7.2超高分辨率显微镜：
超分辨率显微镜原理
超分辨率显微镜原理
超分辨率显微镜是一种通过克服传统显微镜的分辨率限制，能够达到更高分辨率的显微镜技术。
其原理主要基于超分辨率成像方法，包括以下几种常见方法：
1. 点扩散函数重建（PSF Reconstruction）：该方法通过量子点等微小发光点的扩散效应，测量系统的点扩散函数（PSF），
并利用逆过程重建样品的高分辨率图像。
通过巧妙选择合适的激发强度和探测方式，可以有效地提高显微镜的分辨率。
2. 结构光显微镜（Structured Illumination Microscopy，SIM）：该方法利用具有特殊图案结构的光源照射样品，通过高频投影的多个子光束和频率分析技术，得到叠加图像，从而在频域上提高了分辨率。
SIM可以将衍射极限下的分辨率提高约2倍。
3. 刺激发射退火显微镜（Stimulated Emission Depletion Microscopy，STED）：该方法利用激光在大约50纳米范围内
激发荧光标记物，然后通过使用另一束特定的激光束使被激发的标记物发生受激发射退火（STED），从而限制只有核心激
发点发光，提高了分辨率。
4. 单分子定位显微镜（Single Molecule Localization Microscopy，SMLM）：该方法利用碰撞助熄灭的性质，使被标记的单个分子在短暂亮起的过程中精确地定位，通过多个分子的多次定位获得高分辨率的图像。
SMLM能够将分辨率提高到纳米级别，并广泛应用于生物学研究。
这些超分辨率显微镜原理的引入，使得科研人员在微观世界中获得了更为清晰、准确的图像，从而更深入地理解生物学和物理学的相关问题。
超高分辨率显微镜技术的研究及应用
超高分辨率显微镜技术的研究及应用近年来，随着科技的不断发展，人类对于微观世界的探索也越来越深入。
而超高分辨率显微镜技术的发展更是为我们揭开了微观世界的神秘面纱，使得我们能够更加深入地研究原子、分子和纳米级别的物质结构和性质。
本文将介绍超高分辨率显微镜技术的基本原理、研究进展以及应用领域等方面的内容。
一、基本原理超高分辨率显微镜技术是一种基于电子束、离子束、探针等方法，利用物质与射线相互作用而获得样品局部结构和性质信息的技术。
其中，电子束显微镜是最为常见和先进的超高分辨率显微镜技术之一。
其基本原理是利用高能电子穿透固体样品时所发生的散射和透射现象，通过对透射电子的成像和分析，可以得到样品的组成、结构和性质信息。
由于电子束波长远远小于光学波长，因此电子显微镜比光学显微镜具有更高的空间分辨率，目前已经达到了亚埃级别。
二、研究进展随着材料科学、生物科学、纳米科学等领域的不断发展，超高分辨率显微镜技术也得到了迅猛的发展。
其中，场发射扫描电镜（FESEM）、透射电镜（TEM）和原子力显微镜（AFM）等技术已经广泛应用于材料、生物、能源等领域，成为了研究和开发新材料、新能源、新药物等的重要手段。
在材料科学领域，超高分辨率显微镜技术广泛应用于材料表面形貌、界面结构、晶体缺陷、成分分析等方面的研究。
通过电子束显微镜等技术，研究人员可以观察到许多微观结构特征，如纳米粒子的分布、晶格缺陷、电子束诱导的化学反应等，从而掌握更多有关材料微观结构和性质的信息，为材料的合成、加工和应用提供了重要的参考。
在生物科学领域，超高分辨率显微镜技术广泛应用于细胞、分子等微观结构的研究。
通过电子束显微镜等技术，研究者可以观察到许多细胞、分子等微观结构的构成和形态，如蛋白质、RNA、DNA等。
这些信息对于生物科学研究中的分子生物学、细胞学、生物物理学等领域都有着重要的意义，有助于人们深入研究生命现象的本质和机理，进一步揭示生物系统的运作原理。
超分辨率显微镜的原理和应用
超分辨率显微镜的原理和应用超分辨率显微镜是一种重要的科学仪器，它可以观察到微小到几纳米甚至更小的结构，帮助我们更好地理解物质和生命的基本原理。
本文将介绍超分辨率显微镜的原理和各种应用。
一、超分辨率显微镜的原理传统光学显微镜受到光的衍射极限的限制，无法观察到小于光波长的结构。
而超分辨率显微镜利用的是几种各具特点的技术，突破了光学显微镜的分辨率极限。
1. 点扩散函数重构技术点扩散函数是指一个点光源在成像平面上的像的强度分布，是光学系统成像性能的度量指标。
超分辨率显微镜利用一种称为点扩散函数重构技术的方法，通过控制样品与显微镜镜头之间的距离和形状，使得点扩散函数重合，从而获得高分辨率的图像。
2. 直接结构重建技术直接结构重建技术是通过对样品进行照射，利用样品本身的发光或散射产生的信号，进行三维重建，从而获取超分辨率图像。
这种方法需要高度精确的光学元件和灵敏的探测器，但可以在不破坏生物样品的情况下进行高分辨率成像。
3. 显微镜成像技术超分辨率显微镜也可以通过多种成像技术实现高分辨率，如近场光学显微镜、荧光共振能量转移显微镜等。
这些技术利用样品对光的相应规律进行探测，可以实现纳米级别的分辨率。
二、超分辨率显微镜的应用超分辨率显微镜的应用十分广泛，尤其在生命科学、材料科学和纳米科技等领域。
1. 生命科学生命科学研究中，超分辨率显微镜可以用于观察生物分子、蛋白质和细胞等对象。
例如，超分辨率显微镜可以研究细胞内分子的位置和运动，揭示生物分子相互作用和信号传导的机制。
另外，超分辨率荧光显微镜还可以用于观察单个分子的动态过程和病毒在细胞内的行为。
2. 材料科学超分辨率显微镜在材料科学领域也有广泛的应用。
它可以观察到纳米级别的材料结构和形貌，揭示各种物理和化学过程的机理。
例如，超分辨率显微镜可以研究纳米颗粒的形貌、大小分布和属性，以及材料在热处理和机械应力下的变化情况。
3. 纳米科技超分辨率显微镜在纳米科技领域的应用十分重要。
超高分辨率电子显微镜的应用及其原理
超高分辨率电子显微镜的应用及其原理随着科学技术的不断进步和发展，电子显微镜已经成为现代科学研究中非常重要的工具之一。
而在电子显微镜的技术领域中，超高分辨率电子显微镜则是其中一个发展比较迅速的领域。
超高分辨率电子显微镜在材料、生命科学、能源、环境等领域都有广泛的应用，并且在纳米材料研究等领域也有着非常重要的地位。
一、超高分辨率电子显微镜的原理超高分辨率电子显微镜是一种采用电子束而不是光束的显微镜。
