花粉活力测定的3种方法

实验16花粉活力的测定

在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。

一、花粉萌发测定法

【原理】

正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。

【器材与用具】

载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。

【试剂】

培养基：10%蔗糖，10mg/L硼酸，0.5%的琼脂。称10g蔗糖、1mg硼酸、0.5g 琼脂与90ml水放入烧杯中，在100℃水浴中熔化,冷却后加水至100ml备用。

【方法】

1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。

2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱（或室温20℃条件下）中孵育，5~10min后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。

【注意事项】

1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。

2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。

3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。

二、碘- 碘化钾染色测定法

【原理】

多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I

2

-KI溶液可将其染

成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I

2

-KI溶液

染色呈黄褐色。因此，可用I

2

-KI溶液染色来测定花粉活力。

【器材与用具】

显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。

【试剂】

I

2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中，加入1g I

2

，待完全溶解

后，再加蒸镏水300ml。贮于棕色瓶中备用。

【方法】

采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I

2

-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。

【注意事项】

此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而

被杀死的花粉粒遇I

2

-KI也呈蓝色。

三、氯化三苯基四氮唑（TTC）法

【原理】

具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH

2或NADPH

2

可将无色的TTC

（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。

【器材与用具】

显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。

【试剂】

0.5%TTC溶液：称取0.5g TTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。溶液避光保存，若发红时，则不能再用。

【方法】

采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。