核酸碱基薄层层析双波色谱扫描分析
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条件：ｘ 二 ２ ５ｍ， 二 ３０ｍ，反射法，线 Ｓ ６ｎ Ａ Ｒ ７ｎ
析用纤维素 （ｌｌｅ ｌｒ ３０ Ｖ ５）德 ｃｌ ｐｖ Ｍ ０Ｕ ２４， ｅｕｓ ｕｅ Ｎ ｏ
将各板中种类和 国产。 狡甲基纤维素钠为上海化学试剂厂产。 性扫描。 用量高法计积分值， 含量均相同的碱基之积分值加和平均，求各碱 其他试剂为Ａ ， Ｒ 水为重蒸水。 Ｍ 作出以 ２仪器 ． 日本 岛律 Ｃ －１ Ｓ９０双波长 色 基积分值和 ｎ 之间关系的回归方程， 积分值（ 任意单位） Ｙ ｎ 为Ｘ的回归直线， 为 ， Ｍ 谱扫描仪。 （）样品测定：加 ２ Ｄ Ａ样品和 ２ １ ２ ｍ Ｎ ｇ ｍ ８ Ｇ ７玻璃制的 ２ １ ｍ 安瓶中，按 （）制板： 取 １． １ ６ ８硅 胶 Ｈ， ｇ ２ １ ＭＮ ８ 多甲酸于 Ｇ １ ． ８ ３Ｏ Ｖ 纤维素， ． ０Ｕ ２４ ５ ０ 外挟甲 ５ 基纤维素钠（ 离 Ａ ｒ Ｂｎｉ ｔ 法水解，依标准碱基溶液配法 ａ ｎ ｄ ｈ， ｏ ｅ ｃ４ ．１ ２ ｏ １ 心去除悬浮物） ０ ｌ于匀浆器中匀浆 ５ ９ｍ ， 分钟， 溶成 ０ ｍ 样品液。取不同量的样品液与 ３ 标准碱基混合液点于同板的不同点上，层析和 速度以浆液不溅出为度， 抽气， 均匀涂布在 ６块 ２ Ｘ ｃ ０ Ｏｍ或 ４ ２Ｘ ｃ ｌ 块 ０ ５ １ ｍ的平整清洁的玻板
会 讯
遗传工程在工业上的应用讨论会简讯
或酵母中表达。人前胰岛素的研究在细菌中得到高效
表达 ， 前胰 岛素 蛋白的产量 已占菌 株总 蛋 白 的 ４％， ０ 达 到了可以投人生产的水平。 此外 口蹄疫病毒、 人绒 毛膜促性腺激 素抗生育疫 苗、 抗菌素、 氨基酸、 传染性 腹泻病疫 苗、 尿激酶等的基 因工程也 已获得阶段成果。
时间 １５小时。 层析后风千或吹干，于 ２ ４ｍ ． ５ｎ
（ 中国科学院成都生物研究所）
紫外灯上定位，画出各碱基斑点的位置，计算
材料和方法
（ 一）主要试剂及仪器
１试剂 ． 碱基 Ａ， Ｃ Ｔ 和 Ｕ，均为 Ｇ （）标准曲线绘制：准确称取并按上法配 １
上。
（ 二）分析方法 １薄层层析分离 ．
即为标准曲线。
（）薄层分离：称取 ２ Ｘ１３ （ｎ 二 ２ ５ ０ Ｍ Ｍ ｎ １
Ｊａ ｅｇ ｕ ａ ： ｎｌｓ ｏ Ｎｕｌｃ ｃ Ｂ ｓ ｉ Ｃ ｎ ｙ ｅ ｌ Ａ ａ ｉ ｆ ｃｅ Ａ ｉ ａｅ ｈ ｔ ． ｙ ｓ ｉ ｄ ｓ 饰 Ｔ ｉ Ｌ ｙｒ ｈｏ ａ ｇａ ｈ ａ ｄ ａ Ｗａｅ ｈｎ ｅ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｐ ｙ Ｄｕｌ ｖ－ ａ ｏ ｎ ｌｎｔ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｍ ａ ｅｇｈ ｏ ａ ｇａ Ｓ ｎ ｈ ｏ ｃ
结果和讨论
Ｃ －）碱甚菠层层析结果 如 表 １和 图
