家米尔斯坦（Cesar Milstein）两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。
单克隆抗体纯化方法
单克隆抗体纯化方法
以下是几种常见的单克隆抗体纯化方法：
1. 亲和层析：利用抗体与特定配体的亲和力进行纯化，例如使用Protein A 或 Protein G 亲和层析来捕获抗体。
2. 凝胶过滤层析：根据抗体分子大小进行分离，可以去除较小的杂质。
3. 离子交换层析：基于抗体的电荷性质进行分离，适用于去除带电荷的杂质。
4. 疏水相互作用层析：利用抗体的疏水性进行纯化，可有效去除亲水性杂质。
5. 亲和洗脱层析：通过改变洗脱条件，如离子强度或 pH 值，从亲和层析柱上洗脱目标抗体。
6. 盐析和透析：通过在高盐浓度下沉淀杂质，然后通过透析去除盐分，实现抗体的纯化。
7. 超速离心：利用离心力将抗体与其他杂质分离开来，适用于大规模制备。
这些方法可以单独或联合使用，以获得高纯度的单克隆抗体。
选择合适的纯化方法取决于抗体的特性和所需的纯度水平。
需要注意的是，在进行单克隆抗体纯化时，应严格遵循实验操作规程，并在适当的条件下进行质量控制和检测，以确保获得高质量的抗体产品。
牛血清白蛋白单克隆抗体的筛选与双抗体夹心ELISA检测方法的建立
中国图书分类号R392-33文献标识码A文章编号1004-5503（2008）11-0999-03【诊断制品】牛血清白蛋白单克隆抗体的筛选与双抗体夹心ELISA检测方法的建立张加利1蔡芳2高强2宋莉莉2于丹2桑建利1【摘要】目的筛选高效抗牛血清白蛋白（BSA）单克隆抗体细胞株，并建立BSA抗原检测的双抗体夹心ELISA法。
方法分别采用辛酸-硫酸铵法和葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化单抗，并进行抗体类型、腹水效价、特异性和相对亲和力测定；应用纯化的单抗建立BSA双抗体夹心ELISA检测法，并进行初步应用。
结果筛选出4株可稳定分泌抗BSA单抗的杂交瘤细胞株，抗体类型为IgG，抗体滴度均可达10-6，特异性良好，相对亲和力较高。
建立的双抗体夹心ELISA法线性范围为1.25～20ng／ml，R2>0.98，灵敏度为1.25ng／ml。
结论已筛选出高效抗BSA的单抗，并建立了BSA双抗体夹心ELISA检测方法。
【关键词】牛血清白蛋白；单克隆抗体；双抗体夹心ELISA法Screening of Monoclonal Antibody against Bovine Serum Albumin and Devel－opment of Double Antibody Sandwich ELISA for BSAZHANG Jia-li△,CAI Fang,GAO Qiang,et al（△College of Life Science,Beijing Normal University,Beijing 100875,China）【Abstract】Objective To screen the monoclonal antibody（McAb）against bovine serum albumin（BSA）and develop a dou－ble antibody sandwich ELISA for BSA.Methods The McAb was purified by caprylic acid-ammonium sulphate precipitation and staphylococcal protein A affinity chromatography and analyzed for type,titer in ascites,specificity and relative affinity.A double anti－body sandwich ELISA was developed with the purified McAb and applied primarily.Results Four hybridoma cell strains stably se－creting McAb against BSA was screened.The secreted McAb with a titer of10-6was IgG which showed good specificity and high rel－ative affinity.The sensitivity of developed double antibody ELISA was1.25ng／ml,and the linear range and R2value of detection result by the method were1.25-20ng／ml and more than0.98respectively.Conclusion The McAb against BSA was successfully screened,and a double antibody sandwich ELISA for BSA was developed.【Key words】Bovine serum albumin;Monoclonal antibody;Double antibody sandwich ELISA《中国药典》三部（2005版）规定制品中牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）残留量应不高于50ng／剂。