由于电子的波长比光短得多，所以理论分辨率比光学显微镜高得多。
超高分辨率电子显微镜的分辨率能够达到0.05-0.1纳米，甚至可以达到0.01纳米以下。
超高分辨率电子显微镜的成像原理是利用电子束与样品之间的相互作用来制造高分辨率的图像。
通常情况下，电子束与样品之间的相互作用会产生散射、反射和吸收等现象。
这些相互作用可以被探测器捕捉到并转换成数字图像。
在超高分辨率电子显微镜中，电子束产生于电子枪中，并通过磁透镜来聚焦。
然后电子束通过样品并被探测器捕获。
在此过程中，需要避免电子束和样品的相互作用输入噪声，并且需要保证探测器和聚焦电子束的正确对准。
二、超高分辨率电子显微镜的应用1. 纳米材料研究在纳米材料研究领域，超高分辨率电子显微镜可以帮助科学家们研究纳米材料的结构、组成、形态以及表面性质等方面的信息。
通过观察纳米材料的结构、形态以及表面性质，科学家们可以更好地理解纳米材料的特性，从而为未来的产品和技术创新提供帮助。
2. 生命科学超高分辨率电子显微镜在生命科学领域的应用也非常广泛。
它可以帮助生物学家们观察细胞和分子的结构，探究生命分子的行为和相互作用，从而更好地理解生命的本质。
3. 能源超高分辨率电子显微镜也可以应用于能源领域中。
它可以帮助科学家们观察太阳能电池、供能设备和储能装置等方面，探究它们的结构、组成和性质。
这些信息对于理解能源技术的本质、优化能源器件、提高能源效率等方面都有帮助。
4. 环境在环境领域中，超高分辨率电子显微镜可以帮助科学家们研究空气、土壤和水中的微生物、细菌和污染物等方面，从而更好地理解它们的组成和化学成分。
超高分辨率显微成像技术的应用
超高分辨率显微成像技术的应用随着科学技术的不断发展，超高分辨率显微成像技术的应用已经成为了当前微观世界研究领域中的热点和重点之一。
它具有高分辨率、高清晰度、高灵敏度、高速度等特点，能够帮助科学家们更深入地观察和研究微观世界中的各种现象和物质结构，极大地推动了微观领域的研究进展。
一、超高分辨率显微成像技术的基本原理超高分辨率显微成像技术是指使用高分辨率的显微成像设备进行微观世界的观察和研究。
这类设备通常采用光学、电子、原子力等不同的成像原理和技术，可以帮助我们观察和研究各种微观结构和物质特性。
其中，基于光学原理的超高分辨率显微成像技术最为常见，例如：荧光共聚焦显微镜（ confocal fluorescence microscopy）、受限光学超分辨率显微镜（stimulated emission depletion microscopy, STED microscopy）、单分子荧光成像技术( single molecule super-resolution imaging)等等。
这些技术都能够通过特殊的成像原理、样品制备和数据处理等手段，在显微成像领域内实现高分辨率的成像，帮助科学家们更好地研究材料、生物、医学等领域的相关问题。
二、超高分辨率显微成像技术在生物领域的应用生物领域是超高分辨率显微成像技术得到广泛应用的领域之一。
这是因为生物体系中含有高度有序的分子、细胞等结构，需要高分辨率的成像技术才能很好地观察细胞表面、细胞互作、病毒等微观生物结构，从而解答生命科学领域中的众多问题。
例如，荧光共聚焦显微镜技术广泛应用于生物领域的成像研究。
结合荧光标记技术，荧光共聚焦显微镜可以实现高强度、高灵敏度的成像，观察到过去无法被发现的极微小的细胞组成结构和细胞生理学的过程，如透明的细胞、活细胞内部分子、原生动物等等。
因此，该技术在生物领域中有着广泛的应用前景，可以帮助科学家们更深入地研究细胞机制、病原微生物、疾病的发生机理等诸多问题。
超高分辨率电子显微镜的原理与应用
超高分辨率电子显微镜的原理与应用电子显微镜是一种非常重要的现代仪器，它能够让我们观察到通常难以看到的微观世界。
超高分辨率电子显微镜（Ultra-High Resolution TEM）是电子显微镜中分辨率最高的一种，它能够让我们以前无法想象的方式观察到微观结构。
本文将详细介绍超高分辨率电子显微镜的原理和应用。
一. 超高分辨率电子显微镜的原理超高分辨率电子显微镜的原理基于单个原子散射电子的相位和振幅，这些电子透过样品时会发生不同的散射。
相干电子衍射是一种技术，在这种技术中用原子散射事件产生的相干电子束照射样品。
束发射的强度和相位在样品内部发生变化，导致电子从样品中折射和散射。
相干衍射用于研究单个原子间的距离和结构，因此可以在原子水平上观察到样品的显微结构。
这些散射电子被透镜收集和聚焦成图像，显示出样品的结构。
二. 超高分辨率电子显微镜的应用1. 研究生物大分子超高分辨率电子显微镜可以用于观察和研究生物大分子，如蛋白质、DNA和RNA，因为这些分子的尺寸非常小。
随着技术的发展和改进，超高分辨率电子显微镜能够观察到约0.1纳米的细节，这意味着可以观察到大分子中的单个原子。
这种能力让研究人员更好地理解这些分子的构成和功能。
2. 研究材料科学超高分辨率电子显微镜也可以用于研究材料科学。
在材料科学中，超高分辨率电子显微镜可用于观察材料的表面和内部结构，以及研究它们的物理和化学性质。
例如，它可以用于观察纳米材料的形态、大小和晶格结构，这对于生产更高效的材料和更强的材料非常有用。
3. 研究纳米技术纳米技术是一种新颖的技术，它利用微小的物质结构制造新的材料和器件。
超高分辨率电子显微镜可以用于研究纳米技术的许多方面。
例如，它可以用于观察和研究纳米粒子和材料的结构，以及研究它们的性质。
此外，它还可以用于观察和研究纳米器件，如纳米管和纳米线。
4. 研究能源领域超高分辨率电子显微镜在能源领域也有广泛的应用。
它可以用于观察和研究各种能源材料的结构和性质，如太阳能电池、燃料电池和超级电容器。
超高分辨率荧光显微镜操作及注意事项
超高分辨率荧光显微镜操作指南及注意事项
1、开机：由于设备需要保持稳定，因此机器是一直保持开
机状态，网上预约刷卡后即可使用。
2、上样：在上样品之前，请在软件上将载物台向上移动
3000，将镜头与样品分开，以防镜头碰坏。
3、滴油：本显微镜只有油镜，请对应需要观察的染料来使
用适合折射系数的镜油。
4、寻样：将样品安装好后，在软件上选择样品对应的Z轴
位置，再进行微调，以10为步进进行调整。