定量分析， 灵敏度也高， 可测小于ｌｇ ， 的碱基。 ｕ
由于有明显的线性关系，所以在此范围内如果 样品和标品积分值接近， 可由样品 ｎ 二 样品 Ｍ
积分值 （ 意单位） 任
Ｕ
表 １ 碱基薄层层析 Ｒ 值 ，
碱基 Ｒ ｔ
Ａ ０． ４ ５
Ｇ ｃ Ｔ
Ｃ 回归方程
４
Ａ回归方程
ｙ＝ ． ０ １２ Ａ ３ ９＋ ．２ ５ ９Ｘ
图 ２ 各碱 基标 准曲线
积分值Ｘ１／ ５标品积分值， 直接算出样品碱基含 量， 省去作标准曲线， 使工作更为简便。 ２分析结果 ． 如表 ２ 示。由表 ２ 数据可 看出，Ｇ＋Ｃ （ ）克分子外最大标准误差在１ ６ ０ ． ６ 以下， 相对误差土１ ８ ． ％以下， ２ 各碱基的最大标 准误差在 １ ０ ０ 以下，相对误差 ４ ２ ． ５ ． 务以下， ４ 符合一般光学分析法的误差范围。 另外， 将本 实验测得的小牛胸腺Ｄ Ａ Ｇ＋Ｃ 克分子％， Ｎ（ ） ４． 多，与文献［ ４０ ２ ［ ３ １ 报道的不同作者的常法分析
３
扫描测定后，选取积分值与标品积分值相差不 大的样品量作为测定点样量。 取 ３ 块薄层板， 每板点标品 ３ 共 ３ 样品按预测量点样， 砂， 点， 亦为 ３ 照前层析和扫描， 点， 分别求出各板中标 品和样品相应碱基积分值的平均值，在相应碱 基标准曲线上找出标品积分值和 １ｎ 所在的 ５ Ｍ 点，从该点推出标准曲线的平行线，即校正曲 线，其上由样品积分值对应的Ｘ值就是样品的 ｎ Ｍ数。 如果样品和标品积分值接近，也可由 样品 ｒ ｉ ｍ二样品积分值 Ｘ１／ ５标品积分值， 直接
混合物， 各斑点很明晰， 效果稳定， 重现性很好， 既可用于 Ｄ Ａ及 Ｒ Ａ 碱基分离， Ｎ Ｎ 又可用于 此两种核酸混合物的各碱基测定。在薄层板的 算出来。 将测得的 Ａ， Ｃ Ｔ之 ｎ 数，即 ＡＭ 两端可各作一次分析， Ｇ，， Ｍ ｎＮ 省时省原料。 （ 二）定量分析 Ｇｍ ｎ、 ｎ ｎＮ ＴＭ代人下式： ＣＭ １标准曲线如 图２ ． 示。回归方 程的 ‘ 检 （ Ｇ＋Ｃ 克分子多 ） 验：查 ｔ 表，ｄ ＝ｎ ２ ３ ｔｏ～５ ４， ｆ 一 ～ ， ｏ ． ｉ ． １而 ８ ～一 －ＧＭ ２一 一 ｘ ０ ｎ土卫－ ｍ一 － １ ０ Ａ Ｍ＋ Ｇ Ｍ＋ ＣＭ ｎ ｎ ｎ ｎ＋Ｔ Ｍ 现在Ａ的 ， ３ ３ Ｇ为 １． ， 为 １． ， ～３． ， ４ ７６ Ｃ ７９ ９ ３ 就得到分析结果。把 ３ 块薄层板测得的上述数 Ｔ为 ９ ６ 均＞１０ 故 Ｐ＜ ０ １ ．， ２ ０１ ． ， ． ，差异极为显 ０ 值平均， 便是该 Ｄ Ａ 的碱基组成。 Ｎ 著。这表明 ５ ５Ｍ范围内线性关系好， －２ｎ 宜作
遗传
Ｈ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） ３ Ｅ Ｅ ＩＡ （ ｉ ｇ ６ ＂ Ｂｊ ｎ ４ －５ ８ １ ４ ９
核 碱 层 析 波 谱 描 析 酸 基薄 层 双 色 扫 分
贾成 禹