纳微科技NMabTM Pro Protein A 亲和层析介质使用说明书
NMab TM Pro Protein A亲和层析介质产品使用说明书文件编号：NM-W-DF-0603版本号：A2NMab TMPro 层析介质使用说明产品简介Protein A 亲和层析是利用Protein A 配基与目标抗体具有专一结合力作用从而达到分离纯化抗体的目的。
Protein A 亲和层析大大简化抗体下游分离纯化工艺，成为抗体分离纯化的标准。
目前市场上的Protein A 亲和层析介质主要分为以多糖（琼脂糖、葡聚糖、纤维素）为基质和以合成高分子（聚丙烯酸酯，丙烯酰胺）为基质两大类。
琼脂糖基质在溶胀状态下具有网状结构，比表面积大，因而亲和载量比较高，但机械强度不高、耐压低。
随着上游发酵技术的进步，抗体表达量越来越高，下游亲和捕获成为抗体生产瓶颈，因此对下游Protein A 亲和层析介质的载量要求越来越高。
为了因应这一需求，纳微科技以琼脂糖为基球，利用特有的微球改性技术以增强其机械强度，并结合自主产权的Protein A图1. NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质电镜图配基技术，在NMab TM Protein A 的基础上成功开发出比其具有更高载量的NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质。
除了高载量外，NMab TM Pro 延续了其优良的结合特异性、耐碱性以及压力-流速特性，是抗体客户降低单抗纯化成本的最佳选择。
下表1是NMab TM Pro Protein A 层析介质的基本性质参数。
相较市场同类产品有如下独特优势：(a) 载量高：一般单抗项目平均动态载量约60-80 mg/mL ；(b) 耐碱性强：0.5 M NaOH 浸泡下24小时载量只下降20%；(c) 配基脱落低：小于20 ppm ；(d) 宿主蛋白（HCP ）残留低：一般在1000 ppm 以内，表现不亚于Prism A ； (e) 回收率高：大于90%；(f) 纯度高：亲和洗脱液纯度99 %以上；(g) 压力流速好：明显强于传统4FF/6FF 系列介质；表1. 纳微科技NMab TM Pro Protein A 亲和层析介质技术参数压力流速曲线测试不同流速下压力变化如下，此压力-流速特性可满足工业生产上对填料流速要求，优于传统4FF/6FF 软胶系列填料。
单克隆抗体
单克隆抗体技术单克隆抗体的克隆化方法经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。
克隆的时间一般说来越早越好。
因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。
但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。
克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所以需要再次或多次克隆化培养。
克隆化次数的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。
一般说，免疫性强的抗原克隆次数可少一些，但至少要3～5次克隆才能稳定。
克隆化的方法很多，包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离法等。
（一）有限稀释法1．材料（1）微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞（即饲养细胞）每孔2万～4万。
（2）HT培养基2．操作方法（1）取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。
并取样进行台盼兰染色，计数。
（2）用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。
（3）用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘，每孔0.05ml，细胞含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔和0.5个/孔。
（4）5％CO2饱和湿度，37℃培养。
（5）每天用倒置显微镜观察克隆生长情况，选择只有一个集落生长的孔，弃掉两个以上和没有细胞生长的孔。
（6）克隆大量繁殖后，布满孔底的1/3～1/2时，测培养液抗体。
（7）抗体阳性孔细胞，移到有饲养层的组织培养瓶中，并传2～4代就可以脱离饲养细胞，建成克隆株。
（二）软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5％的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。
2．将117ml完全DMEM液和3ml 10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。
3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5％琼脂糖的完全DMEM液，并加75×108 脾细胞。
临床医学检验临床免疫技术-概论(精选试题)
临床医学检验临床免疫技术-概论1、机体免疫自稳功能低下，可导致（）。
