hplc法测定左旋多巴片的有关物质
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收稿日期 ：2019–10–26 作者简介 ：黄祥元（1982—），男，湖南邵阳人，讲师，主要研究方
向为植物资源综合利用。
精密称取杂质 A、左旋多巴、杂质 B、5，6- 二羟基吲哚 -2羧酸对照品适量，加流动相稀释制成每毫升各约含 10ug 的混 合对照品溶液，作为系统适用性溶液。
按上述色谱条件，精密量取上述溶液各 20μL，注入液相色 谱仪，记录色谱图，结果显示，空白辅料峰不干扰主成分峰及各
Abstract ：Column Agilent HC-C18（2）（250*4.6mm，5um）with 0.01mol/L potassium dihydrogen phosphate solutionacetonitrile as mobile phase at flow rate of 1ml/min，detection wavelength of 280nm，column temperature 25℃，the injection volume of 20ul conditions to determine the relevant substances of levodopa tablets，the method is specific，sensitive，reproducible，high accuracy，can be used for levodopa tablet related substance detection and quality control.
Key words ：levodopa tablets ；related substances ；HPLC
左旋多巴（3，4- 二羟基苯丙氨酸）是生物体内儿茶酚胺 类激素、神经递质和黑色素的代谢前体，主要用于帕金森病 及帕金森综合征。本文参考 USP36标准中收载的“左旋多巴片” 【有关物质】项下的检查方法，建立了 HPLC 测定左旋多巴片 有关物质方法，该法操作简便，灵敏，重现性好，准确度高， 可用于左旋多巴片有关物质检测及质量控制。 1 仪器与试药
关键词 ：左旋多巴片 ；有关物质 ；HPLC 中图分类号 ：TQ460.7 文献标志码 ：A 文章编号 ：1003–6490（2019）11–0210–02
Determination of Related Substances in Levodopa Tablets by HPLC
Huang Xiang-yuan，Li Gui-xiong，Jiang Ai-qing
第45卷第11期
2019年11月
医药化工
Pharmaceutical and Chemical
化工设计通讯
Chemical Engineering Design Communications
HPLC法测定左旋多巴片的有关物质
黄祥元，李贵雄，蒋艾青 （永州职业技术学院，湖南永州 425000）
摘 要 ：色谱柱 Agilent HC-C18（2）（250mm×4.6mm，5um），以 0.01mol/L 磷酸二氢钾溶液 - 乙腈为流动相，在流速为 1mL/min，检测波长 280nm，柱温 25℃，进样量 20ul 条件下测定左旋多巴片的有关物质。结果表明，本方法专属性强、灵敏、 重现性好、准确度高，可用于左旋多巴片有关物质检测及质量控制。
仪器 ：戴安 Ultimate 3000 泵 ； 检测器 ：戴安 Ultimate 3000 DAD 检测器 ； 数据处理系统 ：Chromeleon 7 色谱数据工作站 左旋多巴对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号 100170200303，含量 100%）；左旋多巴杂质 A（USP，批号 K1J271， 含量 99%）；左旋多巴杂质 B（USP，批号 J1J299，含量 87%）、5， 6- 二羟基吲哚 -2- 羧酸（TRC Canada 公司，批号 1-GSU-49-5， 含量 96%），除乙腈为色谱纯、水为超纯水外，其他均为分析纯。 2 试验方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent HC（2）-C18 柱，5µm，4.6mm×250mm。 流动相：0.01mol/L 磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾 1.36g， 加水 1 000mL 溶解，摇匀）- 乙腈（97：3，用磷酸调节 pH 至 2.0） 流速 ：1.0mL/min。 柱温 ：20℃。 检测波长 ：280nm。 进样量 ：20μL。 2.2 专属性定位 2.2.1 辅料空白溶液的制备 按制剂工艺处方配制空白辅料，置 25mL 量瓶中，加流动 相适量振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 取左旋多巴片细粉适量（约相当于左旋多巴 10mg），精密 称定，置 25mL 棕色量瓶中，加流动相适量超声使溶解并稀释 至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 2.2.3 对照品溶液制备 精密称取左旋多巴对照品适量，加流动相溶解并定量稀 释制成每 1mL 约含 0.4mg 的溶液，作为左旋多巴对照品溶液 ； 另精密称取左旋多巴杂质 A、杂质 B、5，6- 二羟基吲哚 -2羧酸对照品各约 5mg，分别置 50mL 量瓶中，加 0.1mol/L 盐酸 溶液适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各杂质对照品溶液。 2.2.4 系统适用性溶液制备
已知杂质峰的检出，各已知杂质峰与主成分峰之间分离度良好。
2.3 线性关系 取混合对照品贮备溶液配制系列不同浓度的混合对照品
溶液进行检测，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵
坐 标 进 行 线 性 回 归， 左 旋 多 巴 杂 质 A 浓 度 在 0.26~5.10μg/ mL，其浓度与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 4 ；左旋多 巴浓度在 0.12~402.40μg/mL，其浓度与峰面积呈良好的线性 关系，r=1 ；杂质 B 浓度在 0.21~4.18μg/mL，其浓度与峰面 积呈良好的线性关系，r=0.999 5 ；5，6- 二羟基吲哚 -2- 羧酸 浓度在 0.28~5.56μg/mL，其浓度与峰面积呈良好的线性关系， r=0.998 5。将混合对照品溶液逐级稀释后进样，记录色谱图， 以信噪比（S/N）约为 3 作为检测限，以信噪比（S/N）约为 10 作为定量限，结果杂质 A、左旋多巴、杂质 B、5，6- 二羟 基吲哚 -2- 羧酸的检测限分别为 1.5ng、0.8ng、1.5ng、1.6ng ； 定量限分别为 5.1ng、2.7ng、5.1ng、5.3ng。 2.4 重复性实验
向为植物资源综合利用。
精密称取杂质 A、左旋多巴、杂质 B、5，6- 二羟基吲哚 -2羧酸对照品适量，加流动相稀释制成每毫升各约含 10ug 的混 合对照品溶液，作为系统适用性溶液。
按上述色谱条件，精密量取上述溶液各 20μL，注入液相色 谱仪，记录色谱图，结果显示，空白辅料峰不干扰主成分峰及各
Abstract ：Column Agilent HC-C18（2）（250*4.6mm，5um）with 0.01mol/L potassium dihydrogen phosphate solutionacetonitrile as mobile phase at flow rate of 1ml/min，detection wavelength of 280nm，column temperature 25℃，the injection volume of 20ul conditions to determine the relevant substances of levodopa tablets，the method is specific，sensitive，reproducible，high accuracy，can be used for levodopa tablet related substance detection and quality control.