核酸组成成分及衍生物的分析除常用的电 泳、纸层析和薄层层析洗脱比色法外，近年来 又出现了双波长色谱扫描法和高压 液相层析 法［１ ２ 。但已报道的双波长色谱扫描法测定的 ， ５ 碱基种类不多，在 测定 Ｄ Ａ ＋ Ｎ （ Ｇ Ｃ ）克分 子外方面， 尚未见报道。 我们在实验中摸索出 分离核酸碱基效果好的硅胶薄层析，并考查了 双波长色谱扫描分析法的准确度。
窦永泽
１－ Ａ， Ｃ Ｔ， ０９ Ｍ） Ｇ， Ｕ， ， 盛于不同容器中， 再分 别称取同样量的上述各碱基混合于一个容器， 各加 Ｉ １ １Ｎ ａＨ 液助溶， ｍ 水， 滴 ２ Ｎ Ｏ ｌ 后加 １ 滴浓 ＨＣ，用 ０１ Ｈ Ｉ稀释到 ５ １ 将上 ｌ ．Ｎ Ｃ ｍ。 述硅胶薄层板于 １５ ００ Ｃ活化半小时，按常法把 单个及混合的碱基溶液分别点在不同的点 上， 用饱和正丁醇上行展开至前沿 １ｃ 处取 出， ２ ｍ
法比较， 本法简便、 快速、 灵敏、 可靠。 参 考 文 献
结果为４． －４． 并相比， １０ ４ ０ ６ ８ 也说明本法结果
可靠。
衰 ２ 小牛脚腺 Ｄ Ａ 玻 Ｎ 签分析橄据
相对误差〔 ＿ ４ Ｕ ‘ ７ ３ 卜 ４ ， １７ ％ ， ，｝ “ ・｝ ．｝ ． 土 、 ！ 。士 ！ “土 ４ 士 ２ 土 ‘
层析纯， 含量 ＞９多；Ａ Ｕ德国产， ８ ， Ｃ为 Ｂ Ｈ Ｄ 产， ， Ｇ Ｔ分别为上海东海制药厂和恒信化工厂 产。小牛胸腺 Ｄ Ａ为上海牛奶公司产。薄层 Ｎ 层析用硅胶 Ｈ， 为青岛海洋化工厂产。薄层层
成各种碱基浓度为 ５ 冈 的 Ａ Ｇ Ｃ Ｔ标 ｎ Ｍ／ ， ， ，
准碱基混合液， 取活化的 ３ ２ Ｘ ｃ 硅胶 块 ０ １ｍ ０ 板， 每板点 ５ 分别为 １ ２ ３４ ５ 按前层 点， ， ， ， ， 冈， 析， Ｃ－ １ 用 Ｓ９０双波长色谱扫描仪测定。测定
本报告摸索出的核酸碱基硅胶薄层层析双 波长色谱扫描分析， 只需 １ 小时的单 向层离 ． ５ 就可把 Ａ Ｇ Ｃ Ｔ Ｕ彻底分开， ， ， ， ， 扫描测定半 小时即可完成， 可测低至 ５ 即 Ｉ ｎ Ｍ（ ｆ ｕ ｇ以下） 的 碱基，经统计处理完全符合一般光学分析法的 准确度（ 相对误差士５ ； 多） 溶剂系统简单， 主要 用国产硅胶， 故价廉。所以， 在核酸碱基分析方 面，与现在常用的纸层析和薄层层析洗脱比色
对于纤维素酶、 血浆蛋白、 胸腺素、 家畜和鱼类育种也
提 出了许 多引人注 目的课 题。 会上 ，就如 何在我 国迅速发 展基因工程间题组织 了专题座谈并提 出了建 议： （ ） １ 进一步加强遗 传工程 的学术交流活动 ， 织人员迅速的报道国外情报信息。 组 （） ２扎扎实实抓好全国 ３ 个生物工程中心的建设 ， 提出 建议， 准研究方向。（） 好遗 传工程研究人材的培 看 ３抓 养。（） 好科研 、 ４抓 教育、 产三结合。 （） 生 ５希望改善国 内工具酶 、 同位素的供应， 从长远来看应建立 自己的工
０． ４０
０３ ．０
０ ７４ ．
０６ ．４
Ｙ二 。 ４＋ ． １ ‘ 一 ． ０ １ ４Ｘ ８ ３
Ｔ 回 归方 程
