微生物学实验：细菌的染色及形态观察

微生物学实验
(本科生必修课共32学时)
教学安排与学时分配
每周4学时
¾实验1 实验室环境和人体体表微生物
的检测
¾实验2 细菌形态的观察
¾实验3 细菌的简单染色；革兰氏染色¾实验4 细菌荚膜和鞭毛染色；鞭毛运
动观察
¾实验5 放线菌、真菌形态结构的观察¾
实验6 微生物测微技术和计数
¾实验7 培养基的制备与灭菌¾实验8 微生物的纯种分离与培养¾实验9 细菌鉴定中生理生化反应¾实验10 噬菌体的效价测定¾实验11 水中微生物的检测
（开放实验）
¾
实验12 产蛋白酶和淀粉酶芽孢杆
菌的分离和活力检测（开放实验）
¾
实验13 微生物多糖——黄原胶的
发酵和提取（开放实验）
（一）细菌的染色及形态观察
(实验3，2)
¾
认识细菌的基本形态，学习和掌握细菌压滴片的制作方法。

¾学习微生物涂片染色的基本技术。

¾
掌握微生物革兰氏染色的基本原理和方法。

¾熟练掌握显微镜(油镜)的使用方法。

¾
了解不同的微生物在斜面上、固体培养基和液体培养基中的生长特征。

目的要求
实验原理
¾
微生物的培养特征是指微生物在固体培养基上和液体培养基中生长后所表现出的群体形态特征。

¾
不同的微生物有其固有的培养特征，直线接种在固体培养基上培养时，会呈现出丝状，带刺状、小突起状、薄膜状、扩展状等菌苔特征。

¾细菌的个体微小（1～10 μm）¾光学显微镜下可以看到它们的个体形态
球形、杆状、和螺旋形等
¾染色后的菌体与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。

¾简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。

¾常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，带正电荷，因此碱性染料很容易与细菌结合使细菌着色。

常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。

革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，利用两种不同性质的染料即结晶紫和沙黄先后染色菌体，染色结果将细菌分为阳性和阴性两大类。

实验材料1.金黄色葡萄球菌
(S taphylococcus aureus)
2.大肠杆菌
(E scherichia coli )
3.奋森氏螺旋体
(B orrelia Vincenti)
实验方法与步骤（一）制片
无菌涂片→自然风干→微火固定（二）染色
1. 单染：用美蓝染色，3-5分钟。

2. 革兰氏染色
C.Gram（革兰）于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。

革兰氏染色方法
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细
胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。

3、用乙醇冲洗进行脱色。

在经历脱色后仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细胞呈无色。

4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂
片进行复染。

例如沙黄，它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色。

Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall 细菌细胞壁结构示意图
革兰氏染色结果片
3. 螺旋体染色：
a) 用无菌牙签取各自牙垢少许
b) 制片
c) 草酸铵结晶紫染2-3分钟
d) 水洗、吸干
e) 油镜观察。

奋森氏螺旋体：呈螺旋状，能活泼运动，分属疏螺旋体属，是一类介于细菌与原生动物之间的微生物。

(三）细菌压滴片的制作
1. 取一载玻片，放在载玻片架
上，用笔标记菌体名称。

2. 点燃酒精灯，取一小滴无菌
水，放于玻片中央。

3. 无菌操作取出少许菌苔，放于
玻片水中涂匀。

4. 取盖玻片，由一端与玻片的菌
液接触，徐徐放下盖玻片。

然
后，观察。

教学内容
¾细菌的制片及革兰氏染色方法步骤；
用金黄色葡萄球菌，大肠杆菌制简单染色片观察。

用金黄色葡萄球菌，大肠杆菌制革兰氏染色片观察。

¾用金黄色葡萄球菌制细菌压滴片；
¾观察金黄色葡萄球菌，大肠杆菌试管的斜面菌苔特征。

实验报告及思考题
¾记录本实验观察结果。

¾试述革兰氏染色方法及原理。

¾革兰氏染色过程中，哪些因素是
成败关键，为什么？
¾使用油镜观察时，应注意什么？¾描述金黄色葡萄球菌，大肠杆菌试管的斜面菌苔特征。