竹材防腐实验设计方案

试验一：竹材防腐剂对腐朽菌毒性实验室
试验设计方案
1时间：
2011年3月日星期。

2地点：
竹子中心实验室竹材综合利用室
3人员
试验设计：
实验人员：
4试验目的
试验AAC等防腐剂的对竹材的防腐效果，寻找适合竹材的防腐剂浓度。

5仪器设备
1培菌室或电热恒温培养箱:温度30℃士2℃，相对湿度75%-85%。

2鼓风干燥烘箱:温度105℃士2℃。

3蒸汽灭菌器:压力0.25MPa，温度138℃。

4（无菌接种室或）超净工作台。

5分析天平:感量0.01g。

6真空泵:真空度0.1MPa。

7培养皿:玻璃，直径9cm。

8波美计:波美度1.00 -1.10。

9培养瓶:500mL广口玻璃锥形瓶。

10防腐剂浸注试样装置。

6药品试材
（一）防腐剂：AAC（烷基铵化物）/CDDC(二甲基二硫代)。

对照CCA、ACQ、CuAz。

（二）试样：试样大小（横×纵×厚）：20×20×5（/10）mm（L×T×R）
试样产地：
试材是3-5年生的毛竹，离地1-3米处，去青去黄。

（三）试菌：
褐腐菌：密粘褶菌/绵腐卧孔菌,白腐菌：绵腐卧孔菌/乳白耙菌。

（四）饲木:饲木应与试样取自同一树种的边材，尺寸为22×22×3mm(顺纹方向)。

7试验方法
7.1培养基制备
7-1.1麦芽糖琼脂培养基的配制:在500mL细口锥形瓶内加入麦芽糖液(波美度1.03)100mL、琼脂1.5%-2% (重量)，在水浴锅中加热，使琼脂溶化。

在培养基中加0.005%(重量)的酵母浸提物，加速许多腐朽菌的生长。

瓶口塞棉塞并包防水纸，置于蒸汽灭菌器中，在压力0.1MPa,温度121℃灭菌30min后，在无菌接种室或超净工作台上冷至不烫手时，把培养基分别倒入5个已灭菌(压力0.1MPa,温121℃)的培养皿(直径9cm)中，等冷却凝固后备用。

7.1.2如选用马铃薯、葡萄糖培养基时，取去皮洗净马铃薯20g，切成小块，加水100mL,煮沸30min，滤
去马铃薯块，将滤液用水补足到100mL，倒人500mL细口锥形瓶中，加葡萄糖2g,琼脂1.5g，加热溶化，瓶口塞棉塞并包防水纸，以下操作步骤同7.1.1,
7.1.3河砂锯屑培养基的配制:将红塘、玉米粉、马尾松边材锯屑(0.4-0.75mm)、洗净干河砂(0.4-0.75mm)
按1：8.5:15:150(重量)的比例拌匀，倒入500mL广口锥形瓶中，每瓶为160g该种混物，待表面平整后，在其表面放入2片饲木(互相分开)，向瓶内徐徐加人90mL麦芽糖液(波美度1.03),塞棉塞并包防水纸，在燕汽灭菌器中(条件同7.1.1)灭菌1h后，取出，置于无菌接种室或超净作台上冷却后备用。

7.2试菌的接种与培养
7.2.1麦芽糖(或马铃薯、葡萄糖)琼脂培养基的接种和培养:在无菌条件下，将按7.1.1配制好的培基接种
试菌，然后置于培菌室或培养箱中，在温度28℃士2℃，空气相对湿度75%-85%的条件下培7-10d，备用。

7.2.2河砂锯屑培养基的接种和培养:在无菌接种室或超净工作台上，在按7.2.1制得的菌丝前缘分割取直
径5mm的菌丝块(带有琼脂培养基)放在与饲木相接的河砂锯屑培养基(7.1.3)上(每一片木接一块菌丝块)，塞棉塞并包防水纸，放在培养室或培养箱中，在与7.2.1相同条件下培养，直到饲表面完全被菌丝覆盖 (约2周)，此时即可放入经防腐剂处理过的试样。

7.3 试样准备及用防腐剂浸注
7.3.1试样数量:测定一种试验防腐剂对每一种试菌的抗腐力需42块试样。

其中防腐剂需配制5个梯度浓
度，每一个浓度至少需6块试样;6块试样只用溶剂或含0%有效成分的配方处理，以确定溶剂或方中的非有效成分对试菌的抗腐力；6块试样未经任何处理以确定所用试菌的活性。

7.3.2防腐剂处理溶液的配制:将防腐剂配成5个梯度浓度，使得处理后的试样中防腐剂保持量有2组低到
足以使试菌能腐朽试样造成明显的重量损失。

水溶性防腐剂用蒸馏水配制.油类或有机溶剂防剂用甲苯或其他溶剂溶解和稀释。

在测定新防腐剂的抗腐力时，还应包括3组经防腐剂处理的已知抗腐力的试样。

7.3.3试样的防腐剂浸注(见图1):在行浸注前，先将每一块试样放在40℃的鼓风干燥箱中烘至恒重称重，
准确到0.01g，该重量(T1)为试样处理前重量。

将用同一浓度防腐剂处理的试样，在真空干燥中真空
(0.01MPa)浸注处理30min，等试样饱和下沉后，取出，用灭菌吸水纸吸去每块试样表面的浮液，立
即称重，准确到0.01g，得浸注后的试样重量(T2),
7.3.4试样中防腐剂保持量(R)的计算按式(1)进行:
式中:R—试样中防腐剂的保持量,kg/m3；
M—试样吸收防腐剂溶液重量，g；
V—试样体积,cm3；
C—防腐剂溶液浓度，%(重量)。

