药物分析课件： 芳酸及其酯类药物分析

3、 离子对HPLC（一齐讨论） USP（29版） 色谱条件：色谱柱 C18（250×4.6mm，10 μm ）；流动相为 0.05mol/L磷酸二氢钠－ 0.05 mol/L磷酸氢二钠－甲醇（含氢氧化四丁基铵 1.9g）（425：425：150），检测波长254nm

三、二氟尼柳中有关物质的检查
例13. 采用两步滴定法测定阿司匹林制
剂含量时，被测组分与标准溶液的反 应摩尔比为（C）
A. 2:1
C. 1:1 E. 以上都不对
B. 1:2
D. 3:1
例14. 阿司匹林中含量最高的杂质为
（C） A. 乙酰水杨酸酐
B. 乙酰水杨酸水杨酸
C. 水杨酸 D. 水杨酰水杨酸
E. 以上都不对
例15. 区别水杨酸和苯甲酸钠，最常用
COONa
COO 3 Fe Cl3
2OH-
7
[[
]6 Fe3(OH)2 ]OOC
7 NaCl
2 Cl
-
赭色
3、丙磺舒
其钠盐在pH5.0 -6.0水溶液中与三氯化铁产生米黄 色沉淀

[
(CH3CH2CH 2)2N
SO2
COOH ]3 Fe
米黄色
4. 布洛芬：其无水乙醇溶液，加入高氯酸羟铵 -无水乙醇试液及N，N’-双环己基羧二亚胺 （DDC）无水乙醇试液，混合后，在温水中加 热20min。冷却后，加高氯酸铁-无水乙醇液， 呈紫色[JP（15）方法]（先生成异羟肟酸，再 与三价铁反应。） 5.氯貝丁酯：见书，原理同上。

二、氧化反应 1. 甲芬那酸加硫酸溶解，与重铬酸钾试 液反应，即呈深兰色，随即变为棕绿色。 2. 甲芬那酸加硫酸溶解，加热呈黄色， 并产生绿色荧光（JP13）


三、水解反应
1. 阿司匹林
O C OH NaCO3 OCOCH3
COONa
OH
CH3COONa
CO2
COONa 2 OH
H2SO4
COOH 2 OH NaSO4
N2 Cl
NaOH
N
OH
NaCl H2O


五、分解产物的反应
1、苯甲酸盐分解成苯甲酸升华物用于鉴别 2、含卤素或硫的药物，可分解后鉴别 eg. 丙磺舒，含 S，与氢氧化钠熔融， 分解生成亚硫酸钠，经硝酸氧化成硫酸盐，显 硫酸盐反应 3、丙磺舒高温加热时，产生SO2臭味



六、紫外吸收光谱法


五、高效液相色谱法 （一） 阿司匹林肠溶胶囊的含量测定
（Ch.P2005版)
色谱条件：C18，甲醇－ 1%冰醋酸（50： 50），波长280nm，外标法定量。 （二）丙磺舒原料药 色谱条件 填充剂为苯基键合硅胶，色谱 柱300mm×3.9mm;流动相为：磷酸二氢钠的1`% 冰醋酸（0.05mol/L）（磷酸调pH3.0）－1%冰醋 酸乙腈溶液（50：50）；检测波长254nm，流速 1.0ml/min。


O
H
pKa=2.95
苯甲酸 ：pKa=4.26
乙酰水杨酸： pKa=3.49

二、苯甲酸类
（一）典型药物
COOH(Na)
COOH
CH3 NH CH3
甲芬那酸
SO2
(CH 3CH 2CH 2) 2N
COOH
苯甲酸（钠）
丙磺舒
三、

其它芳酸类药物
典型药物（氯贝丁酯为液态，相对密度比水大）
CH3 Cl O
C
COOC2H5
CH3
氯贝丁酯
CH3 CH3
CHCH2
CH CH3
COOH
布洛芬


§2
鉴别试验
（一）三氯化铁反应 1. 水杨酸类药物（酸度条件及灵敏度）
COOH
COOOH
6
4 FeCl3
药物
水杨酸
二氟尼柳
实验方法
（
[
2Fe]3Fe
）
pH 4
6
O-
+ 12HCl
阿司匹林
对氨基水杨酸
COONa COOH HCl
+
+
NaCl

方法：



四、紫外分光光度法 （一）直接紫外分光光度法 1、贝诺酯乙醇溶液λmax = 240nm 吸收系数法和对照品比较法 （二）离子交换-紫外分光光度法 氯贝丁酯 （三）柱分配-紫外分光光度法 USP（29）（利用水杨酸与铁的配位 化合物在酸性条件下不稳定的性质） 阿司匹林胶囊：同时测定SA和ASA
OCOCH3
醋酸苯酯
OH
OH
COOH
OH COO
OH
水杨酸苯酯
OCOCH3 COOH OCOCH3 COO
乙酰水杨酸苯酯

（2）水杨酸：胃肠道刺激易氧化使阿司 匹林成品变色（注意原料与制剂的对照液 配制的区别以及不同限量及原因）
原理：水杨酸结构中酚羟基与高铁 盐反应生成紫堇色，而阿司匹林则无 易炭化物：检查被硫酸炭化呈色低分子有机杂
B. 非水滴定法
C. 溴量法 D. 亚硝酸钠滴定法
E. 以上都对
例18. 用直接滴定法测定阿司匹林含量
（ABE） A. 反应摩尔比为1：1
B. 在中性乙醇溶液中滴定
C. 用盐酸滴定液滴定 D. 以中性红为指示剂
E. 滴定时应在不断振摇下稍快进行
1% eg. 贝诺酯无水乙醇液：λmax=240nm, E1cm 730 760
1、紫外特征吸收法


