哮喘患者痰嗜酸性粒细胞凋亡与IL25 及sIL22R 相关性的研究

哮喘患者痰嗜酸性粒细胞凋亡与I L25及sI L22R相关性的研究
许军阳　江凤霞　邱元吉　(中山大学第五附属医院呼吸内科,珠海519000)
中国图书分类号　R392 文献标识码　A 文章编号　10002484X(2004)0920646202
[摘　要]　目的:探讨哮喘患者痰液嗜酸性粒细胞凋亡(E OS)与I L25和sI L22R的关系。

方法:选择哮喘患者(哮喘组)急性发作期和缓解期30例,20名健康人(正常组)作对照。

分别采用E LIS A法测定患者痰液白细胞介素5(I L25)和可溶性白介素2受体(sI L22R),应用流式细胞仪检测痰液E OS凋亡。

结果:哮喘患者急性发作期和缓解期痰液中I L25和sI L22R明显升高, E OS凋亡率增高,而正常组未发现E OS凋亡。

急性发作期哮喘患者E OS凋亡率与I L25呈明显的负相关,r为-0178。

结论:哮喘患者气道局部有E OS凋亡现象,并受到I L25相互作用的调节。

sI L22R与E OS凋亡率无明显的相关性。

[关键词]　哮喘;细胞因子;嗜酸性粒细胞;凋亡;相关性
A kinetic study on the relationship betw een I L25,sI L22R and eosinophil apoptosis in asthmatic patient’s air w ay inflammation
XU Jun2Yang,JIANG Feng2Xia,QIU Yun2Ji.Department o f Respirtatory Medicine,The Fifth Hospital,Zhongshan Univer sity,Guangdong,Zhuhai,519000,China
[Abstract]　Objective:T o explore the relationship between eosinophil(E OS)and I L25,sI L22R in asthmatic patients in sputum.Meth2 ods:Thirty asthmatic patients(asthmatic group)during exacerbation and stable stage and twenty healthy pers ons were selected.I L25and sI L22R in sputum were determined by E LIS A,E OS apoptosis was identified by flow cytometre.R esults:I L25,sI L22R and E OS apoptosis percentages in the patients during exacerbation and stable stage in sputum were increased significantly,.There were no expression of E OS apoptosis in the healthy pers ons.Data analyses revealed a negative correlation between E OS apoptosis and the levels of I L25,and a closer correlation between the percentages and I L25.Conclusion:E OS underwent apoptosis in asthmatic airway and E OS apoptosis was regulated by I L25.There were no correlation between E OS apoptosis and sI L22R.
[K ey w ords]　Asthma;Cytokines;E osinophil;Apoptopsis;relativity
支气管哮喘是以嗜酸性粒细胞(eosiniphil E OS)、肥大细胞反应为主的气道变应性炎症(AAI)和气道高反应性(AHR)为特征的疾病。

Sim on等认为E OS凋亡受抑制可能是E OS增多的重要原因, E OS凋亡有利于哮喘过程中E OS炎症的消退1。

我们对30例哮喘患者痰液白细胞介素5(I L25)、可溶性白介素2受体(sI L22R)和E OS凋亡进行观察,探讨其变化规律。

1　材料与方法
111　材料来源　哮喘患者(哮喘组)急性发作期和缓解期30例,近2个月来未用过皮质激素。

男16例,女14例,年龄13～65岁,平均年龄35±11岁。

疾病诊断标准参照2003年我国制定的支气管哮喘防治指南2。

所有患者排除心、肝、肾疾患、恶性肿瘤和肺部感染等。

另选20名健康人(正常组)作对
作者简介:许军阳(1961年-),男,医学硕士,主任医师,主要从事哮喘免疫方面的研究。

照,其中男9名,女11名,年龄15～65岁,平均3913±1017岁。

用3%NaCl雾化吸人,回收痰液于1500 rΠmin离心10分钟,上清液贮于-20℃,在1月内作细胞因子检测。

细胞用1ml Hank液重悬,在6小时内作凋亡检测。

I L25、sI L22R测定试剂盒由Medgenix 公司提供。

112　痰液I L25、sI L22R测定　用E LIS A方法测定。

113　E OS凋亡
11311　E OS的标记　痰液置10ml离心管中,加等量生理盐水稀释,离心洗涤(1200rΠmin,5分钟),去上清;加入3ml生理盐水重新悬浮细胞;取70μm孔径尼龙筛网过滤,滤过液低速离心(1000rΠmin,3分钟),去上清;调整细胞浓度为106ml-1,加入C D49d2 FITC和C D152PE各10μl,按操作程序在室温避光孵育15分钟后,加入5ml P BS缓冲液离心洗涤,去上清。

