基因工程知识点总结

基因工程总结
一．概念(1)原理：。

(2)优点：与杂交育种相比，
；与诱变育种相比，。

（3）基因工程成功的原因：①成功拼接的原因：②成功表达的原因：二．基本工具1、两种酶：(1)：作用特点：。

(2)
：E ·coli DNA 连接酶与T 4 DNA 连接酶的区别：
2、一种运载体（1）条件：①
；②
；
③具有特殊的标记基因（作用：）
（2）种类：最常用；其他动植物病毒、
三、操作程序(1)：
方法：①：不知道脱氧核苷酸序列
②
：已知目的基因两端一小段序列，便于③利用化学方法人工合成：知道全部序列，且基因比较小。

这种方法不需要模板。

(2)
——基因工程的核心
基因表达载体的组成：(3)
生物种类常用方法受体细胞
将目的基因插入到Ti 植物
动物
受精卵
将含有目的基因的表＋微生物
原核细胞Ca 2处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA 分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA 分子
质粒的T-DNA 上→农达载体提纯→取卵
转化过程
杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞染(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得色体的DNA 上→表达
具有新性状的动物
(4)
①目的基因是否插入到转基因生物的染色体DNA 上：②是否转录：③是否翻译：
④个体水平鉴定：抗虫、抗病接种实验
易错点说明：
1、切割目的基因和运载体的要求：用限制酶。

目的是：。

同种的含义是：同一种或相同两种，即单酶切或双酶切。

选择双酶切的原因是。

2、工具≠工具酶；运载体≠质粒。

3、启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子
起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译过程的启动和终止。

启动子：。

终止子：一段有特殊结构的DNA短片段，位于基因的尾端，作用是使转录过程停止。

4、基因探针的要求：①单链②有③
5、农杆菌转化法中的“2”次导入：
第一次：将含有目的基因的T—DNA的质粒导入农杆菌；
第二次（非人工操作）：将含有目的基因的T—DNA导入受体细胞并整合到植物细胞的染色体DNA上。

6、转化：。

7、（1）乳腺生物反应器与化学反应器比较,优点是：质量稳定，成本低廉，无污染，经济效益显著。

（2）乳腺生物反应器与膀胱生物反应器比较，或者优点是：①收集产物更容易，不必对动物造成伤害；
②从动物一出生就可以收集；③与性别无关。

8、将目的基因导入植物细胞采用最多的方法;
导入单子叶植物最常用且成本较高的方法；
我国科学家独创且简便经济的方法。

巩固练习
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1、下图中的图1是Eco RⅠ限制酶的作用示意图。

另外，某限制酶的识别序列和切割位点是—C AATTG—，该酶作用DNA后所得末端与图1所得末端用E·coli DNA连接酶能否连接起来？若能连接起来，能否再次被Eco RⅠ限制酶识别并切割呢？
2、下列说法正确的是（）
(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。

(2)限制酶来源于原核生物而不切割自己的DNA的原因：限制酶具有特异性，原核生物的DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

（3）青霉素是诱变后的高产青霉菌产生的，不是通过基因工程改造的工程菌产生的。

（4）将目的基因导入植物受体细胞时，一般不选用卵细胞，原因是：形成单倍体。

（5）将目的基因导入动物受体细胞时，受体细胞与核移植时不同，或者选用MⅡ中期卵母细胞。

（6）抗病毒转基因植物只抗某些病毒，不是所有病毒，不抗虫。

A．三项B．四项 C．六项 D．五项
3、下列是基因工程的有关问题，请回答：
(1)限制性核酸内切酶可以识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的__________(填化学键名称)断裂，形成的末端总体可分为两种类型，分别是____________________。

(2)目的基因和载体重组时需要的工具酶是______________，和限制性核酸内切酶相比，它对所重组的DNA两端碱基序列____________(填“有”或“无”)专一性要求。

(3)如图表示构建表达载体时的某种质粒与目的基因。

已知限制酶Ⅰ的识别序列和切割位点是—G GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切割位点是—GATC—。

分析可知，最好选择限制酶________切割质粒，限制酶______切割目的基因所在的DNA，这样做的好处分别是______________________、_____________________________。