5、拍照：首先拍照宽场模式，寻找合适的样品。
找到合适
的样品后，再开启需要的激光器，并打开安全锁。
在软件上将拍照模式改为SI，并设定好Z轴上下端和通道。
设定好保存目录，按下RUN进行拍照。
6、下样：将载物台升高3000，然后取下样品，用擦镜纸
将镜油吸掉，换一张擦镜纸沾取少量无水乙醇，将镜油擦干净。
7、关机：将激光安全锁关掉后，关闭打开的激光器。
收拾
好台面即可。
负责人：高丁
分析测试中心。
超高分辨率显微镜技术和发展前景
超高分辨率显微镜技术和发展前景随着科技的不断发展，越来越多的科学家开始着眼于研究微观世界。
在研究微观世界的过程中，显微镜起到了至关重要的作用。
而随着显微镜技术的不断提升，超高分辨率显微镜逐渐成为了研究微观世界的重要工具。
本文将会从超高分辨率显微镜的发展历程、技术原理、应用场景、市场前景和行业现状等方面来论述该技术的发展前景。
一、超高分辨率显微镜的发展历程超高分辨率显微镜源于20世纪80年代，当时光学显微镜已经能够解析50至100纳米的距离。
在随后的几十年中，由于新材料和新技术的引入，超高分辨率显微镜的分辨率从100纳米提高到了几个纳米。
其中，透射电子显微镜（TEM）、原子力显微镜（AFM）和受控力反射显微镜（CRAFM）是超高分辨率显微镜的代表。
二、超高分辨率显微镜的技术原理以透射电子显微镜（TEM）为例，它可以利用电子束取代光通过被检测样品，通过四极或椭圆势镜控制和聚焦，使得电子束具有非常小的直径和高的亮度。
在这样的情况下，硬物质的原子和分子可以产生对电子束的衍射，再通过特殊的图像处理技术，就可以将结果呈现在显微镜屏幕上。
三、超高分辨率显微镜的应用场景超高分辨率显微镜已经成功运用到了多个领域中，其中生物医学领域的应用最为广泛。
如超高分辨率显微镜可以帮助科学家观察癌细胞内部的活动，或帮助科学家研究蛋白质的结构和功能。
除此之外，超高分辨率显微镜在物理学、材料学、半导体研究、能源等方面也有着广泛的应用。
四、超高分辨率显微镜的市场前景超高分辨率显微镜作为新兴技术，其市场也在不断扩大。
随着科学家的研究不断深入，超高分辨率显微镜在医疗诊断、药物研发、环境检测等方面也能发挥重要作用。
而随着人们在对生命和物质科学探索的深入，超高分辨率显微镜的市场前景将会更加广阔。
五、超高分辨率显微镜的行业现状目前，超高分辨率显微镜市场上主要有以下几家企业在研发和生产相关产品：荷兰FEI公司、德国卡尔·蔡司公司、日本日立公司、美国斯坦福电子公司等。
超高分辨率显微镜简介
WF
C.A.
TIRF
TIRF/单分子定位·超分辨率 奥林巴斯高端Xcellence系统
TIRF 原理: 消逝波和渗透深度
消逝波:z轴强度指数性衰减
Z
渗透深度 50 – 300 nm
48
TIRF/单分子定位·超分辨率 奥林巴斯高端Xcellence系统
点描法(点彩派画法)
点分布函数(PSF),信噪比(S/N)决定计算分辨率
La Parade de Cirque (1889)
样点量决定计算分辨率
The Sunday Afternoon on the Island of La Grande Jatte (1884–1886)
Particle detection and image reconstruction using ImageJ and QuickPALM plugin.
Original Data Courtesy of Colin Rickman: Centre for Integrative Physiology, University of Edinburgh
TIRF/单分子定位·超分辨率 奥林巴斯高端Xcellence系统
FV-OSR
TIRF/单分子定位·超分辨率 奥林巴斯高端Xcellence系统
FV-OSR
更多精彩，敬请期待
TIRF/单分子定位·超分辨率 奥林巴斯高端Xcellence系统
TIRF 技术，让我们以极高的信噪比对超薄Z轴空间（50nm） 的荧光进行检测 超高的信噪比 让我们可以检测到 单分子 检测到单分子，基于此，有了单分子定位超高分辨率技术
超高分辨率显微镜的原理和应用
超高分辨率显微镜的原理和应用随着科技的不断发展，显微镜也越来越先进，从最初的单透镜显微镜到现在的复杂显微镜，人类不断提高显微镜的分辨率，使得我们能够更加深入地了解物质的本质和特性。
而其中一款高端显微镜——超高分辨率显微镜，其在高分辨率成像、表面分析、物质成分鉴定等领域都有着广泛的应用。
今天，就让我们一起来了解一下超高分辨率显微镜的原理和应用吧。
一、超高分辨率显微镜的原理超高分辨率显微镜主要基于光学显微镜原理，通过光的折射、衍射等现象来对样品进行成像。
同时，这种显微镜还加入了一些新的技术，如间隔光束和先进的图像处理技术，使得超高分辨率显微镜的成像质量更加出色。
超高分辨率显微镜的一个主要原理是利用了场激发的发射。
在显微镜的顶部，有一个非常小的光学探针，这个探针能够刻意产生一个非常强烈、非常小的光场。
当这个场与样本中的物质相互作用时，它会产生一个光响应，这个响应就可以被探针探测到。
而与该响应相关的信噪比将决定图像的质量和分辨率。
除此之外，超高分辨率显微镜里还加入了三维成像技术。
这项技术利用了样品表面或内部的不连续性，可以产生一些表现为微小的隆起或凹陷的构造。
通过测量这些构造进行成像，就可以在三维空间内重建出一个逼真的图像，从而更加直观地观察和研究样品中的微小结构和表面特性。
二、超高分辨率显微镜的应用1. 表面分析超高分辨率显微镜被广泛应用于微观表面分析，如表面形貌、摩擦学、摩擦性能、表面特性等。
在这方面，它可以为其他科学家或工程师提供有关表面微观结构与表面特性之间关系的重要信息。
这些信息可以用于改进材料的表面特性、研究材料磨损机理、设计摩擦表面减震系统等。
2. 物质成分鉴定超高分辨率显微镜还可以对物质成分进行鉴定。
它可以通过研究样品的表面成分分布或确定一个特殊的特征，比如膜层的厚度以及材料的薄膜结构，来鉴定物质的成分。
该技术可以应用在诸如制备材料、半导体制造、生物医学和食品工业等领域。
3. 细胞生物学超高分辨率显微镜还可以用于细胞生物学领域，特别是在研究生物大分子如蛋白质和核酸的结构中。
亚细胞级别的检测技术——高分辨率显微镜技术介绍