A.免疫缺陷病B.免疫增殖病C.自身免疫病D.恶性肿瘤E.超敏反应2、可非特异直接杀伤靶细胞的是（）。
A.NK细胞B.Th细胞C.Ts细胞D.Tc细胞E.TCRαβ＋细胞3、组织可溶性抗原的粗提？4、可溶性抗原的提取和纯化？5、纯化抗原的鉴定？6、动物采血法有哪几种？7、免疫动物的选择有哪些？8、抗血清的鉴定方法？9、抗血清的鉴定方法？10、抗血清的保存方法？11、抗血清的纯化方法？12、单克隆抗体的优点有哪些？13、单克隆抗体的优点有哪些？14、单克隆抗体的局限性？15、单克隆抗体目前效果较好的纯化方法（）。
A.亲和层析法B.凝胶过滤法C.离子交换层析法D.超速离心法E.盐析法16、放射性标志物的鉴定？17、下列何种物质不常用放射免疫技术分析（）。
A.激素B.微量蛋白质C.肿瘤标志物D.药物E.抗核抗体18、关于RIA，下列说法正确的是（）。
A.标记抗原限量B.标记抗体限量C.抗体限量D.标准抗原限量E.待测抗原限量19、关于单位点IRMA说法正确的是（）。
A.首先加入固相抗原与待测标本B.然后加入标记抗体C.测定固相免疫复合物的放射量D.测定上清液的放射量E.待测抗原需含二个以上表位20、关于IRMA与RIA，说法错误的是（）。
A.IRMA较RIA特异性高B.IRMA较RIA灵敏度高C.IRMA较RIA标准曲线工作范围宽D.IRMA所用抗体较少E.RIA所用抗体较少21、荧光抗体技术特点？22、酶免疫技术的特点？。
亲和层析原理
亲和层析原理首先，亲和层析原理的基本原理是什么呢？亲和层析原理是利用生物大分子与其特异性亲和配体之间的非共价相互作用来实现目标生物大分子的选择性吸附和分离。
亲和配体通常是一种具有高亲和性的小分子化合物，它可以与目标生物大分子的特定结构域或功能基团结合，形成稳定的复合物。
在亲和层析过程中，混合物经过填料床层后，非特异性成分通过洗脱缓冲液被洗脱，而目标生物大分子则与亲和配体形成的复合物保持在填料上，最终通过改变条件将目标生物大分子从亲和填料上洗脱出来，实现其分离和纯化。
其次，亲和层析原理的应用范围非常广泛。
在生物技术领域，亲和层析技术被广泛应用于蛋白质、核酸、多肽等生物大分子的分离和纯化。
例如，利用亲和层析技术可以从复杂的细胞提取物中高效地纯化目标蛋白质，为后续的功能研究和结构分析提供高纯度的样品。
在制药工业中，亲和层析技术也被用于生物药物的生产和纯化过程中，例如单克隆抗体、重组蛋白等生物药物的制备工艺中都离不开亲和层析技术的应用。
此外，亲和层析原理还具有许多优点。
首先，亲和层析技术具有高选择性，可以实现对目标生物大分子的高效分离和纯化，避免了传统分离方法中多次反复操作的繁琐和耗时。
其次，亲和层析技术操作简单，不需要复杂的设备和操作条件，适用于实验室规模的小型分离和纯化工作。
最后，亲和层析技术还可以实现对生物大分子的非变性分离，保持目标生物大分子的天然构象和生物活性，有利于后续的功能研究和应用。
总的来说，亲和层析原理是一种基于生物大分子与特定亲和配体之间特异性相互作用的分离和纯化技术，具有广泛的应用前景和许多优点。
随着生物技术和制药工业的不断发展，亲和层析技术将在更多领域发挥重要作用，为生物大分子的研究和应用提供有力支持。
希望本文对您了解亲和层析原理有所帮助，谢谢阅读！。
抗体纯化方法汇总与比较
抗体纯化方法汇总与比较
1. 概论
制备出效价高，特异性强，稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础，抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败，不同的免疫学实验方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）对抗体的效价，浓度和纯度有不同的要求。
我们知道，一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体，血清蛋白以及其他各种杂蛋白等，在制备特异性抗体过程中当抗体的效价达到实验预期之后，我们所制备的抗体的纯度关键取决于所选择的纯化方法。
下面就一一介绍常用抗体纯化方法及其相关原理。
免疫球蛋白主要有5种，轻链和重链的组成也有较大差异。
其结构如下图所示：
各类免疫球蛋白有不同的亚型，下图展示人免疫球蛋白各亚型的理化性质：
2. 沉淀法
硫酸铵/辛酸沉淀法是纯化抗体最传统的方法之一，被广泛用于血清和腹水抗体的浓缩和粗纯，此方法可大规模粗纯抗体，但纯化后纯度不高，还需配合其它方法继续纯化。
通常是将饱和硫酸加入血清或腹水中，将抗体沉淀下来，然后在溶解沉淀继续下一步的纯化。
辛酸沉淀抗体通常要先将腹水或血清的pH调至4.8，然后缓慢的滴加辛酸，是蛋白沉淀，抗体在上清中，上清继续下一步的纯化。
3. 离子交换层析
离子交换层析也常用于抗体的纯化，通量大，工业上用离子交换层析成本低，主要用于除去非抗体蛋白，及用亲和层析纯化时混入的Protein A/G等亲和填料脱离的配基，内毒素的去除等。
离子交换纯化时，根据抗体的pI选择合适的离子交换类型，在pI未知时可以分别用阴阳离子交换填料去试验。
单克隆抗体纯化工艺中Protein A层析介质的选择
单克隆抗体纯化工艺中Protein A层析介质的选择1.单抗分离纯化中的亲和层析介质亲和层析具有专一、高效的特性。
一般使用亲和层析纯化后，抗体的纯度一般大于95%以上，收率在95%以上；所以在抗体纯化工艺中一般使用亲和层析作为单抗纯化工艺的捕获步骤。