7.4防腐剂的耐久性试验
7.41 水溶性防腐剂的流失试验:经防腐剂处理后的试样，经充分气干后，将同一组保持量的试样放在600
mL烧杯中的不锈钢或塑料网架上，用玻璃压块压住，按每块试样加50mL蒸馏水的比例加入蒸馏水。

将烧杯放在真空干燥器中，抽真空至真空度90kPa以下，保持30min，或直到没有气泡逸出液面为止。

消除真空，在大气压下保持24h，移去烧杯中的水，用等量的新鲜蒸馏水取代。

以后，每隔24h重复
上述操作，总共14d。

将每次取代水和洗涤烧杯壁的洗涤水加在一起，如有需要，可用于分析水溶防腐剂中各种成分的流失量。

7.4.2油类或有机溶剂防腐剂的耐久性试验:试样用油类或有机溶剂防腐剂处理后三天，开始耐久性试验，
耐久性试验是先流失，后挥发。

7.4.2.1流失试验：将同一组保持量的试样，放在600mL烧杯内的不锈钢或塑料网架上，用玻璃重物压住，
加蒸馏水充满烧杯，在室温条件下保持2h，倾去水，取出压块，继续进行挥发试验。

7.4.2.2挥发试验:将装有试样的烧杯放入鼓风烘箱中，在50℃士2℃下挥发17h,
7.4.3耐久性试验后试样的恒重:在耐久性试验后，将试样放到鼓风烘箱中，在40℃下干燥至恒重。

称重(每
块试样准确至0.01g),得试样在腐朽前的重量(T3)。

7.5试样的灭菌及接种
将同一组保持量的试样放到盛有用5mL蒸馏水浸泡的滤纸的密闭容器内，或用多层纱布包好，放
在蒸汽灭菌器中，在100℃士2℃下汽蒸30min。

待冷却后，在无菌的条件下，将试样以宽面与培养瓶中被菌丝覆盖的饲木相接触，放在饲木(7.2.2)上。

每片饲木上放一块试样，每一培养瓶中放2块试样(见
图2)。

7.6试样的腐朽试验
将盛有试样的培养瓶放置于培养室或培养箱中，保持温度28℃士2℃，相对湿度75%-85%,腐朽12周。

除检查时必须开灯外，其余时间不要开灯。

7.7试验终了时试样的称重
经12周腐朽后，将试样从培养瓶中取出，仔细地刮除试样表面的菌丝和杂质。

将试样放到鼓风烘箱
中，在40℃下干燥至恒重，逐个称重，准确至0.01g。

腐朽后试样恒重重量为T4。

8结果计算
计算每块试样腐朽后的重量损失百分率(L)，见式(3):
式中: L—试样重量损失率，%;
T3—试样腐朽前恒重重量，g;
T4—试样腐朽后恒重重量，g;
9防腐剂毒性极限的评定
9.1防腐剂毒性极限值是按本标准规定的试验方法所测定的能抑制试菌腐朽的最低保持量。

试样失重率<3%可忽略不计，即腐朽后失重率<3%的防腐剂保持量为防腐剂对该试菌的毒性极限值.防腐剂对一种试菌的毒性极限值愈小，则说明该种防腐剂对这种试菌的抗腐力愈大。

反之，若防腐剂对一种试菌的毒性极限值愈大，那么该种防腐剂对这种试菌的抗腐力愈小。

9.2应该将溶剂(或用0%有效成分的配方)处理试样的失重率和未处理对照试样的失重率相比较以确定溶剂(或配方中非有效成分)对腐朽的影响。

未处理的对照试样在腐朽后的失重率低于45%的任何试验都是无效的。

10毒性极限值的重新测定
如果由于所选择的保持量间的间距太大而不能准确地确定毒性极限值，或因其他原因而无法确定
毒性极限值时，应该用靠近毒性极限值，且缩短保持量间的间距重新进行试验，以尽可能准确地确定毒性极限值。

11报告
试验结果的报告应该包括简要情况和试验所有主要阶段的数据。

将一种防腐剂配方在一个实验室中的试验结果和其他配方在不同实验室中所得的结果相比较是无效的。

所有配方间的比较都应该按同一次试验的结果进行，除非试验在同一实验室、用同样的试菌和木材树种进行。

在这样的情况下，未处理的和溶剂处理的对照试样的重量损失百分率应该是相似的。

木材防腐剂对度朽菌毒性实验室试验记录表
防腐剂名称：试菌名称：
防腐剂代号：培养室温度：
试样树种：培养室相对湿度：
年月日实验员：计算者：审核员：
5（水平）*6=30*5（防腐剂）=150+[2（空白对照和无有效成分对照）*6]=162（总共）。