亚细胞级别的检测技术——高分辨率显微镜技术介绍高分辨率显微镜技术是一种能够实现亚细胞级别观测的显微镜技术。
它不同于普通的光学显微镜，可以观测到更细微、更复杂的结构，且拥有更高的分辨率和更强的敏感性。
因此，高分辨率显微镜技术被广泛应用于生物学、化学、物理等领域的研究中。
本文将从高分辨率显微镜技术的原理、分类、应用等方面进行介绍。
一、高分辨率显微镜技术的原理高分辨率显微镜技术的原理基于超分辨率成像，即通过一系列特定技术手段，将对象内部的细节显现出来，提高分辨率，使得显微镜的分辨率可以达到数十纳米乃至亚纳米级别。
超分辨率成像主要有以下三种技术：单分子成像技术、结构照射技术和光学相位探测技术。
1. 单分子成像技术单分子成像技术的原理是将被观测物体内部的单个分子发光，通过显微镜成像，进而得到具有超高分辨率的成像效果。
这一技术主要应用于生物学领域的研究，可以实现对单个蛋白质、DNA分子等分子级别的观测。
2. 结构照射技术结构照射技术的原理是将被观测物体内部的结构进行局部照射，向外发射辐射，以获得更多的信息来提高分辨率。
这一技术主要应用于材料学和电子显微镜领域。
3. 光学相位探测技术光学相位探测技术的原理是利用光学干涉技术，实现对被观测物体的位相信息的探测，从而提高图像分辨率。
这一技术主要应用于生物学领域的研究中，已经成为细胞学和纳米生物学领域的主要技术手段之一。
二、高分辨率显微镜技术的分类高分辨率显微镜技术主要包括STED超分辨率显微镜、PALM/STORM超分辨率显微镜、模拟孔径显微镜、结构光显微镜等。
1. STED超分辨率显微镜STED超分辨率显微镜是利用光的相互作用原理，通过激光束扫描荧光探针，形成荧光状态，从而达到提高成像分辨率的效果。
该技术分辨率可达到10纳米以下，已经广泛应用于生物学和材料学领域。
2. PALM/STORM超分辨率显微镜PALM/STORM超分辨率显微镜是通过针对荧光发射的位置和时间进行调整，实现对被观察物体的超分辨率成像。
超分辨显微镜的原理和应用
超分辨显微镜的原理和应用摘要：超分辨显微镜是一种可以使物体分辨率比传统显微镜高几个数量级的高端显微技术。
本文将介绍超分辨显微镜的原理、技术和应用。
首先，将讨论超分辨显微镜的原理，包括近场光学显微镜、荧光显微镜、光学相位重构等。
其次，将介绍超分辨显微镜的技术，包括单分子荧光成像、STED显微镜、PALM和STORM等。
最后，将讨论超分辨显微镜在生命科学、材料科学和纳米技术等领域中的应用。
关键词：超分辨显微镜，原理，技术，应用，生命科学，材料科学，纳米技术一、引言显微镜是科学研究和工业制造中最为基础的工具之一。
自17世纪以来，显微镜一直在科学研究中发挥着重要的作用，从而使我们能够观察到比人眼所能看到的更小的物体。
传统的显微镜已经可以提供很高的分辨率，但是在生命科学、材料科学和纳米技术等领域中，研究对象的大小和结构越来越小，因此需要一种可以提供更高分辨率的显微镜技术。
超分辨显微镜是一种可以提供比传统显微镜更高分辨率的显微技术。
本文将介绍超分辨显微镜的原理、技术和应用。
二、超分辨显微镜的原理超分辨显微镜的原理是利用一些物理现象来绕过传统显微镜的分辨极限。
目前，常用的超分辨显微镜技术主要有近场光学显微镜、荧光显微镜和光学相位重构等。
近场光学显微镜传统显微镜的分辨率受限于照明光的波长，而近场光学显微镜则绕过了这个限制。
在近使分辨率远高于传统显微镜。
近场光学显微镜有多种类型，包括原子力显微镜和光学近场显微镜等。
原子力显微镜使用针尖和样品之间的作用力来探测样品表面的形态，而光学近场显微镜则利用光波在近场区域中的强烈干涉来提高分辨率。
荧光显微镜荧光显微镜是一种利用荧光分子发射的光信号来获得图像的显微技术。
荧光显微镜可以通过控制激发光的波长和荧光分子的特性来实现更高的分辨率。
其中，单分子荧光成像技术是一种可以实现超分辨显微的荧光显微技术，它可以在分子级别上探测样品中的荧光信号。
光学相位重构光学相位重构技术是一种可以通过干涉和重构光波前来提高分辨率的显微技术。
超分辨率显微镜的原理与应用
超分辨率显微镜的原理与应用近年来，超分辨率成像技术在生物、材料等领域得到广泛应用，由此引发了超分辨率显微镜的发展。
相比传统显微镜，超分辨率显微镜具有更高的分辨率和灵敏度，让我们能够更加深入地观察微观世界。
一、超分辨率显微镜的原理超分辨率显微镜主要有两类：基于单分子荧光的超分辨率显微镜和基于结构的超分辨率显微镜。
基于单分子荧光的超分辨率显微镜主要包括STED（抑制受激发射调制）显微镜和PALM（单分子光激发定位显微镜）/STORM （单分子光激发重建显微镜）技术。
STED显微镜利用激光束对样品区域进行光谱剪除，通过光学效应抑制受激发射的退火过程，实现物品的精确成像。
PALM/STORM技术则利用单分子荧光标记样品，通过逐个观察和定位单分子的方法，重建出精细的图像。
基于结构的超分辨率显微镜主要包括SIM（结构照明显微镜）和STORM显微镜，这些技术利用非线性光学效应和结构照明来提高分辨率。
SIM显微镜利用直角三角形的交叉模型，用两个偏振滤波器和三个照射角度来产生三个频率的交叉模型，对样品进行成像。
STORM显微镜则通过精确控制光激发过程，获得单个荧光染料的二次闪烁图像，达到亚分辨率的成像效果。
总体来说，超分辨率显微镜都是通过特殊的光源、探测和成像方法来突破传统光学分辨率的限制，实现微观物品的高分辨率成像。
二、超分辨率显微镜的应用超分辨率显微镜的应用范围十分广泛，在生物、材料、半导体等领域都有重要的应用价值。
在生物学领域，超分辨率显微镜被广泛用于研究生物大分子结构和功能。
例如，在研究蛋白质结构时，超分辨率显微镜能够解析出更细节的结构，以及在细胞内进行实时观察，揭示出细胞内分子运动的规律。
在材料学领域，超分辨率显微镜可用于研究材料表面和内部结构，以及材料缺陷和纳米结构的形态学和电磁性质。
例如，在研究材料的荷电效应时，超分辨率显微镜可观察到材料表面的单个缺陷，从而得出更精确的研究结果。
在半导体领域，超分辨率显微镜可用于研究半导体器件的内部结构和结晶缺陷，以及半导体表面纳米结构的性能和特性。
高分辨率显微镜成像原理及优缺点揭示