2、双波长吸收度比法 eg. 二氟尼柳：A251/A315 应在4.2 ～4.6
其余和同学一起读书。
七、红外吸收光谱法 特征性比紫外吸收光谱法好，Chp常采用 对照图谱法，USP常采用对照品对照。 八 TLC和HPLC（见书）
Chapter 5 芳酸及其酯类药物分析 §1 典型药物分类与理化性质
一、水杨酸类药物
（一）典型药物（二氟尼柳见课本）
O C OH OH
C O OH
OCOCH3
水杨酸
阿司匹林
OCOCH3 COO NHCOCH3
贝诺酯
COONa
COOH
OH
O O C
OH
NH2
对氨基水杨酸钠
双水杨酯
（二） 理化性质 1. 熔点 2. UV，IR特征 3.溶解行为 4.酸性：受苯环、羧基、取代基影 响（游离羧基可用氢氧化钠滴定） OH 取代基为吸电子基团，↑ C O 取代基为给电子基团，↓
的试液是（C） A. 碘化钾
B. 碘化汞钾Βιβλιοθήκη C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁
E. 亚铁氰化钾
例16. 在中性条件下，可与三氯化铁试
液反应，生成赭色沉淀的药物是（D） A. 水杨酸钠
B. 对氨基水杨酸钠
C. 乙酰水杨酸 D. 苯甲酸钠
E. 扑热息痛
例17. 对氨基水杨酸钠的含量测定方法
有（ABCDE） A. 离子对高效液相法
剂（酚酞和酚红） 样品：阿司匹林、双水杨酯、苯甲酸、丙 磺舒、布洛芬

（二）水解后剩余滴定法 1. 阿司匹林的含量测定

COOH OCOCH3
2 NaOH 2 NaOH
COONa OH
2 H2O
CH3COONa


H2SO4
NaSO4
需做空白实验
同学请计算硫酸的滴定度。

水溶液与三氯化铁试液反应 加乙醇溶解后与三氯化铁试液反应 加热水解后与三氯化铁试液反应
加稀盐酸呈酸性后与三氯化铁试液反应
加氢氧化钠试液煮沸水解后加盐酸呈微酸性后反 应
结果
贝诺酯 双水杨酸
稀溶液与三氯化铁反应
紫堇色 深紫色 紫堇色 紫红色 紫堇色 紫色
2.
苯甲酸： 碱性或中性溶液，与三氯化铁生成
碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀
（三） 两步滴定法 1. 阿司匹林片和肠溶片的含测。 中和：中和制剂中存在的酒石酸等稳定剂 及水解产物水杨酸、醋酸,使阿司匹林成为钠盐。 水解与测定： 需做空白实验 2. 氯贝丁酯的含量测定（读书，说明氢氧化 钠为两个不同的浓度）

二、亚硝酸钠滴定法
对氨基水杨酸钠含芳伯氨基


三、双相滴定法
苯甲酸钠

四、重氮化-偶合反应
贝诺酯：酸水解后，与亚硝酸钠反应生成重氮 盐与碱性β -萘酚偶合生成橙红色沉淀。
O CO CH 3 C OO N HC OC H3 OH
3 H2O
HCl
HO
NH2 HCl
COOH
2 CH3COOH
HO
NH2
NaNO2
2 HCl
HO
N2 Cl
NaCl
2 H2O
OH HO OH N
合成路线见书。
ChP2005采用TLC和HPLC法分别测定不同的杂质。
USP(29):TLC。


四、甲芬那酸中特殊杂质的检查
（1）合成工艺
COOH Cl NH CH3 CH3 Cu COOH NH CH3 CH3


（2）检查 1）铜盐 原子吸收分光光度法 2）有关物质 TLC和HPLC。


五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查
1、合成工艺

2、 对氯酚的检查 GC法（分析提取过程） HPLC（NP） 3、挥发性杂质 GC法
§4 含量测定 一、酸碱滴定法 （一）直接滴定法

COOH
OCOCH3
NaOH
COONa OCOCH3
H2O

注意的问题：1. 溶剂，2.速度，3.指示

(3)
质。
二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 1、合成工艺与间氨基酚杂质的产生
NH2 OH COONa CO2 H 2O HO [O] O HO NH2 [O] OH OH O OH HO O H2N OH O NH2

2、双相滴定法与原理
原理：对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨


基酚易溶于乙醚，使两者分离后，在乙醚中加 入适量水，用盐酸滴定液（0.02mol/L）滴定， 以消耗一定量盐酸控制其限量。(Chp2005 版)

§ 3、特殊杂质检查 一、阿司匹林中特殊杂质检查 1、合成工艺

ONa CO2
ONa
ONa COONa H COOH
ONa COOH (CH3CO)2O
COOH OCOCH3 CH3COOH


2、检查

（1）溶液的澄清度（控制酚类等杂质）：

OH (CH3CO)2O
检查碳酸钠试液中不溶物
熔点156～161℃
2 CH3COONa
H2SO4
2 CH3COOH
Na2SO4
2. 双水杨酯
NaOH
稀盐酸
COOH OH
熔点：约158℃
3. 氯贝丁酯：酯基结构，碱水解后与盐酸羟胺 生成异羟肟酸盐，在弱酸性条件下加三氯化 铁即呈紫色异羟肟酸铁。

4. 羟苯乙酯：加热水解生成的对羟基 苯甲酸与硝酸汞反应，生成白色沉淀和 硝酸，硝酸氧化对羟基苯甲酸生成醌型 结构的化合物，显红色。（反应式）