Ｙ二 １ ２＋ ． ７ ： 一 ． １ ６ ２ ５ ２ Ｘ
回归方程
宁 二 ． ０ ２４ Ｘ 。 ， ８＋ ． ４ ８ ４
散点
图 １ 薄层析谱 １ ．小牛胸腺 ＤＮ 水解物 ： ． 十 Ｇ＋ ｃ十 Ｔ ； Ａ ２（ Ａ ） ３ Ｃ ＋ Ｇ＋ ｃ＋ Ｔ＋ Ｕ ， ． Ａ ） 在 ２ ４ｍ 紫外灯下显影时，由于该仪器形状限 ５ｎ 制， 无法用一般照相机拍摄， 此照片系在 ２４ｍ 紫 ５ｎ 外分析灯显影时用铅笔勾画出各斑点后 ， 自 然 光 在 照下拍摄结果。
中国遗传学会最近在杭 州召开了遗传工程在工业 上的应用讨论 会。 会议主持人 李载平教授在发言 中指 出， 因工程 与核子物理等学科相比是小学 科， 基 花钱不 多， 收效极大。 他说， 但 当前 世界上开展的遗传工程研 究仅仅是个开始，我们 需要做 的而又 能够做的工作很 多， 一定要开 阔视野。 例如用基因工程制 造探针技 术， 必将形成一个新的产业。它 可以用特异性 Ｄ Ａ 片段 Ｎ 的分子杂 交法进行各种 目的基因的检测 ，其灵敏度将 比 现在常 用的免疫沉淀法高出 １００ ，０ 倍。这种探针可 用于 检测遗传病、 食品检验检查沙门 氏菌 污染， 甚至制 造探针 柱预防血液受乙型肝炎病毒或其它化学有害物 质的污染。 其它诸 如建立分泌型载体 系统 ， 建立合适 的发酵和产物提取工艺 、 降低成本 、 增加收益等等 ， 将 有大 量工 作可做。 在会 议上的学术交流表明，近几年来我国遗传工 程 的研究 工作在某些项 目上已取得可喜成果。例如乙 型肝 炎病毒、 干扰 素等不 仅得到克隆， 而且 已经在细菌
１ 示。 对于核酸碱基薄层层析分离， 大多数文 献是使用纤维素板，据我们多方实验不如硅胶 板层析好。聚酸胺薄层析［可以把 Ｒ Ａ碱基 １ １ ３ Ｎ Ａ Ｇ Ｃ Ｕ分开 （ ， ， ， Ｇ在原点） 但未报道 Ｄ Ａ ， Ｎ 碱基中的Ｔ层析数据。桧山千都子等［的硅胶 ［ ｚ ］ 薄层层析分离的碱基种类也很少。本实验根据 前人的经验， 摸索出的硅胶薄层层析法， 只经单 向展层就彻底分开了 Ａ， Ｃ Ｔ， 种碱基 Ｇ， Ｕ ， ５
平 值 一． 均 ！７ １ ５． ，１． “２ ９ｊ７ ． ９一・’ ７！６ ８ ０ ６ ７７ 标准误差 １ ‘ Ｉ ｝ ・】０９ “” 。５ ｆ． 士 ３ ．｛ ・｝ ・ ０５ 甘１ ２土 “ 士 “ ４
｝
‘ ｎ． ｝ Ｃ 基Ｍ ‘ ） 、 Ｉ ＋ Ａ｝ 。 Ｔ克子Ｉ Ｇ｝ ｝ ｝ ％ 分
测定 次数
｛ １ ０
［ 〕 蔡菊 娥等： １８。 １ ９０ 生物化学与生物物 理进展 ，３： ， （） ６ ５ Ｅ 桧山千都子 ｆ Ｅ ７０药学杂志，８８： ３， ２ ］ ． １ ８ ： ９ ９（ ） １ ２ １ ［ Ｄ． ３ １ ０ ．佐登 （ 嘉钟等译） １６。核酸的化学 ，第 １ 施 ： ９５ 版， 上海科学技 术出版社 ， ６ ８ 页。 ［ ］ Ａ ｒｎ ｎ ｉ ： ７ Ｍｅ ｏｓ Ｅ ｚｍ ｌｇ， ． ４ ａｏ Ｂ ｄｃ １５． ｔ ｄ ｉ ｎｙ ｏｏｙ Ｖ ｌ ｅ ｈ ９ ｈ ｎ ｏ １ ， ． １ ７５ １ １ ［ ］ Ｋ ｎ ｅ ， Ｋ ｃ ａ ： ８． ｃ ｉ Ａ ｉｓ ｓ ５ ｅ ｎｔ Ｃ ｕ ｅ ｌ １ ０ Ｎ ｌｃ ｄ Ｒ ． ｈ ． ｔ ９ ． ｕｅ ｃ ｅ， ８２） ４６． （０： ３ ７