高分辨率显微镜成像原理及优缺点揭示引言显微镜在科学研究和工业应用中起着至关重要的作用，帮助人们观察和理解微观世界。
随着科学技术的发展，高分辨率显微镜应运而生，成为研究人员的得力工具。
本文将介绍高分辨率显微镜的成像原理以及其优缺点。
一、成像原理高分辨率显微镜利用光学原理以及先进的技术手段实现对微观结构的观察和分析。
下面将介绍三种主要的高分辨率显微镜成像原理。
1. 透射电子显微镜（Transmission Electron Microscopy，TEM）透射电子显微镜通过传输电子束来观察样品的内部结构和成分。
它利用电子束在样品内部产生的散射、透射和折射现象，通过探测这些电子的位置信息，并将其转化为图像显示出来。
透射电子显微镜具有极高的分辨率，可以观察到纳米甚至更小尺度的细微结构。
2. 扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscopy，SEM）扫描电子显微镜利用电子束与样品表面产生的信号来获取样品表面的形貌和成分信息。
通过扫描样品表面的电子束，利用样品表面的电子信号与电子束的位置信息进行比较，可以获取高分辨率的表面形貌图像。
扫描电子显微镜广泛应用于材料科学、生物学等领域的研究。
3. 荧光显微镜荧光显微镜通过激发样品中产生的荧光信号来观察样品的结构和成分。
它利用荧光物质在受到特定波长光照射后吸收光能并重新发射出不同波长的荧光光子。
荧光显微镜能够观察到单个分子，并且具有高度的灵敏度和分辨率。
近年来，还出现了许多基于荧光显微镜的超分辨率成像技术，进一步提高了显微镜的分辨率。
二、优点高分辨率显微镜相较于传统显微镜具有以下一些显著优点。
1. 高分辨率：高分辨率显微镜能够观察到微观结构的细节，甚至达到纳米级别的分辨率，为科学研究和工业应用提供了更为精确的观察手段。
2. 非破坏性：与传统的显微镜不同，高分辨率显微镜在观察样品时不会对其进行破坏性的操作，保持了样品的完整性，方便进一步的实验和研究。
超高分辨率电子显微镜的研究与应用
超高分辨率电子显微镜的研究与应用对于生物学、材料科学、化学等领域的研究来说，电子显微镜具有不可或缺的作用。
而传统的电子显微镜虽然分辨率较高，但是由于镜头的物理限制，无法达到超高分辨率。
然而，随着技术的不断发展，超高分辨率电子显微镜技术得到了重大的突破，被广泛应用于各个领域的研究中。
超高分辨率电子显微镜，即高分辨透射电子显微镜，简称HRTEM，它的分辨率比传统透射电镜高出数倍甚至数十倍。
HRTEM所使用的透射电子束是以电子为信号的一种成像技术，其分辨率已经达到了原子尺度，主要原因在于它的探针尺寸比其他成像技术小得多。
HRTEM技术应用广泛，其作用包括但不限于：1. 分子结构研究：如蛋白质、DNA等生物大分子的结构分析，以及复杂有机和无机化合物的分子结构分析等。
2. 生物医药研究：HRTEM技术在生物医药研究中的应用主要包括纳米药物传递、病毒抗原分析、疫苗研制等。
3. 催化剂研究：HRTEM能够捕捉“原子级或原子级以下”尺寸的结构和物化特性，成为明晰催化剂表面反应原理、优化催化剂性能等方面的有力工具。
4. 纳米材料研究。
HRTEM技术对于纳米结构体系研究也是十分重要的，可以获得纳米材料的晶格参数、缺陷、位错、晶界等信息。
5. 符合材料研究。
通过HRTEM技术可以得到材料的微观组织结构、晶格畸变、界面缺陷等信息，从而为材料设计提供了必要的理论支持。
为了实现HRTEM技术的高分辨率，还需要在样品处理、镜头性能等多个方面进行技术改进、创新，同时还需要进行数据分析和模拟，来实现更精确、更复杂的分析工作。
总的来说，超高分辨率电子显微镜技术的不断发展，为科学技术的进步和发展打下了坚实的基础，它为我们提供了一个探索微观结构的新视角，其广泛的应用还将持续带来许多新的惊喜和发现。
超分辨率显微镜在化学研究中的应用
超分辨率显微镜在化学研究中的应用超分辨率显微镜（Super-resolution microscopy）是近年来发展起来的一种显微镜技术，具有突破传统显微镜分辨率限制的能力，广泛应用于化学研究领域。
本文将介绍超分辨率显微镜在化学研究中的应用，并探讨其对化学领域的意义。
一、超分辨率显微镜的原理及分类超分辨率显微镜绕过了通常显微镜分辨率的极限，使研究人员能够观察到更小的细节和结构。
它基于多种原理和技术，包括近场光学显微镜（Near-field optical microscopy）、刺激发射退火显微镜（Stimulated emission depletion microscopy）、结构光显微镜（Structured illumination microscopy）等。
这些技术通过不同的途径提高了显微镜的分辨率，并在不同的研究领域中发挥着重要作用。
二、超分辨率显微镜在化学成像中的应用1. 动态观察化学反应超分辨率显微镜在化学反应的动态观察中发挥着重要作用。
传统显微镜对于观察化学反应中的微观细节常常有限，而超分辨率显微镜能够提供更高的分辨率，可以实时观察到化学反应的发生过程。
这对于研究反应机理以及优化反应条件有着重要意义。
2. 分子相互作用研究超分辨率显微镜在分子相互作用研究中也起到了重要作用。
通过标记特定分子并利用超分辨率显微镜的高分辨率特性，研究人员可以观察到分子在空间尺度上的相互作用和行为，揭示了许多分子相互作用的细节。
这对于理解分子相互作用的机制以及新药物的研发具有重要意义。
3. 单分子荧光成像超分辨率显微镜还可应用于单分子荧光成像。
传统显微镜常常受到荧光信号的叠加和漂移的限制，而超分辨率显微镜通过准确的荧光成像技术，可以在单个分子水平上观察和定量分析。
这为研究生物分子的行为和药物的靶向效应提供了有力手段。
三、超分辨率显微镜在化学领域的意义超分辨率显微镜的应用使得化学研究人员能够观察到更小尺度的细节，从而深入探究物质的微观结构和反应行为。
超分辨率显微镜的使用步骤和技巧
超分辨率显微镜的使用步骤和技巧超分辨率显微镜是一种现代化的显微成像技术，可以提供超过传统显微镜分辨力的图像。
它的使用可以在细胞、分子和材料科学领域带来许多重要的应用。
本文将介绍超分辨率显微镜的使用步骤和一些技巧，确保您能够正确并有效地使用这一先进的仪器。
使用步骤：1. 准备样本：首先，选择适合超分辨率显微镜分辨率的样本。