在单抗分离纯化中使用的亲和层析主要是有：ａ．嵌合抗体，人源化，全抗体一般使用Protein A 或Protein G层析介质为捕获步骤；b. FC融蛋白一般使用Protein Ａ层析介质做捕获步骤；c． Fab片段，或scFv 单链抗体一般使用Protein L层析介质捕获， Protein L (Capto L) 对轻链kappa片段有特异吸附。
如果轻链的种类是Lambda，可以选择Lambda Select 特异的捕获。
d．单区域抗体sdAb一般有V H区域，也可以使用protein A，如MabSelect 作为捕获步骤。
1.1Protein A 的性质金黄色葡萄球菌A蛋白（Staphylococal Protein A，SPA）是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。
能特异性地与人或哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区域结合。
天然的protein A SPA是十种氨基酸组成。
由于不含有胱氨酸及半胱氨酸，所以无二硫键。
紫外光谱和吸收系数为A275nm %=1.65，等电点为pH5.1。
SPA十分稳定，用4mol/L尿素、硫氰盐酸、6mol/L的盐酸胍和pH2.5的酸性条件，以及加热煮沸均不影响其活性。
分子量：全长的SPA 54KD，去掉与细胞壁结合部分的SPA 42KD。
SPA与IgG结合的亚类主要是IgG1、IgG2和IgG4。
近几年来基因工程的SPA出现，解决了天然protein A的耐碱性问题，MabSelect Sure是基因工程的SPA，去掉了天然SPA的DACE 区域，对于B区域进行了修饰，将不耐受NaOH的氨基酸去掉。
使修饰后的SPA可以耐受0.1-0.5M的NaOH；这就很好的解决了层析介质CIP的问题，同时修饰后的SPA也耐受蛋白酶。
2021-2022学年安徽省滁州市临床执业医师其它测试卷(含答案)
2021-2022学年安徽省滁州市临床执业医师其它测试卷(含答案)学校:________ 班级:________ 姓名:________ 考号:________一、单选题(10题)1.关于传染病的治疗原则，下述正确的是：( )A.以特异性治疗为主，一般、对症治疗为辅B.以治疗、护理为主，消毒、隔离为辅C.治疗、护理与消毒、隔离并重D.一切为了患者的康复E.以消毒、隔离为主，治疗、护理为辅2.阿苯哒唑属A.抗真菌药B.抗病毒药C.抗结核病药D.抗肠虫病药E.抗滴虫病药3.急性化脓性腹膜炎手术治疗的主要目的是：A.明确诊断B.去除病因C.清洗腹腔D.放置引流E.预防腹腔脓肿的发生4.让患者从不同场景、不同角度、与不同人合影的照片中寻找他熟悉的人适用于A.注意障碍训练B.记忆障碍训练C.视觉失认训练D.身体失认训练E.图形背景区分障碍5.腹部的浅部触诊法有利于检查下列各项，除外：( )A.有无压痛B.抵抗感C.搏动D.某些肿大的肿瘤E.阑尾压痛点6.下列哪种活动可改善RA.患者腕关节功能：B.珠算C.锯木D.乒乓球运动E.下棋F.拧螺钉7.在肠梗阻的诊断过程中极为重要的是：A.是否肠梗阻B.是机械性还是动力性肠梗阻C.是单纯性还是绞窄性肠梗阻D.是高位还是低位肠梗阻E.是什么原因引起的梗阻8.一般散剂除另有规定外，水分不得超过A.5.0%B.7.0%C.9.0%D.11.0%E.13.0%9.甲状腺癌预后最差的组织类型是：A.乳头状癌B.滤泡状癌C.未分化癌D.髓样癌E.胶样癌10.关于急性血源性骨髓炎的叙述不正确的是A.常见于10岁以下儿童B.多发生在长骨的干骺端C.最常见的致病菌为链球菌D.早期确诊主要依靠局部分层穿刺E.X线片一般在发病2周左右才显示骨质破坏和骨膜反应二、1.A1型题(10题)11.10．Virchow淋巴结是指A.非特异性淋巴结炎B.淋巴结结核C.肺癌向右侧锁骨上窝转移引起的D.胃癌向右侧锁骨上淋巴结群转移起的E.食管癌向左侧锁骨上淋巴结群转移引起的12.70．小儿重型腹泻最易发生的酸碱平衡紊乱是A.呼吸性酸中毒B.代谢性酸中毒C.代谢性碱中毒D.呼吸性碱中毒E.代谢性酸中毒合并呼吸性酸中毒13.易被误认为管型的物质有A.类圆柱体B.细胞团C.草酸钙结晶D.细菌E.白细胞14.68．与细菌侵袭力无关的致病因素是A.外毒素B.荚膜C.磷壁酸D.血浆凝固酶E.透明质酸酶15. 评价血细胞分析仪测定结果与真值一致性程度的指标是A.可比性B.准确性C.精密度D.重复性E.线性范围16.76．狼疮性肾炎一般不表现为A.轻型肾炎B.急性肾炎C.慢性肾炎D.慢性肾盂肾炎E.肾病综合征17.25．慢性支气管炎最主要的并发症是A.肺出血B.支气管扩张C.小叶肺炎D.肺栓塞E.肺气肿、肺心病18.71．婴儿腹泻当补液纠正脱水与酸中毒后，患儿突然发生惊厥，首先考虑A.补液量不够B.低血镁C.补液速度太快D.低血钾E.低血钙19.按照执业医师的标准，对医师定期考核的内容包括A.业务水平、工作成绩、身体健康状况B.业务水平、工作成绩、职业道德状况C.业务水平、工作成绩、业务培训状况D.业务水平、工作成绩、科研教学能力E.业务水平、工作成绩、外语语言能力20.免疫系统的3大功能为A.免疫防御、免疫应答、免疫记忆B.免疫应答、免疫记忆、免疫监视C.免疫防御、免疫记忆、免疫监视D.免疫防御、免疫自稳、免疫监视E.免疫应答、免疫自稳、免疫监视三、2.A2型题(10题)21. 1.5岁患儿，发热、咳嗽5天，喘憋12小时入院。
蛋白质纯化的方法选择
前言蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质。
蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务，到目前为止，还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来，但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获取高纯度的制品。
蛋白质提纯的总目标是设法增加制品纯度或比活性，对纯化的要求是以合理的效率、速度、收率和纯度，将需要蛋白质从细胞的全部其他成分特别是不想要的杂蛋白中分离出来，同时仍保留有这种多肽的生物学活性和化学完整性。
能从成千上万种蛋白质混合物中纯化出一种蛋白质的原因，是不同的蛋白质在它们的许多物理、化学、物理化学和生物学性质有着极大的不同，这些性质是由于蛋白质的氨基酸的序列和数目不同造成的，连接在多肽主链上氨基酸残基可是荷正电的、荷负电的、极性的或非极性的、亲水的或疏水的，此外多肽可折叠成非常确定的二级结构（α螺旋、β折叠和各种转角）、三级结构和四级结构，形成独特的大小、形状和残基在蛋白质表面的分布状况，利用待分离的蛋白质与其它蛋白质之间在性质的差异，即能设计出一组合理的分级分离步骤。
可依据蛋白质不同性质与之相对应的方法将蛋白质混合物分离：1．分子大小不同种类的蛋白质在分子大小方面有一定的差别，可用一些简便的方法，使蛋白质混合物得到分离1.1 透析和超滤透析在纯化中极为常用，可去除盐类（脱盐及置换缓冲液）、有机溶剂低分子量抑制剂等。
透析膜的截留分子量在5000左右如分子量在10000一下的酶液就有就有泄露的危险，在纯化中极为常用，可去除盐类、有机溶剂低分子量抑制剂等超滤一般用于浓缩和脱色1．2 离心分离置换缓冲液许多酶富集于某一细胞器内，匀浆后离心得得到某一亚细胞成分，使酶富集10~20 倍，再对特定的酶进行纯化。
差速离心，分辨率较低，仅适用于粗提或浓缩。
速率区带法，如离心时间太长所有的物质都会沉淀下来，故需选择最佳分离时间，可得到相当纯的亚细胞成分用于进一步纯化，避免了差速离心中大小组分一起沉淀的问题，但容量较小，只能用于少量制备。
单克隆抗体纯化工艺流程
单克隆抗体纯化工艺流程英文回答：Single clone antibody purification process is a crucial step in the production of monoclonal antibodies. Itinvolves several steps to ensure the isolation and purification of the desired antibody from the mixture of other proteins and contaminants.The first step in the purification process is toharvest the cells producing the monoclonal antibody. This can be done by centrifugation or filtration to separate the cells from the culture medium. Once the cells are separated, they are lysed to release the intracellular contents, including the antibody of interest.After cell lysis, the next step is to remove celldebris and insoluble components from the lysate. This canbe achieved through centrifugation or filtration methods. The clarified lysate is then subjected to a series ofchromatography steps to purify the antibody.One commonly used chromatography technique is protein A affinity chromatography. Protein A is a bacterial protein that has a high affinity for the Fc region of immunoglobulin G (IgG) antibodies. The lysate is passed through a column packed with protein A resin, and the antibody binds to the resin while other impurities are washed away. Elution of the antibody is then performedusing a low pH buffer or an IgG-specific elution buffer.Another purification step is ion exchange chromatography, which separates proteins based on their charge. The lysate is loaded onto an ion exchange column, and