紫外-可见分光光

具体操作：取本品20片，称定：1.7320g，研细，精密称取0.2546g，按上述方法操作， 测定吸收度为0.460。 A样×W平均 百分含量＝────────────── ×100％ E1%1cm×1×100×W样×N样×规格
0.460×1.7320／20 ＝────────────────── ×100％＝98.1％。 319×1×100×0.2546×1/100×5/100×0.01 (3)计算分光光度法(对仪器要求较高，多采用双波长法) (4)比色法 四．紫外－可见分光光度计 紫外-可见分光光度计其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～760nm的可见 光区。主要由光源、单色器、吸收池、检测器、指示器等主要部件组成。 （一）主要部件 1.光源：是提供入射光的装置，分光光度计对光源的要求是能发射强度足够而且稳定的连续 光谱。常用光源有：钨灯（可见光），氘灯（紫外光）。 2.单色器：其作用是将来自光源的复合光，按波长顺序色散分离出所需波长的单色光。常用 的色散元件是棱镜或光栅，由棱镜或光栅和狭缝组成。 3.吸收池：也叫比色皿或比色杯，在分光光度法分析中，用来盛放样品溶液的器皿。用光 学玻璃制成的吸收池，只能用于可见光区；用熔融石英（氧化硅）制的吸收池，适用于紫 外光区，也可用于可见光区，吸收池必须匹配，厚度应一致，盛同一溶液，在所用波长处 测吸光度，两者误差应在0.2-0.5%之内。
0.409 ＝──────────── ×100％＝98.8％。 207×1×100×5×1/250×0.001 例2：氯氮卓片含量测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氯氮卓30mg），置100m液（9→1000） 稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，用盐 酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照紫外－可见分光光度法，在308nm的波长处测 定吸收度，按氯氮卓吸收系数（E1%1cm）为319计算，即得。（规格为10mg） 具体操作：取本品20片，称定：1.7320g，研细，精密称取0.2546g，按上述方法操作， 测定吸收度为0.460。
(3)吸光系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定 条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 计算式 A样 含量（%）= ——————————————- ×100% W样/稀释倍数×(E１％１ｃｍ)对×100×1 2.2．多组分的定量方法
6.选择狭缝宽度，CP大部分品种可采用2nm，但采用吸收系数法测定含量时，必须调节 狭缝宽度，尽量小，至供试品吸收度不在增加。 7.测定时应先在规定吸收波长±2nm附近确定最大吸收波长，除另有规定外应在规定吸收 波长±2nm以内，并以此最大吸收波长作为测定波长。
2. 定量 2.1．单组分的定量方法 (1)标准曲线法 测定时,先配制一系列浓度不同的标准溶液,在同一条件下分别测定吸光度, 考查浓度与吸光度成直线关系的范围,然后以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标, 绘制A-c关系曲线，或叫工作曲线。如符合比尔定律，将得到一条通过原点的直线。 也可用直线回归的方法，求出回归的直线方程。再根据样品溶液所测得吸光度，从标准曲 线或或回归方程求得样品溶液的浓度。 (2) 对照品比较法 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的 量应为供试品溶液中被测成分标示量的100±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波 长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后，按下式计算含量，即得。 计算式 A样×W对/稀释倍数×100×1 含量（%）= ————————————-- ×100% A对×W样/稀释倍数×100×1
(1)解线性方程法 (2)等吸收双波长消去法
3.药典中多用于制剂的含量测定。 （1）对照品比较法 根据 A样=E样C样L样 A对=E对C对L对 其中 E样＝E对 L样＝L对
A样 C样 得出 ───＝─── A对 C对
C样＝C对×A样／A对
W对× N对×A样 样品的百分含量原料药为：─────────×100％ W样×N样× A对 W对× N对×A样×W平均 片剂、胶囊剂或颗粒剂等为：──────────×100％ W样×N样×A对×规格 W对× N对×A样 注射液为：─────────────×100％ V样×N样×A对×规格 N为稀释度，规格表示每片（或粒或袋或支 ）含主药的克数 （见P243-245例1、例2，注意：求校正因子f时保留五位有效数字） （2）吸收系数法（前提条件:已知吸收系数E1%1cm，通常大于100，并保证分光光度计性能 良，应选择在最大吸收度狭缝处测定）（见P246-249例1、例2、例3） 根据 A样=E样C样L样 L样＝1 A样 样品的百分含量原料药为： ────────── ×100％ E1%1cm×1×100×W样×N样 A样×W平均 片剂、胶囊剂或颗粒剂等为：────────────── ×100％ E1%1cm×1×100×W样×N样×规格 A样 注射液为： ────────────── ×100％ E1%1cm×1×100×V样×N样×规格