样本应具备较高的荧光信号和较低的背景噪声水平，以获得清晰的图像。
微胶束、活细胞、单分子和纳米颗粒都是常见的适用样本。
2. 标记样本：在使用超分辨率显微镜之前，样本需要进行荧光标记。
合适的标记方法包括使用荧光探针、染料或免疫标记技术。
确保标记物能够与您感兴趣的结构高度特异性地结合。
3. 调整光路参数：在使用超分辨率显微镜之前，您需要调整光源、检测器和镜片的位置和设置。
请根据仪器的操作手册进行正确设置，以确保光路参数的准确性和优化，以获得高分辨率图像。
4. 调节显微镜焦距：超分辨率显微镜需要在样品和镜片之间形成最佳焦距。
通过调节显微镜的焦距来确保样品在成像时处于最佳状态，并获得最高的分辨率。
5. 选择合适的成像模式：根据样品类型和感兴趣的结构，选择适合的超分辨率成像模式。
常见的成像模式包括结构照明显微镜（SIM）、刺激发射显微镜（STED）和单分子显微镜。
6. 获取图像数据：根据您的设置，在显微镜软件中选择适当的参数并开始图像采集。
确保采集图像时设置适当的曝光时间，以避免图像过曝或过暗。
7. 图像处理和分析：获取图像后，您可以借助图像处理软件进行优化和增强。
常见的图像处理软件包括ImageJ、Fiji和MATLAB等。
对于超分辨率显微镜图像，通过去卷积和增强对比度等方法，进一步提高图像质量。
技巧：1. 样本准备的关键性：在使用超分辨率显微镜之前，样本的准备至关重要。
确保样品固定、染色和标记过程正确，以避免破坏或变形样品。
2. 避免光破坏：超分辨率显微镜对光的要求很高，所以在进行成像时，应避免长时间暴露在强光下。
超高分辨率显微镜的工作原理与样品制备技术
超高分辨率显微镜的工作原理与样品制备技术超高分辨率显微镜是一种先进的显微技术，可以在纳米尺度下观察和研究样品的细节。
本文将介绍超高分辨率显微镜的工作原理，并探讨样品制备技术。
一、工作原理超高分辨率显微镜的工作原理基于单分子荧光成像和光学原理。
其主要分为以下几个步骤：1. 激发：通过激光器对样品进行激发，使样品中的荧光标记物进入激发态。
2. 发射：被激发的荧光标记物会发射出一束具有特定波长的荧光光子。
3. 光子检测：利用高灵敏度的光学探测器来检测和记录荧光光子的位置和强度。
4. 定位：通过检测到的荧光光子，利用图像处理算法对其进行定位，从而获得超高分辨率的图像。
二、样品制备技术样品制备是超高分辨率显微镜研究中至关重要的一步。
以下是一些常用的样品制备技术：1. 标记物选择：根据研究目的选择适合的荧光标记物，并通过化学反应将其与待测物相结合。
2. 固定化：将待测物固定在载玻片上，以保持样品的形态结构和稳定性。
常用的固定化方法有化学固定化和凝胶固定化等。
3. 样品清洁：确保样品表面无尘和杂质，以避免影响图像质量。
可以使用超声波清洗等方法进行清洁。
4. 样品切片：对于生物样品，常需要制备薄片以便观察。
切片技术包括常规切片、冷冻切片和超薄切片等。
5. 荧光染色：将样品染色以增加荧光信号的强度和对比度。
常用的荧光染色方法有免疫染色、荧光标记蛋白质等。
6. 抗褪色：荧光信号的褪色是超高分辨率显微镜观察中常见的问题。
为了抵抗荧光信号的褪色，可以使用抗褪色剂。
总结：超高分辨率显微镜通过荧光成像和光学原理实现了对样品细节的高分辨率观察。
样品制备技术在超高分辨率显微镜研究中起到至关重要的作用，包括标记物选择、固定化、样品清洁、样品切片、荧光染色和抗褪色等步骤。
这些技术的应用可以帮助科研人员更准确、高效地研究样品，并为各个领域的科研工作带来更多可能。
超高分辨率显微镜技术的发展和应用
超高分辨率显微镜技术的发展和应用超高分辨率显微镜技术是指可以观测到原子甚至分子级别的显微镜技术。
这项技术的发展可以追溯到20世纪50年代，当时由于受制于光学的分辨率极限，人们认为无法观察到比光学分辨率更小的物体。
然而，在20世纪初，电子显微镜技术的出现突破了光学分辨率的限制，使得人们能够观察到比光学分辨率小得多的物体。
而大约在20世纪八十年代，随着扫描隧道显微镜的问世，超高分辨率显微镜技术得到了实质性的突破。
这门技术的应用领域非常广泛，下面我们从不同的维度来看一下超高分辨率显微镜技术的发展和应用。
一、技术发展历程超高分辨率显微镜技术的发展历程非常漫长，且历史悠久。
早在19世纪初期，人们就已经开始尝试用光学显微镜观察20纳米以下的物体，但是由于受制于光波的波长，一直没能取得太好的成效。
在这之后，电子显微镜的问世，让我们开始能够看到原子结构的内部构成，进而培养了人们对于探究小世界的兴趣。
而在20世纪80年代以后，由于扫描隧道显微镜、原子力显微镜的问世，让人类首次能够真正地观察到大于光学分辨率的细微物质结构，这极大地推进了科学研究。
二、技术应用领域超高分辨率显微镜技术在材料科学、生物医学、信息技术、纳米科学等多个领域都有重要的应用。
在材料科学方面，超高分辨率显微镜技术可以用来观测材料的结晶形貌和元素型谱，这对我们研究材料的性质和制备有着至关重要的意义。
比如在钢铝焊接领域，我们可以利用扫描电镜观察焊缝的形貌和元素分布，以此直观地判断焊接质量。
在生物医学方面，超高分辨率显微镜技术可以用来观测细胞结构、分子、蛋白质等或微观的细节，这对人们的健康和医疗保健有着深刻的影响。
例如，在癌症分子研究领域，科学家利用原子力显微镜观察DNA分子的三维结构，为癌症的基因诊断和治疗提供新的思路。
此外，在信息技术和纳米科学领域中，超高分辨率显微镜技术也得到了广泛的应用。
对于纳米科学研究而言，小至原子和分子水平的精细操作对于实现量子耦合和量子操控至关重要，而超高分辨率显微镜技术能够提供千分之一米的高分辨率，对于实现量子控制具有积极意义。
超分辨显微镜的原理与应用
超分辨显微镜的原理与应用超分辨显微镜是一种专业显微镜，可以在微观尺度下获取高质量的图像。
它的原理是利用高分辨率的镜头和光学技术，以及计算机图像处理技术，将显微镜的分辨率提高到更高的水平。
本文将讨论超分辨显微镜的原理、不同类型的超分辨显微镜、以及它们在不同领域的应用。
1. 原理传统的显微镜分辨率受到光的衍射极限的限制，即衍射极限 =光波长/2倍数口径。
在可见光范围内，约为200nm。
这意味着，如果要观察更小的物体或细节，必须使用具有更高分辨率的显微镜。
