临床常见细菌的手工鉴定和结果判断

临床常见细菌的手工鉴定和结果判断

一．细菌的鉴定步骤

1、鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有

已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。

2、对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板

上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。（我们这里一般都是预先纯化培养）

3、对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，

G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。4、按鉴定质控单的要求填写好病人XX，年龄，性别；标本类型，

标本编号，送检日期等。另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以与有无溶血。

5、复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。

⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色

方法。

首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变

⑵．触酶实验(H2O2实验)：

a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。

b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。

c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。

d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。

⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：

a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的

最终呼吸酶。酶并不直接与试剂（1%盐酸四甲基对苯二

胺）起反应，而是首先使细胞色素c氧化，然后氧化型细

胞色素c使对苯二胺氧化，出现深兰色反应。

b. 方法（滤纸法，菌落法，试剂纸片法）：

一般我们采用滤纸法，取白色洁净滤纸条，沾取菌落少许，

加试剂一滴，阳性者立即呈粉红色，继而出现深兰色。结

果读取在10秒钟时为最佳，60秒内读取可靠。本实验

避免接触含铁物质（假阳性），也不能在含糖培养基上生

长的菌落进行实验（假阴性）。

c. 阳性对照用铜绿假单胞菌，阴性对照用大肠埃希菌。

d. 应用：奈瑟氏属的菌种均阳性，也用于区别假单胞菌属

和肠杆菌，前者阳性，后者阴性。

二．葡萄球菌属的鉴定

葡萄球菌属主要的种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌。

1、形态与染色：葡萄球菌直径0.5～1.5μm，菌体圆形，呈单个，

成双以与不规簇状排列。染色呈紫色，为革兰阳性球菌。2．与链球菌的区别：触酶实验为阳性，而链球菌阴性；菌体形态链球菌小于葡萄球菌，呈成双和链状排列的卵圆形的革兰阳性球菌。

3. 与微球菌的区别：触酶实验同为阳性，但微球菌的菌体呈四联

状，要大于葡萄球菌，微球菌葡萄糖氧化发酵实验（操作方法同甘露醇OF试验）为氧化型；而葡萄球菌为发酵型。另外呋喃唑酮（即痢特灵50μg/片）敏感实验微球菌为耐药，而金黄色葡萄球菌为敏感。

4．葡萄球菌属的种间鉴定：

⑴．菌落色素与溶血毒素：金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄

色，柠檬色或者淡黄色，而其他葡萄球菌则在血平板上菌落大多数为白色，也有部分为柠檬色或深黄色。

⑵．溶血毒素：金黄色葡萄球菌有α﹑β﹑γ﹑δ溶血毒素，各毒

素的区别是对动物红细胞的溶血X围﹑抗原性与溶血时的温度等。其中以α溶血毒素为主。而其他葡萄球菌大多数不产生溶血毒素，只有表葡有极少能产生溶血毒素。

⑶．血浆凝固酶实验：用与区别金黄色葡萄球菌（阳性），表

皮葡萄球菌（阴性），腐生葡萄球菌（阴性）。血浆凝固酶是金葡菌所产生的，有结合凝固酶和游离凝固酶两种。血浆凝固酶检测有两种方法，为玻片法和试管法，我们一般采用玻片法。

a. 操作方法：挑取少许金黄色葡萄球菌菌落在玻片上与血

浆乳化，结合凝固酶能作用于血浆中的纤维蛋白原，从而在金黄色葡萄球菌表面发生凝集，所以我们肉眼能看见凝集颗粒。玻片法主要由结合凝固酶作用产生；游离凝固酶是金黄色葡萄球菌产生的胞外酶，能与血浆中的血浆凝固反应因子（类似凝血酶的一种物质）作用，形成复合物再使纤维蛋白原转化成纤维蛋白而发生凝集。试管法主要由游离凝固酶作用产生。

b. 注意事项：菌落不能太多，否则会影响结果观察；凝固

酶阳性要做自凝阴性对照（用生理盐水代替血浆），只有在

阴性对照也不凝集才能认为是真正的阳性，有一部分葡萄球

菌有自凝现象。

⑷．新生霉素敏感实验：金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌对新

生霉素纸片（5μg/片）敏感；而腐生葡萄球菌，微球菌则对

之耐药。抑菌环直径>16mm即为新生霉素敏感。

⑸．甘露醇氧化发酵实验：

a.操作方法：取两支甘露醇微量生化管，在微量管内接种待

检细菌，然后一支加两滴石腊密封，另外一支则不加，放3

7℃孵箱内18～24h后观察结果。

b.结果观察：微量生化管变黄色为阳性，也就是能利用甘露

醇。若两管都变黄色则说明是发酵型；其中加石蜡管不变色，

没加石蜡管变黄色则为氧化型；如果两管都不变色则说明该

细菌是不利用甘露醇（产碱型）。

c.应用：金黄色葡萄球菌在需氧和厌氧的条件下都能利用甘

露醇（即两管都变黄色）；表皮葡萄球菌需氧部分产酸，厌

氧条件下不利用甘露醇（即没加石蜡管有部分会变黄色，加

石蜡管不变黄色）；腐生葡萄球菌与表皮葡萄球菌类似。

三．微球菌属的种间鉴定

微球菌属主要的种有易变微球菌，藤黄微球菌，玫瑰微球菌。鉴定生化见下表