基因工程总结答案
一．概念
(1)原理：基因重组。

(2)优点：与杂交育种相比，克服远缘杂交不亲和的障碍；与诱变育种相比，定向改造生物的遗传性状。

（3）基因工程成功的原因：①成功拼接的原因：基本组成单位相同；有相同的双螺旋结构
②成功表达的原因：共用一套密码子；信息传递都遵循中心法则
二．基本工具
1、两种酶：
(1)限制酶：作用特点：识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

(2)DNA连接酶：E·coli DNA连接酶与T4 DNA连接酶的区别：
2、一种运载体
（1）条件：①稳定并能自我复制或整合到染色体DNA上；②有一个至多个限制酶切割位点；③具有特殊的标记基因（作用：便于重组DNA的鉴定和选择）
（2）种类：最常用质粒；其他动植物病毒、γ噬菌体的衍生物
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三、操作程序
(1)目的基因的获取
方法：①基因文库中获取：不知道脱氧核苷酸序列
②PCR合成：已知目的基因两端一小段序列
③利用化学方法人工合成：知道全部序列，且基因比较小。

这种方法不需要模板。

(2)基因表达载体的构建——基因工程的核心
基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因
(3)将目的基因导入受体细胞
生物种类常用方法受体细胞
植物
农杆菌转化法
体细胞或受精卵
将目的基因插入到Ti
动物
显微注射技术
受精卵
将含有目的基因的表＋
微生物
感受态细胞法
原核细胞
Ca2处理细胞→感受
态细胞→重组表达载
体DNA分子与感受态
细胞混合→感受态细
胞吸收DNA分子
质粒的T-DNA上→农达载体提纯→取卵
转化过程杆菌→导入植物细胞
→整合到受体细胞染(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得
色体的DNA上→表达具有新性状的动物
(4)目的基因的检测与鉴定
①目的基因是否插入到转基因生物的染色体DNA上：DNA分子杂交法
②是否转录：分子杂交法
③是否翻译：抗原—抗体杂交法
④个体水平鉴定：抗虫、抗病接种实验
易错点说明：
1、切割目的基因和运载体的要求：用同种限制酶。

目的是：产生相同的黏性末端。

同种的含义是：同一种或相同两种，即单酶切或双酶切。

选择双酶切的原因是防止目的基因和质粒的环化及反向链接。

2、工具≠工具酶；运载体≠质粒。

3、启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子
起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译过程的启动和终止。

启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。

终止子：一段有特殊结构的DNA短片段，位于基因的尾端，作用是使转录过程停止。

4、基因探针的要求：①单链②有目的基因③同位素标记
5、农杆菌转化法中的“2”次导入：
第一次：将含有目的基因的T—DNA的质粒导入农杆菌；
第二次（非人工操作）：将含有目的基因的T—DNA导入受体细胞并整合到植物细胞的染色体DNA上。

6、转化：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

7、（1）乳腺生物反应器与化学反应器比较,优点是：质量稳定，成本低廉，无污染，经济效益显著。

（2）乳腺生物反应器与膀胱生物反应器比较，或者优点是：①收集产物更容易，不必对动物造成伤害；②从动物一出生就可以收集；③与性别无关。

8、将目的基因导入植物细胞采用最多的方法农杆菌转化法;导入单子叶植物最常用且成本较高的方法基因枪法；我国科学家独创且简便经济的方法花粉管通道法。

巩固练习答案
1、能；不能。

2、C
3、(1)磷酸二酯键黏性末端和平末端(2)DNA 连接酶无(3)ⅠⅡ限制酶Ⅰ切割质粒不会把两个标记基因都破坏目的基因两端均有限制酶Ⅱ的识别序列
解析(1)限制性核酸内切酶(限制酶)能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式，分别为黏性末端和平末端。

(2)目的基因和载体重组时需要DNA 连接酶恢复所连接的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

多种限制酶切割，形成不同的切割位点，所用的DNA 连接酶对所连接的DNA 两端碱基序列没有专一性要求。

(3)由题干及图示可知，限制酶Ⅰ的识别序列和切割位点是—G GATCC—，限制酶Ⅰ切割质粒不会把两个标记基因都破坏，最好选择限制酶Ⅰ切割质粒。

限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—GATC—，目的基因两端均有限制酶Ⅱ的识别序列，因此用限制酶Ⅱ切割目的基因所在的DNA。

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