超分辨显微镜通过控制光源，镜头和样品之间的距离，以及使用相干/非相干光等技术，来突破衍射极限，提高显微镜的分辨率。
其中一个超分辨技术是“局部化发光显微镜（STED）”。
它利用一个圆形光束，中心较亮，离中心越远光强越弱，将样品的荧光杂乱的发光压缩到仅微小的区域，然后只在需要的区域内发光，来取得超高分辨率的图像。
2. 类型超分辨显微镜有许多不同类型。
例如：（1）近场扫描光学显微镜（NSOM）：使用尖端放大光线并将其聚焦到样品表面，通过扫描探针与样品表面之间的交互，可以获得比传统显微镜更高的分辨率。
（2）荧光共焦显微镜（FLIM）：通过观察样品中发射的荧光，将物质的一些基本特性转化为显像检测。
FLIM 的目标是识别被标记的蛋白质并检测其位置和数量。
这是神经科学和生命科学领域中研究单个分子的最常用术语之一。
（3）结构光三维显微镜：使用光栅，如果满足振动条件，则会实现照明图案的重叠。
当将此技术与场深远比其深的荧光片复合使用时，可以获得高分辨率、三维成像。
（4）单分子显微镜（SMM）：可以捕获单个光点的显微镜技术，并因此提供高解析度、高灵敏度、高可扩展性并且适用于广泛的样品类型。
3. 应用超分辨显微镜可以在许多领域发挥作用。
其中一些包括：（1）药物研究：用于分析不同药物分子的数量、结构和活性，寻找更好的药物设计概念。
（2）生命科学：用于研究分子交互、细胞结构和生物过程，提供有关生命科学中基本生物物理学原理的理解。
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• Liphard现在正与Betzig以及其他一些研究人员一起研究大肠杆菌的 趋化现象（chemotaxis）。Liphard还提到：“我从没想到这项技术 达到的分辨率有这么高，可以如此清楚地看到细胞内单个蛋白质分 子的定位，甚至还能定量。而对我来说，每天的工作实际上就是在 弄清楚这些蛋白质在什么位置，什么时候存在。而之前我们的研究 主要采用间接方法。但超高分辨率显微镜这项新技术是我从事科研 工作这么长时间以来，感触最深，获益最大的一项科技成果。”
• 1994年，Hell在《光学快报》（Optics Letters）上发表了他 关于STED的理论文章。不过直到多年以后，这项理论才得以在 实践中被证实。在那段时间里，Hell一面继续研究工作，一面 四处奔走筹集科研经费，还卖掉了他4Pi 显微镜的专利。 • • 但是那个时候Abbe的衍射极限理论仍然在学界占统治地位，许 多物理学家对Hell的理论都持怀疑甚至批评态度，因此他们也 都将研究重点放在其它的成像技术上。尽管如此，Hell还是在 1997年与马普生物物理化学研究所签订了一份长达5年的合同， 以继续他的STED研究。 • • 1999年，Hell将他的研究成果分别投给了《自然》（Nature） 杂志和《科学》（Science）杂志，不过都被退稿。当时两位杂 志的主编都没有意识到他的研究成果将会改变整个显微镜领域。 • • 直到2000年，事情才终于有了转机——《美国国家科学院院刊》 （PNAS）发表了Hell的科研成果。采用 Hell的STED技术，人们 第一次得到了纳米级的荧光图像。Hell的工作由此获得了广泛 的肯定，2002年，他获得了马普研究所的终身职位。从此， Hell一直在马普研究所从事成像技术的研究工作。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2 科研竞赛
• 2006年，超高分辨率显微镜研究行业翻开 了新的篇章。Eric Betzig、Harald Hess以 及Lippincott-Schwartz小组、Samuel Hess 小组以及庄晓威（音译）科研小组几乎同 时报道了他们提高显微镜分辨率的科研成 果，下面分别介绍这三个小组的研究情况。
• 早在上世纪80年代中期，当时 师从德国海德堡大学 （University of Heidelberg） 一位低温固态物理学家的 Stefan Hell就已经发现，如果 不是像常规那样使用一个透镜 聚焦，而是将两个大孔径的透 镜组合在一起聚焦，就可以提 高光学显微镜的分辨率。 Stefan Hell是首位发现这一现 象的研究人员 • Hell于1990年顺利完成了他的 博士学业，但同时，这也意味 着他将无法再凭借奖学金的资 助进行研究了。Hell最终决定 独自一人继续在家研究以上的 发现，并最终成功发明了4Pi显 微镜。
• 紧随STED这项开创性工作之后， 世界各地实验室等研究机构内陆续 出现了一批高分辨率的显微镜技术。 例如，由珍妮莉娅法姆研究学院 （Janelia Farm Research Campus） 的物理学家兼工程师Mats Gustafsson领导的研究团队开发 出了结构光学显微镜（structuredillumination microscopy, SIM）。 • 同年，Gustafsson小组得到了HeLa 细胞中肌动蛋白细胞骨架的图像， 他的图像相比传统显微镜的图像来 说，在测向上的分辨率提高了2倍。 随后，Gustafsson小组又使用非线 性技术将整体分辨率提高了4倍。
2.1 Eric Betzig、Harald Hess以及 、 以及Jennifer 以及 Lippincott-Schwartz小组 小组
2005年夏天，细胞生物学家Jennifer Lippincott-Schwartz卸下了她在美国马里兰州贝 塞斯达美国国立卫生研究院（HIV）暗室里的红色灯泡。Lippincott-Schwartz正在为 赋闲在家的两位物理学家Eric Betzig和Harald Hess腾出空间，筹备实验室。正是这 两位物理学家研制出了光敏定位显微镜（photoactivated localization microscopy, PALM），他们的这种新产品能将荧光显微镜的分辨率提升至纳米级水平。
3 超高分辨率显微镜的成绩