析用纤维素 （ｌｌｅ ｌｒ ３０ Ｖ ５）德 ｃｌ ｐｖ Ｍ ０Ｕ ２４， ｅｕｓ ｕｅ Ｎ ｏ
将各板中种类和 国产。 狡甲基纤维素钠为上海化学试剂厂产。 性扫描。 用量高法计积分值， 含量均相同的碱基之积分值加和平均，求各碱 其他试剂为Ａ ， Ｒ 水为重蒸水。 Ｍ 作出以 ２仪器 ． 日本 岛律 Ｃ －１ Ｓ９０双波长 色 基积分值和 ｎ 之间关系的回归方程， 积分值（ 任意单位） Ｙ ｎ 为Ｘ的回归直线， 为 ， Ｍ 谱扫描仪。 （）样品测定：加 ２ Ｄ Ａ样品和 ２ １ ２ ｍ Ｎ ｇ ｍ ８ Ｇ ７玻璃制的 ２ １ ｍ 安瓶中，按 （）制板： 取 １． １ ６ ８硅 胶 Ｈ， ｇ ２ １ ＭＮ ８ 多甲酸于 Ｇ １ ． ８ ３Ｏ Ｖ 纤维素， ． ０Ｕ ２４ ５ ０ 外挟甲 ５ 基纤维素钠（ 离 Ａ ｒ Ｂｎｉ ｔ 法水解，依标准碱基溶液配法 ａ ｎ ｄ ｈ， ｏ ｅ ｃ４ ．１ ２ ｏ １ 心去除悬浮物） ０ ｌ于匀浆器中匀浆 ５ ９ｍ ， 分钟， 溶成 ０ ｍ 样品液。取不同量的样品液与 ３ 标准碱基混合液点于同板的不同点上，层析和 速度以浆液不溅出为度， 抽气， 均匀涂布在 ６块 ２ Ｘ ｃ ０ Ｏｍ或 ４ ２Ｘ ｃ ｌ 块 ０ ５ １ ｍ的平整清洁的玻板
会 讯
遗传工程在工业上的应用讨论会简讯
或酵母中表达。人前胰岛素的研究在细菌中得到高效
表达 ， 前胰 岛素 蛋白的产量 已占菌 株总 蛋 白 的 ４％， ０ 达 到了可以投人生产的水平。 此外 口蹄疫病毒、 人绒 毛膜促性腺激 素抗生育疫 苗、 抗菌素、 氨基酸、 传染性 腹泻病疫 苗、 尿激酶等的基 因工程也 已获得阶段成果。
时间 １５小时。 层析后风千或吹干，于 ２ ４ｍ ． ５ｎ
（ 中国科学院成都生物研究所）
紫外灯上定位，画出各碱基斑点的位置，计算
材料和方法
（ 一）主要试剂及仪器
１试剂 ． 碱基 Ａ， Ｃ Ｔ 和 Ｕ，均为 Ｇ （）标准曲线绘制：准确称取并按上法配 １
上。
（ 二）分析方法 １薄层层析分离 ．
即为标准曲线。
（）薄层分离：称取 ２ Ｘ１３ （ｎ 二 ２ ５ ０ Ｍ Ｍ ｎ １
Ｊａ ｅｇ ｕ ａ ： ｎｌｓ ｏ Ｎｕｌｃ ｃ Ｂ ｓ ｉ Ｃ ｎ ｙ ｅ ｌ Ａ ａ ｉ ｆ ｃｅ Ａ ｉ ａｅ ｈ ｔ ． ｙ ｓ ｉ ｄ ｓ 饰 Ｔ ｉ Ｌ ｙｒ ｈｏ ａ ｇａ ｈ ａ ｄ ａ Ｗａｅ ｈｎ ｅ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｐ ｙ Ｄｕｌ ｖ－ ａ ｏ ｎ ｌｎｔ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｍ ａ ｅｇｈ ｏ ａ ｇａ Ｓ ｎ ｈ ｏ ｃ
结果和讨论
Ｃ －）碱甚菠层层析结果 如 表 １和 图