紫外－可见分光光度法
一、定义
二、原理 三、应用
四、紫外—可见分光光度计
一. 定义 紫外－可见分光光度法:是通过测定被测物质在紫外－可见光区的特定波长处 或一定波长范围内的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 紫外－可见分光光度法一般是在200～760nm波长范围内选择。 二. 原理 1.透光率或透光度T ：透过光的强度为Ⅰt与入射光的强度为Ⅰ0之比称透光率或透光 度，用表示，即：T＝Ⅰt/Ⅰ0*100％ 2.吸光度A: 透光率的倒数反映了溶液对光的吸收强度，其定义为： A＝－lgT；T=10-a。 3.实践证明，溶液对光的吸收程度，与该溶液的浓度、溶液液层的厚度及入射光的波 长等因素有关。当入射光的波长保持不变，则溶液对光的吸收程度与溶液的浓度和溶液液 层的厚度有关。朗伯和比尔分别于1760年和1852年研究了光的吸收与溶液的浓度和溶液 液层的厚度的定量关系。 即：朗伯－比尔（LamLert-Beer）定律：当一束平行的单色光通过浓度一定的某一含 有吸光物质的溶液时，在入射光的波长、强度以及溶液的温度等保持不变的条件下，该溶 液的吸光度A与溶液液层的厚度L成正比。 A=ECL 或 C=A / EL 其中：A为吸光度； C为溶液浓度； E为常数，称为吸收系数； L为光通过溶液的长度，单位为cm； 吸光系数E在一定的条件下是一个常数，它与入射光的波长、物质的性质及溶液的温度 等有关。吸光系数是物质的特性常数之一，表明物质对某一特定波长光的吸收能力。当溶 液的浓度为1％（C=1），光通过溶液的长度为1cm时，E=A,称为百分吸收系数
4.检测器：是测量光线透过溶液以后强弱变化的装置，其作用是检测光信号，并将光信号 转换成电信号，一般采用光电管或光电倍增管。使用前应校正测定波长并按仪器说明书进 行操作。 （二）分光光度计的光学性能 1.波长的准确度试验 可用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正或用氧化钬玻璃检定。 2.吸光度准确度 用重铬酸钾硫酸溶液检定，测定吸收度，在换算成E1%1cm，允差范围 为±1％。 3.杂散光 通常以光强较弱的波长处（如220nm，340nm处），所含杂散光的强度百分比 作为指标，采用1％碘化钠在220nm测得透过率应＜0.8％；采用5％亚硝酸钠在340nm 测得透过率应＜0.8％，即符合规定。 （三）注意事项 1.空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。 2.测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照，采用1cm的石英 吸收池,石英吸收池必须洁净，必须配对（盛装同一溶剂，在规定波长测定吸收池透光 率，应小于0.3％），否则要引入测定误差。 3.一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。 4. 测定前应先检查所用溶剂在测定波长附近是否符合要求，每次使用同一厂牌批号，混合 均匀的溶剂。（220～240nm,A应＜0.4；241～250nm，A应＜0.2；251～300nm, A 应＜0.1；300nm以上，A应＜0.05） 5.在测定时或改测其它检品时，应用待测溶液冲洗吸收池3～4次，用干净绸布或擦镜纸擦 净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损）。
例1：维生素B12注射液含量测定 精密量取本品适量，加水制成每ml约含维生素B12 25μg的溶液，照紫外－可见分光 光度法在361nm 波长处测定吸收度，按维生素B12吸收系数（E1%1cm）为207计算即得。（规格为1ml： 1mg）
具体操作：精密量取本品5ml，置250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，以水为空白，在 361nm波长处测定吸收度为0.409。 A样 百分含量＝────────────── ×100％ E1%1cm×1×100×V样×N样×规格
三. 应用
1 定性
1.1鉴别方法：物质的定性就是对物质作鉴定，用紫外－可见吸收光谱对物质进行鉴定时， 主要根据光谱上的一些特征吸收，包括最大吸收波长、最小吸收波长、肩峰、吸收系 数、吸收度比值等。 （1）对比吸收光谱图的一致性(将试样与其标准品配成相同浓度的溶液) （2）对比吸收光谱特征数据的一致性（最大吸收波长和吸收系数） （3）对比吸收度（或吸光系数）的比值的一致性 a.吸收峰: 曲线上吸收最大值且比左右相邻都高之处称为吸收峰，它所对应的波 长称为最大吸收波长 b.谷: 峰与峰之间且比左右相邻都低之处称为谷，它所对应的波长称为最小吸收 波长 c.肩峰 : 在吸收峰旁形状像肩的小曲折处叫尖峰 d.末端吸收: 吸收光谱曲线波长最短的一端，呈现强吸收，吸收度相对大但不成 峰形的部分 1.2杂质检查：利用不同化合物的紫外光吸收不同（具有特征吸收波长）进行杂质检查。 1.纯度检查 2.杂质限度检查（有时可利用峰谷吸光度比值控制杂质贤亮）