ANCA检测

肺出血肾炎综合征
ANCA自身抗体谱临床意义：原发性系统性小血管炎
相关疾病
IIF染色型 特异性靶抗原抗体
韦格纳氏肉芽肿（WG）
c, p(少见)
显微型多动脉炎（MPA）
c, p
坏死性新月体肾小球肾炎（NCGN） p, c(少见)
过敏性肉芽肿性血管炎（CSS）N）
低阳性率
ANCA实验室检测策略 和临床意义
ANCA 自身抗体谱 ANCA 自身抗体谱临床意义 ANCA 检测
ANCA 自身抗体谱
抗中性粒细胞胞浆抗体 anti-neutrophil cytoplasmic antibodies
A-N-C-A
中性粒细胞
胞浆型ANCA （cANCA）
核周型ANCA （pANCA）
cANCA主要靶抗原 为PR3(80-90%)
1990
现已发现，ANCA自身抗体谱存在十余种特异性抗体； 对系统性血管炎、炎症性肠病及自身免疫性肝病等疾病的诊断与鉴
别诊断具有重要意义； 成为重要自身免疫性疾病的临床常规检测项目。
<已知的ANCA靶抗原及其在中性粒细胞胞浆中分布>
嗜天青颗粒
p, a
Felty综合征
p, a
BPI , lamina ？其它 BPI, lamina ？其它
actin? BPI ,其它 actin? BPI ,其它 actin? BPI ,其它
LF, CG,MPO（少见） LF, CG,MPO （少见） LF, CG,MPO（少见）
ANCA自身抗体谱临床意义：药物性 /感染性疾病
特异性颗粒
蛋白酶3（PR3）
乳铁蛋白（LF）
髓过氧化物酶（MPO）
溶菌酶（LYS）
杀菌/通透性增高蛋白（BPI）
人白细胞弹性蛋白酶（HLE）
组织蛋白酶G（CG）
溶菌酶（LYS）
天青杀素（AZU）
防御素（DEF）
β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）
人溶酶体相关膜蛋白2（H-LAMP 2）
(Savige, van der Woude, Wiik et al., 1999)
阴性
阳性
最优检测 最低检测
单特异性 ELISA检测
结果
传统检测策略
筛查
靶抗原 确认
cANCA: 胞浆型
pANCA: 核周型
EUROPLUSTM 马赛克实现ANCA 快速诊断
cANCA，pANCA，MPO，PR3， GBM
两种荧光染色型
胞浆型ANCA（cANCA）
核周型ANCA（pANCA）
<研究概况>
Davies
首次发现ANCA (pANCA)
1982
1985
Van der Wouder
WG中存在ANCA (cANCA)
Falk
ANCA-MPO
1988
1989
Ta r g e n
pANCA/aANCA
Ludemann
新基质判读
创新性基质的荧光模型
■ 新基质突显粒细胞，ANCA荧光模 式更易分辨，实现快速判读
■ 如组合中 HEp-2 细胞的荧光着色， 则提示存在 ANA
■ 如粒细胞的荧光着色较 HEp-2 细胞 显著增强，则确认ANCA阳性
ANCA荧光模型
cANCA- 荧光模型 -
粒细胞（EOH）
HEp-2 + 粒细胞（EOH） HEp-2 + 粒P细rim胞a（teElOivHer）
粒细胞（HCHO）
HEp-2
cANCA- 靶抗原 -
蛋白酶3（PR3） 杀菌通透性增强蛋白（BPI；CAP57） 其它未知抗原
cANCA- 相关疾病 -
pANCA- 相关疾病 -
原发性血管炎 结缔组织病 慢性炎症性肠病 自身免疫性肝病
显微镜下多动脉炎 （MPA) 嗜酸细胞性肉芽肿性多血管炎 SLE 类风湿性关节炎 溃疡性结肠炎 克罗恩病 原发性硬化性胆管炎 AIH type 1 / PBC
42-70% 18-60% 9-25% 3-20%
特异性靶抗原抗体
溃疡性结肠炎（UC）（60-80%）
p, a
克罗恩病（Crohn’s病）（10-20%）
p, a
原发性硬化性胆管炎（PSC）（70-88%） p, a
原发性胆汁性肝硬化（PBC）（3-18%） p, a
自身免疫性肝炎（AIH）
p, a
系统性红斑狼疮（SLE）
p, a
类风湿性关节炎（RA）
相关疾病
IIF染色型
特异性靶抗原抗体
药物性狼疮（DIL） 甲状腺功能亢进（PTU治疗）
p
MPO （常见） LF,HEL