定量分析， 灵敏度也高， 可测小于ｌｇ ， 的碱基。 ｕ
由于有明显的线性关系，所以在此范围内如果 样品和标品积分值接近， 可由样品 ｎ 二 样品 Ｍ
积分值 （ 意单位） 任
Ｕ
表 １ 碱基薄层层析 Ｒ 值 ，
碱基 Ｒ ｔ
Ａ ０． ４ ５
Ｇ ｃ Ｔ
Ｃ 回归方程
４
Ａ回归方程
ｙ＝ ． ０ １２ Ａ ３ ９＋ ．２ ５ ９Ｘ
图 ２ 各碱 基标 准曲线
积分值Ｘ１／ ５标品积分值， 直接算出样品碱基含 量， 省去作标准曲线， 使工作更为简便。 ２分析结果 ． 如表 ２ 示。由表 ２ 数据可 看出，Ｇ＋Ｃ （ ）克分子外最大标准误差在１ ６ ０ ． ６ 以下， 相对误差土１ ８ ． ％以下， ２ 各碱基的最大标 准误差在 １ ０ ０ 以下，相对误差 ４ ２ ． ５ ． 务以下， ４ 符合一般光学分析法的误差范围。 另外， 将本 实验测得的小牛胸腺Ｄ Ａ Ｇ＋Ｃ 克分子％， Ｎ（ ） ４． 多，与文献［ ４０ ２ ［ ３ １ 报道的不同作者的常法分析
３
扫描测定后，选取积分值与标品积分值相差不 大的样品量作为测定点样量。 取 ３ 块薄层板， 每板点标品 ３ 共 ３ 样品按预测量点样， 砂， 点， 亦为 ３ 照前层析和扫描， 点， 分别求出各板中标 品和样品相应碱基积分值的平均值，在相应碱 基标准曲线上找出标品积分值和 １ｎ 所在的 ５ Ｍ 点，从该点推出标准曲线的平行线，即校正曲 线，其上由样品积分值对应的Ｘ值就是样品的 ｎ Ｍ数。 如果样品和标品积分值接近，也可由 样品 ｒ ｉ ｍ二样品积分值 Ｘ１／ ５标品积分值， 直接
混合物， 各斑点很明晰， 效果稳定， 重现性很好， 既可用于 Ｄ Ａ及 Ｒ Ａ 碱基分离， Ｎ Ｎ 又可用于 此两种核酸混合物的各碱基测定。在薄层板的 算出来。 将测得的 Ａ， Ｃ Ｔ之 ｎ 数，即 ＡＭ 两端可各作一次分析， Ｇ，， Ｍ ｎＮ 省时省原料。 （ 二）定量分析 Ｇｍ ｎ、 ｎ ｎＮ ＴＭ代人下式： ＣＭ １标准曲线如 图２ ． 示。回归方 程的 ‘ 检 （ Ｇ＋Ｃ 克分子多 ） 验：查 ｔ 表，ｄ ＝ｎ ２ ３ ｔｏ～５ ４， ｆ 一 ～ ， ｏ ． ｉ ． １而 ８ ～一 －ＧＭ ２一 一 ｘ ０ ｎ土卫－ ｍ一 － １ ０ Ａ Ｍ＋ Ｇ Ｍ＋ ＣＭ ｎ ｎ ｎ ｎ＋Ｔ Ｍ 现在Ａ的 ， ３ ３ Ｇ为 １． ， 为 １． ， ～３． ， ４ ７６ Ｃ ７９ ９ ３ 就得到分析结果。把 ３ 块薄层板测得的上述数 Ｔ为 ９ ６ 均＞１０ 故 Ｐ＜ ０ １ ．， ２ ０１ ． ， ． ，差异极为显 ０ 值平均， 便是该 Ｄ Ａ 的碱基组成。 Ｎ 著。这表明 ５ ５Ｍ范围内线性关系好， －２ｎ 宜作
遗传
Ｈ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） ３ Ｅ Ｅ ＩＡ （ ｉ ｇ ６ ＂ Ｂｊ ｎ ４ －５ ８ １ ４ ９
核 碱 层 析 波 谱 描 析 酸 基薄 层 双 色 扫 分
贾成 禹