• 已经开始使用这些显微镜的生物学家对这项技术都表示出了极高的 热情。Jan Liphardt这位在美国劳伦斯伯克力国家实验室 （Lawrence Berkeley National Laboratory）工作的生物学家，还 清楚地记得他2006年第一次在《科学》（science）杂志读到Betzig 的那篇有关PALM技术的论文时的激动心情。当他看到那幅线粒体蛋 白的图像时立刻想到了该技术可以用于他自己的微生物研究领域。 • Liphard说道：“通常，我们得到的大肠杆菌荧光图像都只有20像素， 甚至更低，现在突然有一幅几千像素的图片摆在你面前，你可以想 象那是一种什么感觉。”
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2.2 Samuel Hess小组 小组
• Samuel Hess小组是上述三个小组之一。Hess是美国缅因州立 大学（University of Maine）物理系的助理教授。2005年夏天， Hess一直在和他们学校的化学工程师和生物学工程师，就如何 提高观察活体细胞脂筏结构的分辨率等问题进行交流。 2005年的一个夏夜，Hess被邻居家举办舞会的声音吵醒。半睡 半醒的Hess走下楼来，随手画了一副设计图，他的这种设计是 需要借助荧光标记的蛋白质来显示细胞形态的。第二天早上， 当Hess重新翻看这幅非清醒状态绘制的潦草的设计图时，不由 得大笑起来。不过令人吃惊的是，他的这幅设计图竟然没有一 点问题。于是他把这幅图拿给物理系的同事检查，但同事也没 有发现任何问题。 接下来，Hess就按照他的设计图开始制作显微镜了。此时，他 的科研经费所剩不多，而结题时间转眼就到。因此，Hess等人 以最快的速度组装好显微镜，并进行了试验。同时，在不到两 天的时间里，缅因州立大学表面科学技术实验室的同事就为 Hess制备好供检验显微镜效果的蓝宝石晶体样品。 2006年，《生物物理学期刊》（Biophysical Journal）刊登了 Hess小组的科研成果。他们将这项研究成果命名为荧光光敏定 位显微镜（fluorescence photoactivation localization microscopy, FPALM）。2007年，Hess小组证明了FPALM可以分辨细胞膜 脂筏上的蛋白质簇。
•
现在就职于美国弗吉尼亚州阿士伯恩霍华德休斯 医学研究所珍妮莉娅法姆研究学院（Howard Hughes Medical Institute’s Janelia Farm Research Campus in Ashburn, Virginia）的 Hess承认，自己与Betzig对生物学的认识都不深。 不过近15年来，他们一直都在努力，希望能运用 生物学知识获取高分辨率的显微图像，但是没有 取得明显进展。然而，当Hess和Betzig了解到 Lippincott-Schwartz和George Patterson在2002 年发明的光敏绿色荧光蛋白（photoactivatable green fluorescent protein）后，他们知道他们已 经找到了解决问题的关键所在。 回想起当时的情形，Lippincott-Schwartz指出： “他们当时非常激动。我还记得当我们得到第一 张显微图像时，你根本无法看出那是什么东西。 直到我看到他们将荧光图像和电镜图像叠加之后 的结果才相信，我们成功了。我当时觉得这一切 真是太神奇了。” 2006年，Eric Betzig、Harald Hess以及 Lippincott-Schwartz小组在《科学》（science） 杂志上发表了他们的PALM研究成果。使用PALM 可以清楚得看到细胞黏着斑和特定细胞器内的蛋 白质。
• 自从1873年Ernst Abbe 第一次发现光学成像具 有衍射限制现象以来， 物理学界就公认，显微 镜的分辨率具有极限， 该极限与光源的波长有 关。 • 直到一个多世纪之后， 罗马尼亚物理学家 Stefan Hell推翻了这一 观点。他是首位不仅从 理论上论证了，而且用 实验证明了使用光学显 微镜能达到纳米级分辨 率的科学家。
4 展望
• 自从2006年STORM技术和PALM技术问世以来，科技工作者就 一直在不断努力，对它们进行改进、完善和提升。 • 2008年，Lippincott-Schwartz的研究团队将PALM技术和单颗粒 示踪技术（single-particle tracking）结合，成功地观测到活体细 胞胞膜蛋白的运动情况。 • 同年，庄小威研究组在《科学》（science）杂志上也发表了他们 的3D STORM成像成果，该技术的空间分辨率比以往所有光学3D 成像技术的分辨率都要高出10倍。论文中，他们展示了用3D 10 3D STORM成像技术拍摄的肾细胞内微管结构图和其它的分子结构 图。随后，他们又进一步将该技术发展成了多色3D成像技术 （multicolor 3D imaging）。 • Gustafsson，还有其他一些科研工作者使用3D SIM技术（该技术 使用3束干涉光，而不是常见的2束）观察到了共聚焦显微镜 （confocal microscopes）无法观测到的哺乳动物细胞核内结构。 • 位于德国的世界知名光学仪器制造公司蔡司公司进一步发展了 SIM和PALM技术，不过他们将PALM称为PAL-M。蔡司公司预计 将于2009年末推出全新的成像产品。
• Hell的努力没有白费，他的冒险终于获得了回报。1992年， Hell第一次用他的4Pi高分辨率显微镜证明了他的确能将传统 光学显微镜的分辨率提高3-7倍。然而，尽管Hell提高了Z方向 的分辨率，他还是没能突破衍射极限的限制。
• 此后不久，Hell又在芬兰土尔 库大学（University of Turku）得到了他的第二个博 士后职位。一个星期六的早晨， Hell正躺在研究生公寓的床上 看一本有关光学量子理论的书， 突然，灵光一闪，Hell脑海里 浮现了一个想法：如果使用一 种合适的激光，仅激发一个点 的荧光基团使其发光，然后再 用一个面包圈样的光源抑制那 个点周围的荧光强度，这样就 只有一个点发光并被观察到了。 Hell给他的这项发明取名STED， 即受激发射损耗显微镜 （stimulated emission depletion）。有了这个想法 后，Hell立即行动，冲进实验 室进行相关实验。每当回想起 当时的心情，Hell都会觉得那 是他科研生涯中最激动的时刻。