11312　流式细胞仪检测凋亡率　根据有关方法并加以改进3。

114　统计学分析　实验数据均以x±s表示。

组
・
6
4
6
・中国免疫学杂志2004年第20卷
间比较采用两样本均数资料t 检验,两变量的相关程度采用直线相关分析。

2　结果
211　哮喘患者痰液I L 25、sI L 22R 和E OS 凋亡率的变
化　哮喘组急性发作期和缓解期患者痰液I L 25和sI L 22R 的表达较正常组明显增加(P <0105),缓解期E OS 的凋亡率略较急性期升高(见表1)。

212　急性发作期哮喘患者痰液E OS 凋亡率与I L 25和sI L 22R 的相关关系　哮喘组急性发作期患者痰液E OS 凋亡率与I L 25呈负相关(见图1),r 值分别为-0178(P <0105),而与sI L 22R 无明显相关性。

表1　哮喘组和正常组I L 25、sI L 22R 和EOS 凋亡率的变化
(x ±s )
T ab 11　Concentrations of I L 25,sI L 2sR and EOS apoptosisin
percentage in asthm atic and control groups(x ±s )
G roups
n
I L 25(ng ΠL )sI L 22R (ng ΠL )E OS apoptosis
percentage (%)
C ontrol group 2010125±7133
365132±132156
Asthmatic group exacerbation 3049152±171831)747148±1701561)3128±
0197S table group
3046132±171631)731112±1771311)3144±
1101N ote :1)P <0105com pared with control
group.
图1　急性发作期哮喘患者痰液E OS 凋亡率与I L 25的相关性
Fig.1　Correlation betw een I L 25and EOS apoptosis percentage
in asthm atic p atients during exacerb ation
3　讨论
哮喘气道局部存在嗜酸性细胞凋亡现象,可能是炎症消散的重要途径。

有证据表明凋亡亦参与炎症反应的调节,凋亡小体(apoptotic body ),很快被邻近的薄壁细胞和巨噬细胞吞噬,不触发机体免疫2炎症反应,因此在炎症消散过程中具有生理性保护意义4。

我们在动态观察中发现,哮喘急性发作期患者痰液中E OS 明显增多,而缓解期逐渐减少,说明哮喘患者确实存在气道中E OS 的浸润。

缓解期E OS 的凋亡率较急性期升高,表明E OS 凋亡参与和调节哮喘患者的免疫2炎症反应。

E OS 凋亡机制的实验表明,I L 23、I L 25能明显抑制E OS 的凋亡,而且在一定范围内呈剂量和时间依
赖关系5。

本研究证实,急性发作期哮喘患者痰液E OS 凋亡率与I L 25呈明显负相关,说明I L 25确实对E OS 凋亡有明显的抑制作用。

我们还发现哮喘患者
痰液sI L 22R 与E OS 凋亡率无明显的相关性,这可能与sI L 22R 是T 细胞激活的一个特异性标志和敏感的定量指标,对细胞的增值和分化起免疫调节作用,而对E OS 的凋亡无明显抑制或促进作用有关。

4　参考文献
1　S im on H U ,Blaser K.Inhibition of programmed eosinophil death ,a key pathogenic event for eosinophilia.Immunol.T oday ,1995;16:53255.2　中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南J .中
华结核和呼吸杂志,2003;26(3):1322138.
3　彭黎明.6种细胞凋亡检测方法的比较J .中华病理学杂志,
1999;19(1):55258.
4　K odama T ,M asuyama T ,M iyata S et al .K inetics of apoptosis in the lung of mice with allergic airway in flammation J .Clin Exp Allergy ,1998;28(11):1432158.
5　S tern M ,M eagher L ,Savil J et al .Apoptosis in human eosinophils :pro 2grammed cell death in the eosinophil lead stop phg ocytosis by macrophages and ism odulated by I L 25J .J Immunol ,1992;148:354323549.
[收稿2003207233　修回20042012]
(编辑　徐　杰)
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746・许军阳等　哮喘患者痰嗜酸性粒细胞凋亡与I L 25及sI L 22R 相关性的研究　第9期。