核酸组成成分及衍生物的分析除常用的电 泳、纸层析和薄层层析洗脱比色法外，近年来 又出现了双波长色谱扫描法和高压 液相层析 法［１ ２ 。但已报道的双波长色谱扫描法测定的 ， ５ 碱基种类不多，在 测定 Ｄ Ａ ＋ Ｎ （ Ｇ Ｃ ）克分 子外方面， 尚未见报道。 我们在实验中摸索出 分离核酸碱基效果好的硅胶薄层析，并考查了 双波长色谱扫描分析法的准确度。
窦永泽
１－ Ａ， Ｃ Ｔ， ０９ Ｍ） Ｇ， Ｕ， ， 盛于不同容器中， 再分 别称取同样量的上述各碱基混合于一个容器， 各加 Ｉ １ １Ｎ ａＨ 液助溶， ｍ 水， 滴 ２ Ｎ Ｏ ｌ 后加 １ 滴浓 ＨＣ，用 ０１ Ｈ Ｉ稀释到 ５ １ 将上 ｌ ．Ｎ Ｃ ｍ。 述硅胶薄层板于 １５ ００ Ｃ活化半小时，按常法把 单个及混合的碱基溶液分别点在不同的点 上， 用饱和正丁醇上行展开至前沿 １ｃ 处取 出， ２ ｍ
法比较， 本法简便、 快速、 灵敏、 可靠。 参 考 文 献
结果为４． －４． 并相比， １０ ４ ０ ６ ８ 也说明本法结果
可靠。
衰 ２ 小牛脚腺 Ｄ Ａ 玻 Ｎ 签分析橄据
相对误差〔 ＿ ４ Ｕ ‘ ７ ３ 卜 ４ ， １７ ％ ， ，｝ “ ・｝ ．｝ ． 土 、 ！ 。士 ！ “土 ４ 士 ２ 土 ‘
层析纯， 含量 ＞９多；Ａ Ｕ德国产， ８ ， Ｃ为 Ｂ Ｈ Ｄ 产， ， Ｇ Ｔ分别为上海东海制药厂和恒信化工厂 产。小牛胸腺 Ｄ Ａ为上海牛奶公司产。薄层 Ｎ 层析用硅胶 Ｈ， 为青岛海洋化工厂产。薄层层
成各种碱基浓度为 ５ 冈 的 Ａ Ｇ Ｃ Ｔ标 ｎ Ｍ／ ， ， ，
准碱基混合液， 取活化的 ３ ２ Ｘ ｃ 硅胶 块 ０ １ｍ ０ 板， 每板点 ５ 分别为 １ ２ ３４ ５ 按前层 点， ， ， ， ， 冈， 析， Ｃ－ １ 用 Ｓ９０双波长色谱扫描仪测定。测定
本报告摸索出的核酸碱基硅胶薄层层析双 波长色谱扫描分析， 只需 １ 小时的单 向层离 ． ５ 就可把 Ａ Ｇ Ｃ Ｔ Ｕ彻底分开， ， ， ， ， 扫描测定半 小时即可完成， 可测低至 ５ 即 Ｉ ｎ Ｍ（ ｆ ｕ ｇ以下） 的 碱基，经统计处理完全符合一般光学分析法的 准确度（ 相对误差士５ ； 多） 溶剂系统简单， 主要 用国产硅胶， 故价廉。所以， 在核酸碱基分析方 面，与现在常用的纸层析和薄层层析洗脱比色
对于纤维素酶、 血浆蛋白、 胸腺素、 家畜和鱼类育种也
提 出了许 多引人注 目的课 题。 会上 ，就如 何在我 国迅速发 展基因工程间题组织 了专题座谈并提 出了建 议： （ ） １ 进一步加强遗 传工程 的学术交流活动 ， 织人员迅速的报道国外情报信息。 组 （） ２扎扎实实抓好全国 ３ 个生物工程中心的建设 ， 提出 建议， 准研究方向。（） 好遗 传工程研究人材的培 看 ３抓 养。（） 好科研 、 ４抓 教育、 产三结合。 （） 生 ５希望改善国 内工具酶 、 同位素的供应， 从长远来看应建立 自己的工
０． ４０
０３ ．０
０ ７４ ．
０６ ．４
Ｙ二 。 ４＋ ． １ ‘ 一 ． ０ １ ４Ｘ ８ ３
Ｔ 回 归方 程