the antibody is selectively retained while otherproteins are washed away. Elution of the antibody is achieved by changing the pH or ionic strength of the buffer.Size exclusion chromatography is also employed to remove aggregates and further purify the antibody. This technique separates proteins based on their size, withlarger molecules eluting first. The antibody is collectedin the void volume while smaller impurities are separated.Finally, the purified antibody is subjected to a viral clearance step to ensure the removal of any potential viral contaminants. This can be achieved through viral filtration or other viral inactivation methods.Once the purification process is complete, the antibody is typically formulated into a suitable buffer for storage and further use. The purity and quality of the antibody are assessed using various analytical techniques, such as SDS-PAGE, HPLC, and ELISA.Overall, the single clone antibody purification process involves a series of steps, including cell harvesting, cell lysis, clarification, chromatography, viral clearance, and formulation. Each step is designed to isolate and purify the antibody of interest while removing impurities and contaminants.中文回答：单克隆抗体纯化工艺流程是单克隆抗体生产过程中的关键步骤。
蛋白a结合的抗体类型-概述说明以及解释
蛋白a结合的抗体类型-概述说明以及解释1.引言1.1 概述在1.1概述部分，我们可以简要介绍蛋白A结合的抗体类型的背景和重要性。
蛋白A是一种从某些细菌（如金黄色葡萄球菌）中提取的蛋白质，在生物医学研究中具有广泛的应用价值。
蛋白A能够与抗体的Fc区结合，因此被广泛用于抗体的纯化、检测和定量分析等领域。
抗体是由人体的免疫系统产生的一种免疫蛋白，能够识别和结合到特定的抗原上。
根据抗体的结构和功能特点，可以将其分为不同的类型，如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE等。
这些不同类型的抗体在机体的免疫应答中扮演着重要的角色，具有不同的生物学功能和应用价值。
蛋白A结合的抗体类型是指能够与蛋白A发生特异性结合的抗体。
由于蛋白A能够结合到抗体的Fc区，因此可以利用蛋白A来纯化、富集和检测与蛋白A结合的抗体。
在生物医学研究中，蛋白A结合的抗体类型被广泛应用于免疫检测、蛋白质纯化、抗体制备和药物研发等领域。
了解和研究蛋白A结合的抗体类型对于深入理解抗体与蛋白质相互作用、抗体的功能和应用具有重要意义。
本文将对蛋白A结合的抗体类型进行分类和介绍，以期帮助读者更好地理解和应用蛋白A结合的抗体。
同时，本文也将探讨蛋白A结合的抗体类型研究的意义和未来的发展方向。
通过对蛋白A结合的抗体类型的系统分类和介绍，我们可以进一步推动抗体研究和应用的发展，为疾病诊断、治疗和药物开发提供更加精准和有效的手段。
同时，对蛋白A结合的抗体类型的深入研究还有助于拓宽我们对抗体多样性和功能的认识，为未来抗体工程和免疫治疗的发展提供科学依据和指导。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以是以下内容之一：文章结构部分的内容是为了介绍整篇文章的组织结构，让读者了解文章的布局和章节安排。
通过清晰的结构安排可以使读者更好地理解文章的内容和逻辑关系。
在本文中,文章分为引言、正文和结论三个主要部分。
引言部分主要介绍了整篇文章的背景和意义。
首先概述了蛋白A结合的抗体类型的重要性和应用领域。
相思子毒素单克隆抗体的制备纯化及鉴定