Key words ：levodopa tablets ；related substances ；HPLC
左旋多巴（3，4- 二羟基苯丙氨酸）是生物体内儿茶酚胺 类激素、神经递质和黑色素的代谢前体，主要用于帕金森病 及帕金森综合征。本文参考 USP36标准中收载的“左旋多巴片” 【有关物质】项下的检查方法，建立了 HPLC 测定左旋多巴片 有关物质方法，该法操作简便，灵敏，重现性好，准确度高， 可用于左旋多巴片有关物质检测及质量控制。 1 仪器与试药
关键词 ：左旋多巴片 ；有关物质 ；HPLC 中图分类号 ：TQ460.7 文献标志码 ：A 文章编号 ：1003–6490（2019）11–0210–02
Determination of Related Substances in Levodopa Tablets by HPLC
Huang Xiang-yuan，Li Gui-xiong，Jiang Ai-qing
第45卷第11期
2019年11月
医药化工
Pharmaceutical and Chemical
化工设计通讯
Chemical Engineering Design Communications
HPLC法测定左旋多巴片的有关物质
黄祥元，李贵雄，蒋艾青 （永州职业技术学院，湖南永州 425000）
摘 要 ：色谱柱 Agilent HC-C18（2）（250mm×4.6mm，5um），以 0.01mol/L 磷酸二氢钾溶液 - 乙腈为流动相，在流速为 1mL/min，检测波长 280nm，柱温 25℃，进样量 20ul 条件下测定左旋多巴片的有关物质。结果表明，本方法专属性强、灵敏、 重现性好、准确度高，可用于左旋多巴片有关物质检测及质量控制。
仪器 ：戴安 Ultimate 3000 泵 ； 检测器 ：戴安 Ultimate 3000 DAD 检测器 ； 数据处理系统 ：Chromeleon 7 色谱数据工作站 左旋多巴对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号 100170200303，含量 100%）；左旋多巴杂质 A（USP，批号 K1J271， 含量 99%）；左旋多巴杂质 B（USP，批号 J1J299，含量 87%）、5， 6- 二羟基吲哚 -2- 羧酸（TRC Canada 公司，批号 1-GSU-49-5， 含量 96%），除乙腈为色谱纯、水为超纯水外，其他均为分析纯。 2 试验方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent HC（2）-C18 柱，5µm，4.6mm×250mm。 流动相：0.01mol/L 磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾 1.36g， 加水 1 000mL 溶解，摇匀）- 乙腈（97：3，用磷酸调节 pH 至 2.0） 流速 ：1.0mL/min。 柱温 ：20℃。 检测波长 ：280nm。 进样量 ：20μL。 2.2 专属性定位 2.2.1 辅料空白溶液的制备 按制剂工艺处方配制空白辅料，置 25mL 量瓶中，加流动 相适量振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 取左旋多巴片细粉适量（约相当于左旋多巴 10mg），精密 称定，置 25mL 棕色量瓶中，加流动相适量超声使溶解并稀释 至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 2.2.3 对照品溶液制备 精密称取左旋多巴对照品适量，加流动相溶解并定量稀 释制成每 1mL 约含 0.4mg 的溶液，作为左旋多巴对照品溶液 ； 另精密称取左旋多巴杂质 A、杂质 B、5，6- 二羟基吲哚 -2羧酸对照品各约 5mg，分别置 50mL 量瓶中，加 0.1mol/L 盐酸 溶液适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各杂质对照品溶液。 2.2.4 系统适用性溶液制备
已知杂质峰的检出，各已知杂质峰与主成分峰之间分离度良好。
2.3 线性关系 取混合对照品贮备溶液配制系列不同浓度的混合对照品
溶液进行检测，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵
坐 标 进 行 线 性 回 归， 左 旋 多 巴 杂 质 A 浓 度 在 0.26~5.10μg/ mL，其浓度与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 4 ；左旋多 巴浓度在 0.12~402.40μg/mL，其浓度与峰面积呈良好的线性 关系，r=1 ；杂质 B 浓度在 0.21~4.18μg/mL，其浓度与峰面 积呈良好的线性关系，r=0.999 5 ；5，6- 二羟基吲哚 -2- 羧酸 浓度在 0.28~5.56μg/mL，其浓度与峰面积呈良好的线性关系， r=0.998 5。将混合对照品溶液逐级稀释后进样，记录色谱图， 以信噪比（S/N）约为 3 作为检测限，以信噪比（S/N）约为 10 作为定量限，结果杂质 A、左旋多巴、杂质 B、5，6- 二羟 基吲哚 -2- 羧酸的检测限分别为 1.5ng、0.8ng、1.5ng、1.6ng ； 定量限分别为 5.1ng、2.7ng、5.1ng、5.3ng。 2.4 重复性实验