Ｙ二 １ ２＋ ． ７ ： 一 ． １ ６ ２ ５ ２ Ｘ
回归方程
宁 二 ． ０ ２４ Ｘ 。 ， ８＋ ． ４ ８ ４
散点
图 １ 薄层析谱 １ ．小牛胸腺 ＤＮ 水解物 ： ． 十 Ｇ＋ ｃ十 Ｔ ； Ａ ２（ Ａ ） ３ Ｃ ＋ Ｇ＋ ｃ＋ Ｔ＋ Ｕ ， ． Ａ ） 在 ２ ４ｍ 紫外灯下显影时，由于该仪器形状限 ５ｎ 制， 无法用一般照相机拍摄， 此照片系在 ２４ｍ 紫 ５ｎ 外分析灯显影时用铅笔勾画出各斑点后 ， 自 然 光 在 照下拍摄结果。
中国遗传学会最近在杭 州召开了遗传工程在工业 上的应用讨论 会。 会议主持人 李载平教授在发言 中指 出， 因工程 与核子物理等学科相比是小学 科， 基 花钱不 多， 收效极大。 他说， 但 当前 世界上开展的遗传工程研 究仅仅是个开始，我们 需要做 的而又 能够做的工作很 多， 一定要开 阔视野。 例如用基因工程制 造探针技 术， 必将形成一个新的产业。它 可以用特异性 Ｄ Ａ 片段 Ｎ 的分子杂 交法进行各种 目的基因的检测 ，其灵敏度将 比 现在常 用的免疫沉淀法高出 １００ ，０ 倍。这种探针可 用于 检测遗传病、 食品检验检查沙门 氏菌 污染， 甚至制 造探针 柱预防血液受乙型肝炎病毒或其它化学有害物 质的污染。 其它诸 如建立分泌型载体 系统 ， 建立合适 的发酵和产物提取工艺 、 降低成本 、 增加收益等等 ， 将 有大 量工 作可做。 在会 议上的学术交流表明，近几年来我国遗传工 程 的研究 工作在某些项 目上已取得可喜成果。例如乙 型肝 炎病毒、 干扰 素等不 仅得到克隆， 而且 已经在细菌
１ 示。 对于核酸碱基薄层层析分离， 大多数文 献是使用纤维素板，据我们多方实验不如硅胶 板层析好。聚酸胺薄层析［可以把 Ｒ Ａ碱基 １ １ ３ Ｎ Ａ Ｇ Ｃ Ｕ分开 （ ， ， ， Ｇ在原点） 但未报道 Ｄ Ａ ， Ｎ 碱基中的Ｔ层析数据。桧山千都子等［的硅胶 ［ ｚ ］ 薄层层析分离的碱基种类也很少。本实验根据 前人的经验， 摸索出的硅胶薄层层析法， 只经单 向展层就彻底分开了 Ａ， Ｃ Ｔ， 种碱基 Ｇ， Ｕ ， ５
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［ 〕 蔡菊 娥等： １８。 １ ９０ 生物化学与生物物 理进展 ，３： ， （） ６ ５ Ｅ 桧山千都子 ｆ Ｅ ７０药学杂志，８８： ３， ２ ］ ． １ ８ ： ９ ９（ ） １ ２ １ ［ Ｄ． ３ １ ０ ．佐登 （ 嘉钟等译） １６。核酸的化学 ，第 １ 施 ： ９５ 版， 上海科学技 术出版社 ， ６ ８ 页。 ［ ］ Ａ ｒｎ ｎ ｉ ： ７ Ｍｅ ｏｓ Ｅ ｚｍ ｌｇ， ． ４ ａｏ Ｂ ｄｃ １５． ｔ ｄ ｉ ｎｙ ｏｏｙ Ｖ ｌ ｅ ｈ ９ ｈ ｎ ｏ １ ， ． １ ７５ １ １ ［ ］ Ｋ ｎ ｅ ， Ｋ ｃ ａ ： ８． ｃ ｉ Ａ ｉｓ ｓ ５ ｅ ｎｔ Ｃ ｕ ｅ ｌ １ ０ Ｎ ｌｃ ｄ Ｒ ． ｈ ． ｔ ９ ． ｕｅ ｃ ｅ， ８２） ４６． （０： ３ ７