相思子毒素单克隆抗体的制备纯化及鉴定张立营;赵怀龙;马凤龙;傅兴伦;孙英姿;高波【摘要】目的制备相思子毒素单克隆抗体并鉴定其特性.方法以甲醛处理的相思子毒素毒蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定.结果获得了4株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞2D3、4E6、1C8和1E5,诱生的腹水效价分别为1∶1×107、1∶1×106、1∶1×105、1∶1×106,亚类鉴定表明2D3为IgG1,其余3株均为IgG2b;特异性鉴定显示它们与多种毒素均无交叉反应,经过亲和层析,获得了纯化的单抗.结论获得了特异性的相思子毒素单克隆抗体,为建立相思子毒索的检测及纯化方法奠定了基础,其中4E6的效价最高,可作为检测相思子毒素的核心试剂.【期刊名称】《实用医药杂志》【年(卷),期】2010(027)009【总页数】3页(P828-829,832)【关键词】相思子毒素;单克隆抗体;制备【作者】张立营;赵怀龙;马凤龙;傅兴伦;孙英姿;高波【作者单位】266071,山东青岛,济南军区青岛第二疗养院检验科;250014,山东济南,济南军区联勤部疾病预防控制中心;250014,山东济南,济南军区联勤部疾病预防控制中心;250014,山东济南,济南军区联勤部疾病预防控制中心;266071,山东青岛,济南军区青岛第二疗养院检验科;266071,山东青岛,济南军区青岛第二疗养院检验科【正文语种】中文【中图分类】R392.11相思子毒素是从豆科藤本植物相思子（Abrus precatorius）的种子中提取的一种剧毒性高分子蛋白毒素，其含量约占种子2.8%～3.0%。
单克隆抗体纯化
单克隆抗体的纯化一、简介抗体或免疫球蛋白（Ig）是B 淋巴细胞针对暴露于外源抗原后产生的独特的可溶性糖蛋白。
通常可从血浆（占总蛋白20%），血清，腹水，细胞培养基，蛋黄，植物提取物或细菌和酵母培养物中分离得到抗体。
常用于纯化的材料主要以腹水和细胞培养上清为主。
单抗纯化方式常用的技术：DEAE 离子交换层析柱，凝胶过滤法和亲和层析。
二、技术方法及原理（一）单抗粗提1.硫酸铵沉淀法（1）原理：高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，故可利用不同盐浓度来沉淀不同蛋白质，硫酸铵因其溶解度大，温度系数小，不易使蛋白质变性而应用广泛。
（2）方法：①若样本体积较小，可配置100%饱和硫酸铵（375 g 硫酸铵加入500 mL 的蒸馏水中，加热至完全溶解，室温过夜，析出晶体任其留在瓶中，用氨水或者硫酸调节pH 至7.0）；若体积较大直接使用固体硫酸铵，根据表格（1）称取所需质量。
②盐析：缓慢向腹水中加入一定量的饱和硫酸铵溶液（或者缓慢加入固体硫酸铵，0.277 mg/mL 终浓度为45%），缓慢搅拌30 min ，室温静置2 h ，再5000 rpm 离心25 min ，去上清，沉淀用PBS 溶解。
③脱盐：主要有柱层析和透析法a）柱层析：将上述样品过Sephadex G-25 层析柱，以PBS 或Tris-HCl 缓冲液为平衡液和洗脱液，第一个蛋白峰即为脱盐后的抗体溶液；b）透析法：将样品装入处理后的透析袋（2% NaHCO3，1mM EDTA 煮沸10 min，蒸馏水洗净）中，置换缓冲溶液为PBS 或Tris-HCl 缓冲液，期间更换4-5 次透析液；2.辛酸-硫酸铵沉淀法（1）适用范围：该法简单易行，适用于提纯IgG1 和IgG2b ，但对IgG3 和IgA 的回收率及纯化效果差。
（2）试剂：0.06M 醋酸缓冲溶液（pH5.0），1M HCl，辛酸，1xPBS ，1M NaOH；（3）方法：在预处理后的腹水中加入2 倍体积的0.06M 醋酸缓冲溶液（pH5.0），按比例加入辛酸（11uL 辛酸/mL 腹水），室温搅拌下逐滴加入，30min 内加完，4℃静置2 h ，10000 rpm 离心30 min ，弃沉淀，上清过滤（经尼龙筛125uM），加入1/10 的1xPBS，再用1M NaOH 调节pH 至7.2；4℃下加入饱和硫酸铵至45% 饱和度，静置1h ，10000 rpm 离心30 min ，弃上清；沉淀用PBS 溶解；3.优球蛋白沉淀法（1）适用范围：适用于提纯IgG3 和IgM 的提取，不会影响抗体活性；复溶缓冲溶液（1M NaCl ，0. 1M Tris-HCl ，pH8.0）（2）试剂：NaCl ，CaCl2，（3）方法：取一定量的预处理后腹水，先后加入NaCl（终浓度0.2M）和CaCl2 （终浓度25mM），可看到纤维蛋白的产生；经滤纸过滤后，透析或层析过滤，缓冲体系为去离子水，超高速离心30min；弃上清，沉淀用1M NaCl，0. 1M Tris-HCl，pH8.0 溶液复溶，再经过透析或层析过滤更换缓冲体系；（二）亲和层析法1.基本原理：基因工程改造的protein A 和protein G 能特异性结合哺乳动物IgG 的Fc 区段，将protein A 和protein G 结合到柱料上，通过亲和层析的方式，可将IgG 及其亚类与片段纯化出来。
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摘要：世界首个单克隆抗体（monoclonal antibody，简称单抗）于1986 年，获得美国食品与药品监督管理局的上市批准，拉开了单抗药物发展的序幕，成为生物医药领域中最耀眼的明珠。
单克隆抗体纯化过程中a蛋白（protein a）层析介质的选择尤为重要，可以影响抗体的纯度。
本文主要阐述单抗纯化过程中a蛋白亲和层析的相关内容。
关键词：a蛋白；耐碱性；动态载量
全球医药行业走向趋势是精准医疗时代，单抗是其中较为成熟的领域，引领了生物制药产业发展最为重要的驱动力。