p, a
MPO,LF,HEL,BPI,其它
囊性纤维化（CF） 原发性支气管扩张症
原发性支气管扩张
a, p
BPI（91%）
a, p
BPI，其它
a, p
BPI，其它
细菌（心内膜炎、呼吸道感染）
肉芽肿性血管炎（GPA） - 典型的GPA：伴随肾小球肾炎 - 局限型GPA：无肾脏受累
显微镜下多动脉炎（MPA) 嗜酸细胞性肉芽肿性多血管炎 结节性多动脉炎
>90% 70%
约30% 10-20% 5-10%
pANCA（甲醛敏感）- 荧光模型 -
粒细胞（EOH） 粒细胞（HCHO）
pANCA
ANA homogen Nuclear dots Centromere ANA nucleolar
Scl-70
Sm/RNP
SS-A/SS-B
Nuclear memb. Ribosomes Mitochondria Golgi apparat. Lysosomes
Actin
Vimentin
cANCA
抗肾小球基底膜疾病（抗GBM病） p
PR3(85%),MPO(10%) PR3(45%),MPO(45%) PR3(25%),MPO(65%) PR3(10%),MPO(60%) PR3( 5%),MPO(15%) MPO(30%)
ANCA自身抗体谱临床意义：IBD/ALiD/CTD
相关疾病
IIF染色型
猴肝 HEp-2
pANCA（甲醛抗性）- 荧光模型 -
粒细胞（EOH）
HEp-2 + 粒细胞（EOH）
粒细胞（HCHO）
pANCA- 靶抗原 -
髓过氧化物酶（MPO） 弹性蛋白酶 组织蛋白酶G 乳铁蛋白 杀菌通透性增强蛋白（BPI；CAP57）
-烯醇化酶 -葡萄糖醛酸酶 溶菌酶 人天青杀素（CAP37） 其它未知抗原
ANCA筛查及靶抗原确认一步到 位，辅助快速诊断
靶抗原确认——MPO和PR3抗原点
检测ANCA相关血管炎时，筛选+抗原点确认靶抗原的EUROPLUS产品与多种 方法联用比较，结果一致性高达97%，且敏感性更高。
多种方法联用：敏感性76.7%，特异性99.1% EUROPLUS：敏感性77.1%，
a, p
病毒（HIV感染）
a, p
真菌（着色真菌病）
a, p
原虫（急性疟疾、侵袭性阿米巴感染） a, p
BPI，CG，其它 不明 不明 CG，PR3
ANCA 自身抗体谱 ANCA 自身抗体谱临床意义 ANCA 检测
ANCA检测
间接免疫荧光法 ELISA方法/欧蒙印迹法
ANCA检测和报告的国际公识
大血管炎
巨细胞动脉炎，大动脉炎
中等血管炎
结节性多动脉炎（PAN），川崎病
小血管炎
肉芽肿性血管炎（GPA）：既往称为韦格纳肉芽肿（WG）
显微镜下多动脉炎（MPA）
嗜酸细胞性肉芽肿性多血管炎（EGPA）：既往称为过敏性肉芽肿性血管炎（CSS）
IgA血管炎
冷球蛋白血症性血管炎
免疫复合物性小血管炎
总体特异性97.8%
J Immunol Methods.2009 Aug 31;348(1-2):67-73
靶抗原确认——GBM抗原点
古德帕斯综合征是一类罕见的自身免疫性疾病，以急进性肾小球损 伤、肺出血和抗肾小球基底膜（GBM）抗体为特征。疾病的初始症 状以非特异症状如疲劳、恶心等为主，很多病患都是直至出现肺肾 症状（常已进入疾病后期如肾衰竭）才获得明确诊断。原发性系统 性小血管炎与古德帕斯综合征初期临床表现相似，在检测ANCA的 同时检测抗GBM抗体可实现疾病的鉴别诊断和诊断。
67% 7% 87%
?
Lancet 2006; 368: 404–18
采血要求：红帽免疫管2-3毫升 1:10
定性检测 稀释倍数：
Thanks & any questions
ANCA荧光检测
ANCA荧光检测的影响因素是什么？ ANA干扰，导致假阳性结果 使用多基质组合，避免干扰
注意区分ANA对荧光模型的干扰
胞质
α-烯醇酶 （α -enolase） 催化酶（catalase） 肌动蛋白（actin）
核板层 核质成分
（lamina ）
ANCA 自身抗体谱 ANCA 自身抗体谱临床意义 ANCA 检测
ANCA自身抗体谱临床应用价值
PICGN
WG
AAV
CSS
MPA
血管炎分类 - Chapel Hill Consensus Conference, 2012