单抗药物主要是由中国仓鼠卵巢细胞（chinese hamster ovary cell，简称 cho 细胞）表达产生，由 cho 细胞分泌的外源蛋白分子，通过纯化过程实现由细胞培养液中回收。
随着单抗生产上游改造、培养参数的优化，其产量已达5-10g/l，同时也增加了下游蛋白回收中去除各种宿主杂质的负担。
宿主蛋白残留的组成随着培养条件的改变显现出显著的变化，单抗药物杂质主要包括与产品相关的污染物和工艺相关的污染物。
根据终产品纯度、杂质含量的严格要求，单抗目前采用三步纯化策略：粗纯（样品捕获）、中度纯化和精细纯化，该策略工艺复杂、对操作要求严格，导致纯化成本一般占总生产成本的 50%-80%。
用a蛋白亲和层析凝胶捕获抗体是大规模单抗纯化的首要步骤，一步纯化可使蛋白纯度达 95%以上。
但a蛋白树脂价格昂贵，在大规模生产中，a蛋白纯化步骤的成本占整个抗体纯化成本的 35%以上。
因此，蛋白 a 纯化效率的提高是进一步提高产品质量、降低生产成本的关键[1]。
1 a蛋白的性质金黄色葡萄球菌
a蛋白（staphylococal protein a，spa）是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。
能特异性地与人或哺乳动物抗体（主要是igg）的fc区域结合。
天然的a蛋白是十种氨基酸组成。
由于不含有胱氨酸及半胱氨酸，所以无二硫键。
紫外光谱和吸收系数为
a275nm %=1.65，等电点为ph5.1。
spa十分稳定，用4mol/l尿素、硫氰盐酸、6mol/l的盐酸胍和ph2.5的酸性条件，以及加热煮沸均不影响其活性。
分子量：全长的spa 54kd，去掉与细胞壁结合部分的spa 42kd。
spa与igg结合的亚类主要是igg1、igg2和igg4。
近几年来基因工程的spa出现，解决了天然a蛋白的耐碱性问题，mabselect sure是基因工程的spa，去掉了天然spa的dace 区域，对于b区域进行了修饰，将不耐受naoh的氨基酸去掉。
使修饰后的spa可以耐受0.1-0.5m的naoh；这就很好的解决了层析介质cip的问题，同时修饰后的spa也耐受蛋白酶。
减少在纯化过程中蛋白酶对spa的作用，使洗脱收集液中spa的脱落更低。
2 结合单抗的a蛋白层析介质的选择
在a蛋白捕获步骤中主要去除的杂质大部分是hcp和基因组dna；由于a蛋白层析介质对聚体没有去除作用，所以在此捕获步骤中应采取尽量减少聚体的形成策略，例如：提高洗脱ph，加入添加剂等；在此捕获步骤中会有a蛋白（配基）的脱落。
在a蛋白捕获过程中，培养上清中的蛋白酶会降解层析介质的配基a蛋白，以及a蛋白与介质骨架的偶联方式，这些都是protein a的脱落原因，所以选择a蛋白脱落较低的层析介质是非常必要的[2]。
2.1 a蛋白层析介质相关指标
耐碱性：药物gmp生产最基本的要求是无菌、无热源。
naoh 是最好的除菌、出热源的试剂。
同时naoh也是公认的cip试剂，使用naoh 可以很好的除去残留在层析介质上的杂质，以确保工艺的稳定性以及层析介质的寿命；?郧?naoh的成本低。
naoh是公认的cip试剂，实验表明，naoh的清洗效果高于其他试剂，适合琼脂糖基架的填料。
而对照的可控玻璃基架（cpg）填料的清洗结果表明，盐酸胍比磷酸更为有效。
cpg填料在高ph下不稳定，不适合用naoh 清洗。
传统的a蛋白的清洗试剂，如：尿素，盐酸胍等的清洗试剂效果不理想，?郧以谂渲檬
迸ǘ冉细撸?这对生产是一个瓶颈。
ge公司的mabselect sure 系列是通过基因工程修饰的a蛋白介质，去除了不耐受naoh 的氨基酸，提高了层析介质耐受naoh的能力。
同时 mabselect sure lx是最新的a蛋白层析介质，结合了耐碱和高载量的性质。
另外， mabselect sure和mabselect sure lx介质在naoh清洗后寿命可以在300次以上。
使用不同浓度的naoh 清洗mabselect sure 的使用次数。
随着抗体技术的发展，培养条件改善以及表达量的大幅度提高（生产规模已经到达3-5g/l），杂质的量（hcp）也随之提高[3]。
如果不能将介质清洗干净，这会影响工艺以及产品的质量。
在这种情况下使用高浓度的naoh （0.5m）的非常必要的。
载量及保留时间：一般protein a层析介质的理论载量为80g/l左右。
高载量可以减少层析柱的体积。
保留时间是指样品在层析柱内的停留时间或样品与层析介质的接触时间。
较低的保留时间可以使用较快的流速，从而提高生产效率。
在抗体纯化工艺开发时，对于动态载量以及保留时间是一个平衡的过程，单纯追求高动态载量，可能保留时间会较长，使得上样时间延长，这样培养基中的蛋白酶就有时间分解样品，以及上样时蛋白酶降解a蛋白，使a蛋白的脱落增加。
另外一些高载量的a蛋白层析介质，是通过提高配基密度增加动态载量的。
但是配基密度提高过程中，如果配基与的层析基质（骨架）的偶联不稳定，就会增加a蛋白的脱落。
此类a蛋白介质在初期动态载量较高，经过一段时间的使用，随着配基的脱落，载量很快降低。
单纯追求高流速，可能会使层析介质的柱压升高，提高了纯化过程中对生产设备（层析柱以及层析系统）的要求，从而增加层析柱以及层析系统的采购成本。
随着上样次数的增多（生产循环次数的增加）层析介质的反压增加，从而减少层析介质的寿命。
另外，有文献报道，以硅胶基质或cpg的在重复装柱的过程中易破碎，从而增加运行的压力以及影响介质的寿命。
现代的a蛋白的动态载量一般在35-60g/l之间，保留时间一般在3-5min左右（20cm 柱床高度，线性流速在250-400cm/h ）。